PLoS ONE: Alkohol og tobak øger risikoen for High Risk HPV Infektion i hoved-halscancer patienter: Undersøgelse fra nordøstlige region India

Abstrakt

Baggrund

human papilloma virus (HPV ) i forbindelse hoved og hals kræft (HNCs) har genereret betydelig mængde forskning interesse i nyere tid. På grund af høj forekomst af HNCs og mangel på tilstrækkelige data om højrisiko-HPV (hr-HPV) infektion fra North -East region i Indien, blev denne undersøgelse udtænkt for at undersøge hr-HPV-infektion, dens former og dens association med livet stil vaner såsom tobak, alkohol osv

Metoder

i alt et hundrede og seks primære HNC tumor biopsi prøver blev indsamlet. Disse prøver blev analyseret for hr-HPV-DNA (13 HPV-typer) ved hjælp af hybrid capture 2 (VK2) assay og genotypning blev gjort ved E6 indlejret multiplex PCR (NMPCR).

Resultater

Tilstedeværelsen HR-HPV blev bekræftet i 31,13% (n = 33) og 24.52% (n = 26) af HNC patienter ved indlejret multiplex-PCR (NMPCR) og HC2 assay hhv. Blandt hr-HPV positive tilfælde, ud af tretten HR- HPV-typer analyseres, kun to fremherskende genotyper, HPV-16 (81,81%), efterfulgt af HPV-18 (18,18%) blev fundet. Signifikant sammenhæng blev observeret mellem hr-HPV-infektion med alkoholforbrug (p 0,001) og tobak tygge (p = 0,02) i HNC tilfælde. Sammenlignet med HPV-18-infektion HPV-16 viste sig at være signifikant associeret med tobak tygge (p = 0,02) vane.

Konklusioner

Vores undersøgelse viste, at tobak tygge og alkoholforbrug kan handle som risikofaktorer for hr-HPV-infektion i HNCs fra det nordøstlige region i Indien. Dette var den første undersøgelse fra nordøstlige Indien, som også vurderede den kliniske anvendelighed af HC2 assay i HNC patientprøver. Vi foreslår, at alkohol, tobak og HR-HPV-infektion virker synergistisk eller supplerer hinanden i processen med HNC udvikling og progression i nærværende undersøgelse befolkning

Henvisning:. Kumar R, Rai AK, Das D, Das R , Kumar RS, Sarma A, et al. (2015) Alkohol og tobak øger risikoen for High Risk HPV Infektion i hoved- og halscancer patienter: Undersøgelse fra nordøstlige region i Indien. PLoS ONE 10 (10): e0140700. doi: 10,1371 /journal.pone.0140700

Redaktør: Jeffrey S. Chang, National Health Research Institutes, TAIWAN

Modtaget: 24. maj 2015; Accepteret: September 28, 2015; Udgivet: 16 Oktober 2015

Copyright: © 2015 Kumar et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. der blev leveret af Institut for Bioteknologi, Ministeriet for Videnskab og Teknologi, Indien (Grant nr BT /04 /NE /TBP /2010 og Grant No. BT /med /NE-SFC /2009) modtaget af AR og AKR henholdsvis [https://www.dbtindia.nic.in/]

konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

hoved- og halskræft (HNC) forekomst udgør ca. 25-30% af alle kræfttilfælde i Indien [1]. HNC er en multifaktoriel og flerfaset sygdom, der rammer anatomiske steder såsom læbe, mundhule, næse og paranasale sinuser, nasopharynx, oropharynx, mundhulen, hypopharynx, strubehoved etc [2]. De afgørende risikofaktorer er tobak, alkohol, betelnød tygge, ændre seksuel adfærd mv som er ansvarlige for størstedelen af ​​HNC byrde. I HNC patienter på 50 år og derover alder, foreninger med ovenstående vigtigste risikofaktorer er mere fremherskende. Tobaksrygning og alkoholrelaterede kræftfremkaldende stoffer spiller vigtig rolle i udviklingen af ​​HNC sandsynligvis gennem immunsuppression [3-6]. I det ekstracellulære og intracellulære rum, cigaretrøg genererer partikler, gasformige ekstrakter og vand opløste stoffer. Større klassificeret mutagene og kræftfremkaldende komponenter af cigaretter er nikotin, tjære, ammoniak, kulilte, kuldioxid, formaldehyd, acrolein, acetone, benzopyrener, hydroxyquinone, nitrogenoxider og cadmium. Tjære og nikotin i cigaretrøg påvirke medfødte immunreaktion og øge modtageligheden for infektioner [7, 8]. Alkoholforbrug er også betragtes som en af ​​de risikofaktorer, som kan bidrage til carcinogenese. Det Internationale Agentur for Kræftforskning af World Health Organization har kategoriseret alkohol som en gruppe 1 kræftfremkaldende stof [9]. Human papillomavirus (HPV) blev anbefalet første gang af Syrjanen et al (1983) som en risikofaktor især for oropharyngeal og oral cancer [10]. I delmængde af HNC tilfælde har HPV forening blevet anerkendt i yngre aldersgruppe ( 50 år) patienter uden vane alkoholforbrug [11, 12] tobak og. HPV-genomisk DNA blev hovedsageligt påvist ved PCR-metode og undersøgelser har vist, at op til 60% af HNC tilfælde kan være HPV positive [13, 14]. Den årsagssammenhæng mellem HPV og hoved- og halskræft er stadig modstridende på grund af modstridende beviser [15, 16]. HPV forening med HNC har påtaget betydning på grund af de resultater, der HPV positive HNC tilfælde har god prognose sammenlignet med HPV negative sager [17-21]. De mulige smitteveje af HPV i HNC kan være oral seksuel adfærd hos voksne og perinatal transmission i neonatale børn. Især mundhulen, svælget og strubehovedet, epitelceller er mere modtagelige for HPV-infektion [2, 22-26]. HPV-typer er klassificeret som høj-risiko (HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 og 82) og lav-risiko (HPV-26, 30, 34, 53, 66, 67, 69, 70, 73, 82, 85) på grundlag af deres kræftfremkaldende potentiale. HPV-16 og HPV-18 med høj risiko typen er blevet betragtet som væsentlig medvirkende genotyper i HNC [27, 28].

Det store cellecyklus regulatorer, p53, pRB og p16 er vigtige tumorsuppressorgener havende rolle i cellecyklus regulerende pathway og cancer [29]. Disse gener spiller vigtig rolle i opretholdelsen af ​​genomisk integritet og cellecyklus, og kontrol af apoptose [30, 31]. High Risk HPV (hr-HPV) type 16 og 18 hovedsagelig udøve deres kræftfremkaldende potentiale gennem ekspression af E6 og E7 oncoproteinet. E6 onkogen aktivering fører til nedbrydning af p53 gennem dens interaktion med E3 ubiquitin ligase E6AP [31, 32]. Den aktive E7 forringer retinoblastoma tumor suppressor protein (pRb) skyldes som transkriptionsfaktor E2F stimuleres og resulterer i overekspression af p16 INK4a, en cyclin-afhængig kinase inhibitor [31, 32]. Ved at unddrage sig de ovennævnte master-vogtere af cellecyklus, HPV-gener tage kontrol over celleproliferation, der fører til ukontrolleret celledeling.

The North Eastern (NE) region i Indien har høj alder justeret incidensrate (AAR) pr 1, 00.000 personer til HNCs i Indien [33]. Blandt alle befolkningsgrupper baseret kræftregistre (PBCR), blev distriktet Kamrup Urban (KUD) af NE-regionen i Indien andenplads (AAR-156,3) hos kvinder og fjerde (AAR-185,2) hos mænd for alle kræft sites forekomst. Den AAR for førende HNC steder i KUD PBCR er som følger: tungen 9.4 (han), 3,2 (hun); mund 7,7 (han), 7.6 (kvinder); hypo svælget 7,7 (han) og 7,6 (kvinder); strubehovedet 8.2 (han). Tobaksrelaterede kræftformer (TRC) tegnede sig for 40%, men 50% hos mænd mens hos kvinder var 30%, men 40% af alle HNC tilfælde i KUD PBCR [33]. Befolkningen i NE-regionen repræsenterer unik etnicitet, særprægede livsstil og kostvaner, som kan spille vigtig rolle i det komplekse samspil af miljømæssige og genetiske faktorer, der kan være forbundet med høj forekomst af HNC i denne region. Der er mangel på tilstrækkelige data om HR-HPV-status i HNC tilfælde af NE Indien. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge forekomsten af ​​HR-HPV-infektion og deres tilknytning til Betal quid tygning, rygning, tobak, alkohol og klinisk-patologiske karakteristika patienter. I den foreliggende undersøgelse blev E6 indlejret multiplex PCR-metode anvendes til den følsomme og type-specifik påvisning af HPV-infektioner er baseret på amplifikation af det virale E6 /E7 onkogen som tidligere [28, 34] beskrevet. Hybrid Capture 2 (VK2) test, som er FDA-USA godkendt og WHO anbefales til påvisning af HPV i kliniske prøver af cervikal intraepithelial læsioner (CINS) er blevet anvendt for første gang for hr-HPV detektering i HNC eksemplarer af NE Indien .

Materialer og metoder

patienter Kendetegn

i alt 106 HNC patienter blev indrulleret i denne undersøgelse (mand 73; kvinde 33). Tumor vævsprøver blev opnået fra hoved og hals onkologi kirurgi enhed af Dr. Bhubaneswar Borooah Cancer Institute (BBCi), Regional Cancer Center, Gauhati, Indien. De Histopatologisk bekræftet HNC sager blev indskrevet i perioden oktober 2011 til september blev 2013. Den demografiske og livsstil oplysninger, der indsamles ved hjælp af en pre-designet spørgeskema gennem personlig samtale. De indsamlede om demografiske variable oplysningerne alder, køn, etnicitet, uddannelse, socioøkonomisk status, livsstilsfaktorer alkohol, rygning, betelnød tygge og andre kostvaner. Det amerikanske Blandede kræft TNM mellemstationer blev brugt til iscenesættelse og diagnose. Patienterne blev informeret om undersøgelsen og skriftligt samtykke blev opnået før indsamling af prøver. Denne undersøgelse blev godkendt af institutionelle etiske komité af Dr. Bhubaneswar Borooah Cancer Institute (BBCi), Gauhati, Assam (Indien).

Genomisk DNA isolation fra tumorvæv

Tissue biopsi prøver blev indsamlet i 1 ml volumen af ​​phosphatbufret saltvand (PBS) og det genomiske DNA blev ekstraheret fra homogeniseret væv ved hjælp QIAamp DNA mini kit (Qiagen, Tyskland) ifølge producentens instruktioner. Mængden og kvaliteten af ​​det isolerede genomiske DNA blev bekræftet ved Nano-spektrofotometer (Bio-fotometer, Eppendorf, Tyskland) og agarosegelelektroforese henholdsvis.

Høj -risk HPV-DNA-detektion af Hybrid Capture 2 (VK2) Indhold

Genomisk DNA isoleret fra biopsiprøver af patienterne blev suspenderet i prøven transportmedium (STM) (Qiagen, Tyskland) og tilstedeværelsen af ​​HPV blev påvist ved HC2 High-Risk HPV DNA-test

™ kit (Qiagen, Tyskland) som pr fabrikantens anvisninger. I patientens SMS prøver blev kemiluminescerende påvisning af de 13 mest almindelige HR-HPV-typer (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 og 68) udføres under anvendelse af automatiseret DML 2000 Luminometer-system (Digene, USA). Lyssignaler blev målt som relative lysenheder (RLU’er) med lysintensiteten indikerer tilstedeværelsen eller fraværet af mål-DNA i de testede prøve. Middelværdien RLU-værdi for høj risiko HPV kalibrator af positive kontrolprøver blev betragtet som positive cutoff (CO) værdi. Patienter specimen med RLU /CO-værdi forholdet ≥ 1 med høj risiko HPV-sonde blev betragtet som “positive” for nogen af ​​de HR-HPV-typer (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 og 68). Fraværet af hr-HPV-DNA under detektionsgrænsen blev betegnet i prøven med RLU /CO 1. Når RLU = CO det giver tilstedeværelsen af ​​ca. 5000 virus kopier i prøven. To bekræftede tilfælde af livmoderhalskræft med hr-HPV positivitet blev også brugt i hver prøvekørsel og bærer DNA som negativ kontrol [35, 36]. Testrapporterne blev genereret som pr format Hybrid Capture

TM software ver. 2.0. Alle prøver blev testet to gange, og prøver med HR- HPV positivt resultat i både testkørsel kun blev scoret som HR- HPV positive.

E6 indlejret multiplex PCR (NMPCR) for HPV-genotypebestemmelse

prøver testet positive for HR-HPV-DNA i HC2 assayet blev yderligere analyseret for HPV-genotypebestemmelse. Den indlejrede E6 PCR reaktion 1

st runde blev udført i 20 pi volumen under anvendelse 25-100 ng genomisk DNA, 1X Maxima Hot Start PCR-buffer, 1,5-2,0 mM MgCl

2 (Thermo Scientific, USA), 250 nM af hver primere (Metabion, Tyskland), 250 uM af hver dNTP og 0,5 U Maxima Hot Start Taq DNA Polymerase (Thermo Scientific, USA). Den termisk cykling betingelse for 1

st runde af E6 PCR var som: Denaturation- 95 ° C- 5 min, 38 amplifikationscykler med Denaturation- 95 ° C- 30 sek, Annealing- 55 ° C- 45 sek, forlængelse- 72 ° C- 90 sek, og endelig forlængelse-72 ° C i 7 min. Den 1

st round E6 PCR-produkt (630bp) blev anvendt som en skabelon (1 pi) for 2

anden runde af nestet reaktion til HPV-genotypebestemmelse ved hjælp multiplex sæt HPV typespecifikke primere. Reaktionsvolumenet og bestanddele var ens som nævnt ovenfor. De 2

nd runde indlejret PCR betingelse for HPV genotypning lignede en

st rundt med kun ændringer i Annealing- 55 ° C 40 sek og Extension-72 ° C 45 sek [34]. Alle PCR-produkter blev visualiseret i 2% agarosegel (Amresco, USA) farvet med ethidiumbromid (Amresco, USA) i Gel Doc XR

™ -systemet (Bio-Rad, USA). HR-HPV-positive cervikale pladecellecarcinom prøver DNA blev anvendt som positiv kontrol i hver PCR-kørsel. De primer sekvenser er beskrevet i tabel 1.

Statistisk analyse

data var repræsenteret som middelværdi ± SD eller frekvenser (%). Den χ² test og Fisher eksakte test blev anvendt til at identificere sammenhængen mellem klinisk-patologiske karakteristika og hr-HPV-status. Univariate analyse blev udført ved at beregne odds ratio (OR) sammen med 95% konfidensintervaller (CIS) og P ≤ 0,05 blev betragtet som signifikansniveauet. Epi-info Version 6 software blev anvendt til statistisk analyse

Resultater

Karakteristik af Patient

I undersøgelsen befolkning (n = 106), 68,86% af patienterne ( n = 73) var mænd og 31,13% var (n = 33) kvinder. Patienternes alder varierede fra 25 til 80 år (gennemsnit = 53,41 år). Mere end tre fjerdedele (80,18%) af patienterne var fra landdistrikterne, hvile (19,56%) var fra semi og byområder. Ikke-vegetarisk kost vane blev rapporteret af 92% af patienterne (tabel 2). Studiepopulationen blev grupperet i en af ​​’hr-HPV positive “(n = 33) eller” HPV negative «(n = 73) baseret på tilstedeværelsen af ​​HR-HPV-DNA. Demografiske karakteristika for patienter og deres kostvaner er nævnt i tabel 2. De demografiske faktorer blev ikke signifikant associeret med HR-HPV-infektion (p 0,05). Ud af de 106 sager, de anatomiske steder blandt klinisk-patologiske karakteristika patienter var af mundhulen 81.13% (n = 86), oropharynx 4,71% (n = 5), hypopharynx 2,83% (n = 3), strubehovedet 8,49% ( n = 9) i (tabel 3). Procentdele af patienter diagnosticeret med fremskreden HNCs var trin III 24.52% (n = 26), IVA- 55,66% (n = 59) og IVB 5,66% (n = 6). Pladecellekræft var fremherskende 85,85% (n = 91) histologisk type i nærværende undersøgelse befolkning.

hr-HPV afsløring og dens samarbejde med demografiske og klinisk-patologiske karakteristika

Den høje risiko HPV-DNA blev påvist ved indlejret multiplex-PCR (NMPCR) i 31,13% (n = 33) og hybrid capture i 24.52% (n = 26) af HNC patienter. Følsomheden og negative positive prædiktivt viste sig at være 100% hver; specificitet og positiv prædiktiv værdi (PPV) blev observeret som 91,19% og 78,78% hhv. Denne test klassificeret 93,29% af tilfældene korrekt, og arealet under kurven blev fundet som 89,50% (p 0,001) med 95% CI (81,30% – 97,80%). For at bekræfte de biologisk aktive HPV’er blev p16-ekspression analyseret i både HPV positive og HPV negative tilfælde, og overekspression af p16 blev fundet i HPV-positive tilfælde, som er en indirekte indikator for tilstedeværelsen af ​​HPV (data ikke vist). I HC2 testede prøver, middelværdi RLU-værdi var i området fra 99 til 3466, og den gennemsnitlige positiv cut off (CO) værdi for HR-HPV var 347 (Qiagen, Tyskland) som pr instruktion. De risici HPV High positive tilfælde blev genotype for HPV-undertyper bruger E6 indlejret multiplex PCR. De primer detaljer, der anvendes til E6 indlejret multiplex-PCR [29] er nævnt i tabel 1. HR-HPV positive tilfælde blev yderligere univariant analyseret for livsstil vaner og signifikant sammenhæng blev fundet mellem hr-HPV positivitet og alkoholforbrug (OR = 7,56; 95% CI 2,64-22,19, s. 0,001) som angivet i tabel 2. alkohol drinker prøver har vist sig at bære t-HPV-infektion i forhold til ikke-drikkende. For at se ud for den synergistiske eller supplerende virkning mellem tobak og alkohol vaner, observerede vi signifikant sammenhæng med hr-HPV positivitet (OR = 3,09;. 95% CI 1,00-9,65, p = 0,02), men når tilfælde af rygere og alkoholvaner blev sammen analyseret og beregnet fandt vi, at der ikke var nogen signifikant sammenhæng med hr-HPV positivitet. Betelnød chewers også havde vist mere hr-HPV-infektion. Blandt HR-HPV positive tilfælde (n = 33), 39.40% (n = 13) patienter var tobak ikke-tyggere og 60.60% (n = 20) var tobak tyggere. Ikke rygere gruppe 69,69% (n = 23) har mere sandsynlighed for hr-HPV-infektion i forhold til rygere 30,31% (10). Patienter, der er bosiddende i landdistrikterne har mere HR-HPV positivitet 87,88% (n = 29) i forhold til semi urban 9,09% (n = 3) og urban 3,03% (1%) residenter. Der var ingen signifikant sammenhæng fundet mellem HR-HPV-infektion og køn, betel quid, tobak tyggere, rygevaner, kosten vane, alder og bopæl (tabel 2).

Blandt hr-HPV positive tilfælde (n = 33), mundhulen 72,72% (n = 24), strubehovedet 6,06% (n = 2), hypopharynx 6,06% (n = 2) og oropharynx 15,15% (n = 5) havde hr-HPV-DNA (tabel 3). Der var signifikant sammenhæng mellem HR-HPV-infektion og svælg tumorsted (p = 0,01). Flertal af HR-HPV positive tilfælde 90,90%, (30 af 33) blev præsenteret med fremskredent stadium III, IV A eller IVB sygdom. Histologisk 90.90% HR-HPV positive tilfælde var pladecellecarcinom, 6,06% var verrucous carcinom og 3,03% var andre carcinomer (adenoid cystisk carcinom, spindel celle malign) (tabel 3). Der var ingen signifikant sammenhæng af TNM tumor stadie, histologi kvalitet og morfologi med HR- HPV positivitet (p 0,05). Når HNC sager blev analyseret med livsstilsfaktorer blev alkoholforbrug fundet at være signifikant associeret med HR-HPV-infektion (p 0,001) (tabel 2). Næste vi analyserede hr-HPV-status i mundhulen kræft alene (tabel 4) og sammenlignet med rygning, tobak, alkohol, betelnød brug og fandt, at der var signifikant sammenhæng af hr-HPV positivitet og alkoholforbrug (OR = 2,98; 95% CI. 0,95-9,43, p = 0,03). For at finde den synergistiske eller komplementær effekt af tobak og alkohol vaner, fra univariat analyse blev det fundet, at der er signifikant sammenhæng af hr-HPV positivitet med tobak og alkohol vaner (OR = 2,94;. 95% CI 0,95-8,88, p = 0,05 ) (tabel 4). Men når analyseret tilfælde af rygere og alkoholvaner sammen, blev der ikke signifikant sammenhæng fundet med hr-HPV positivitet.

Foreningen af ​​HPV type 16 og 18 med demografiske og klinisk-patologiske karakteristika

Blandt HR- HPV positive tilfælde, HPV-16 var til stede i 81.81% (n = 27) og HPV-18 i 18,18% (n = 6) af tilfældene. Tobaks- tyggere havde signifikant øget risiko for HPV-16-infektion (p = 0,02), men ikke af HPV-18. Risikoen for HPV-16 er positiv, er 11,88 gange mere i tyggere i sammenligning med ikke-tyggere med 95% CI (1,01 til 317,2). rygning vane viser imidlertid ikke nogen betydning i forhold til ikke-rygere (or- 0,14) med 95% CI (0,01-1,28). HPV-18 positivitet blev fundet i 5 tilfælde (83,33%) af ikke-tyggere i sammenligning med tyggere. HPV-16-infektion hos rygere viste sig at være højere (p = 0,05) sammenlignet med HPV-18 (tabel 5), Selvom hr-HPV-DNA viste sig at være signifikant associeret med alkoholforbrug (tabel 2), men med henvisning til HPV – 16 alene eller, HPV-type 18 alene, var der ikke en sådan sammenhæng fundet med det. Mundhulen 70.37% (n = 19), strubehovedet 7,41% (n = 2), hypopharynx 7,41% (n = 2) og oropharynx 14,82% (n = 4) cancerpatienter har HPV-16 som mest fremherskende HR-HPV-type henviser HPV -18 fandtes kun i mundhulen 83,33% (n = 5) og oropharynx 16,66% (n = 1). I den histologiske subtype pladecellekræft, blev HPV-16 fundet i 25 tilfælde (92,59%) og HPV-18 i 5 tilfælde (83,34%) blev opdaget. HPV-16 var fremherskende hos mænd 66,66% (n = 18) samt forholdsmæssigt højt hos kvinder 33,44% (n = 9), hvorimod HPV-18 var mere hos mænd 83,33% (n = 5) sammenlignet med hunner 16,67% ( n = 1) sager. Betel quid tygge, alkoholforbrug, alder, køn viste ingen signifikant association med tilstedeværelsen af ​​HPV-16, 18 typer (p 0,05). (Tabel 5)

Diskussion

The human papillomavirus (HPV) er blevet identificeret som en ætiologisk faktor i delmængde af cancer i hoved og hals især oropharyngeal cancer [37]. De fleste af de HPV-positive forbundet svælg carcinoma patienter blev rapporteret at være yngre i alder og for det meste ikke havde nogen historie af tobak /alkohol brug [38]. Nogle forskergrupper har slået til lyd for, at HPV-positive og HPV tilfælde negative HNC bør betragtes som to adskilte kliniske, patologiske enheder og de behandlingsregimer skal udformes i overensstemmelse hermed [37-39]. De tumor hypoxi fraktion og spredning evner blev signifikant reduceret i HPV-positive tumorceller efter bestråling i forhold til HPV-negative celler [40]. Det blev påvist, at HPV-positive lokalt avancerede HNC patienter har vist signifikant højere patologisk komplet respons sammenlignet med HPV negative sager, der gennemgår kemoterapi [41]. Talrige undersøgelser har rapporteret HPV-DNA-detektion i HNSCC med varierende satser, de detekteringsteknikker inkluderet i situ hybridisering og Southern blot-hybridisering (lavere følsomhed metoder) eller PCR (Høj følsomhed metoder) [42]. Desuden metoder til prøveudtagning og opbevaring også variere. Manglen på universelt anerkendte standardiserede og klinisk relevant procedure for HPV påvisning har rejst bekymringer om deres anvendelse i rutinemæssig klinisk indstilling. Vores undersøgelse har for første gang vurderet anvendeligheden af ​​HC2 assay i kliniske prøver af HNC sager fra NØ Indien. Vi foreslår, at Hybrid Capture 2 (VK2) assay, som er godkendt af Food and Drug Administration (FDA, USA), for hr-HPV påvisning i kliniske livmoderhalsprøver, kan også bruges til hr-HPV detektering i HNC prøver. På grund af semi-kvantitativ karakter af HC2 assay det kan have ansøgning om prognostisk vurdering af HR-HPV i HNC patienter.

Vi brugte E6 indlejret multiplex PCR (NMPCR) for HPV genotypning, og fandt HPV-16 i 81,81 % (n = 27) og HPV-18 i 18,18% (n = 6) af HR-HPV-positive (n = 33) tilfælde, som er 31,13% af HNC patienter (33/106). Vores undersøgelse data understøttes af tidligere undersøgelser fra Indien, som havde fundet HPV-DNA i området fra 22% til 73% i orale cancertilfælde [43-45]. Blandt (n = 33) HR- HPV tilfælde fandt vi (n = 27) HPV 16, i hvilken 70,37%, 14,82%, 7,41%, 7,41% og (n = 7) HPV-18 i 83,33%, 16,66%, 0 % og 0% af mundhulen, svælg, larynx og hypopharyngeal kræftpatienter hhv. Vores undersøgelse viser højere HPV-16, 18-infektion sats sammenlignet med tidligere undersøgelser fra Indien [43-46]. Vi fandt, at svælg cancer websted sammenlignet med andre tumor-sites har vist betydelig risiko for højrisiko-HPV-infektion. Vores data er støttet af tidligere undersøgelse, hvor det viste sig at have sammenslutning af svælg kræft med høj risiko HPV-infektion [47]. Epidemiologi af HPV positive oropharyngeal pladecellecarcinom (OPSCC) er forskellige fra HPV negative og er kendetegnet ved yngre alder og stærkt forbundet med seksuel adfærd. HPV associeret svælg cancer (HPV-OPC) vokser i incidens og har tydelige kliniske, patologiske, molekylære og epidemiologiske funktioner [38]. Forskellen i vores observationer med andre undersøgelser kan tilskrives forskellige metoder, etnisk variation, tumor-sites osv [48]. Vores data viser, at betelnød tygge, kan rygning ikke signifikant sammenhæng med hr-HPV-infektion. HR-HPV positivitet i HNC tilfælde var lille, som kan forvirre rolle betelnød, ryge som risikofaktorer for HPV-infektion. Det blev demonstreret af Ang et al (2010), at HPV-positiv svælg kræft progression ikke kan være stærkt forbundet med tobak-rygning [47]. Men andre undersøgelser har vist tobak forbindelse med HPV-infektion [49].

Vi observerede i vores data, at tobak chewers har signifikant højere hr-HPV-infektion, udgør tobak tygge som en risikofaktor for HR- HPV-infektion. Koncentrationen af ​​nikotin og dets eksponering varighed til cellen kan ændre antigen medierede signaleringsveje [50]. Ændring i antigenet medieret signalering begivenheder i immuncellerne kan være den mekanisme, ved hvilken nicotin eller andre bestanddele af cigaret inhiberer responset af cellen for bakteriel /viral infektion [50]. Vi foreslår, at tobak er forbundet kræftfremkaldende stoffer kan medføre forandringer i genetiske begivenheder, som kan føre til molekylære ændringer, hvilket gør den enkelte modtagelige for HR-HPV-infektion.

I den foreliggende undersøgelse HR-HPV-infektion viste sig at være signifikant associeret med alkoholforbrug i HNC tilfælde. Oh et al (2014) har for nylig vist, at HR-HPV belastning og alkoholforbrug kan have synergistisk virkning på HR-HPV-infektion og dets persistens i livmoderhalskræft [51]. En anden nylig undersøgelse har vist, at alkoholindtagelse var forbundet med markant øget risiko for HPV-infektion hos mænd [52]. Dette understøtter vores observation, at alkoholindtagelse, kan virke som en risikofaktor for HPV-infektion.

Ethanol, en stor bestanddel af alkoholholdige drikkevarer, oxideres til acetaldehyd af alkohol dehydrogenaser (ADH). Acetaldehyd metaboliseres til acetat ved aldehyddehydrogenaser (ALDH). Dårlig mundhygiejne og rygning kan ændre de orale bakterieflora, som kan føre til øget acetaldehyd produktion [53]. I dyremodeller har acetaldehyd blevet bevist som kræftfremkaldende og mutagene [54]. Genetiske faktorer såsom ADH /ALDH2 polymorfi, manglende ALDH2 eller lave niveauer af ekspression af ALDH2 og alkohol drikkevaner blev rapporteret at være forbundet med højere risiko for hoved og halscancer [55, 56].

Alkohol kan også ændre medfødte immunreaktion i dosisafhængig måde, hvilket kan resultere i ændret inflammatoriske respons på infektion [57]. Da immunrespons spiller vigtig rolle i HPV-infektion, kan alkoholforbruget hjælpe med at omgå immunresponset for HPV-infektion. Systemisk immunitet komponenter såsom cytokin serum niveau har vist sig at blive forøget i vedvarende HPV infektion tilfælde [58].

Vores undersøgelse dokumenterer om øget sårbarhed for hr-HPV-infektion i tobak tyggere og alkohol drikker mest i mundhulen kræft patienter. Vores observation er godt understøttet af tidligere HNC undersøgelser fra Indien og i hele verden [14]. Fra det samlede antal sager, hvor tobak tygge og rygevaner blev analyseret med HPV, foreningerne var ikke signifikant (tabel 2), som hovedparten af ​​befolkningen var HPV negative og HPV positive tilfælde var mindre. Men da de tygge vaner blev taget langs HPV positive tilfælde alene, var signifikant sammenhæng fundet (tabel 4) beviser, at tobak tygge og alkoholforbrug fungere som risikofaktorer for HPV-infektion. Mere antal svælg kræft i vores undersøgelse kunne have bragt en bedre vurdering af alkohol og tobak sammen med hr-HPV i disse kræftformer. Vi fokuserede primært på HR- HPV DNA-detektion ved at ansætte nyere metode såsom HC2 assay og E6-NMPCR som mindre anvendt i HNC. Den alkoholindtagelse og tobak tygge /rygning er udbredt vaner i nordøstlige indiske befolkning. Vi føler, at masse sensibilisering gennem screening cum oplysningsprogrammer om HNC risikofaktorer kan hjælpe med at reducere HNC forekomsten i NE befolkning i fremtiden.

Vi konkluderer fra vores nuværende studie data, hr-HPV-infektion kan være mere udbredt i tobak chewers, alkohol drikkende og de fungerer som risikofaktorer for HPV-infektion i HNC tilfælde af nordøstlige Indien. Hybrid Capture 2 (VK2) assay grund af sin høje negativ prædiktiv værdi, specificitet og sensitivitet kan anvendes til HR- HPV detektion i HNC kliniske prøver.

Tak

Vi anerkender samarbejdet af hoved og hals kræftpatienter, der deltog i undersøgelsen. Vi takker også Madhumita Dey og Anindita Dutta for de værdifulde forslag og redigering af manuskriptet.