PLoS ONE: peptid-Fluorescerende Bakterier Complex som Selvlysende Reagenser til Cancer Diagnosis

Abstrakt

I øjeblikket i klinikken, folk bruger hematoxylin og eosin pletten (H Accepteret: 11. december 2012; Udgivet: januar 18, 2013 |

Copyright: © 2013 Dong et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (No.30870683 og 81.171.451). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

med udviklingen af ​​nye teknikker vedrørende diagnosticering og behandling for kræft, at dødeligheden af ​​kræftpatienter er faldet i de seneste årtier. Men det formål at helbrede kræft er stadig langt fra at nå. Øjeblikket, at de centrale punkter forøge hærdehastigheden og livskvalitet af kræftpatienter er tidligere og nøjagtig diagnose og effektiv behandling af sådanne maligne sygdomme. Anvendelsen af ​​følsomme selvlysende reagenser og målretning molekyler til kræftceller giver nyttige værktøjer til præcis diagnose og effektiv behandling for kræft. Nye selvlysende materialer såsom quantum dots [1], opkonvertering nanomaterialer [2] og nanobubbles [3] er blevet forsøgt at gælde for kræft billeddannelse. Forskellige molekyler, såsom antistoffer [4], peptider [5], [6] og aptamerer [7] er blevet anvendt som målsøgningsmolekyler for kræft diagnose og terapi. Selv om der er visse fremskridt for udviklingen af ​​selvlysende materialer og målretning molekyler, effektive systemer til kræft diagnose og terapi er ikke blevet fuldt etableret. Tidligere og mere præcis diagnose metoder kombinerer molekyler rettet med robuste imaging molekyler tiltrække flere og flere forskere interesse [8]. Vores undersøgelse har til hensigt at etablere et nyt system, som omfatter peptider rettet mod og fluorescerende bakterier for præcis diagnose af kræft. Targeting peptider kunne screenes og identificeres af bakterier overflade display metode udviklet i 1990’erne [9], [10]. Brug af fluorescens-aktiveret cellesorterer (FACS), har forskellige peptider med specifik bindingsaktivitet blevet opnået i en high throughput måde med bakterier viser metoden [11], [12]. Øjeblikket, med denne metode, målretningsindstillingerne peptider til brystcancerceller [13] og substratpeptider til proteinase [14], er blevet identificeret. I vores undersøgelse med identifikationen af ​​de specifikke bindingspeptider for lungekræft A549-celler, der skal etableres en ny teknik til at detektere lungecancer-celler under anvendelse peptid-fluorescerende bakterier system. Endvidere kunne peptid-fluorescerende bakterier systemet anvendes som den diagnostiske reagens i klinisk anvendelse for kræftpatienter i fremtiden.

Materialer og metoder

1. Celledyrkning og Materialer

human lunge carcinoma cellelinier (A549-celler og H460 celler), humant brystadenocarcinom cellelinie (MCF-7), human hepatocellulær carcinom-cellelinje (HepG-2), human cervical carcinoma-cellelinie (HeLa) og human larynx carcinom-cellelinie (Hep-2) blev anvendt i denne undersøgelse. Disse cellelinier blev dyrket i RPMI-1640 (Hyclone Corp., USA) og humane lunge-fibroblastceller (HLF) blev dyrket i Dulbeccos modificerede Eagle-medium (Hyclone Corp., USA) i en CO 5%

2 befugtet inkubator ved 37 ° C. Mediet blev suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS) (Hyclone Corp., USA) og 1% penicillin /streptomycin (China National Medicine Corp., Kina). A549, H460 og HLF celler slags gaver fra Dr. Biliang Zhang [15], [16] (Guangzhou institutter for biomedicin og sundhed, CAS, Kina). MCF-7, HepG-2, HeLa og Hep-2-celler var venlige gaver fra Dr. Haiyan Liu [17], [18] (The Cyrus Tang Hematology Center, Soochow University, Kina). De andre kemiske midler i denne undersøgelse blev købt fra China National Medicine Corporation.

2. Screening af Binding monoklonale peptid-fluorescerende Bakterier med A549 celler

Den bakterielle peptid bibliotek af

E. coli

anvendt i denne undersøgelse var en gave fra Patrick S. Daugherty i Institut for Kemiteknik, University of California, Santa Barbara. I denne bakterielle peptid bibliotek, hver

E. coli

overflade præsenterede 13-mer peptid (X2CX7CX2) fusion i det andet ekstracellulære løkke af cirkulært permuteret ydre membranprotein OmpX (CPX) [13], hvori udtrykte peptider og grønt fluorescerende protein (GFP) blev induceret ved tilsætning af L – (+) – arabinose (0,02% vægt /volumen) til en log-fase-kultur [13], [19]

Frosne alikvoter af 1 × 10

9 bakterier blev optøet og dyrket. natten over i super optimale bouillon (SOB) ved 37 ° C og tilsat 34 ug /ml chloramphenicol (CM) og 0,2% (vægt /volumen) D – (+) – glucose. Den næste dag blev bakterierne subkultur 1:50 i lysogeni bouillon (LB) medium suppleret med 34 ug /ml CM i 2 timer ved 37 ° C og induceret med 0,02% (w /v) L – (+) – arabinose for 1 time ved stuetemperatur for at sikre GFP og peptider udtrykkes i bakterier. Efter dyrkede (48 timer efter såning) A549 og HLF Cellerne blev høstet ved trypsinering og resuspenderet i rør. 10

7 HLF-celler blev co-inkuberet med 100 gange overskud bakterieceller i 45 minutter på en inversion ryster ved 4 ° C. Cellesuspensioner blev centrifugeret ved 1000 rpm i 5 minutter ved 4 ° C, og supernatanten blev opsamlet. Denne procedure kan gentages for anden gang på grund af de forøgede uspecifik binding begivenheder indtraf for HLF celler. Supernatanten blev co-inkuberet med 10

7 A549-celler i 45 minutter på en inversion ryster ved 4 ° suspensioner C og celler blev centrifugeret ved 1000 rpm i 5 minutter ved 4 ° C og derefter vasket tre gange med PBS. Sedimentet blev resuspenderet med 5 ml kold PBS og straks analyseret ved FACS (BD FACS Aria II, BD Corp. USA). Sorteringsprocessen gate i FACS forsøg blev indstillet baseret på de fluorescerende signaler af negative kontrolprøver. Når indstillingerne fluorescens var blevet optimeret til den negative kontrol blev en passende slags gate trukket til sortering biblioteket baseret på fluorescens. En slags gate blev trukket til at udelukke så meget af den negative kontrol som muligt, mens der stadig opfange positive begivenheder i biblioteket [13] .De grønt fluorescerende celler blev gated for sortering fordi hvis peptider, som var på overfladen af ​​grønne fluorescerende bakterier kunne binde med A549-celler og de grønne fluorescerende signaler af celler ville stige. Mindst 10

5 hændelser blev registreret, og tumorcellerne med øget grønne fluorescerende signaler og faldt i den orange port blev indsamlet med FACS. De opsamlede celler blev dyrket natten over i SOB indeholdende 0,2% D – (+) – glucose og 34 ug /ml CM. Bakterier bindende med kræftceller specifikt blev forstærket til næste runde af screening. Fra næste runde, 10

6 celler var nok til FACS-analyse og sortering. Indtil det fluorescerende signal af tumorceller stoppe stigende i rækkefølge to runder, blev proceduren ifølge screening for bindingspeptider afsluttes. Udvalgte bakterier med bindingspeptider blev dyrket på mediet plade LB indeholdende 1% agar og 34 ug /ml CM. Efter dyrket i 24 timer ved 37 ° C blev monoklonale peptid-fluorescerende bakterier udvalgt og dyrket i 5 ml SOB indeholdende 0,2% (m /v) D – (+) – glucose og 34 ug /ml CM ved 37 ° C natten over. Den næste dag blev bindingsaktiviteten af ​​individuelle kloner undersøges ved at måle de GFP fluorescerende signaler af celler efter A549-celler inkuberet med disse monoklonale peptid-fluorescerende bakterier. Sekvenserne af bindende peptider på overfladen af ​​monoklonale peptid-fluorescerende bakterier blev opnået ved at udsende disse bakterier til Sangon Biotech Co, Ltd Shanghai, Kina til sekventering.

3. Karakterisering af Bindende specificitet og effektivitet mellem peptid-fluorescerende bakterier og celler

Forsøgene blev udført på begge vedhæftede og løsrevne celler. Den fluorescensmikroskopi Forsøget blev først udført for at undersøge bindingsspecificiteten af ​​monoklonale peptid-fluorescerende bakterier med vedhæftede celler. A549-celler, HLF celler, H460 celler, MCF-7-celler, Hep-2-celler, HepG-2-celler og HeLa-celler (3 x 10

5) blev udpladet i 12-brønds celledyrkningsplader en dag før forsøget. Efter induktion, 100 pi bakteriesuspension (≈8 × 10

7) i 1 ml PBS blev inkuberet med alle slags celler ved stuetemperatur, hvilket er bevist at sikre proteiner på overfladen af ​​celler udtrykte normalt under inkubationen [13] i 45 minutter og blev vasket tre gange af PBS. Celler blev fotograferet med fluorescensmikroskopi (Nikon Ti, Nikon Corp. Japan) for at bekræfte bindingsaktiviteten af ​​monoklonale peptid-fluorescerende bakterier med celler. Bindingsaktiviteten mellem monoklonale peptid-fluorescerende bakterier med løsnede celler blev undersøgt ved flowcytometri. Fremgangsmåden i behandlingen bindingsaktiviteten af ​​peptid-fluorescerende bakterier ligner den til screening de bindende peptider med celler.

4. Forsøg at opretholde Bakterier Bindende aktivitet med forskellige Fiksering Metoder

Fiksering blev udført med forskellige fiksering reagenser (ethanol [20], methanol [21], acetone [22] og 4% paraformaldehyd [23]). Efter centrifugeret ved 5000 rpm i 5 min blev supernatanten fjernet, og bakterierne blev fikseret i fastgørelseselementerne reagenser til 20 minutter ved stuetemperatur. De overskydende fiksering reagenser blev fjernet, og de faste bakterier blev suspenderet ved PBS og opbevaret ved 4 ° C.

flowcytometrianalyse og fluorescensmikroskopi blev udført som tidligere angivet at undersøge bindingsaktiviteten af ​​faste bakterier med celler. Sammenlignet med friske monoklonale peptid-fluorescerende bakterier, forholdet mellem faste bakterier til celler varierede fra 100:1 til 500:1 at opnå indlysende og detekteres fluorescerende signaler i celler. Normalt efter bakterier blev fastsat, de grønne fluorescerende signaler af bakterier faldt til vis grad. Til undersøgelse af, om den bindende aktivitet af faste bakterier med celler afhængig af tiden, blev fluorescens mikroskopi og FACS analyser udført gentagne gange på dag 1, dag 7 og dag 30 efter fiksering.

5. Undersøgelse af Bindende aktivitet af peptid-fluorescerende bakterier System med tumorvæv af mus xenotransplantat

Bindende eksperiment blev udført på paraffinindstøbt væv. A549 mus tumor xenograft prøver på paraffin dias var venlige gaver fra Dr. Laura Cerchia og Dr Vittorio De Franciscis (Istituto di endocrinología ed Oncologia Sperimentale, CNR, Napoli, Italien). Den tilhørende papir om prøver forberedelse er allerede blevet offentliggjort i PLoS ONE journal [24]. Proceduren for afvoksning for paraffin prøverne blev udført efter den accepterede procedure [25]. 1 × 10

6 (i 100 pi) frisk peptid-bakterier og 5 × 10

6 faste peptid-bakterier blev inkuberet separat med paraffin tumorsnit i 1 time ved stuetemperatur. Efter vask med PBS tre gange blev tumorsnit observeret under et Nikon A1R konfokalt laserscanningmikroskop (Nikon Corp. Japan).

Resultater

1. Berigelse af specifikke bindingspeptider bibliotek for A549-celler

For at isolere cellespecifikke bindende ligander for en given tumor-fænotype vi besluttet at oprette et modelsystem herunder normale (ikke-tumor) cellelinie (HLF) og lungecarcinom-cellelinje (A549). HLF celler arbejdede for modselektion i screeningen. En 13-mer-biblioteket med cystein behersket peptider blev anvendt til selektion af bindingspeptider mod intakte celler (figur 1A). Ved hver runde af A549 selektion celler trin blev udført en eller to modselektion skridt mod HLF celler. Under udvælgelsesprocessen, vi gradvist øget selektionstryk ved at ændre inkubationsbetingelser, vask tilstand og område af gate i FACS. Under runde 6 og 7, er forholdet af grønne fluorescerende celler til hele celler forblev uændret, antyder, at befolkningen var standset med at udvikle sig under selektionstryk. Faktisk var puljen runde 6 beriget for peptider, der vises på overfladen af ​​bakterier, der fortrinsvis binder til A549-celler (Figur 1B). Tres individuelle kloner af bakterier fra denne pulje blev udvalgt og dyrket i det næste trin i analysen.

(A) Skematisk gengivelse af peptider screening og udvælgelse med bakteriel display-bibliotek. 1. Konstrueret biblioteket ved at omdanne plasmider i

E.coli

MC1061; 2. Kasserede bakterier bindende med normale celler efter præ-inkubation; 3. inkuberede blanding af cancerceller og resterende bakterier; 4. Analyseret den bindende virkning af kræftceller med bakterier ved hjælp af FACS; 5. Sorteret de bindende bakterier til cancerceller ved flowcytometri og dyrket de bindende bakterier i medium; 6. Udføres næste runde bindende bakterier screening; 7. Isoleret de bindende bakterier til cancerceller og sekventeret peptiderne vist på overfladen af ​​bakterierne. (B) Forløbet af berigelse af bakterier bindende med kræftceller ved FACS i 6 screening runder.

2. Identifikation af monoklonale Peptid-fluorescerende bakterier med høj bindingskapacitet Efficiency

De monoklonale peptid-fluorescerende bakterier med høj binding effektivitet blev identificeret fra 60 kloner til yderligere forsøg. Før klonerne blev sendt til sekventering anvendte vi FACS til at sammenligne bindingen effektiviteten af ​​bakterier til HLF og A549-celler. Efter inkubering med inducerede monoklonale peptid-fluorescerende bakterier, procentdelen af ​​de fluorescerende celler til hele celler repræsenterede bindende sats af peptider på overfladen af ​​klonale bakterier med celler. Resultaterne viste, at bindingen på alle bakterierne fra disse 60 kloner var omkring 10% -80% for A549-celler, mens det var mindre end 5% for HLF celler (data ikke vist). Sammenligning til dem med 20% binding rate, peptider-fluorescerende bakterier med 80% binding sats kan have højere affinitet for celler. Bindingen sats af de monoklonale peptid-fluorescerende bakterier (klon 4) med den højeste binding effektivitet var 80% for A549-celler og 0,4% for HLF celler (figur 2). Sekventeringsresultaterne viste, at syv unikke klon-sekvenser blev opnået fra 60 kloner (tabel 1). Der var ingen bevaret sekvens observeret for alle disse kloner.

Den bindende brøkdel af A549 celler med bakterier (vis i den orange gate) var 80%, og at af HLF celler var 0,4%.

3. Evaluering af bindingsspecificiteten af ​​monoklonale peptid-fluorescerende Bakterier

identifikation af et lille sæt af peptid-fluorescerende bakterier, der kan skelne de A549 celler fra HLF celler rejser et spørgsmål om, hvorvidt disse peptid-fluorescerende bakterier kan binde såvel med andre celletyper. Til dette mål bestemmes vi at undersøge den relative binding potentialet i alle de peptid-fluorescerende bakterier til flere cellelinjer. Vi først bestemmes celletypespecificiteten ved måling af bindingsaktivitet af alle peptid-fluorescerende bakterier på et panel af ikke-relaterede cellelinjer. Vi fandt, at nogen af ​​de syv peptid-fluorescerende bakterier ikke bandt til andre humane carcinom celletyper, herunder lever (HepG-2), larynx (Hep-2), cervikal (Hela) og bryst (MCF-7) carcinomceller. Resultaterne fra observation af fluorescerende mikroskop og flowcytometer på de vedlagte og løsnede celler verificeret bindingsspecificiteten af ​​peptid-fluorescerende bakterier. Figur 3 viste typiske resultater af peptid-fluorescerende bakterier, der havde den højeste binding effektivitet til A549-celler (klon 4). Desuden kunne de bakterier med kun CPX scaffold protein ikke binde med A549-celler, hvilket betød, peptider frembyder på overfladen af ​​bakterierne medierede bindingsbegivenheden mellem bakterier og A549-celler. Mere opmærksomhed skal betales til andre lungecarcinomceller fx H460. Vores resultater viste, at de monoklonale peptid-fluorescerende bakterier ikke kunne genkende H460 celler -En anden cellelinje også tilhører kategorien af ​​ikke-småcellet lungekræft, som indebar, at de monoklonale peptid-fluorescerende bakterier har mulighed for at anerkende forskellige genrer af lungecancerceller.

(A) fluorescensmikroskop billeder af bakterier kloner inkuberet med celler. A549

△ blev inkuberet med CPX kun bakterier og andre celler blev inkuberet med udvalgte monoklonale peptid-fluorescerende bakterier, skalalinjen var 20 um. (B) FACS resultater af forskellige celler binder med monoklonale peptid-fluorescerende bakterier ved forholdet 1:100. (C) Procentdel af bindende fraktion af monoklonale peptid-fluorescerende bakterier med forskellige celler fra FACS-data. Data var gennemsnit ± S.D. af mindst tre uafhængige forsøg.

4. Vedligeholdelse af bindingsevnen af ​​peptid-fluorescerende Bakterier med tumorceller til klinisk anvendelse

En fiksering metode var nødvendig for at opretholde bindingsspecificiteten og effektiviteten af ​​bakterier til celler til mere omfattende applikationer. Gennem sammenligning af bindende virkning af bakterier med celler efter bakterier blev fastsat ved ethanol, methanol, acetone og 4% paraformaldehyd, valgte vi paraformaldehyd som fiksering reagens til yderligere undersøgelse. Selvom de faste bakterier stadig holdt evnen til at binde med celler, bindingen effektiviteten af ​​faste bakterier var lavere end den for friske bakterier. For at opnå en sammenlignelig bindende virkning for de faste bakterier, vi øget forholdet mellem bakterier til celler fra 100:1 til 500:1. De i fig 4A og S1 resultater viste, at faste bakterier stadig opretholdt den bindingsspecificitet. Desuden efter sammenligning med negative kontrolceller, ikke-tumorcellelinie (HLF) med nogle tumorcellelinier (H460 og Hep-2), bindingsspecificiteten af ​​faste bakterier var bedre end for friske bakterier. Efterfølgende undersøgte vi ændringen på bindingen effektiviteten af ​​faste bakterier efter tidsforløbet. I dette eksperiment de mål, vi valgte var friske bakterier, frisk faste bakterier (dag 1) og faste bakterier, der er gemt i 7 dage og 30 dage. Resultaterne (figur 4B, 4C og 4D) viste, at de faste bakterier stadig holdt en højere bindingseffektivitet med celler, selv efter opbevaring i 30 dage, hvilket indikerede, at faste fluorescerende bakterier kan anvendes til påvisning af A549-celler, selv efter opbevaring i temmelig lang tid.

(a) Procentdel af bindende del af friske og faste monoklonale peptid-fluorescerende bakterier med forskellige celler fra FACS-data. Celler binder friske bakterier (sort) på forholdet 1:100 og bindende til faste bakterier (grå) på forholdet 1:500. (B) fluorescensmikroskop billeder af A549-celler inkubere med friske bakterier og faste bakterier ved forholdet 1:500, på dag 1, dag 7 og dag 30 efter fiksering og omfanget bar var 20 um. (C) FACS resultaterne af A549-celler binder med friske og faste monoklonale peptid-fluorescerende bakterier ved udvekslingsforholdet 1:500 på forskellige tidspunkter. (D) Procentdel af bindende fraktion af friske og faste monoklonale peptid-fluorescerende bakterier med A549-celler fra FACS dataceller bindende med friske bakterier og faste bakterier ved udvekslingsforholdet 1:500 på forskellige tidspunkter. Data var gennemsnit ± S.D. af mindst tre uafhængige forsøg.

5. Påvisning af A549 tumorvæv fra musene xenograft med peptid-fluorescerende bakterier Salg

Efter inkuberet tumorvæv i A549 mus xenograft med inducerede monoklonale peptid-fluorescerende bakterier (klon 4 og CPX kun), tumor sektion i xenotransplantat udsendte grøn fluorescens fordi peptider på overfladen af ​​fluorescerende bakterier kunne genkende tumorcellerne. Imidlertid vævssnit støder op til tumoren del inkuberet med klon 4 peptid-bakterier og tumor sektion inkuberet med CPX kun bakterier ikke udsender fluorescenssignaler (figur 5). Disse resultater kunne reproduceres med faste peptid-fluorescerende bakterier (data ikke vist).

Målestokken var 20 um. Data, var repræsentative for mindst tre uafhængige forsøg.

Diskussion

I vores undersøgelse blev specifikke bindende peptider for lungekræft celler identificeret med bakterier overflade display metode. Der var ingen konserverede sekvenser for de peptider, som indikerede, at disse peptider kan interagere med forskellige proteiner på overfladen af ​​tumorceller. Selv om disse peptider kan anvendes som target molekyler til diagnose og behandling for kræft, i denne undersøgelse, forsøgte vi at udforske potentialet i fluorescerende

E. coli

MC1061, som havde specifikke peptider på overfladen, direkte arbejdede som diagnostiske reagenser. Resultaterne fra

in vitro

eksperiment viste, at de udvalgte bakterier med peptider på overfladen specifikt kunne binde med A549 celler med høj affinitet, uanset om cellerne blev fastgjort eller frigjort. Evnen af ​​peptid-fluorescerende bakterier til at genkende visse tumorceller blev bekræftet ved mus tumor xenograft eksperimenter. Med resultaterne fra de

in vitro

eksperimenter blev en ny fremgangsmåde udviklet for første gang at detektere lungecancerceller direkte med fluorescerende bakterier. I betragtning af hylden tid og sikkerhed af bakterier, manipulation af levende bakterier var nødvendigt for deres videre anvendelse. Gennem sammenligning af effekten af ​​forskellige fiksering reagenser (ethanol, methanol, acetone og 4% paraformaldehyd), blev 4% paraformaldehyd valgt som den bedste fiksering reagens. Bakterierne fikseret med dette reagens kunne opretholde en høj binding effektivitet og specificitet til celler i mindst en måned.

I den kliniske praksis og bænk arbejde, det meste af tiden, imaging teknologi blev anvendt til diagnosticering af lungecancer. Mange billeddiagnostiske molekyler allerede har klinisk og subklinisk brug, for eksempler, funktionelle radioaktive molekyler til PET imaging [26], nye magnetiske materialer til MRI imaging [27], nye materialer til ultralyd imaging [28] og PET /MR imaging [29 ]. Selv der er allerede rapporter om bakterien som en selvlysende imaging reagens i diagnose [30], men dens anvendelse er begrænset på grund af knaphed på præcision, følsomhed og selvlysende styrke denne imaging reagens. Vores nye system kan hjælpe os ikke kun at diskriminere lungecancerceller fra andre celler, men også at bestemme den genre af lungecancerceller, hvilket gør denne fremgangsmåde mere nøjagtig for diagnose. På nuværende metoder, der anvendes klinisk til bestemmelse af genre af celler indbefatter Hematoxylin og eosin farvning (H & E-farve) [31] og immunhistokemi [32], men disse to metoder er mere komplicerede, dyre og subjektiv sammenlignet med vores nye metode . Med lave investeringer (kun én fluorescerende mikroskop nødvendigt) og korte forberedelsestid af prøver, vores metode giver en ny supplerende måde for at gøre hurtige og præcise beslutninger om, hvorvidt tumorer er godartet eller ondartet, hvor er kanten af ​​tumor sektion og endda hvad genre tumor patienten har under kirurgiske operationer [33], [34].

Vores undersøgelse præsenteret en ny metode til at opdage lunge kræftceller direkte med peptid-fluorescerende bakterier som selvlysende reagenser

in vitro

. Denne metode har fordelene ved lave omkostninger, nem indkøb, let ydeevne, kort tid forberedelse og objektivitet. Men i øjeblikket kunne vi ikke belyse den detaljerede molekylære mekanisme om bindingsbegivenheden mellem peptider og celler. Desuden har vi stadig brug for flere kliniske prøver at bekræfte gyldigheden af ​​vores system. Selvom, fra de foreliggende eksperimentelle resultater, vi mener, at denne metode har stort potentiale som en ny kliniske diagnostiske midler. Fremover studie, er der behov for støtte fra masse eksperimentelle data til at fremme oversættelsen af ​​denne metode fra bænken til klinikken.

Støtte Information

Figur S1.

FACS resultater af forskellige celler binder med faste monoklonale peptid-fluorescerende bakterier ved forholdet 1:500.

doi: 10,1371 /journal.pone.0054467.s001

(TIF)

Tak

Vi takker Dr Vittorio de Franciscis og Laura Cerchia for at give A549 mus tumor xenograft prøver på paraffin dias. Vi takker Dr. Biliang Zhang og Haiyan Liu for at give cellelinjer.