Generelle metoder at udødeliggøre Primary Cells

Primære celler giver ekstremt nøjagtige oplysninger og relevante resultater inden for forskning, der tjener som de mest ideelle celle modeller for en bred vifte af forskning, fra grundlæggende cellebiologi og fysiologi, udviklingsmæssige biologi, sygdomsmekanismer, at narkotika screening og terapeutiske udvikling. Men primære celler ikke øges uendeligt i kultur og er meget vanskelige at dyrke. Derfor forskere tendens til at bruge immortaliserede celler til deres forskningsprogram.

De immortaliserede celler sætte forskerne i stand til at bruge det samme konsekvent materiale gennem et forskningsprojekt, uden at skulle etablere nye kulturer, fordi disse immortaliserede celler har en udvidet levetid span og vedligeholde genotype og fænotypiske markører af kilden væv. Ved hjælp af en celle immortalisering service hjælper forskere undgå dette problem og giver dem mulighed for en næsten uudtømmelig celler, der kan bruges under hele et helt forskningsprojekt.

Den vellykkede immortalisering af forskellige primære celler gennemføres ved hjælp af forskellige gener og agenter. Celle immortalisering kan gøres på mange måder; og brugerdefinerede service er til rådighed på markedet til at hjælpe med at generere immortaliserede cellelinjer. Der er mange metoder til pattedyrcelle immortalisering inden kultur miljøer. Et par af disse metoder er angivet nedenfor:

hTERT Expression

hTERT alene kan udødeliggøre celler uden at forårsage kræft-associerede ændringer eller ændre fænotypiske egenskaber. Primære humane celler, der hidtil er blevet fastlagt af tvungen ekspression af hTERT alene omfatter fibroblaster, retinale pigmenterede epitelceller, endotelceller øsofageale pladeceller, brystepitelceller, keratinocytter, osteoblaster og Nestin-positive celler i pancreas.

En væsentlig hindring for immortalisering af primære humane celler og etablering af humane cellelinjer er telomer-kontrolleret ældning. Telomer-kontrollerede senescens er forårsaget af afkortning af telomerer, der forekommer hver gang somatiske humane celler deler. Men forskere har vist, at overførsel af et exogent hTERT cDNA, der koder for den katalytiske underenhed af human telomerase, kan anvendes til at forhindre telomer forkortning, overvinde telomer-kontrollerede senescens, og udødeliggøre primære humane celler.

Viral transformation

Viral transformation metode er en anden måde at omgå cellulær ældning. De mest almindeligt anvendte og bedst forstås af denne klasse af virale gener er Simian Virus 40 stort T-antigen (SV40). SV40 stort T-antigen binder til en række proteiner (de vigtigste er p53 og Rb), som, når den fungerer normalt, er negative regulatorer af celledeling. Tilsvarende hjælp siRNA til inaktive p53 og /eller RB kan også initiere ubegrænset cellulær levetid. Andre onkogener indbefatter c-Myc, Ras og HPV 16 E6 /E7 og deres indførelse, ligeledes effektivt kan udødeliggøre primære cells.Viral gener, herunder Epstein-Barr virus (EBV) og Simian virus 40 (SV40) T-antigen kan inducere immortalisering. Virusgener opnå immortalisering ved inaktivering af tumorsuppressorgener, der sætter celler i en replikativ senescent tilstand.

Inaktivering af tumorsuppression Gener

Nylige opdagelser har fundet, at co-ekspression af hTERT katalytiske subunit kombineret med p53 eller RB siRNA, kan med held udødeliggøre humane ovarieepitelceller. Samtidig har overekspression af Ras eller Myc T58A mutanter også vist sig at være i stand til at udødeliggøre visse primære celletyper. Denne metode giver en mere autentisk celle model med en mere defineret genetisk baggrund.

Brugerdefineret Cell Immortalisering Services

Creative Bioarray kan levere brugerdefinerede celle immortalisering tjenester. Med mange års erfaring i celle immortalisering, selskabet er nu i stand til at udødeliggøre celler fra mennesker, mus, kvæg og hunde, ved hjælp af forskellige udødeliggøre agenter eller gener. Den brugerdefinerede immortalisering service kan markant forlænge replikationskapacitet af dine mål celler, som hjælper sparer lab tid og penge.