PLoS ONE: Identifikation af HSA-miR-335 som prognostisk Signatur i Gastric Cancer

Abstrakt

Baggrund

mavekræft (GC) er en af ​​de mest almindelige malignitet og primære årsag til død i kinesiske cancerpatienter. Gentagelse er en vigtig faktor, der fører til behandlingssvigt og lavt niveau af 5-års overlevelse i GC patienter efter kirurgisk resektion. Derfor identifikation af biomarkører med potentiale i at forudsige recidiv risiko er det centrale problem i prognosen i GC patienter.

Patienter og metoder

I alt 74 GC patienter blev udvalgt til systematisk analyse, som består af 31 patienter med recidiv og 43 patienter uden tilbagefald. Først blev miRNA microarray og bioinformatik metoder anvendt til at karakterisere differentiale udtrykte miRNA fra primære tumor prøver. Efter, vi brugte en ROC metode til at vælge signatur med bedste sensitivitet og specificitet. Endelig har vi valideret signaturen i GC prøver (frosne friske og blodprøver) ved hjælp af kvantitativ PCR.

Resultater

Vi har identificeret 12 differential miRNA herunder 7 up-regulerede og 5 ned-regulerede miRNA i gentagelse gruppe. Ved hjælp af ROC metode, vi yderligere konstateret HSA-miR-335 som en signatur til at genkende tilbagefald og ikke-gentagelse sager i uddannelse prøver. Desuden har vi valideret denne underskrift med kvantitativ PCR-metoden i 64 testprøver med ensartet resultat med træningssæt. En høj frekvens tilbagefald og ringe overlevelse blev observeret i GC tilfælde med høj grad af HSA-MIR-335 (

P

0,001). Derudover har vi vurderet, at HSA-miR-335 var involveret i reguleringen af ​​målgener i flere onkogene signal-veje, såsom p53, MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-lignende receptor og fokal vedhæftning.

Konklusion

Vores resultater viser, at HSA-miR-335 har potentiale til at genkende tilbagefald risiko og forholde sig til prognosen for GC patienter

Henvisning:. Yan Z, Xiong Y, Xu W, Gao J, Cheng Y, Wang Z, et al. (2012) Identifikation af HSA-miR-335 som prognostisk Signatur i Gastric Cancer. PLoS ONE 7 (7): e40037. doi: 10,1371 /journal.pone.0040037

Redaktør: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Spanien

Modtaget: Februar 21, 2012; Accepteret: 30. maj 2012; Udgivet 3. juli, 2012 |

Copyright: © 2012 Yan et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Disse forfattere har ingen støtte eller finansiering til at rapportere

konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

i øjeblikket kirurgi er stadig den vigtigste mulighed for at behandle gastrisk cancer (GC), men selv efter at udføre helbredende resektion, vil ca. 40-65% af GC patienterne oplever en gentagelse af sygdommen muligvis omfatter lokal tilbagefald, peritoneal formidling eller hæmatogen metastaser [1], [2]. Af denne grund er den 5-års overlevelsesraten for GC patienter var stadig i et lavt niveau. En stor udfordring for at forbedre kliniske resultater er bedre at forstå molekylære mekanismer og anerkende robuste underskrifter for prognosen for GC.

Flere risikofaktorer, herunder patologisk serosa tilstand, status margin, tumor mikrokar tæthed og genekspression ændringer i forbindelse med gentagelse er blevet rapporteret [3], [4]. Derudover har enkelte prædiktive eller diagnostiske metoder blevet anvendt til at evaluere gentagelse risikovurdering baseret på genekspression profilering eller et sæt af kliniske variable [5] – [8]. disse mange observationer herunder flere gen eller protein ændringer, kan dog hæmme deres kliniske anvendelse. Pålidelige og bekvem molekylære markører til kliniske praktikere er nødvendige for prognosen i GC.

En nylig opdaget af miRNA er stærkt konserverede i genomerne fra vanddyr, hvirveldyr og planter. De tjener kritiske funktioner på flere biologiske processer [9], herunder udviklingsmæssige timing, mønstre og embryogenese, differentiering, organogenese, og apoptose [10]. På grund af sine mange vigtige biologiske funktioner, er det ikke overraskende, at den unormale miRNA udtryk vil føre til sygdom og endog kræft [11].

miRNA er blevet præsenteret som effektive potentielle biomarkører for at opspore vævet oprindelse i maligne tumorer i ukendt primær oprindelse [12]; miRNA udtryk profiler er i stand til at afspejle den udviklingsmæssige afstamning og differentieret tilstand tumorer [11]. Systematisk analyse på stabiliteten af ​​miRNA samt optimerede betingelser for ekspressionsanalyse bruger formalin-fikseret paraffinindlejrede og blodprøver er blevet rapporteret tidligere [13] – [15], kaste lys over deres uventede diagnostiske potentiale. Der er et begrænset antal miRNA [16] i det humane genom, som vides at regulere ca. 30% af gener [17]. Disse attributter af miRNA kan give os en simpel metode til at forudsige tilbagefald risiko for kræftpatienter.

I denne undersøgelse har vi identificeret en miRNA (HSA-miR-335), der har potentiale til at forudsige gentagelse risiko for GC baseret på microarray og kliniske data for en lille størrelse prøve i kinesiske GC patienter. Vores resultater viste, at HSA-miR-335 kunne være fungere som et klinisk prognostisk signatur for GC.

Metoder

kliniske prøver

Denne undersøgelse er blevet godkendt af den etiske komité i Wuhan General Hospital i Guangzhou Command, PLA. Alle gastrisk kræftpatienter og ikke-cancer patienter med fordøjelsessygdomme forudsat skriftligt informeret samtykke i vores undersøgelse.

Patienter i gastrektomi for potentielt helbredelig GC på Wuhan General Hospital i Guangzhou militære kommando var i dette studie. Berettigelse til optagelse i denne undersøgelse omfattede histologisk bekræftet adenokarcinom i maven eller gastroøsofageal krydset. Alle patienter havde modtaget komplette resektioner herunder et forsøg på komplet tumor fjernelse med inddragelse af brede negative marginer og udvidet retroperitoneal lymphadenectomy (D2 type). Oplysninger om clinicopathologic, terapeutisk, og resultatet parametre af patienter, Maj 2005 Feb for 2012 blev indsamlet retrospektivt. Kræft iscenesættelse blev udført i overensstemmelse med den femte udgave af den amerikanske Joint Commission om kræft TNM kriterier.

I alt 12 differential udtrykte miRNA, herunder 7 opreguleret og 5 nedreguleres, blev identificeret ved SAM i GC prøver med og uden tilbagefald i henhold til kriterierne i FC 2, q = 0. Kolonner repræsenterer prøver og rækker repræsenterer miRNA (sort, grøn og rød svarer til uændret, nedreguleret og opreguleret henholdsvis) . R: tilbagefald prøver; NR:. Non-gentagelse prøver

Gentagelse blev defineret som enhver kræft tilbagefald, herunder lymfeknude, rest mave, lokale, peritoneal og hæmatogene metastaser. Alle patienter, der har oplevet fornyet kræft blev diagnosticeret klinisk eller radiografisk, og bekræftet ved biopsi via øvre gastrointestinal endoskop eller perkutan punktering. Den radiografiske standard for tilbagefald diagnose inkluderet CT eller MR-scanning af brystet, mave, bækken, hoved og ben scanninger eller andre diagnostiske tests, som blev brugt kun under særlige omstændigheder. Alle prøverne blev opnået fra kirurgiske prøver af patienter med gastrisk adenocarcinom og alle patienter gav skriftligt samtykke til anvendelsen af ​​disse væv til forskningsformål. Vi valgte prøver (herunder frosne friske og blodprøver) fra 74 patienter med og uden GC tilbagefald.

miRNA Microarray

miRNA microarray analyse blev udført som beskrevet i detaljer på hjemmesiden for CapitalBio ( https://www.capitalbio.com) og også i henhold til Hua procedure [18]. Kort fortalt blev 50-100 ug af total RNA anvendes til at ekstrahere miRNA bruger miRNA isolationskit AM1560 (Ambion, USA). Fluoresceinmærket miRNA blev anvendt til hybridisering på Affymetrix miRNA Chip indeholdende 1075 prober. Fluorescenssignalet blev scannet ved GeneChip Scanner 3000 7G (Affymetrix, USA). Rådata blev normaliseret og analyseret i GeneChip kommandokonsollen 1.1 software (Affymetrix, USA).

Vi opnåede 2 miRNA HSA-miR-335 og HSA-miR-128b med bedste sensitivitet og specificitet ved klassificering GC prøver med og uden tilbagefald. Tal (a) til (l) repræsenterer ROC kurver for HSA-MIR-429, HSA-MIR-3755, HSA-MIR-128b, HSA-MIR-133b, HSA-MIR-133a, HSA-MIR-335, HSA -miR-194, HSA-miR-142-5p, HSA-miR-373, HSA-miR-19a, HSA-miR-142-3p og HSA-miR-32, hhv.

RNA Extraction fra Frozen frisk og blodprøver

RNA blev ekstraheret fra frosne friske GC væv ved hjælp af en standard Trizol protokol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). For blodprøver, blev miRNA ekstraheret under anvendelse af miRNease (Qiagen). Kort fortalt blev 700 pi QIAzol reagens tilsat til 200 pi plasmaprøve og inkuberet i 5 minutter ved stuetemperatur. Derefter blev 140 pi chloroform tilsat, vortexblandet i 15 sekunder og inkuberet i 3 minutter ved stuetemperatur. Dette blev efterfulgt af en centrifugering af 14000 rpm ved 4 ° C i 15 min. Den øvre, vandig fase blev fjernet og 1,5 gange af dens volumen tilsat i 100% ethanol. Hver 700 pi blanding blev anbragt på en søjle og centrifugeret ved 13000 rpm ved stuetemperatur i 15 sek. Efter, blev 500 pi Buffer RPL tilsættes kolonnen og centrifugeret ved 13000 rpm ved stuetemperatur i 2 minutter. Søjlen blev derefter centrifugeret ved 13000 rpm ved stuetemperatur for at tørre det. Følgende var elueringstrinnet med 20 pi nuclease-frit vand. . Den eluerede RNA blev opbevaret ved -70 ° C

Resultaterne i frosne friske prøver viste, at i 26 tilfælde med tilbagefald, 21 tilfælde med høj udtrykt af HSA-MIR-335; og i 38 tilfælde uden tilbagefald, 29 tilfælde med lavt udtrykt af HSA-miR-335. De samme resultater blev observeret i blodprøver, i 26 tilfælde med recidiv, 19 sager med højt udtrykt af HSA-miR-335; og i 38 tilfælde uden tilbagefald, 30 tilfælde med lavt udtrykt af HSA-miR-335. Der var 11 sager blev ikke matchet i udtrykket niveau af HSA-miR-335 i sammenligning af resultater mellem frosne friske og blodprøver.

Real-time kvantitativ PCR

Modne miRNA sekvenser blev erhvervet fra Sanger Institute miRBase Sequence Database (https://microrna.sanger.ac.uk/sequences/). Stem-loop revers transkription (RT) primere blev designet i henhold til Chen [19]. RT-reaktionen anvendte betingelser involverede inkubationer ved 16 ° C i 30 minutter; 37 ° C i 30 minutter og derefter 72 ° C i 10 min. Den termiske cyklus-forløb for PCR involverede en initial denatureringstrin ved 95 ° C i 5 minutter efterfulgt af 40 cyklusser ved 95 ° C i 30 s, 57 ° C i 30 s og 72 ° C i 30 s. De smelte kurver for hver PCR blev nøje analyseret for at bestemme enhver ikke-specifik forstærkning. Udtrykket af hver miRNA blev beregnet ved hjælp af 2

-ΔΔ

C

T formel og normaliseret til U6 snRNA udtryk [20].

A. FC Værdien af ​​HSA-miR-128b og HSA-miR-335 var 1,647 og 3,589 sammenlignet recidiv med ikke-gentagelse prøver baseret på real-time PCR-data, hhv. Ensartede resultater blev observeret på microarray data. B. HSA-miR-335 var mere sensitiv og specifik end HSA-miR-128b og HSA-miR-335 /128b ved klassificering tilbagefald og ikke-recidiv prøver.

Unsupervised Algoritme

SAM [21] blev anvendt til at udføre clustering beregning opsyn. Den cutoff for signifikans blev bestemt ved en tuning parameter delta, valgt af bruger baseret på den falske positive sats og repræsenteret ved q-værdi. Vi valgte en fold ændring større end 2, og q = 0, da kriterierne for den differentielle ekspression af miRNA valg.

A. Overlevelse kurve for fornyet gruppe sammenlignet med ikke-recidiv gruppe i GC patienter. Der sås en signifikant forskel på overlevelsen tid mellem GC patienter med og uden recidiv (

P

0,001). B. Survival kurve af miR-375 (+) sammenlignet med miR-375 (-) gruppe i GC patienter. miR-375 (+) gruppe har dårlig prognose sammenlignet med miR-375 (-) gruppe (

P

0,001)

ROC og Kaplan-Meier Survival Curve Analysis

ROC kurve analyse blev udført ved hjælp af MedCalc softwarepakker (Verison 8.2.1.0, Mariakerke, Belgien). De AUC kurver forudsat et mål for de samlede resultater af en diagnostisk test. Forholdet mellem miRNA signalintensiteter og Ct-værdi af hver miRNA blev brugt til ROC beregning i prøver. Overlevelse analyser blev også udført af MedCalc softwarepakke.

Statistisk analyse

De kliniske data blev analyseret ved hjælp af Chi-Square test. Den kumulative overlevelse kurve blev sammenlignet ved log-rank test. For alle analyser, en forskel med

P

. 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Det vigtigste led i denne pathway netværk omfatter af p53, MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR , Toll-lignende receptor, fokal vedhæftning Vejviser

miRNA Målrettet Gene forudsigelse og Signal Pathway Analyser

Vi udnyttede en miRNA target gen forudsigelse database Targetscan (http.: //www.targetscan.org) for at vælge plausible mål af differentierede udtrykt miRNA. En integreret gen ontologi database molekylære annotation systemet (MAS3.0, https://www.capitalbio.com) blev anvendt til at undersøge miRNA målrettede gener og deres engagement i forskellige signalveje.

Resultater

Kliniske Karakteristik af GC patienter

i alt 74 patienter med /uden recidiv blev udvalgt til systematisk analyse. 31 patienter havde tilbagevendende GC, som blev bevist patologisk ved biopsi ved anastomose sites via endoskopi. 43 patienter uden tilbagefald blev udvalgt som kontrolgruppe med kampe i køn, alder ved diagnose, TNM mellemstationer, behandling og antallet af involverede lymfeknude (tabel 1).

Der var ingen signifikant forskel i Køn (

P

= 0,469), Age (

P

= 0,502), Tumor placering (

P

= 0,299), Differentiering (

P

= 0,511) , Lymfeknude resektion (

P

= 0,217) og status adjuverende kemoterapi (

P

= 0,214). Der var signifikant forskel i UICC stadium (

P

= 0,108) og overlevelse /dødsfald-forhold bemærkede (8/23 i recidiv gruppen versus 34/9 i ikke-recidiv gruppe,

P

0,001) (tabel 1)

miRNA Expression Profiler Associated med GC gentagelse

Vi brugte en miRNA microarray chip til at måle miRNA ekspressionsniveauerne i 10 GC prøver med /uden recidiv (5/5) som træningssæt. Når man sammenligner miRNA udtryk mellem grupperne, 7 opreguleret og 5 ned-regulerede miRNA fundet, der var statistisk signifikante i GC tilbagevendende gruppen (tabel 2). Disse 12 miRNA kunne bruges til at skelne mellem GC med og uden tilbagefald baseret på en hierarkisk klyngeanalyse (figur 1).

HSA-miR-335 er den bedste Signatur for klassificering GC med og uden Gentagelse i Training Set

Vi brugte ROC metode til at analysere følsomheden og specificiteten af ​​kandidatlandene biomarkører baseret på miRNA microarray data. Vi opnåede 2 miRNA HSA-MIR-335 og HSA-MIR-128B med bedste følsomhed og specificitet ved klassificering GC-prøver med og uden tilbagefald (figur 2, tabel 3). Kombineret med FC-værdi (FC

HSA-miR-335 = 4,675; FC

HSA-miR-128b = 1,453) af hver biomarkør, vælger vi HSA-miR-335 for yderligere undersøgelse

Validering af Signatur i test prøver af real-time PCR

udtrykket niveau af HSA-miR-335 blev opdaget af real-time PCR i 64 test GC prøver sammenlignet med den matchede tilstødende væv som kontrol. Resultaterne viste, at i 26 tilfælde med tilbagefald, 21 tilfælde (21/26, 80,8%) var høj-udtrykt af HSA-MIR-335; og i 38 tilfælde uden tilbagefald, 29 sager (29/38, 76,3%) var lavt udtrykt af HSA-miR-335 (figur 3). De samme resultater blev observeret i blodprøver ved hjælp af en blandet blodprøve fra 20 ikke-cancer patienter med fordøjelsesproblemer sygdomme som kontrol: I 26 tilfælde med recidiv, 19 sager (19/26, 73,1%) var højt udtrykt af HSA-miR -335; og i 38 tilfælde uden tilbagefald, 30 sager (30/38, 78,9%) var lavt udtrykt af HSA-miR-335 (figur 3). Der var 11 tilfælde (11/64, 17,2%) ikke modsvares i udtrykket niveau af HSA-miR-335 i sammenligning af resultater mellem frosne friske og blodprøver.

Derudover har vi opdaget ekspressionsniveauet HSA-miR-128b i 64 GC blodprøver ved hjælp af real-time PCR. Resultaterne viste, at i 26 tilfælde med recidiv, 18 tilfælde (18/26, 69,2%) var højt udtrykt af HSA-miR-128b; og i 38 tilfælde uden tilbagefald, 27 tilfælde (27/38, 71,1%) var lavt udtrykt af HSA-miR-128b. FC værdi af HSA-MIR-128b og HSA-MIR-335 var 1,647 og 3,589 sammenlignet recidiv med ikke-tilbagefald prøver, henholdsvis (figur 4A). Vi analyserede også følsomheden og specificiteten af ​​HSA-MIR-335, HSA-MIR-128b og HSA-MIR-335 /128b (kombineret med MIR-335 og MIR-128b som en signatur) baseret på realtids-PCR data. Resultaterne viste, at HSA-MIR-335 var mere følsom og specifik med en AUC-værdi på 0,88 end HSA-MIR-128b (AUC = 0,79) og HSA-MIR-335 /128b (AUC = 0,84) ved klassificering tilbagefald og ikke- gentagelse prøver (figur 4B, tabel 3).

HSA-miR-335 som en sygdom Progression Signature at forudsige Gentagelse Risk i GC patienter

De 74 GC patienter blev inddelt i to grupper, herunder 31 patienter med tilbagefald som en gruppe og 43 patienter uden tilbagefald som en gruppe. De patienter, som oplevede en gentagelse af GC havde en signifikant reduceret median overlevelse (

P

0,001; figur 5A). Vi har registreret ekspressionsniveauerne af HSA-MIR-335 i alle 74 GC-prøver. En væsentlig forskel er observeret i to grupper, der repræsenterer høj-udtrykt af HSA-MIR-335-gruppen og lav udtrykt af HSA-MIR-335 gruppe som følger: MIR-335 (+) og MIR-375 (-). GC patienter (n = 35) med miR-335 (+) havde signifikant reduceret median overlevelse sammenlignet med dem (n = 39) med miR-375 (-) (

P

0,001; 5B).

signalvej og Gene ontologi Analyser af HSA-miR-335 Målrettede Gener

for at undersøge de mulige reguleringsmekanismer af HSA-miR-335 i færd med GC tilbagefald, vi udnyttet en bioinformatik-database for at vælge plausible mål denne miRNA. I alt 255 gener blev forudsagt som målgener af HSA-MIR-335. Signalvej analyser viste, at de fleste af de målrettede gener, der blev reguleret af HSA-miR-335 var involveret i de samme veje, såsom p53, MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-lignende receptor, fokal vedhæftning ( tabel 4, figur 6). Vi foreslog, at disse mange pathway ændringer kan være involveret i kliniske patologiske funktioner og patienternes resultatet af GC. I mellemtiden, brugte vi en integreret gen ontologi database at anmærke den molekylære funktion af miRNA målrettede gener. Resultaterne viste, at gener reguleret af HSA-miR-335 har deltaget i de fleste af de vigtige biologiske proces i forbindelse med human cancer (tabel 5).

Diskussion

Gentagelse er hyppige i GC patienter efter operation ; Derfor er det vigtigt at identificere tilfælde med en høj gentagelse risiko. Traditionel klinik patologiske faktorer er til tider utilstrækkelige til forudsigelse af tilbagefald i individer og mange forskergrupper har forsøgt at identificere biomarkører ved anvendelse af nye teknologier, der kan skelne disse højrisiko-sager. En række nylige undersøgelser har dokumenteret, miRNA ændringer, der er involveret i initiering og progression af humane kræftformer. miRNA udtryk profilering af humane tumorer har identificeret udtryk signaturer forbundet med diagnose, iscenesættelse, progression, prognose og respons på behandlingen.

I denne undersøgelse har vi analyseret primære GC tilfælde for at forudsige recidiv og defineret ikke-tilbagevendende tilfælde som dem fri for GC i mindst et år efter kurativ resektion. Vi identificerede HSA-miR-335 som en plausibel prognose underskrift GC baseret på microarray data fra 10 GC prøver som træningssæt. Desuden vi valideret denne signatur på 64 prøveemner med mere end gennemsnitligt 85% sensitivitet og specificitet. Overlevelsen analyserer resultater viste, at patienter med høje ekspressionsniveauer af HSA-MIR-335 havde nedsat samlet overlevelse sats sammenlignet med dem med lave ekspressionsniveauer af HSA-MIR-335. Disse resultater viser, at denne signatur havde potentiale til at forudsige en gentagelse af GC.

Microarray teknologi har udviklet sig markant og blive en omfattende og nyttig metode til at hjælpe os med bedre forstår kræft [22]. Det er nu almindeligt anvendt til at undersøge de funktionelle roller miRNA i mange typer af cancer [23], med flere væsentlige miRNA virkninger på onkogener og tumorsuppressorgener identificeret. Af de 12 miRNA er identificeret i denne undersøgelse, HSA-miR-373 var en af ​​de ned-regulerede miRNA i tilbagevendende gruppe. Dette kan være et onkogen fungerer gennem den velkendte p53 pathway, som er involveret i carcinogenese [24]. Nogle miRNA, såsom HSA-miR-19a og HSA-miR-32, er placeret i cancer-associerede genomiske regioner, der måtte være involveret i maligniteter via sletning, forstærkning, eller epigenetiske modifikation mekanismer [25]. Derudover HSA-MIR-429 var opreguleret i tilbagevendende tilfælde og grupperet på kromosom 1, der bekræfter, at nogle miRNA såsom HSA-MIR-200b er grupperet med HSA-MIR-429 og i stand til at co-regulere deres målrettede gener [26 ].

Indtil nu, til miRNA udpeget i denne undersøgelse forudsige risikoen for GC tilbagefald er ikke blevet velkarakteriseret. HSA-MIR-335, som transkriberes fra det genomiske region kromosom 7q32.2, er blevet rapporteret at forskellen udtrykt i godartede og ondartede tumorer [27]. Vigtigere er det også påvist, at MIR-335 regulerer RB1 og kontroller celleproliferation i en p53-afhængig måde [28]; deltager i udviklingen af ​​brystcancer [29]; regulerer vækst og invasion af maligne celler [30]. Den nyeste forskning rapporterer, at miR-335 kan fungere som en metastase suppressor i GC ved at målrette Bc-2 og SP1, og kunne videreudvikles som en potentiel prognostisk faktor [31]. For at opsummere de ovenstående synspunkter, funktionen af ​​miR-335 var kontroversiel. Vores resultater viser, at HSA-MIR-335 var opreguleret i GC tilbagefald prøver og involveret i de fleste af de onkogene signalveje, såsom p53, MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-lignende receptor, fokal adhæsion . Disse multiple signal pathway ændringer, især herunder p53 pathway, rimelighed påvirke kliniske resultat, herunder GC tilbagefald risiko [32]. Selvom den prognostiske rolle af HSA-MIR-335 i gastrisk cancer ukendt, er vores resultater opmuntrende.

Blod er den mest tilgængelige prøve på hospitaler. Den kliniske betydning af identifikation af biomarkører, som kunne let detekteres ligesom HSA-miR-335 er naturligvis. Desuden arkiverede paraffinindlejrede prøver er også en af ​​de let tilgængelige materialer i hospitaler, der ofte holdes med veldokumenterede klinisk-patologiske data. De repræsenterer fremragende kilder til prognostisk anvendelse i både grundforskning og kliniske undersøgelser. miRNA varierer i størrelse fra 19-25 nt og de beskyttes af den RNA-induceret nedregulering kompleks, som kan gøre dem mindre modtagelige for RNA-nedbrydning i forhold til mRNA i disse væv [33]. Således var vi i stand til at opdage miRNA-ekspression i paraffinindlejrede prøver og fokuseret på systematisk analyse ved hjælp af denne signatur for relevant prognostisk værdi. PCR-baserede klassificering metode synes derfor at give os en måde, ved hjælp af let tilgængelige kliniske prøver, at forudsige recidiv.

Sammenfattende har vi identificeret en prognose-relateret miRNA som kan forudsige gentagelse risiko for GC patienter. Ved at kombinere denne signatur med konventionelle clinicopathologic faktorer, bør vi være i stand til at forudsige en patients sygdom udfald mere præcist. Derudover identifikation af højrisikopatienter ville føre til overvejelse af yderligere terapeutisk intervention og kan således informere lægen om en bedre opfølgning program.

Tak

Vi takker Dr. Li Wang (National Institute of Environmental Health Sciences, USA) for indsigt kommentarer og manuskript redigering.