PLoS ONE: Isoleret Lung perfusion som en adjuverende behandling af kolorektal cancer lungemetastaser: en præklinisk undersøgelse i en gris Model

Abstrakt

Baggrund

lunge er en hyppig site af kolorektal cancer ( CRC) metastaser. Efter kirurgisk resektion, har lungemetastaser gentagelser blevet relateret til tilstedeværelsen af ​​mikrometastaser, potentielt tilgængeligt for en høj dosis kemoterapi administreret via adjuvans isoleret lunge (ILP). Vi søgte at bestemme

in vitro

den mest effektive stof, når det gives til CRC cellelinjer under en kort eksponering og

in vivo

dets umiddelbare og forsinkede tolerance, når det administreres via ILP.

Metoder

først, effekten af ​​forskellige cytotoksiske molekyler mod et panel af humane CRC cellelinjer blev testet

in vitro

hjælp cytotoksisk assay efter 30 minutters eksponering. Derefter tidligt (operativ) og forsinket (1 måned) tolerance af to koncentrationer af molekylet indgives via ILP blev testet på 19 voksne svin ved hjælp hæmodynamiske, biologiske og histologiske kriterier.

Resultater Salg

In vitro

, gemcitabin (GEM) var den mest effektive lægemiddel mod udvalgte CRC cellelinier.

In vivo

, GEM blev administreret via ILP med regelmæssige (20 ug /ml) eller høj (100 ug /ml) koncentrationer. GEM administration var forbundet med forbigående og dosisafhængig pulmonal vasokonstriktion, hvilket fører til en frivillig reduktion i pumpe indstrømning for at opretholde en stabil lungearterietryk. Efter denne graduering blev ILP hjælp GEM ikke forbundet med nogen systemisk lækage, systemisk skade, og akut eller forsinket histologisk pulmonal toksicitet. Farmakokinetiske undersøgelser afslørede dosisafhængig optagelse forbundet med heterogen fordeling af molekylet i lungeparenkymet, og vedvarende cytotoksicitet venøs spildevand.

Konklusioner Salg

GEM er effektiv mod CRC-celler selv efter en kort udsættelse . ILP med GEM er en sikker og reproducerbar teknik

Henvisning:. Pagès P-B, Facy O, Mordant P, Ladoire S, Magnin G, Lokiec F, et al. (2013) Isoleret Lung perfusion som en adjuverende behandling af kolorektal cancer lungemetastaser: en præklinisk undersøgelse i en gris Model. PLoS ONE 8 (3): e59485. doi: 10,1371 /journal.pone.0059485

Redaktør: Ajay Goel, Baylor University Medical Center, USA

Modtaget: August 23, 2012; Accepteret: 14 Feb 2013; Udgivet: 18 Mar 2013

Copyright: © 2013 Pagès et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af den franske nationale Liga mod kræft [SW /SP-116F.2010] og den Videnskabelige Komité for School of Medicine i Dijon, Frankrig. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Ca. 11% af patienter med colorectal cancer (CRC) vil med tiden udvikle lungemetastaser [1]. Denne tilstand er forbundet med 5-års overlevelsesraten i området fra 5 til 50%, i henhold til muligheden for at opnå fuldstændig kirurgisk resektion [2] – [7]. Trods kirurgisk resektion, pulmonal gentagelse forekommer i mere end 40% af patienterne, sandsynligvis på grund af mikrometastaser, der allerede var til stede under den indledende procedure [3]. Adjuverende kemoterapi forbedrer progressionsfri men ikke samlet overlevelse [8], og stigningen i den systemiske dosis forbundet med uacceptable toksicitet [9].

Den komplette tumor og metastase kontrol har altid været hjørnestenen i anticancer behandlingsformer. Desuden seneste data viser, at metastase er en flerstrenget proces, hvorved cancerceller kan frø fjerne steder samt den primære tumor selv [10]. Denne senere proces, kendt som ‘selv-seeding, “er blevet valideret i forskellige forsøgsmodeller [11], og udgør et stærkt argument til fordel for den lokale styring af metastatiske sygdomme.

For at mindske gentagelse af CRC lungemetastaser, har nogle forfattere udviklet teknikken med isolerede lunge (ILP) [12], der tillader at øge dosis af cytotoksisk middel leveret til lungevævet uden systemisk eksponering. Denne teknik har vist sig at være sikker og effektiv mod CRC lungemetastaser i gnavermodel [13] – [17]. De vigtigste mål med denne undersøgelse var at bestemme

in vitro

den mest effektive stof, når det gives til CRC cellelinjer under en kort eksponering og

in vivo

dets umiddelbare og forsinkede tolerance, når det administreres via ILP i en gris model.

Materialer og metoder

In vitro Anti tumorale Effect

cellelinjer.

et panel af humane kolorektale adenocarcinom cellelinjer (HT29, HCT8, HCT116, SW480) blev valgt til at repræsentere mangfoldigheden i CRC kemo følsomhed og mutationsstatus (tabel 1), købt fra den amerikanske Tissue og Cell Collection (ATCC ®, Rockville, MD, USA) og vedligeholdes i kultur som anbefalet.

forbindelser

de følgende forbindelser blev valgt som de mest effektive lægemidler mod CRC i kliniske omgivelser [18] – [19]:. Gemcitabin (GEM) (Gemzar®, Lilly) , Cisplatin (cisplatin Mylan®, Mylan), 5 fluorouracil (5 FU) (Fluorouracile ACCORD®, Accord Healthcare), Oxaliplatin (Eloxatine®, Sanofi), Raltritexed (Tomudex®, Hospira) og irinotecan (Campto®, Pfizer).

cytotoksicitet assay.

Anti tumorale virkning af disse forbindelser blev bestemt ved anvendelse cytotoksisk assay som tidligere beskrevet [20]. Kort beskrevet blev celler podet i 24-brønds plader, fik lov at vokse, indtil konfluens i 24 timer, og udsat for alene eller i kombination i 30 minutter udvalgte forbindelser. Efter 4 dage blev celler farvet ved anvendelse af krystalviolet, og absorbansen blev målt i hver brønd ved en automatisk fotometer (590-nm filter, Spectra-A®, Varian, Frankrig). Celleoverlevelse blev beregnet som procentdelen af ​​absorbans i behandlede

vs Salg ubehandlede brønde, og IC50 (koncentration opnå en inhibering af væksten på 50% af celler) blev bestemt. Den mest effektive lægemiddel blev defineret som forbindelsen med den laveste IC50 [20], og testet i kombination med den næstmest effektive forbindelse.

Isolated Lung Perfusion

Dyr.

Tre måneder gamle store hvide svin (n = 19), der vejer 50 ± 3 kg hver, blev købt fra Hazotte (Beaumont, Frankrig). Dyrene fik lov at akklimatisere til laboratoriemiljøet i 7 dage med fri adgang til foder og vand. Eksperimenter blev godkendt af Det Dyreetiske udvalg universitetet i Bourgogne, Frankrig (A0809).

Anæstesi.

Dyrene blev bedøvet som beskrevet tidligere [21]. Det systemiske arterielle blodtryk blev overvåget gennem et kateter indsat i overarm arterie. Den puls, elektrokardiogram, nasal temperatur, ilt blodet mætning blev overvåget ved hjælp af NICO-systemet (Novametrix Medical Systems, Wallingford, CT). Ufraktioneret heparin (100 UI /kg) blev indgivet før vaskulær udelukkelse af lungen. For at opnå perioperativ analgesi blev 20 ml af ropivacain 0,75% injiceres i perilesional hud og brystvæggen. Tramadol og paracetamol blev ordineret i den postoperative periode med jævne mellemrum.

Kirurgisk Teknik.

Efter at have lagt dyret på højre laterale decubitus, en venstre posterolateral lateral torakotomi blev udført i den fjerde intercostals plads . Hjertesækken blev åbnet bredt, og den venstre vigtigste lungepulsåren (LMPA) og både venstre pulmonale vener (LPV) blev isoleret. Kanylering blev udført ved hjælp af en metal tippes højre anguled kanyle (High Flow aortabuen kanyle 3,8 mm, TERUMO®, Ann Arbor, USA) indsat i LMPA og en venøs kanyle (DLP Venstre Heart Vent Kateter, Medtronic®, Minneapolis, USA) indsat i konvergensen mellem LPVs via venstre atrium (LA). En skærm linje blev indsat i oprindelsen af ​​LMPA. Den LMPA og LA var end fastspændt, blev venstre lunge ventileret og venstre hovedbronchus blev lokket til at okkludere bronkial arterielt blod [22].

Isoleret Lung perfusion.

ekstrakorporal cirkulation systemet omfattede en pumpe (Biomedicus®, Minneapolis, USA), varmeveksler, beholderen og PVC-rør af ¼ inch diameter. Priming blev opnået med en opløsning indeholdende 850 ml voluven (6% hydroxyethylstivelse 130 /0,4) og 150 ml blod fra lungekredsløbet. Efter start af perfusion, blev pumpen flow gradvist at opnå en gennemsnitlig LMPA tryk svarende til trykket målt før fastspænding. Kemoterapi blev derefter injiceret ind i kredsløbet [23], pumpeflow blev moduleret at stabilisere middelværdi LMPA tryk og kemoterapi perfusion varede i 30 minutter efterfulgt af en 15 min periode udvaskning. Ved 5, 10, 20 og 30 min af perfusionen blev systemiske blodprøver taget. Ved 30 min perfusion blev to lunge udtaget til måling af koncentrationen af ​​lægemiddel i lungevævet og vurdere histologiske akut lungeskade. Væskeprøver blev taget i perfusionskredsløbet til måling af koncentrationen af ​​lægemidlet, og lunge effluent blev trukket at vurdere dets cytotoksiske virkning på tumorceller

in vitro

. Ved afslutningen af ​​proceduren blev kanyler trukket tilbage, torakotomi blev lukket på en midlertidig bryst rør, og dyrene blev vækket.

Eksperimentelle grupper.

fase I studie har defineret en maksimal tolereret dosis efter 30 minutters intravenøs infusion af GEM svarende til systemisk dosis på 20 ug /ml /h [24]. Som et fremspring, koncentrationen af ​​GEM anvendes til ILP var 0 ug /ml (kontrolgruppe, n = 5), 20 ug /ml (regelmæssig dosis, n = 7 dyr) og 100 ug /ml (høj dosis, n = 7).

Farmakokinetik.

for at determinate koncentrationen af ​​GEM i blodprøver og lungeparenkym, prøver blev spin-tørret ved 4 ° C og 12000 G i 10 minutter. Kvantificering af GEM i plasmaet og surpernatant blev derefter opnås ved anvendelse isocatic omvendt fase (HPLC) -system HØJTRYKSVÆSKEKROMATOGRAFI som tidligere beskrevet [25]. Koncentration af perle i slutningen af ​​ILP blev etableret i kredsløbet, i to forskellige lungebiopsier, og i den systemiske cirkulation. Resterende cytotoksicitet af venøse spildevand blev undersøgt ved hjælp af serielle fortyndinger og in vitro cytotoksisk assay.

Akut systemisk toksicitet.

ILP procedure blev udført på nitten grise. Systemiske toksicitet af GEM blev bedømt ved måling af lever- og nyrefunktion. Hæmodynamisk tolerance blev vurderet ved at registrere puls og systemisk blodtryk.

Akut pulmonal toksicitet.

Respiratory tolerance blev vurderet ved at registrere middelværdi LMPA pres, oxyhæmoglobin mætning (SpO2) og partialtrykket af kuldioxid under udånding (PCO2). Sværhedsgraden af ​​lungelæsioner blev vurderet histologisk ved anvendelse af Chiang score, som blev skabt for at evaluere akut lungeskade efter iskæmi /reperfusion sekvens af transplanterede lunger [26]. Kort fortalt denne score esteems læsioner som ødem og celleinfiltration. Ødem er scoret som 1 for perivaskulær ødem; 2 for peribronchial eller interstitielle ødemer; 3 for alveolær ødem. Cell infiltration er scoret som 2 for perivaskulær celle infiltration; 3 for interstitiel celleinfiltration; 4 for alveolær celleinfiltration. Summen af ​​alle de patologiske scoringer var stillingen for hver rækkevidde, og så vi beregnet den gennemsnitlige score for venstre lunge med summen af ​​det øvre og det nedre lap score, hvor 0 er en normal score.

Forsinket toksicitet.

Efter en måned opfølgning, tolv dyr blev reoperated på. Forsinket toksicitet blev vurderet ved hjælp af de samme metoder og kriterier som beskrevet for akut toksicitet. Dyrene blev derefter aflives humant af en intrakardial injektion af pentobarbital (Dolethal®, Vetoquinol).

Statistisk analyse.

kategoriske variable blev rapporteret som tal og proportioner. Normale kontinuerlige variabler rapporteres som middelværdier ± standardafvigelser. Med hensyn til de hæmodynamiske parametre, sammenlignede vi moderate middelværdier for en måde gentages til det samme dyr ved gentagne-foranstaltninger ANOVA. En lineær regression blev udført for at estimere sammenhængen mellem kontinuerlige variabler. Når resultaterne af variansanalyse var statistisk signifikante (p 0,05), udførte vi en

posthoc

sammenligning i Benferroni metode til at reducere α risiko. Statistiske analyser blev udført ved hjælp af STATA 12 statistisk software (StataCorp, College Station, USA).

Resultater

cytotoksisk Assay

administreres gennem en kort eksponering, GEM var mere effektiv end 5 FU, cisplatin, oxaliplatin og irinotecan (Figur 1 A B). Raltitrexed viste den samme effekt som GEM i HCT8 og HT29, men ikke i HCT116 og SW480 celler. Adjunction af raltitrexed til GEM ikke øge sin cytotoksicitet (Figur 1 C). Derfor GEM alene blev udtaget til ILP procedure.

A- IC50-værdier efter in vitro eksponering i 30 min af CRC celler SW480, HT28, HCT116 og HCT8 med Oxaliplatin, 5 FU, Cisplatin, GEM, Irinotecan og raltitrexed. B- Dosis-respons-kurver efter in vitro eksponering i 30 min af CRC celler SW480, HT28, HCT116 og HCT8 med Oxaliplatin, 5 FU, cisplatin, GEM, Irinotecan og raltitrexed. C- Dosis-respons-kurver efter in vitro eksponering i 30 min af CRC celler SW480, HT28, HCT116 og HCT8 med kombination af GEM og Raltitrexed.

Farmakokinetik

Efter 30 min af perfusion, GEM koncentration var større for den højdosis end for regelmæssig-dosisgruppen målt i kredsløbet (74,29 ± 18,06 vs. 22,85 ± 6,51 ug /ml, p = 0,0001) og i lungeparenkymet (141,46 ± 117,07 ug /g vs 56.91 ± 28.06 ug /g, p = 0,014). Cytotoksicitet assay viste en fastholdt cytotoksiske virkning af lungen spildevand i slutningen af ​​ILP, med ingen forskel mellem den almindelige dosis og høj-dosisgruppen selv for 10% fortynding af lungen afløbet (figur 2). I den systemiske cirkulation, den maksimale koncentration af GEM efter ILP var 0,638 ± 0,27 pg /ml for højdosis-gruppen og 0,248 ± 0,15 pg /ml regelmæssig-dosisgruppen (tabel 2).

Celler blev udsat for forskellige fortyndinger (10%, 50% og 100%) af lungen spildevand.

Akut systemisk toksicitet

med hensyn til systemisk hæmodynamisk tolerance, blev der ikke observeret nogen signifikant ændring i blodtryk, hjertefrekvens, og elektrokardiogram som bestemt før, under og efter operationen (tabel 3). Ingen større lever- eller renal akut toksicitet blev bemærket (tabel 4).

Akut lungetoksicitet

Før fastspænding, var individuelle variationer i det gennemsnitlige LMPA pres bemærket ved baseline, med værdier fra 18 til 34 mmHg. Efter fastspænding blev perfusion tilgangen gradvist øges for at opnå en tilgang af 500 til 600 ml /min. I GEM grupper, øgede den gennemsnitlige LMPA trykket gradvist, hvilket fører til formindske indstrømningen af ​​det ekstrakorporale pumpe til at opretholde det oprindelige middel LMPA tryk (figur 3A). Som følge heraf var den gennemsnitlige LMPA presset var ikke signifikant forskellig mellem de tre grupper (figur 3B), men den gennemsnitlige perfusion indstrømning på 30 min var lavere i de GEM grupper end i kontrolgruppen (figur 3A). Der var en omvendt korrelation mellem koncentrationen af ​​GEM i perfusionskredsløbet og den gennemsnitlige flow efter 30 min perfusion (p = 0,0158). Der var ingen forskel i den gennemsnitlige LMPA trykket før og efter ILP (p = 0,7187, figur 3C). Histologiske analyser viste en gennemsnitlig Chiang score på 5,05 ± 3,52 i kontrolgruppen, med ingen signifikant forskel i GEM grupper. Der var også nogen korrelation mellem Chiang score og GEM infunderede dosis (p = 0,7491, tabel 5) eller GEM koncentrationen i lungeparenkymet (p = 0,7278).

A- Perfusion indstrømning i den isolerede lunge perfunderet med gelatine (580 ± 178,88 ml /min), GEM 20 ug /ml (257,14 ± 202.62 ml /min) og GEM 100 ug /ml (210 +/- 138,92 ml /min) i løbet af 30 min (p = 0,0055). B- Perfusion tryk i isolerede lunge perfunderet med gelatine, GEM 20 ug /ml, og GEM 100 ug /ml i løbet af 30 minutter. C- Mean forlod lungepulsåren pres før og efter ILP med gelatine, GEM 20 mikrogram /ml og GEM 100 pg /ml i løbet af 30 min (p = 0,7187).

Langtidsvirkninger

hverken lunge nekrose eller fibrose blev observeret, enten visuelt eller mikroskopisk. Hyppigst læsioner beskrevet var peribronchial ødem og interstitiel celleinfiltration. Alvorlige læsioner såsom alveolær cellulær infiltration blev kun set for de tre første dyr i kontrolgruppen, der præsenteret en lungeødem ved afslutningen af ​​ILP procedure i forbindelse med en hurtig stigning i tilgangen. Der var ingen korrelation mellem GEM koncentration i lungeparenkym og Chiang score (p = 0,0846) (tabel 5).

Kommentarer

I første omgang udviklet som en adjuverende behandling af lungemetastaser stammer fra sarkomer, har ILP genereret betydelig interesse på grund af den høje pulmonal recidivraten og nedsat overlevelse på lang sigt i denne patologi, selv efter fuldstændig kirurgisk resektion [3]. Potentielle fordele ved ILP omfatter levering af højdosis kemoterapi til lungen, fører til en hurtig mætning af lungeparenchymet og begrænset systemisk lækage [14], [27] – [29]

interesse.

in vitro

cytotoksisk assay er at vælge en kemoterapi stof for ILP procedure, som foreslået af tidligere undersøgelser. Link

et al

. vist, at

in vitro

analyser kunne identificere aktive lægemidler til individualiseret hepatisk arterie infusion [30]. Kornmann

et al

. viste, at patienter med CRC, der demonstrerede

in vitro

følsomheden kan drage fordel af bugspytkirtlen og kolik regional kemoterapi med GEM [31]. Når du indstiller denne foreløbige analyse, valgte vi et panel af celler, der repræsenterer mangfoldigheden i CRC om vækstfaktorer signalveje [32]. Disse veje er målrettet i tilfælde af metastatisk sygdom, alene eller i kombination med cytotoksiske midler, herunder oxaliplatin og irinotecan [33]. Men disse to lægemidler var mindre effektive end GEM følgende korte eksponering, sandsynligvis fordi GEM udviser en dosisafhængig effekt hvorimod effekten af ​​oxaliplatin og irinotecan er mere tidsafhængig [24], [34], [35].

til dato GEM er ikke en standard systemisk behandling af metastatisk CRC [33]. Men som tidligere nævnt, nogle publikationer retfærdiggøre brugen af ​​HTCA at vælge den aktive kemoterapi på CCR celler under en kort eksponering på 30 min [30], [31]. Det er at bemærke, at lægemidler, der anvendes i isoleret organperfusion såsom isoleret lunge eller lever perfusion, er ikke nødvendigvis de molekyler, der anvendes til intravenøse behandlinger. I thorax onkologi, Hendricks et al. har rapporteret lovende resultater i et fase I klinisk forsøg ved hjælp melphalan under ILP at behandle lungemetastaser [22]. I denne undersøgelse primære cancere var colorektalt carcinom, nyrecellecarcinom og sarkom og melphalan var ikke en standard terapi af nogen af ​​disse kræftformer. Ligeledes ved nedsat onkologi, melphalan er blevet rapporteret at være forbundet med klinisk respons og forlænget overlevelse efter isoleret leveren perfusion, på trods af sin begrænsede effekt efter intra venøs administration [28]. Isoleret organperfusion stadig en eksperimentel teknik kun udføres af få kirurgiske hold i klinikken, og alle lægemidler til rådighed for systemisk administration er ikke blevet testet for isolerede orgel perfusion. En af de vigtigste fordele ved isolerede organperfusion er at tillade anvendelse af højere dosis af cytotoksiske midler, og dermed udvide antallet af molekyler tilgængelige til opnåelse af en antitumor virkning. Men til dato er der ingen offentliggørelsen i evaluering af effekten af ​​gemcitabin på lungemetastaser fra CRC i kliniske omgivelser.

Med hensyn isoleret organperfusion, den klassiske dosiseskalerende design er nytteløst, hvis ekstrakorporal kredsløb føre til en stabil tilstand udsætter orglet parenkym til aktive koncentrationer forbundet med normalt væv mætning [36]. I vores undersøgelse, GEM anvendte koncentrationer under ILP var 18-40 gange højere end

in vitro

IC50, hvilket fører til stabile GEM koncentrationer i kredsløbet hele perfusion, med minimale systemiske lækager. For begge grupper GEM koncentrationer i kredsløbet var meget højere (fra tre til tyve gange), der findes i plasmaet fra patienter behandlet med IV GEM [24]. Desuden den cytotoksiske aktivitet af lunge spildevand demonstrerede de vedvarende høje GEM koncentrationer og bevaret cytotoksisk aktivitet. Disse tre elementer indikerer en mætning af lungeparenkym som helhed ved GEM under ILP procedure, men rumlige fordeling er stadig tvivlsomt.

Under ILP blev indstrømningen tryk opretholdes svarende til det gennemsnitlige pulmonale arterietryk målt før fastspænding at forhindre lungeødem og akut lungeskade [37], [38]. Adjunction af GEM til kredsløbet var forbundet med en stigning på intrapulmonal vaskulær modstand og efterfølgende forøgelse af den gennemsnitlige pulmonale arterietryk (mPAP). Denne forbigående vaskulær toksicitet GEM er allerede blevet rapporteret efter systemisk administration, og beskrives som et forbigående vasokonstriktion forbundet med en kapillær lækage-syndrom [39]. Vi viste, at denne vaskulære fænomen under ILP er dosisafhængig og reversibel, forudsat at sænke ILP indstrømningen styrer mPAP. Endelig fandt vi heterogene koncentrationer af GEM i lungeparenkymet ifølge regionen og hvad gruppen betragtes, som allerede rapporteret med andre cytotoksiske midler [40]. Denne heterogenitet kan fortolkes som en konsekvens af en fragmentarisk lægemiddelinduceret vasokonstriktion, og kan blive opvejet af den adjunction af vasodilatatorer under ILP hjælp GEM.

Højere histologiske Chiang score blev fundet i kontrolgruppen end i GEM gruppe ved afslutningen af ​​proceduren og efter en måneds overlevelse. Franke et al. har vist, at øget pulmonal tryk i en indstilling af ILP vil resultere i skadelige virkninger på morfologi [37], men i vores undersøgelse, presset af perfusionen var signifikant forskellig i de kontrol- og GEM grupper. Den eneste signifikante forskel i pulmonal hæmodynamisk mellem grupperne var en signifikant højere perfusion indstrømning i kontrolgruppen. Denne forøgelse af perfusion indstrømning kan være ansvarlig for de histologiske skadelige virkninger.

Denne undersøgelse viste, at ILP med GEM er en sikker og reproducerbar teknik, tillader at levere høj dosis kemoterapi til lungeparenkym med meget begrænset systemisk utætheder. Men GEM-associeret forbigående og dosisafhængig pulmonal vasokonstriktion førte til heterogen fordeling af GEM i lungeparenkym,. Yderligere eksperimenter er nødvendige for at optimere fordelingen af ​​lægemidlet i lungeparenkymet og at teste effektiviteten af ​​denne fremgangsmåde, før man overvejer kliniske studier.

Tak Salg

Vi takker Paul Van Schil (Antwerpen, Belgien ) for hans venlige velkomst og præcis undervisning i den kirurgiske teknik. Vi takker også Valentin Derangere, Jean-Baptiste Lequeu, Thierry Benard, Philip Bastable og Pablo Ortega-Deballon for deres entusiastiske støtte til dette arbejde.