PLoS ONE: Effekter af MICA udtryk på Prognose for Advanced ikke-småcellet lungekræft og effekten af ​​CIK Terapi

Abstrakt

Målsætning

For at undersøge den kliniske betydning af ekspressionen af ​​MHC klasse I-kæde-relateret gen A (MICA) hos patienter med fremskreden ikke-småcellet lungekræft og udforske forholdet mellem MICA udtryk og effektiviteten af ​​cytokin-induceret killer celle (CIK) terapi til behandling af fremskreden ikke-småcellet lungekræft.

Metoder

Vi opnåede data på 222 patienter med fremskreden ikke- småcellet lungekræft, herunder data om MICA udtryk, alder, køn, ECOG score, patologisk type, scene, behandling historie (herunder 38 patienter, der fik autolog CIK infusion celle), og samlet overlevelse (OS). MICA ekspression i lungekræft væv blev vurderet ved immunohistokemisk farvning. Analyser af MICA udtryk, og CIK terapi forening med overlevelse resultater blev udført ved hjælp af Cox proportional modeller, Kaplan-Meier metoder, og log-rank test.

Resultat

s

MICA blev udtrykt i både membranen og cytoplasma. MICA udtryk korreleret med den fase af lungekræft, ECOG score, køn og alder. Multivariate COX regressionsanalyse viste, at ekspressionen af ​​MICA var en uafhængig prognostisk faktor avanceret ikke-småcellet lungekræft (p = 0,002). I undergruppe analyse, vi delte de 222 patienter i CIK og kontrolgrupper. I CIK-gruppen, mellemlang OS (MOS) af patienterne med en høj ekspression af MICA var længere end i dem med lav ekspression af MICA (27 måneder vs 13 måneder). I kontrolgruppen, MOS hos patienter med en høj ekspression af MICA var kortere end hos patienter med lavt MICA ekspression (9 måneder vs. 18 måneder). COX regressionsanalyse viste, MICA ekspression påvirker virkningen af ​​CIK terapi (p 0,0001).

Konklusion

1) En høj ekspression af MICA er en af ​​indikatorerne for en dårlig prognose for avancerede ikke-småcellet lungekræft patienter. 2) høj ekspression af MICA kan være en af ​​de prædiktive faktorer for vellykket CIK terapi

Henvisning:. Chen Y, Lin G, Guo ZQ, Zhou Zf, han Zy, Ye Yb (2013) Effekter af MICA udtryk på prognosen for Advanced Ikke-småcellet lungekræft og Effekt af CIK Therapy. PLoS ONE 8 (7): e69044. doi: 10,1371 /journal.pone.0069044

Redaktør: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Spanien

Modtaget: 2. marts, 2013; Accepteret: 5 juni 2013; Udgivet: 23 Jul 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader unrestrict`ed brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering.: projektet blev støttet af Fonden for Young Scholars af Fujian Provincial Department of Health, Kina. (Grant nr 2011/01/24). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

lungekræft er stadig den hyppigste årsag til kræft-relateret dødelighed i verden, og omkring 1,4 millioner mennesker er diagnosticeret med lungekræft hvert år [1]. Ca., er 85% af alle tilfælde lungekræft kategoriseret som ikke-småcellet lungekræft (NSCLC), og mere end 50% af NSCLC-patienter har avancerede lokal invasion og /eller fjerne metastaser. I det sidste årti, har mange undersøgelser fokuseret på de immunologiske aspekter af lungekræft. Immunterapi er for nylig blevet den fjerde vigtige behandling modalitet for ondartede svulster efter operationen, strålebehandling, og kemoterapi [2], [3], [4], [5].

tilblivelse og udvikling af en tumor er tæt relateret til responset af immunsystemet. Teorien om “immunoediting” har forsøgt at beskrive den komplekse vekselvirkning mellem et udviklende tumor med en udviklende immunrespons. Dette menes at omfatte tre faser; en eliminering fase, hvor immunsystemet ødelægger tumoren, en ligevægt fase, hvor tumoren og immunsystemet sameksistere, og en flugt fase, hvor tumoren udvikler mekanismer at omgå destruktion af immunsystemet. Molekyler, der er op eller ned reguleret under immunoediting kan repræsentere potentielle prognostiske markører [6]. De store histokompatibilitetskompleks-klasse I-kæde-relaterede (MIC) proteiner repræsenterer en hidtil ukendt familie af højt glycosyleret, membran-forankret MHC klasse I-lignende molekyler. Selvom de deler lignende struktur til klassisk klasse I tunge kæder, GLIMMER og MICB ikke forbinder med β2-mikroglobulin eller med transportøren forbundet med antigen forarbejdning (TAP) [7]. MIC proteiner har en begrænset vævsdistribution og de er sjældent udtrykt af normale celler. Det er blevet rapporteret, at MICA konstitutivt udtrykkes af intestinale epitelceller og udtrykkes bredt i en række forskellige maligniteter. Derfor anses det for at være et tumor-associeret antigen (TAA) [8], [9], [10].

MIC proteiner fungerer som ligander for den stimulerende C-type lectin-lignende NKG2D receptor, først identificeret på NK-celler og efterfølgende vist at blive udtrykt på CD8 +, ap og γδ T-celler. NKG2D er et type II transmembrant glycoprotein, udtrykkes som en disulfidbundet homodimer på celleoverfladen. Det fungerer som en aktiverende receptor efter ligandbinding, understøtter den cytotoksiske aktivitet af NK-celler og T-celler mod tumorceller [11], [12]. Tumorceller stabilt transficeret til at udtrykke MICA og de murine versioner af NKG2D ligander RAE-1 eller H60 ved høje niveauer, fjernes ved CD8 + T-celler og NK-celler [13], [14], hvilket indikerer, at tumorceller overudtrykker NKG2D ligander bliver mere følsomme over immun cellemedieret cytolyse. Ikke desto mindre har de seneste rapporter identificeret en mekanisme, hvormed tumorer synes at være i stand til at undergrave denne overvågningsmekanisme. blev identificeret Opløselige former af MICA skal kaste af tumorer og vist sig at forårsage nedregulering af NKG2D ved at engagere med receptoren på tumorinfiltrerende lymfocytter (TIL’er), forringer T-celle funktion [15]. Denne undersøgelse har planer om at undersøge avanceret NSCLC tilfælde at gennemføre en retrospektiv analyse udforske sammenhængen mellem glimmer udtryk og prognosen af ​​avancerede NSCLC patienter.

cytokininduceret morder (CIK) celler er en unik population af cytotoksiske T-lymfocytter med en karakteristisk CD3 + /CD56 + fænotype, og de kan genereres fra cytokin cocktail-inducerede mononukleære celler fra perifert blod (PBMC). Disse celler har vist højere proliferative og cytolytiske aktiviteter sammenlignet med CD3- /CD56 + lymfokin-aktiverede dræberceller (LAK) [16]. På nuværende tidspunkt er CIK-celler er anerkendt som en ny type af anti-tumor effektorcelle, med stærkere antitumoraktivitet og et bredere spektrum af målrettede tumorer end andre rapporterede anti-tumor effektorceller. Desuden kan CIK celler regulere og generelt øge immune funktioner hos kræftpatienter [17], [18]. Aktuelle data fra fase I /II undersøgelser af anti-NSCLC effekter af CIK-celler er meget begrænset, og de terapeutiske fordele ved CIK celler er ukendte i NSCLC patienter. Som målrettet og kemoterapi har gjort væsentlige gennembrud i individualiseret behandling, bør vi undersøge prædiktive faktorer immunterapi at forbedre effekten af ​​CIK terapi i NSCLC patienter. Nogle undersøgelser har vist, at NKG2D receptor er overudtrykt på overfladen af ​​CIK-celler, og det forventes, at en cytolytisk virkning kan medieres af interaktionen mellem NKG2D receptor på CIK-celler og MICA ligand på cancerceller [19], [20], [21]. Så teoretisk kan CIK celler genkende MICA ligander på lungekræft cellemembraner og dræbe kræftcellerne. Hvorvidt høj MICA udtryk kan bruges som en prædiktiv faktor CIK terapi resultatet stadig at blive fastlagt. Vi planlægger at studere MICA udtryk og effekten af ​​CIK terapi at bestemme, om MICA udtryk er en prædiktiv faktor for en vellykket CIK terapi.

Materialer og metoder

Etik Statement

Alle procedurer blev udført i overensstemmelse med Helsingfors-erklæringen, og med godkendelse fra den etiske komité i Fujian Provincial Cancer Hospital. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle deltagere.

Patienter og prøver

Patienter (n = 222) med fremskreden eller lokalt fremskreden ikke-småcellet lungekræft (III-IV fase) fra 12

th Institut for Fujian Provincial Cancer Hospital blev indrulleret fra december 2005 og december 2010. kriteriet nøglen udelukkelse var mangel på tilstrækkelig væv til immunhistokemi (IHC). Vigtige klinisk-patologiske data blev indsamlet fra disse patienter, herunder TNM stadie, ECOG score, køn og alder. Generel patientinformation er vist i tabel 1. Alle tumorer modtaget følgende resektion i operationsstuen eller transbronkial lunge biopsier eller aspirationsbiopsier blev straks fast og placeret i 10% neutral bufferet formalin, inden behandling og indlejring i paraffin for at sikre optimal vævsfiksering og bevaring til histologisk undersøgelse. De oprindelige histopatologiske slide sæt og rapporter blev opnået fra hver tilfælde, og disse blev revideret for at bekræfte diagnosen og nøjagtigheden af ​​de eksisterende data, og at fuldføre mangler oplysninger fra databasen hvor det er muligt.

Behandlinger

Ud af 222 patienter 32 nægtede behandling efter at være blevet diagnosticeret. De resterende 190 patienter modtog behandlinger, herunder kemoterapi, målrettet terapi, strålebehandling, CIK behandling, og den bedste understøttende symptomatisk behandling. I tilfælde af lokalt fremskreden lungekræft (22 tilfælde med stadie IIIA, 6 tilfælde med stadie IIIB) behandlingen model bestod af præoperativ induktion kemoterapi, kirurgi og postoperativ adjuverende kemostråleterapi. Fire ud af fireogtyve patienter fik fire cyklusser af supplerende CIK behandling (Tabel 2). Patienterne fik autolog CIK celle behandling efter strålebehandling. CIK celle behandling blev givet ved 1-måneders intervaller. Patienterne var berettiget til CIK vedligeholdelsesbehandling indtil de ikke længere enige om at fortsætte vedligeholdelsesbehandling eller indtil sygdomsprogression forekom. For hver behandling fik patienterne en infusion på mindst 1,0 × 10

10 CIK celler.

Avancerede sager (34 sager med stadie IIIB, 128 tilfælde med stadie IV), modtaget behandlingsregimer af kemoterapi, EGFR-TKI målrettet terapi, og CIK behandling. Kemoterapi inkluderet første-line, second-line, og tredje-line behandling. Første-line kemoterapi bruges tredje generation kemoterapeutiske midler indeholdende en platin to-drug regime. Den anden-line kemoterapi med single-agent docetaxel og pemetrexed blev brugt oftere end tredje-line kemoterapi og behandling blev givet i henhold til sygdomssituationen. EGFR-TKI behandling med 250 mg gefitinib qd eller 150 mg erlotinib blev fortsat indtil sygdomsprogression eller indtil toksicitet kunne ikke blive tolereret. Der var 34 patienter med fremskreden sygdom, som fik CIK behandling (tabel 2). CIK celle behandling blev givet ved 1-måneders intervaller. For hver behandling fik patienterne en infusion på mindst 1,0 x 10

10 CIK-celler.

CIK cellepræparat

CIK-celler blev isoleret og dyrket ifølge standardprotokol. Perifert blod (50 ml) trækkes fra patienter ved hjælp af heparin som en antikoagulant. Mononukleære celler blev isoleret ved Ficoll-Conray densitetsgradientcentrifugering og deres levedygtighed vurderet ved udelukkelse af trypanblåt. Ca. 2,0 × 10

6 /ml mononucleare celler blev udpladet på seks-brønds skåle og dyrket med medium I indeholdende RPMI 1640 plus 1,0 × 10

6U /l human interferon gamma (IFN-γ), 5,0 × 10

5U /L rekombinant human interleukin-2 (IL-2), 10% varmeinaktiveret humant serum, 25 mM HEPES, 2 mM L-glutamin, 100 U /ml penicillin, og 100 ug /ml streptomycin. Cellerne blev inkuberet i en fugtig atmosfære med 5% CO

2 ved 37 ° C. Efter 24 timer, 100 ug /L monoklonalt antistof (Mab) mod CD3 og 1,0 x 10

5U /L IL-1α blev tilsat. Efter yderligere 48 timer blev supernatanten aspireret, og cellerne blev dyrket i medium II; Medium I i fravær af INF-γ. Mediet blev skiftet hver tredje dag. Cellelevedygtighed blev bestemt under anvendelse af trypan blue-farvning. CIK celler blev transfunderet tilbage til donorerne følgende otte dages kultur. Alle CIK cellekulturer blev testet for forurening (bakterier, svampe og mycoplasma) hele undersøgelsen for at sikre kultur kvalitet og transfusion sikkerhed.

Fænotype analyse af CIK celler

De fænotyper af dyrkede celler var bestemt ved flowcytometri (BD FACSCalibur). Cellerne blev mærket med monoklonale antistoffer (m ABS), som genkender human CD3, CD4, CD8, CD56, og NKG2D.

Immunhistokemi

Immunhistokemisk påvisning af MICA blev udført ved en rutinemæssig streptavidin-biotin peroxidase teknik anvender kanin polyklonalt anti-MICA antistof. Rutinemæssig paraffin sektionering, afvoksning og hydratisering under anvendelse af 3% hydrogenperoxid blev udført for at blokere endogen peroxidaseaktivitet. Microwave antigen-genvinding blev gjort før blokering med føtalt kalveserum i 2 timer. Ca. 50 pi (1:25) af kanin-polyklonalt anti-human MICA blev tilsat, og blandingen blev inkuberet ved 4 ° C natten over. Ca. 50 pi biotinyleret gede anti-kanin IgG sekundært antistof arbejdsopløsning blev tilsat, og blandingen blev inkuberet ved 37 ° C i 30 minutter efterfulgt af diaminobenzidin farvning. Prøven blev modfarvet med hematoxylin, vasket med ethanol og saltsyre, mættet med lithiumcarbonat, indtil farven vendte tilbage til blå, og derefter dehydreret med gradient alkohol og xylen før montering med neutral harpiks.

Udeladelsen af ​​primære antistof og dets erstatning med PBS blev anvendt som negativ kontrol, og tumorinfiltrerende leukocytter blev anvendt som interne positive kontroller for glimmer farvning. Et afsnit af colorektal væv, der havde vist sig at være positiv for MICA blev også anvendt som en positiv kontrol [22], [23].

Evaluering af immunofarvning

To uafhængige patologer undersøgte immunhistokemi aftestede slides uden nogen forudgående viden om kliniske historie af patienterne. MICA ekspression blev evalueret i henhold til farvningsintensitet og scoret som følger. Intensiteten af ​​immunfarvning blev klassificeret i fire kategorier: 0 = ingen farvning eller kun en ikke-specifik baggrundsfarve, 1 = lysegult, 2 = gul eller dyb gul, og 3 = brun eller tan. Procentdelen af ​​positive celler blev vurderet semikvantitativt og klassificeres i fem grupper: 0 = ≤5% positive celler, 1 = 6% -25% positive celler, 2 = 26-50% positive celler, 3 = 51-75% positive celler, og 4 = 76% -100% positive celler. Den histokemisk score på immunoreaktivitet blev opnået ved at tilsætte intensitet og procentvise scoringer. Histokemiske scoringer blev inddelt i to grupper, cases med snesevis af 0-4 blev defineret som lav-udtryk gruppe, og tilfælde med snesevis af 5-7 blev defineret som den høje udtryk gruppe. [23], [24], [25].

Prognose evaluering

Den samlede overlevelse (OS) fungerer som den gyldne standard i evalueringen af ​​den terapeutiske effekt af tumor terapi, så vi vedtaget OS ved vurderingen af ​​prognosen. Patienterne blev fulgt fra datoen for diagnosen trin IIIB /IV sygdom til dødsdagen. Patienter uden en kendt dato for død blev censureret på tidspunktet for den sidste opfølgning.

Statistisk analyse

Statistisk analyse af data blev udført ved hjælp af SPSS-pakken (version 13 til Windows) . Chi-square test (Fishers eksakte test) og t-test blev anvendt til at vurdere forskellene i kategoriske variabler og kontinuerlige variabler hhv. Patienter, hvis død relateret til deres lungekræft blev betragtet i sygdomsspecifikke overlevelse beregninger. De, der døde af ikke-lungekræft årsager uden tegn på tilbagefald blev censureret på dødstidspunktet. Overlevelseskurverne blev estimeret ved Kaplan-Meier-metoden, og forskelle i overlevelse blev vurderet ved log-rank test. Multivariat analyse af Cox ‘proportionale hazard ratio model blev anvendt til at teste betydningen af ​​prognostiske faktorer, herunder MICA ekspression, køn, alder, histologi, ECOG score, og CIK terapi. En p-værdi 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

GLIMMER udtryk

immunhistokemisk udtryk for MICA inden for lungetumorer stort set homogen.. Det kombinerede granulær cytoplasmatisk farvning med cellemembranen farvning. Ingen farvning af stroma, ekstracellulær matrix, eller kerner blev observeret, hvorimod tumorinfiltrerende leukocytter farvet positive for MICA (figur 1).

Ekspression af MICA i normal lunge epitel (A). MICA lav ekspression i lunge tumorvæv (B), GLIMMER høj ekspression i lunge tumorvæv (C).

Analyse af MICA til udtryk i de 222 NSCLC sager viste, at 98,2% af lungetumorer viste positiv farvning for glimmer. Femogfyrre (20,3%) af prøverne demonstrerede lysegul farvning, 33,8% (n = 75) var gul eller dyb gul, og 44,1% (n = 98) var brun eller gyldenbrun farve (tabel 3). En variabel andel af MICA-positive celler blev også observeret; 47,3% (n = 105) af tumorerne udviste omfattende ekspression af glimmer positive celler (76% -100%), mens 1,8% (n = 4) i tilfælde demonstrerede MICA immunoreaktivitet hos mindre end 5% af tumorcellerne (tabel 4 ).

Karakterisering og fænotyper af CIK celler

De udvidede CIK celler blev analyseret ved flowcytometri. Fænotypisk analyse af CIK celler fra 38 patienter efter 14 dages dyrkning viste, at de procentdele af CD4 +, CD8 +, CD3-CD56 +, CD3 + CD56 + celler var 45,2 ± 7,5%, 37,1 ± 9,2%, 25,2 ± 9,8%, og 18,2 ± 5,6 %, henholdsvis (figur 2). Vi analyserede udtryk for NKG2D på in vitro udvidede CIK celler. Vi fandt, at kun 2,6 ± 1,2% af CD4 + T-celler var NKG2D +, mens de andre CIK celler udtrykte NKG2D. Procentdelen af ​​NKG2D + i CD8 +, CD3-CD56 +, og CD3 + CD56 + populationer var 88,6 ± 5,4%, 97,2 ± 2,1%, og 92,8 ± 3,8%, henholdsvis (figur 3).

Sammenligning af MICA udtryk med patient- og tumor egenskaber

histokemisk score på immunoreaktivitet blev opnået ved at tilsætte intensitet og procentvise scoringer. Tilfælde med en score på 0-4 blev defineret som den lave ekspression gruppe, og tilfælde med en score på 5-7 blev defineret som den høje ekspression gruppe. Den lave-udtryk gruppe omfattede 84 tilfælde (37,8%) og den høje-udtryk gruppe indeholdt 138 tilfælde (62,2%). Analyse udnytte den histokemiske score metode afslørede statistisk signifikante sammenhænge mellem glimmer udtryk og iscenesættelse af lungekræft, ECOG score, køn og alder. Der var ingen signifikant sammenhæng mellem glimmer udtryk og patologisk type (tabel 5).

univariat overlevelsesanalyse

Blandt 222 patienter, der var 160 mænd og 62 kvinder og den mediane samlede overlevelse var 13 måneder, 95% CI (11,918-14,082) og 1-års overlevelse og 2-årige overlevelsesrate var 52,3% og 19,8%, henholdsvis (figur 4A). Ved univariat analyse, GLIMMER udtryk, køn, alder, TMN scenen, ECOG score, og CIK terapi var alle prædiktorer for total overlevelse (alle p 0,05), mens den histologiske subtype ikke var (p = 0,544) (tabel 6). Den mediane overlevelse af patienter med en høj ekspression af MICA var signifikant kortere end dem med en lav ekspression af MICA, p = 0,01 ved log-rank test (figur 4B).

OS i 222 patienter (A ). OS i den samlede befolkning og af glimmer udtryk (B). OS i den samlede befolkning ved glimmer udtryk og CIK terapi (C).

For at bekræfte betydningen af ​​CIK terapi i behandlingen af ​​fremskreden NSCLC med høj ekspression af MICA, vi delte 222 patienter i en CIK og kontrolgruppe. I undergruppe analyse var mediet OS (MOS) af patienterne i CIK-gruppen med høj ekspression af MICA længere end OS til patienter med lav ekspression af MICA (27 måneder vs. 13 måneder). I kontrolgruppen, MOS fra patienter med høj ekspression af MICA var kortere end hos patienter med lavt ekspression af MICA (9 måneder vs 18 måneder) (figur 4C). Desuden COX regressionsanalyse viste, at glimmer udtryk har en signifikant effekt på CIK terapi (p = 0,001).

multivariat overlevelsesanalyse

I multivariat analyse, GLIMMER udtryk, køn, alder, ECOG score og CIK terapi var uafhængige prognostiske faktorer (tabel 7). Vi kunne se, at risikoen for død for patienter med høj ekspression af MICA var 3,08 gange højere end for patienter med lav udtryk for MICA. Dette antyder, at høj ekspression af MICA en indikator for dårlig prognose i avanceret NSCLC cancerpatienter. Samspillet af glimmer og CIK (p 0,0001), viste, at glimmer overekspression var en uafhængig prædiktor for vellykket CIK terapi. Dette var i overensstemmelse med resultaterne af den univariate undergruppe analyse. Vi har ikke indføre kliniske faser i den multivariate analyse som de deltagende patienter i vores undersøgelse var alle avanceret NSCLC tilfælde.

Diskussion

Terapi til avanceret NSCLC har indtastet æra af individualiserede behandling. Som immunterapi til behandling af lungekræft bliver tilgængelig, er det nu vigtigt at identificere faktorer, der forudsiger hvilke patienter vil reagere bedst til immunterapi.

MICA er sjældent udtrykt af normale celler, selv om det er blevet rapporteret, at glimmer er konstitutivt udtrykt af intestinale epitelceller, og udtrykkes bredt i en række forskellige maligniteter, såsom bryst-, ovarie-, tyktarms-, nyre-, pankreas-, prostatacancer, hepatocellulært carcinom og melanom [8], [9], [10]. Denne retrospektiv analyse af 222 NSCLC tumorer undersøgte rolle stress relateret protein MICA som prognostisk markør i avanceret NSCLC og udforskede forholdet mellem glimmer udtryk og effekten af ​​CIK terapi til behandling af fremskreden NSCLC. Analyse af MICA udtryk i 222 NSCLC tumorer viste, at immunhistokemisk udtryk for MICA inden for lungetumorer stort set homogen. De fleste af lunge tumorer i denne undersøgelse viste stærk cytoplasmatisk og cellemembran udtryk for MICA, men normal lunge epitel ikke udtrykke dem. Disse resultater tyder på, at ekspressionen af ​​MICA kun sker efter malign transformation under lungekræft udvikling, hvilket er i overensstemmelse med andre resultater for mange andre maligniteter. Derfor har disse molekyler har potentialet til at blive brugt som tumormarkører for lungekræft. Andreas Busche et al. [26] opdaget MICA i 40 NSCLC tilfælde ved immunhistokemi, og fandt, at 5 ud af 17 adenocarcinom sager og 5 ud af 23 pladecarcinom sager havde positive MICA udtryk, hvilket betød, at 27,5% af NSCLC sager havde positive glimmer udtryk. Den højere MICA udtryk ses i vores patienter kan skyldes forskelle mellem befolkningsgrupper og racer, eller at alle patienter indskrevet i vores undersøgelse var avancerede tilfælde, mens de 40 tilfælde indskrevet i Busche undersøgelse omfattede området fra fase I til fase IV. Ved chi-square test og en nøjagtig sandsynlighed test, fandt vi, at patienter med stadium IV sygdom udviste signifikant højere MICA ekspression end patienter med stadium III-sygdom. I betragtning af de ovenstående resultater, vi udledes, at den positive sats på MICA udtryk ville stige som den fase af lungekræft avancerede. Men vi har stadig brug for at forstørre stikprøvestørrelsen og indrullere patienter i alle faser for at teste hypotesen.

Det er velkendt, at den cytotoksiske funktion NK-celler er direkte aktiveres af tumorceller, mens CD8 + T-celler kræver samtidige pre-sensibilisering og HLA-stimulering. Inducerbar-overfladeekspression af MICA som reaktion på stress eller malign transformation menes at markere dysfunktionelle celler til eliminering af cytotoksiske lymfocytter via NKG2D-medierede mekanismer [27], [28]. Faktisk ektopisk ekspression af NKG2D ligander ved tumorer fremkalder perforin-afhængig stærk NK og cytotoksisk T-lymfocyt (CTL) responser in vivo [13], [29]. Tidligere undersøgelser har vist, at MICA ekspression er en uafhængig markør for en god prognose i kolorektale cancere og osteosarcomer [22], [30]. Omvendt opregulering af MICA er en uafhængig indikator for dårlig prognose i brystkræft [23] og glimmer udtryk korrelerede ikke med prognoser i ovariecancer [24]. Imidlertid har vores undersøgelse af avanceret NSCLC viste en signifikant korrelation mellem glimmer udtryk og iscenesættelsen af ​​lungekræft. I overlevelse analyse, patienter med en dårlig prognose var mere tilbøjelige til at have høje niveauer af MICA på deres tumorer end dem med en god prognose.

GLIMMER udtryk på lungekræft celler er et tveægget sværd. MICA er en stressinduceret molekyle, der er blevet forbundet med immun-overvågning. Men de seneste rapporter identificeret en mekanisme, hvormed tumorer synes at være i stand til at nedbryde den immune overvågningsmekanisme. Tumorceller vides at konstitutivt udtrykker MICA protein på celleoverfladen; men disse celler også kaste MICA i en opløselig form, eventuelt gennem proteolyse [8], [15]. Udgydelse af opløselige MICA kobles med en samtidig reduktion i NK celleoverfladeekspression af NKG2DL, hvilket fører til formindskede immunstimulerende signaler for cytotoksiske lymfocytter [15]. Desuden er opløseligt MICA forbundet med en systemisk nedregulering af NKG2D ekspression på overfladen af ​​CD8 + T-celler og på γδ T-celler, hvilket yderligere inhibere antitumoraktiviteten af ​​disse immunceller [31]. For lungecancerceller blev MICA hovedsageligt udtrykt i membranen og cytoplasma. Så det kunne udledes, at kræftceller med høj ekspression af MICA i membranen kunne blokere NKG2D receptorer ved at slippe sMICA, og derved omgå immun afvisning. Dette kan være en af ​​årsagerne til den dårlige prognose af lungekræfttilfælde med høj ekspression af MICA. Derved kan MICA har variable virkninger på prognose og på det biologiske opførsel af tumorer og indflydelse tumorgenese og progression.

cytokininduceret killer (CIK) celler er heterogene ex vivo-ekspanderede T-lymfocytter, med et blandet T -NK fænotype, der er i stand til at udøve en bred MHC-ubegrænset antitumor aktivitet mod både faste og hæmatologiske maligniteter [18], [32], [33], men kliniske studier med CIK celler er stadig i deres vorden, og kun rapportere om et relativt lille antal patienter i de fleste af disse undersøgelser. I øjeblikket akkumulerede beviser tyder på, at amplifikation og immunreaktion af CIK-celler er relateret til aktivering af receptoren NKG2D signalvejen [19], [20], [21], [34]. Det er blevet vist, at højt udtrykt NKG2D receptor på CIK-celler kan interagere med ligander, ligesom glimmer på tumorceller og aktiverer second messenger signalveje nedstrøms for NKG2D receptor. CIK-celler binder til tumorceller gennem øget ekspression af NKG2D og dens ligering stimulerer CIK-celler til at frigive perforin, som spiller en rolle i lyserende tumorceller. Det vigtige implikation er, at CIK immunterapi ikke kan være begrænset til en bestemt type kræft eller HLA haplotype, udvide antallet af potentielle patienter, der kunne drage fordel af en sådan fremgangsmåde. Endvidere kan CIK-celler omgå en vigtig tumor immune flugtmekanismen når tumorceller nedregulerer HLA-ekspression. Vores laboratorium har også bekræftet, at med undtagelse af CD4 + T-celler, de andre CIK celler udtrykker NKG2D. Forventer derfor vi, at størstedelen af ​​CIK-celler kan genkende MICA ligand på lungen tumorcellemembranen gennem deres NKG2D receptor og bliver aktiveret til at dræbe tumorcellerne.

Gennem enkelt-faktor-analyse af 222 tilfælde af avanceret ikke-småcellet lungekræft i vores undersøgelse blev det konstateret, at CIK behandling havde en signifikant effekt på OS (p = 0,040). COX regressionsanalyse viste, at CIK behandling kan anvendes som en af ​​de uafhængige prognostiske faktorer for avancerede ikke-små patienter cellet lungecancer. Denne undersøgelse analyseres yderligere sagerne i undergrupper og fandt, at patienter med højt GLIMMER udtryk havde en signifikant større overlevelse gavn af CIK behandling. Yderligere COX regressionsanalyse viste, at ved skæringspunktet mellem MICA og CIK effektivitet, p-værdien er 0,0001, hvilket antyder, at CIK behandling har en god effekt hos patienter med høj MICA ekspression og høj ekspression af MICA kan anvendes som prædiktor for effekten af ​​CIK behandling.

Vores resultater er begrænset af det lille antal CIK behandlede patienter, mangler den tilbagevirkende kraft af analysen, den variable antal behandlingscykler, og studiet en evaluering af kort -term virkninger. Derfor er en behandling model for glimmer udtryk guidet CIK for avancerede ikke-småcellet lungecancer patienter har brug for yderligere undersøgelse med et udvidet stikprøve i yderligere prospektive kliniske studier.

Det kan konkluderes, at evalueringen af ​​MICA udtryk på tumorer celler hos patienter med fremskreden ikke-småcellet lungekræft vil bidrage til yderligere at bestemme patientens prognose. Patienter med høj MICA udtrykkende tumorer har en forholdsvis dårligere prognose, men på grund af vekselvirkningen mellem den aktiverende receptor NKG2D på CIK-celler og MICA på tumorcellerne, kan høj ekspression af MICA forbedre effektiviteten af ​​CIK terapi og forbedre overlevelsen. Det giver en ny individualiseret behandling for fremtidig immunterapi, og et teoretisk grundlag for fremtidige prospektive studier ved hjælp af en udvidet stikprøve.

Tak

Forfatterne takker Drs Liyuan Zhang og Weifeng Zhu (Department Patologisk, Fujian Provincial Cancer Hospital) for deres teknisk rådgivning og histologiske observationer.