Abstrakt
Baggrund
Til fremadrettet evaluere anvendeligheden af
BRAF
V600E mutation detektion i daglig klinisk praksis hos patienter med metastatisk kolorektal cancer (mCRC).
Patienter og metoder
504 FRK patienter behandlet med systemisk kemoterapi ± biologiske blev analyseret.
Resultater
En statistisk signifikant højere forekomst af BRAF mutation blev observeret hos patienter med ECOG-PS 2 (
s
= 0,001), flere metastatiske steder (
p
= 0,002), 65 år (
s
= 0,004), primære tumorer placeret i tyktarmen (
s
0,001), high-grade tumorer (
s
= 0,001) og i dem med mucinøse funktioner (
s
= 0,037). Patienter med
BRAF
V600E muterede tumorer havde en statistisk signifikant reduceret progressionsfri overlevelse (PFS) sammenlignet med vildtype (wt) dem (4.1 og 11,6 måneder, henholdsvis;
s
0,001) og samlet overlevelse (OS) (14,0 vs. 34,6 måneder, henholdsvis;
s
0,001). I den multivariate analyse
BRAF
V600E mutation opstod som en selvstændig faktor i forbindelse med reduceret PFS (HR: 4,1, 95% CI 2,7-6,2;
s
0,001) og OS (HR : 5,9, 95% CI 3,7-9,5;
s
0,001). Blandt de 273 patienter behandlet med bjærgning cetuximab eller panitumumab,
BRAF
V600E mutation blev korreleret med reduceret PFS (2,2 vs. 6,0 måneder;
s
0,0001) og OS (4,3 vs. 17,4 måneder;
s
0,0001).
Konklusioner
Tilstedeværelsen af
BRAF
V600E-mutation i mCRC karakteriserer en undergruppe af patienter med tydelig biologisk, kliniske og patologiske træk og er forbundet med meget dårlige patienternes prognose .
Henvisning: Saridaki Z, Tzardi M, Sfakianaki M, Papadaki C, Voutsina A, Kalykaki A, et al. (2013)
BRAF
V600E Mutation Analyse i patienter med metastatisk kolorektal cancer (mCRC) i daglig klinisk praksis: korrelationer med kliniske karakteristika, og dens indvirkning på patienters Outcome. PLoS ONE 8 (12): e84604. doi: 10,1371 /journal.pone.0084604
Redaktør: Rui Manuel Reis, University de Minho, Portugal
Modtaget: Juni 16, 2013; Accepteret: November 15, 2013; Udgivet: 18. december 2013 |
Copyright: © 2013 Saridaki et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres
Finansiering:. Dette arbejde blev delvist støttet af en bevilling fra kretensiske Association for Biomedical Research (CABR) og den Hellenske Society for Medical Oncology (Hesmo). Z.S., I.M. og A.V. er modtagere af en CABR postdoktoralt stipendium. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser. Asst. Professor John Souglakos tjener PLoS ONE Journal som en akademisk redaktør. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.
Introduktion
Mutationer i
BRAF
onkogen er blevet fundet i ca. 8 % af humane cancere, herunder 50-60% af melanomer, 30-70% af skjoldbruskkirtelkræft, 30% af serøse lav kvalitet ovariecancere og 10% af CRCs [1]. Den mest almindelige onkogen mutation tegner sig for mere end 95% af mutationerne i
BRAF, fundet i CRCs er enkelt substitution missense mutation V600E, som er placeret i kinasedomænet af genet [2]. Denne aminosyre ændring resulterer i konstitutiv aktivering af BRAF kinase og fremmer celle transformation [1,3] .. Mutationer i andre kodoner af
BRAF
gen i tyktarmskræft er ekstremt sjældne, tælle for 5% af alle mutationer i genet [2].
Flere undersøgelser har rapporteret, at eksistensen af en
BRAF
mut ation i en primær CRC tumor markerer patienter, der bærer en særlig dårlig prognose, uanset o ftreatment typen administration. Dens tilstedeværelse er blevet forbundet med nedsat overlevelse i tidlig betjenes stadier behandlet med adjuverende kemoterapi [4]. ligeledes i metastatisk sygdom indstilling patienter synes ikke at svare på nogen af de eksisterende kemoterapi og resultaterne ligner ubehandlede patienter [5-8]. I CRC,
BRAF
mutationer er rapporteret at forekomme oftere i tilfælde karakteriseret ved tilstedeværelsen af et defekt DNA mismatch repair (dMMR) systemet resulterer i mikrosatellit instabilitet (MSI) [9-11]; dette synes at skyldes hMLH1 promoter hypermethylering (sporadisk CRC) og ikke til kimlinje-ændringer (arvelig CRC) [12,13]. Som det tidligere er blevet rapporteret,
BRAF
mutation bevarer sin prognostisk værdi både i MSI-høj, og i mikrosatellit stabil (MSS) tumorer [4-6,14]; idet sidstnævnte bekræftes også af den nyligt offentliggjorte
BRAF
signatur [15].
Udover sine prognostiske implikationer, flere retrospektive undersøgelser har tilskrevet en prædiktiv rolle til
BRAF
V600E mutation skyldes den observerede manglende fordele relateret til behandling med anti-EGFR MoAb’er. Det var i første omgang først dokumenteret af Di Nicolantonio et al [3], og Souglakos et al [8], men i løbet af årene, dette blev yderligere bekræftet ved efterfølgende undersøgelser [7,16,17]. Desuden blev denne mutation er negativ prognostisk betydning bekræftet i den post-hoc undergruppe analyse i to første linje fase III randomiserede studier [CAIRO2 og Crystal] [18,19]. På trods af, at de ovennævnte data kræver yderligere validering i prospektive randomiserede forsøg, de støtter den tanke, at den naturlige historie og respons på behandling på forskellige kemoterapeutiske regimer af
BRAF
-mutant CRC tumorer adskiller sig markant fra
BRAF
vildtype tumorer. Tilsyneladende, en mutant
BRAF
ikke bare erstatte
KRAS
aktivering i en lineær signalvej; mest sandsynligt er det giver særlige karakteristika med ildevarslende konsekvenser, hvilket retfærdiggør anvendelsen af produktet i patient udvælgelse og lagdeling i fremtidige kliniske forsøg [8].
For at vurdere anvendeligheden af
BRAF
V600E mutation detektion i daglig klinisk praksis, for at undersøge dens sammenhæng med de forskellige klinisk-patologiske karakteristika, samt, dens prognostiske og prædiktive effekt, vi søgte at gennemføre denne undersøgelse i et prospektivt database over CRC patienter behandlet for metastatisk sygdom.
Patienter og metoder
Patient befolkning
Undersøgelsen blev godkendt af den etiske komité /Institutional Review bestyrelse Universitetshospitalet i Heraklion og alle patienter gav deres skriftligt informeret samtykke til anvendelsen af vævet materiale til translationel forskning. Siden 1/1/2007 indtil 31-12-2012, vi fremadrettet analyseret for
BRAF
V600E alle patienter med nydiagnosticeret mCRC ved Institut for Medicinsk Onkologi, University Hospital of Heraklion (Kreta, Grækenland). Fem hundrede og fire på hinanden følgende patienter med histologisk bekræftet mCRC og tilgængelig tumor materiale til molekylær analyse, som blev behandlet med mindst en cyklus af systemisk kemoterapi med eller uden tilsætning af bevacizumab, cetuximab eller panitumumab blev indrulleret. Patienternes evaluering blev udført ved baseline og hver fjerde cyklusser af kemoterapi. Patienternes sygdomsstatus blev kodet, uden kendskab til laboratorieanalyse.
Tissue udvælgelse og DNA-ekstraktion
formalin-fikseret, blev paraffinindlejrede (FFPE) tumor sektioner gennemgået af en patolog (MT) for at bekræfte diagnosen og definere tumor-berigede områder for dissektion. Ti serielle sektioner af 5 um tykkelse blev farvet med nuklear fast red (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og skrabe dissektion under et binokulært mikroskop blev udført for prøver med ≥ 80% tumorceller; for prøver med 80% maligne celler, mikrodissektion med den piezoelektriske Eppendorf microdissector (Eppendorf, Hamburg, Tyskland) blev udført. DNA-ekstraktion blev udført under anvendelse af MasterPure ™ Complete DNA og RNA Purification Kit ifølge producentens instruktioner (Epicentre Biotechnologies, Madison, WI, USA) og de isolerede cancerceller blev lyseret i buffer indeholdende proteinase K ved 60 ° C i 72 timer. [ ,,,0],11]
KRAS mutationsanalyse
KRAS mutationsanalyse blev udført ved Sanger-sekventering efter PCR-amplifikation af KRAS exon 2. PCR-betingelser og primere, der benyttes, er tidligere blevet beskrevet [8].
BRAF mutationsanalyse
V600E BRAF mutation blev opdaget af real-time PCR ved hjælp af allel-metoden diskrimination som beskrevet tidligere [11,20]. Kort fortalt blev tumorceller ‘DNA amplificeret under anvendelse af et sæt primere og to hydrolyseprodukter prober i ABI PRISM 7900T Sequence Detection System (AB; Applied Biosystems, Forest City, CA, USA). De to hydrolyseprodukter prober blev mærket ved 5 ‘med VIC og FAM fluoroforer reportere for wt og den mutante allel, hhv. SDS 2.3 software blev anvendt til analyse af resultaterne.
Study Design
Formålet med denne undersøgelse var at evaluere nytten af
BRAF
V600E opdagelse i daglig klinisk praksis og til at korrelere dets eksistens med kliniske og patologiske egenskaber, samt behandling resultat med henblik på at definere mulige prognostiske og /eller prædiktive implementeringer i en prospektiv database af patienter med mCRC. Alle tilgængelige biopsier af den primære tumor med mere end 100 celler per sektion blev inkluderet i analysen. Foreninger mellem
BRAF
og baseline karakteristika blev vurderet ved hjælp af Fishers eksakte test for kategoriske variabler eller logistisk regression for kontinuerlige variabler. Progressionsfri overlevelse (PFS) og samlet overlevelse (OS) blev målt fra tidspunktet for diagnosen metastatisk sygdom til den første radiografisk dokumentation for sygdomsprogression eller død, henholdsvis. Kaplan-Meier kurver blev brugt til at beskrive andelen af patienter, der forblev fri for arrangementer over opfølgningsperioden. Foreninger mellem prognostiske faktorer og PFS eller OS blev undersøgt ved hjælp af Cox proportionel risiko regressions modeller. Alle rapporterede p-værdier er tosidede og ikke korrigeret for flere test.
Resultater
patientrettigheder karakteristika og sygdom funktioner
Kendetegnene for de inkluderede patienter var typisk for metastaserende CRC og er opsummeret i tabel 1. kort fortalt, medianen patienternes alder var 64 år (interval: 21-89), 59% var mænd og deres PS (ECOG) var 0-1 (90%); den primære tumor var placeret i rektum hos 28% af patienterne og i 40% af tilfældene blev udifferentierede (høj kvalitet) (tabel 1). Tyve-syv procent af patienterne havde en metastatisk websted og 64 (13%) gennemgik en metastasectomy med helbredende hensigt efter administration af systemisk behandling.
BRAF
V600E mutation blev påvist i 41 (8,2%) patienter og i alle tilfælde var gensidigt udelukkende med
KRAS
mutationer, som blev fundet i 217 (43%) af den samlede undersøgelsespopulation.
Feature
Ν
%
progressionsfri overlevelse
Samlet Surivival
504
100
Median (måneder)
HR *
95 % CI
@
s Drømmeholdet værdi
Median (måneder)
HR *
95% CI
@
s Drømmeholdet værdi
Median Alder (Range) 64 (21-89) Age≤ 65 years2715411.51.170.91-1.510.22532.30.820.61-1.040.07 65 år 2314610.027.8Gender Mand 297599.91.110.86-1.430.4233.20.980.76-1.250.85Female 2074111.234.6Tumor LocationColon3627210.71.050.72-1.520.80233.80.960.71-1.710.65Rectum1422811.133.7Tumor DifferentiationHigh Grade (ikke nærmere angivet) 200407.91.811.40-2.340 .00123.82.291.74-3.020.001Low Grade (godt Moderat Differentieret) 3046011.634.9MucinousFeaturesYes99209.81.270.68-2.380.08929.81.421.18-2.010.124No4058011.233.5ECOG PS
#
0-14.549.011,91. 961.54-2.830.00135.72.311.18-4.060.027250107.817.5Number af metastatisk sites11392711.41.240.84-1.820.9533.81.580.91-2.130.097 1365739.828.9MetastasectomyYes651322.30.290.09-0.42 0.00152.70.310.19-0.500.001No439879.829.9
KRAS
mutationsWild Type2865710.31.060.81-1.370.6934.41.230.90-1.670.189Mutant2184310.927.6
BRAF
V600E
mutationsWild Type46291.811.64.072.66-6.20 0.00134.65.433.60-8.18 0.001Mutant428.24.114.0
KRAS/BRAF
V600E
mutationsDouble Wild Type2444813.31.891.65-2.180.03436.22.281.79-3.010.016
KRAS
eller
BRAF
V600E
mutant260529.621.6Table 1. Patienter ‘ og tumorer ‘Karakteristika og univariat analyse af overlevelse
* HR:. Hazard Ratio,
@
CI: konfidensinterval,
#
PS: performance status CSV download CSV
Systemisk behandling og patienternes resultat
Den gennemsnitlige tid fra første diagnose til diagnose af metastatisk sygdom var 21,6 måneder (95% CI 17,6-24,2) for patienter med tidlig-stadie sygdom (fase i-III ), og den mediane interval fra diagnose af metastatisk sygdom til behandlingsstart 0,6 måneder (95% CI 0,4-1,0). Den mediane opfølgningstid var 30,4 måneder (interval, 2.6-72.9 måneder) og på tidspunktet for analysen 329 (65%) patienter blev afdøde, hovedsagelig fra sygdomsprogression (n = 322; 98%); fem (1%) dødsfald var behandlingsrelaterede og to (0,4%) var af årsager relateret til sygdom eller behandling. Den mediane PFS var 10,5 måneder (95% CI: 8.9-12.4) og median OS 29,9 måneder (95% CI: 26,8-34,5). Alle patienter blev behandlet med 5-FU-baseret first-line kemoterapi og i 96% af tilfældene patienterne modtog en oxaliplatin eller irinotecan kombination (tabel 2). To hundrede og tredive ni (48%) patienter fik også bevacizumab i kombination med kemoterapi i linien indstillingen først, mens et anti-EGFR monoklonalt antistof blev administreret i 74 (14,7%) af patienterne i linjen indstillingen først og i 273 ( 54%) i 2
nd eller efterfølgende behandling linjer (tabel 2). Langt størstedelen af patienterne er blevet behandlet med 2
nd line systemisk behandling. Ingen forskel blev observeret i procentdelen af patienter behandlet med 2
nd line behandling mellem
BRAF
WT og mutant patienter; grupper (
s
= 0,314) (tabel 3).
regimer
N
%
Oxaliplatin-baseret på1
st line 17434Irinotecan-baserede 1
st line 19539FOLFOXIRI 11523Fluoropyrimidins monoterapi 184Bevacizumab + kemoterapi 1
st line23948Cetuximab eller Panitumumab 1
st line 7415Cetuximab eller Panitumumab Salvage behandling 27354Table 2. Systemisk behandling.
CSV Hent CSV Feature Nej (%)
BRAF
V600E
s Drømmeholdet værdi
Total
Wild Type
Mutant
Age≤ 65 years270 (54) 254 (94,1) 16 (5,9) 0,004 65 years232 (46) 207 (89,2) 25 (10,8) Tumor DifferentiationLow grade303 (60) 290 (95,7) 13 (4.3) 0.001High grade199 (40) 171 (86,9) 28 (14,1) Tumor LocationColon361 (72) 324 (89,8) 37 (10,2) 0.001Rectum141 (28) 137 (97,2) 4 (2,8) mucinøs Yes98 (20) 84 (86) 14 (14) 0.0037No404 (80) 377 (94,6) 27 (5.4) ECO PS
#
0-1453 (90) 432 (95,2) 21 (4,6) 0,001249 (10) 29 (39) 20 (41) Antallet af metastatisk sites1138 (27) 133 (96,4) 5 (3,6) 0,002 1364 (73) 328 (90,1) 36 (9,9) 2
nd linje treatmentsYes489449 (90,1) 40 (9,1) 0.314No2523 (86,7) 2 (13,3) MetastasectomyYes65 (13) 64 (98,5) 1 (1,5) 0.001No439 (87) 398 (91) 41 (9) tabel 3. Korrelation af
BRAF
V600E mutation med kliniske og patologiske egenskaber
CSV Hent CSV
Korrelationer af BRAF mutation med clinico. -pathological funktioner og patienter “Progression og samlet overlevelse
påvisning af
BRAF
V600E mutation er blevet korreleret med specifikke kliniske karakteristika og patologiske funktioner (tabel 3). Mere præcist,
BRAF
V600E mutation blev fundet i 10,8% og 5,9% (
s
= 0,004) af patienterne ældre og yngre end 65 år, hhv. Også høj kvalitet tumorer præsenteret en højere frekvens af
BRAF
V600E mutation (14,1%) sammenlignet med lav kvalitet tumorer (4,3%;
s
= 0,001). Derudover en højere forekomst af
BRAF
V600E mutation blev fundet i tumorer beliggende i colon (10,2%) end i rectum (2,8%;
s Restaurant 0,001), som samt i tumorer med mucinøs histologi (14%) sammenlignet med dem med ikke mucinous funktioner (5,4%;
s
= 0,037). Endelig
BRAF
V600E mutation blev oftere fundet i patienter med ECOG PS 2 (41%) sammenlignet med dem med PS 0-1 (4,6%;
s
0,001) og hos patienter med multipel metastase (9,9%) sammenlignet med dem med én metastatisk stedet (3,6%;
s
= 0,002) (tabel 3). Der var ingen signifikant sammenhæng mellem den
BRAF
V600E mutation status og køn (
s
= 0,412). Kun én patient (1,5) med
BRAF
V600E
mutation undergik en metastasectomy sammenlignet med 63 (13%) patienter med WT
BRAF
tumorer (
s
. 0,001)
univariat analyse viste signifikant sammenhæng af flere kliniske og patologiske træk med PFS og /eller mos. Faktisk patienter med
BRAF
V600E muteret primære tumorer præsenteret væsentligt lavere PFS (4,1 vs. 11,6 måneder HR: 4,07, 95% CI: 2,66-6,20;
s
0,001) i sammenligning med dem med
BRAF
vildtype primære tumorer (tabel 1 og figur 1A); dette fund var uafhængig af typen af den indgivne første linje behandling (alle
s
værdier 0,05). Tilsvarende PFS var signifikant lavere hos patienter med høj kvalitet tumorer (7,9 vs. 11,6 måneder HR: 1,81, 95% CI: 1,40-2,34;
s
= 0,001) og ECOG PS 2 (7,8 vs. 11,9 måneder, HR: 1,81, 95% CI: 1.54-2.83;
s
= 0,001) i forhold til dem med lav kvalitet tumorer og ECOG PS 0-1 (tabel 1). Desuden patienter med både KRAS /BRAF
V600E WT tumorer udgør en betydeligt højere PFS (13,3 vs. 9,6 måneder HR: 1,89, 95% CI: 1,65-2,16;
s
= 0,034) sammenlignet med dem med nogen mutation i
KRAS eller BRAF
V600E
(tabel 1) i modsætning hertil patienter, som gennemgik en metastasectomy af en metastase med helbredende hensigt præsenteret signifikant højere PFS (22,3 vs . 9,8 måneder, HR: 0,29, 95% CI: 0.09-0.42;
s
0,001) (tabel 1). Der var ingen signifikant sammenhæng mellem PFS og alder, køn, tumor placering, mucinous histologi, antal metastatiske steder og
KRAS
mutationer (tabel 1).
univariat analyse viste også, at patienter med
BRAF
V600E muteret primære tumorer havde signifikant lavere median OS (14,0 vs. 34,6 måneder HR: 5,43, 95% CI: 3,60-8,18;
s
0,001) i sammenligning med dem med wt primære tumorer (tabel 1, figur 1B), uafhængigt af typen af den indgivne første linje behandling. Desuden mediane samlede overlevelse var signifikant højere hos patienter med lav kvalitet tumorer (34,9 vs. 23,8 måneder HR: 2,29, 95% CI: 1,74-3,02;
s
= 0,001), PS 0-1 (35,7 vs. 17,8 måneder; HR: 2,31, 95% CI: 1,18-4,06;
s
= 0,001) og dem, der gennemgik metastasectomy (52,7 vs. 29,9 måneder HR: 0,31, 95% CI: 0.19- 0,50;
s
= 0,001) (tabel 1). Også patienter med både KRAS /BRAF
V600E WT tumorer udgør en betydeligt længere median OS (36.2 vs. 21,6 måneder HR: 2,28, 95% CI: 1,79-3,01;
s
= 0,034) i sammenligning med dem med nogen mutation i
KRAS eller BRAF
V600E
(tabel 1). Der var ingen signifikant sammenhæng mellem Mos og køn, tumor placering, mucinous histologi, antal metastatiske steder eller
KRAS
mutationer status, selv om der er observeret en ikke signifikant tendens til forbedret overlevelse hos patienter yngre end 65 år (32,3 vs. 27,8 måneder, HR: 0,82, 95% CI: 0,61-1,04;
s
= 0,07). i forhold til personer over 65 år (tabel 1)
Den multivariate analyse bekræftede, at påvisning af
BRAF
V600E mutation var stærkt korreleret med både faldt PFS (HR: 4,1, 95% CI: 2,7-6,2;
s
0,001) og OS ( HR: 5,9, 95% CI: 3,7-9,5;
s
0,001) (tabel 4). Ligeledes høj kvalitet tumor og dårlig PS (ECOG 2) dukket op som uafhængige prognostiske faktorer for kortere PFS (HR: 2,3, 95% CI: 1,4-3,1;
s
= 0,008 og HR: 1,6, 95% CI : 1,2-2,1, henholdsvis;
s
= 0,034) og kortere MOS (HR: 2,8, 95% CI: 1,8-4,1;
s
= 0,003 og HR: 1,7, 95% CI : 1,4-2,3, henholdsvis;
s
= 0,021) (tabel 4). Ligeledes metastasectomy med helbredende hensigt opstod som en selvstændig prognostisk faktor for forbedret PFS (HR: 0,4, 95% CI: 0,26 til 0,8;
s
= 0,003) og MOS (HR: 0,6, 95% CI: 0,4 -0,9;.
s
= 0,028) (tabel 4)
Hazard Ratio
95% CI *
s Drømmeholdet værdi
Progression-Free SurvivalBRAF (mutant vs. WT *) 4,1 (2,7 -6,2) 0.001Tumor Grade (høj vs. lav) 2.3 (1,4-3,1) 0.008Metastatectomy (ja vs. nej) 0,4 (0.26- 0,8) 0.003ECOG PS (2 vs. 0-1) 1,6 (1,2-2,1) 0.034Overall SurvivalBRAF (mutant vs. WT *) 5,9 (3,7 -9,5) 0.001Tumor Grade (høj vs. Low) 2,8 (1.8- 4,1) 0.003Metastatectomy (ja vs . nej) 0,6 (0,4-0,9) 0.028ECOG PS (2 vs. 0-1) 1,7 (1.4-2.3) 0.021Table 4. Multivariat analyse
CSV Hent CSV
Predictive betydning af BRAFV600E mutation i behandling med. anti-EGFR monoklonale antistoffer
Seventy-fire (25%) patienter, med
KRAS
wt primære tumοrs modtog en anti-EGFR monoklonalt antistof i kombination med kemoterapi som første linje behandling.
BRAF
mutationer blev påvist i 6 (8,1%) patienter. Selv median PFS og OS var arithmeticaly lavere hos patienter med BRAFV600E mutationer sammenlignet med patienter med vildtype BRAFV600E status (4,2 vs. 11,1 måneder og 14,3 vs. 35,0 måneder, henholdsvis) disse forskelle ikke var statistisk forskellige sandsynligvis på grund af den lille prøvestørrelse .. på den anden side, 273 patienter med
KRAS Salg wt primære tumorer blev behandlet med et anti-EGFR-mAb som anden (84 patienter, 31%) eller efterfølgende linje behandling (189 patienter, 69%). Patienter med
BRAF
V600E mutant tumorer (22 patienter, 8%), der præsenteres betydeligt forkortede PFS (2,2 vs. 6,0 måneder,
p
0,0001) og MOS (4,3 vs. 17,4 måneder ,
s
0,0001) sammenlignet med dem med
BRAF
V600E wt tumorer (figur 2A og B), stratificeret for den linje af behandlingen. Yderligere 13 patienter med
BRAF
V600E
mutation ikke blev behandlet med anti-EGFR mAbs, i 2
nd eller højere behandling linjer. Elleve af dem modtog 2
nd line kombinationskemoterapi og median PFS var 2,4 måneder, mens medianen OS var 4,8, sammenlignes med dem, der observeres hos patienter med
BRAF
V600E
mutationer i behandling med anti-EGFR mAbs.
diskussion
i nærværende undersøgelse har vi vurderet virkningen af
BRAF
V600E test for FRK patienter i daglig klinisk praksis. Så vidt vi ved er dette den største prospektive serier af patienter nogensinde rapporteret i litteraturen giver værdifulde data vedrørende epidemiologiske mønstre, samt, virkningen af
BRAF
V600E mutation status på patienternes resultat. Faktisk forekomsten af mutationen er signifikant højere hos patienter med ECOG PS 2 (41%) sammenlignet med dem med ECOG PS 0-1 (4,6%;
s Restaurant 0,001), men også hos patienter med udifferentierede tumorer (14,1%), multi-metastatisk sygdom (9,9%) og fremskreden alder (10,8%) i forhold til dem med differentierede tumorer (4,3%;
s
= 0,001), sygdom forvirret i et metastatisk websted ( 3,6%;
s
= 0,002) og alderen ≤ 65 år (5,9%;
s
= 0,004). På den anden side, at incidensen af den
BRAF
V600E mutation var meget lav hos patienter med metastatisk rektal cancer (2,8%). Disse data viser, at
BRAFV600E
mutation er korreleret med andre kender skadelige kliniske prognostiske faktorer, hvis kan påvirke patienternes resultat. På den anden side kan man argumentere for, at den aggressive biologiske opførsel af tumorer huser en
BRAFV600E
er ansvarlig for tilstedeværelsen af disse kliniske faktorer som hurtigt fremadskridende multimetastatic sygdom og dårlig performance status eller lav sandsynlighed for en sekundær metastasectomy . Vores undersøgelse foreslår, at vurderingen af
BRAFV600E
mutation er et skridt fremad i “personlig behandling”, da kan ændre behandlingen hensigt (palliativ eller helbredende) og som kan påvirke behandlingen strategi.
Også den aktuelle undersøgelse, bekræfter i et prospektivt analyseret patienternes kohorte de negative prognostiske betydning af
BRAF
V600E mutation, som tidligere er blevet rapporteret i retrospektive undersøgelser [3,6,8, 11,14]. Faktisk patienter med
BRAF
V600E mutation i deres primære tumor havde signifikant lavere median PFS (4,1 vs. 11,6 måneder HR: 4,07, 95% CI: 2,66-6,20;
s
s
0,001; figur 1A-B), mens
BRAF
V600E mutation blev afsløret som den stærkeste uafhængig faktor for faldet PFS (HR: 4,1, 95% CI: 2,7-6,2;
s
0,001) og OS (HR: 5,9, 95% CI: 3,7-9,5
s
0,001; tabel 4). Disse resultater er i overensstemmelse med tidligere retrospektive undersøgelser fra vores gruppe [8,11] og andre [3,6,14,18] vedrørende ugunstige prognostiske betydning af
BRAF
V600E mutation i CRC.
Vi har også observeret, i overensstemmelse med tidligere rapporter [3,7,8,16,18], at patienter med
BRAF
V600E opnå en begrænset, hvis nogen fordel af behandlingen anti-EGFR mAbs. Faktisk patienter med
BRAF
V600E mutant tumorer behandlet med en anti-EGFR mAB i anden eller efterfølgende linje, præsenteret faldt betydeligt median PFS (2,2 vs. 6,0 måneder,
s
0,0001) og MOS (4,3 vs. 17,4 måneder,
s
0,0001) sammenlignet med dem med
BRAF
V600E wt tumorer (figur 2A og B). Den samme konstatering er blevet observeret både i retrospektive undersøgelser i serier af patienter [3,7,8,16,21], samt, i randomiserede kliniske forsøg [18]. På den anden side, efterforskerne i CRYSTAL undersøgelse rapporteret en mindre fordel af tilsætning af cetuximab til kemoterapi (FOLFIRI) hos patienter med
BRAF
V600E mCRC, men denne afgørelse er stadig tvivlsom, da en interaktion testen ikke er forsynet [19]. Men den negative prognostiske betydning af
BRAF
V600E mutation fremgår klart selv i denne retrospektive analyse af krystal forsøg [19] .. Vore data såvel som dem fra de tidligere omtalte undersøgelser antyder, at anti- EGFR MoAbs er ikke i stand til at vende den negative prognose for
BRAFV600E
mutation. Den aktuelle undersøgelse er ikke i stand til at besvare spørgsmålene, hvor
BRAFV600E
mutation har en prædiktiv værdi til behandling med anti-EGFR MoAbs eller hvis patienter med
BRAFV600E
mutation skal behandles eller ej med anti-EGFR mAbs. Dette spørgsmål bør være sandsynlig behandles i et prospektivt måde enten med en kombination af BRAF og anti-EGFR inhibitor ved hjælp af en adaptiv model eller i et Tilfældig forsøg ved hjælp af
BRAFV600E
mutation som lagdeling faktor.
Ikke desto mindre har en analyse af mutationer i RAS /RAF-vejen vist sig markant betydning for behandlingen af patienter med mCRC. I den foreliggende undersøgelse patienter med dobbelte WT typen tumorer udgør en betydeligt højere PFS (HR: 1,89;
s
= 0,034) og median OS (HR: 2,28;
s
= 0,016) i sammenligning med dem med en mutation i en af
KRAS
eller
BRAF
gener. Desuden nylig rapporteret undersøgelser understrege vigtigheden af
KRAS
mutationer uden hotspots i codon 12 og 13, samt, i
de nationale tilsynsmyndigheder
mutationer, især hos patienter behandlet med Panitumumab [22] , Alle data understrege vigtigheden af test for RAS /RAF familie i mCRC for at designe den optimale behandlingsstrategi i daglig klinisk praksis.
Fra biologisk synspunkt vores resultater støtter konceptet, at CRC med
BRAF
V600E er en klar delmængde af sygdommen med specifikke biologiske karakteristika. Faktisk
BRAF
V600E mutation i CRC er korreleret med MSI-H status og cyklin D1 overekspression, og karakteriserer en undergruppe af patienter med dårlig prognose [9-11]. Hertil kommer, at særskilte naturhistorie og passivitet af
BRAF
-mutant tumorer til de almindeligt anvendte kemoterapeutiske regimer indebærer, at
BRAF
V600E mutation ikke bare erstatte
KRAS
aktivering i en lineær signalvej, men sandsynligvis giver yderligere eller særlige egenskaber. For eksempel i cellekulturer, den V600E mutation øger BRAF aktivitet uafhængig af
KRAS
og viser lavere transformerende aktivitet [1], mens inhibering af MEK med små molekyler forhindrer tumorvækst i
BRAF
– mutant tumorxenoplantater men ikke i
KRAS
-mutant modparter [23]. Disse forskelle kan delvis forklare forskellene vedrørende prognostiske værdi af aktivering
KRAS
og
BRAF
mutationer.
Endelig analysen af
BRAF
V600E i daglig klinisk praksis er muligt, da det kan udføres fra den samme DNA anvendes til analysen af den
KRAS
mutationer, som er obligatorisk for alle patienter med mCRC [24]. Analysen af
BRAF
V600E ved hjælp af metoden diskrimination alleliske er følsom (følsomhed 95%) [11,20], inexpesinsive [20], og giver resultater inden for to timer.
Sammenfattende
BRAF
V600E mutation identificerer en undergruppe af FRK patienter med tydelig biologisk adfærd, kliniske karakteristika og patologiske funktioner. Disse patienter ofte til stede metastatisk sygdom i flere steder, har dårlig PS og en dårlig prognose, at være resistente over for alle aktuelt tilgængelige behandlingsmuligheder. Analysen af
BRAF
V600E mutation i daglig klinisk praksis kan være et skridt fremad i begrebet “personlig” behandling af patienter med mCRC, da nye agenter rettet mod denne specifikke mutation er et presserende berettiget.
Leave a Reply
Du skal være logget ind for at skrive en kommentar.