Lille molekyle kinase inhibitor med en stor bindingsaffinitet for ZAK er nilotinib

I en enkelt prøve for hepatocellulært carcinom, patienter, der har erhvervet sorafenib og doxorubicin sammen havde noget længere gennemsnitlige tid for progressionsfri overlevelse og samlet overlevelse end patienter, der fik doxorubicin alene. Endnu et andet lille molekyle kinaseinhibitor med en stor bindingsaffinitet for ZAK er nilotinib, som også standser breakpoint cluster region Abelson og sker for at være i klinisk anvendelse til behandling af kronisk myeloid leukæmi.

Selv om bindingsaffiniteter sorafenib og nilotinib for ZAK er blevet rapporteret, er hverken agent blevet testet for deres evne til at begrænse ZAK aktivitet. Disse midler blev administreret af os til HaCaT celler 30 minutter før behandling med doxorubicin i 24 timer, for at finde ud af, om sorafenib eller nilotinib kunne begrænse downstream handlinger ZAK. Den klare nærvær af enten kemisk stærkt undertrykt doxorubicin stimulerede phosphorylering af p38 og JNK MAPK. Ligesom i HaCaT celler udsat for ZAK siRNA, at dækningen af ​​disse celler sorafenib eller nilotinib reduceret den basale phosphorylering af p38 MAPK. Romidepsin producent

Sorafenib og nilotinib reducerede også spaltningen af ​​caspase 3 og PARP, hvilket indikerer, at doxorubicin medieret apoptose også blev undertrykt. Zak hæmmere blokerer daunorubicin induceret MAP K service og apoptose i HaCaT celler. Daunorubicin kan være et anthracyclin, der er anset for at arbejde ved lignende mekanismer såsom doxorubicin, men viser mindre potent antitumoraktivitet. For at undersøge, om hæmning af ZAK resultater daunorubicin induceret apoptose og MAPK aktivering, vi forbehandlet HaCaT celler med sorafenib eller nilotinib tæt fulgt af daunorubicin i 24 timer.

Svarende til resultaterne med doxorubicin, den klare tilstedeværelse af enten kemisk stærkt undertrykt daunorubicin stimulerede fosforylering af JNK og p38 MAPK. Sorafenib og nilotinib også betalt spaltningen af ​​caspase 3 og PARP, hvilket indikerer, at daunorubicin medieret apoptose også blev undertrykt. Doxorubicininduced apoptose er delvist blokeret af inhibitorer af JNK eller p38 i HaCaT celler. ZAK er blot en MAP3K der er blevet bevist at forårsage phosphorylering af p38 MAPK og JNK.

For at bestemme om tilbagetrækning af JNK eller p38 MAPK kunne hindre doxorubicin aktiveret apoptose, vi brugte SB 203580, SP 600.125, eller begge i kombination til HaCaT celler 30 min før behandling med 25 M doxorubicin i 24 timer. Tilstedeværelsen af ​​enten inhibitor eller måske en blanding af begge resulterede i kløvning af caspase 3 og PARP, hvilket indikerer, at p38 MAPK og JNK deltog i et omfang i doxorubicin medieret apoptose. I nærvær af pancaspase kemiske, zVAD fmk doxorubicininduced apoptose var fuldstændig inhiberet. ZAK siRNA og Zak hæmmere forhindrer ikke doxorubicininduced apoptose i HeLa-celler. At prøve, om Zak inhibitorer ville reducere celledød i en cancercelle linje vi forbehandlet HeLa celler med sorafenib eller nilotinib efterfulgt af doxorubicin i 24 timer.

I modsætning til deres evne til at begrænse PARP og caspase 3 spaltning i HaCaT celler, nilotinib og sorafenib ikke lavere PARP eller caspase 3 spaltning i HeLa-celler. I HeLa-celler, doxorubicin undladt at øge phosphorylering af JNK- og p38 MAPK, sandsynligvis fordi de basale niveauer af disse phosphorylerede SAPKs allerede var forhøjet i fravær af en inducer. Ikke desto mindre blev phosphoryleringen af ​​SAPKs undertrykt af sorafenib og nilotinib, hvilket indikerer, at inhibitorerne var effektive til at kontrollere ZAK i disse celler. Disse data tyder på, at den hævede endogene udøvelse af ZAK i HeLa-celler kan være ansvarlig for den øgede basal phosphorylering af JNK og p38 MAPK.