PLoS ONE: retrotransposition Long spækket Nukleotid Element-1 er associeret med Colitis men ikke Tumorer i en murin Colitic Cancer Model

Abstrakt

Lang afbrudt element-1 (L1) er en overføres element, der kan bevæge sig inden genomet, der kan føre til genome mangfoldighed og modificeret genfunktion. Selvom L1-aktivitet i somatiske celler, der normalt undertrykkes gennem DNA-methylering, er nogle L1S aktiveret i tumorer, herunder colorectal carcinom. Men hvordan L1-retrotransposition (L1-RTP) er involveret i gastrointestinale lidelser stadig, at blive belyst. Vi antager, at L1-RTP i somatiske celler kan bidrage til colitis-associeret cancer (CAC). For at løse dette, vi ansat en eksperimentel model af CAC hjælp af transgene L1-reporter mus, der bærer et humant L1-EGFP reporter gen. Mus blev udsat for gentagne cyklusser af colitis induceret af administration af dextran natriumsulfat (DSS) i drikkevand med injektion af carcinogen azoxymethan (AOM). L1-RTP-niveauer blev målt ved en kvantitativ polymerasekædereaktion målretning den nyligt indsatte reporter EGFP i forskellige væv og celletyper, herunder prøver opnået ved laser mikrodissektion og cellesortering med flowcytometri. DNA methylering niveauer af den humane L1-promotoren blev analyseret ved bisulfit pyrosekventering. AOM + DSS-behandlede mus udviste signifikant højere niveauer af L1-RTP i hele colon væv under den akutte fase af colitis sammenlignet med kontrol naive mus. L1-RTP-niveauer i hele colon væv blev positivt korreleret med den histologiske alvorlighed colitis og graden af ​​neutrofil infiltration i lamina propria (LP), men ikke med tumorudvikling i tyktarmen. L1-RTP blev beriget i LP mesenchymale celler snarere end epitelceller (ECS), myeloid eller lymfoide celler. DNA methylering niveauer af den menneskelige L1 promoter region viste en negativ korrelation med L1-RTP-niveauer. L1-RTP var fraværende fra de fleste tumorer fundet i 22 uger gamle mus. Afslutningsvis vi demonstreret, at L1-RTP blev induceret i mus CAC slimhinde i overensstemmelse med den akutte inflammatoriske respons; synes imidlertid retrotransposition ikke at have direkte relevans for colitis-induceret kræft initiering

Henvisning:. Otsubo T, Okamura T, Hagiwara T, Ishizaka Y, Dohi T, Kawamura YI (2015) retrotransposition Long spækket Nukleotid Element -1 er forbundet med Colitis men ikke Tumorer i en murin Colitic Cancer Model. PLoS ONE 10 (2): e0116072. doi: 10,1371 /journal.pone.0116072

Academic Redaktør: Emiko Mizoguchi, Massachusetts General Hospital, UNITED STATES

Modtaget: September 30, 2014 Accepteret: December 5, 2014; Udgivet: 24 Februar 2015

Copyright: © 2015 Otsubo et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Denne forskning blev delvist støttet af tilskud fra programmerne tilskud-i-Aid for Unge Forskere; Tilskud-i-Aid for Videnskabelig Forskning (C); Tilskud-i-Aid for Videnskabelig Forskning om prioriterede områder fra Undervisningsministeriet, Cultures, Sport, Videnskab og Teknologi; International forskningssamarbejde Tilskud fra Sundhedsministeriet, Labor, og Velfærd; og National Center for Global Sundhed og medicin (21-110, 22-205, 21-129, 23-101, 25-104, 26-110); og Grant-in-Aid for Forskning fra Ministeriet for sundhed, arbejde og velfærd Japan (09156296)

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion.

lang afbrudt element -1 (L1) er en overføres element, der kan bevæge sig i genomet at fremkalde gen sletninger, inversioner og indsættelser, der kan føre til genome mangfoldighed samt ændre genfunktion [1,2] . L1 er til stede i alle pattedyr, herunder mennesker og omfatter ca. 17% af det humane genom [3,4]. Selvom L1 aktivitet normalt undertrykkes i somatiske celler gennem epigenetiske mekanismer, såsom DNA-methylering, er nogle L1S aktiveres ved miljømæssige faktorer, herunder kræftfremkaldende og proinflammatoriske forbindelser [5-8]. Vigtigere, blev L1 indrykninger påvist i flere typer af humane kræftformer, herunder kolorektal kræft [9-11]. Hypomethylering af CpG-øer på L1 5′-UTR er blevet rapporteret ikke kun i cancere, men også i humane inflammatoriske lidelser [12,13] foreslå en potentiel rolle for L1 gennemførelse i inflammatoriske tilstande. Denne mulighed er især vigtigt i gastrointestinal carcinogenese, fordi kronisk inflammation er en af ​​de vigtigste risikofaktorer for gastrointestinal malignitet [14,15]. Men hvordan L1-retrotransposition (L1-RTP) er involveret i gastrointestinal inflammation og malignitet stadig, at blive belyst. Vi hypotesen, at L1-RTP i somatiske celler kan bidrage til colitis-associeret cancer (CAC). For at løse denne mulighed, anvendte vi en eksperimentel model for CAC hjælp af kræftfremkaldende azoxymethan (AOM) sammen med induktion af colitis ved dextransulfat natrium (DSS) i drikkevandet i forbindelse med en transgen mus L1 reporter system. Mekanismen for denne CAC model er blevet omfattende undersøgt ved anvendelse af forskellige typer af gen-manipulerede mus. For eksempel TNF-receptor 1 (TNFR1) deficiente mus udviste nedsat antal tumorer, som var afhængige af mangel på TNFR1 fra deres hæmatopoietiske celler [16]. Som en nedstrøms signal af TNFR1, er nukleare transkriptionsfaktor kappa B (NF-kB) rapporteret at være kritisk i inflammation-associerede udvikling af colitic cancer [17]. IL-6 også fremmer tumorvækst, eventuelt gennem aktivering af Janus-aktiveret kinase (JAK) og signalet transducer og aktivator af transkription (STAT) 3 pathways [18-20].

I denne undersøgelse fandt vi at L1-RTP var positivt associeret med sværhedsgraden af ​​colitis. Aktivering af L1 blev korreleret med hypometylering af CpG-øer på L1 5′-UTR. Imidlertid blev L1-RTP ikke steget i tumorerne i denne model antyder, at L1-RTP ikke er signifikant involveret i tumor initiering i denne CAC model.

Materialer og metoder

Etik redegørelse

Alle forsøg med mus blev udført i overensstemmelse med de institutionelle retningslinjer for pasning og anvendelse af forsøgsdyr i forskning med godkendelse af Animal Care og brug Udvalg for Research Institute, National center for Global Sundhed og medicin (godkendelsesnummer 14039). Dyrene blev aflivet med ketamin og xylazin og enhver indsats blev gjort for at minimere lidelse.

Mus og CAC model

En linje af transgene mus huser et humant L1-EGFP reporter gen (

HL1-EGFP

), opkaldt Linie 4, blev udviklet i vores anlæg [5] og anvendt i alle eksperimenter. Mus blev holdt under specifikke patogenfrie betingelser under forsøgene. CAC model protokoller er vist i fig. 1A. Ugentlig peritoneal injektion af azoxymethan (AOM, 10 mg /kg, Sigma-Aldrich Japan) blev startet ved 6 ugers alderen og gentages fire gange. Mus blev sultet i 12 timer før AOM injektion for at øge virkningen af ​​carcinogenese med AOM [21]. Mus i forsøgsgruppen fik 3,5% (W /V) dextransulfat-natrium (DSS, Sigma-Aldrich Japan) i drikkevandet i 5 dage ved 7 uger, og denne behandling blev gentaget fire gange månedligt. Ved 22 ugers alderen (tumor fase), blev colonvæv opnået. Synlige tumorer blev skåret fra slimhinden og separat analyseret fra baggrunden slimhinde. I nogle forsøg blev colon væv opnået fra 8 uger gamle mus efter to injektioner af AOM og inden for syv dage efter ophør DSS behandling (akut fase).

(A) Skematisk tidsplan for AOM + DSS colitis musemodel. Pile angiver tidspunkter forbundet med akutte inflammatoriske og tumor faser til høst af kolon væv og /eller tumorer. (B) L1-RTP niveauer blev analyseret med genomisk DNA ekstraheret fra hele distale colon væv og /eller tumorer. Den EGFP copy /genom blev beregnet ved hjælp af ß-actin som intern kontrol. Prøver mærket “akut AOM + DSS” blev opnået i den akutte fase i panel A, og andre blev indsamlet under tumoren fase. AOM + DSS indikerer resterende kolon væv efter fjernelse synlige tumorer. Data blev vist som middelværdi ± SD. P-værdier blev beregnet med en uparret to-halet t-test.

Kvantificering af L1-RTP

For PCR-analysen blev genomisk DNA fremstillet fra væv og celler ved hjælp af en DNA udsugningsanlæg (QuickGene, Fujifilm, Tokyo, Japan). Metoden til påvisning af frekvensen af ​​L1-RTP med en PCR targeting retrotranspositioned EGFP blev beskrevet tidligere [22]. Til analyse af tumorer blev en tilfældigt udvalgt tumor fra hver mus udsat for DNA-ekstraktion og L1-RTP-analyse.

Histologisk analyse og laser mikrodissektion

Hele kolon væv opnået under den akutte inflammatoriske fase blev rullet op og lynfrosset i flydende nitrogen. Frosne snit blev fikseret med kold acetone og farvet med hematoxylin og eosin til histologisk analyse. Histologiske scorer for graden af ​​krypt tab og celleinfiltration var blindt tildelt hver kolon. Crypt tab blev evalueret som det relative fald i epitelcelle område i sammenligning med naive colon under anvendelse af et optaget billede analyseret ved billede J software (NIH, Bethesda, MD, USA): 0-ingen ændring eller mindre end 10% fald fra naive kolon , 1-10-30% af epitelceller gik tabt, 2-30-50%, 3-50-70%, 4-70-90%, 5-mere end 90%. Celleinfiltration scores: 0-ingen ændring fra naive kolon, en-omdrejningspunkt infiltration begrænset til slimhinden lag, 2-fokal infiltration i både slimhinder og submukøse lag, 3-diffus slimhinde og submucosa infiltration. En score for hver mus blev bestemt som summen af ​​krypten score og celleinfiltration score. Neutrofil infiltration blev bestemt ved cellekernemorfologi. I nogle forsøg blev opnået genomisk DNA fra frosne sektioner ved hjælp af en laser mikrodissektion-system (LMD 7000, Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland) i overensstemmelse med producentens anvisninger.

Cell separation

epithelceller (EC’er ) blev isoleret fra tyktarmen og behandlet med 10 mM EDTA i Hanks Balanced Salt Solution (HBSS, Sigma-Aldrich). Lamina propria (LP) celler (LPCs) blev isoleret ved hjælp af en Gentle MACS Dissociator (Milteny Biotech, Köln, Tyskland) med lamina propria Dissociation Kit til musen (Milteny Biotech). LPCs blev farvet med fluoresceinisothiocyanat (FITC) -, R-phycoerythrin (PE) – eller allophycocyanin (APC) -mærket anti-CD3, anti-CD11, anti-CD11 c, anti-B220, anti-Gr-1, eller anti -EpCAM antistoffer (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA), og 7-aminoactinomycin D at identificere levedygtige celler, og cellerne blev sorteret med et flowcytometer (MoFlo, Beckman Coulter, Tokyo, Japan). Celletype sortering blev udført med følgende overflademarkører: T-celler, EpCAM

-CD3

+ CD11b

-CD11c

-; B-celler, herunder B220-lav plasmaceller, EpCAM

-B220

+ CD11b

-CD11c

-; dendritiske celler /makrofager, en blanding af EpCAM

-CD3

-CD11b

+ celler, EpCAM

-CD3

-CD11c

+ celler og EpCAM

-CD3

-F4 /80

+ celler; granulocytter, EpCAM

-GR-1

høje celler; ikke-epitelial ikke-hæmatopoietiske celler, EpCAM

-CD3

-B220

-CD11b

-CD11c

-F4 /80

-GR-1

-. celler

DNA methylering assay

for at vurdere status methylering af L1, blev bisulfit-pyrosekventering udført med en PyroMark Q24 pyrosekventering maskine (QIAGEN, Hilden, Tyskland) ved hjælp af pyro LINE kit (PyroMark Q24 CpG LINE- 1 4 x 24, kat. no.970042, QIAGEN).

statistisk analyse

statistisk analyse blev udført under anvendelse af Prism 6 statistiske program (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA) med de metoder, der er angivet i figurteksterne. For analyserne af forskel pardannelsen et- eller to-halet Students t tests blev anvendt. Korrelationer blev testet med tosidige Pearson beregninger. Værdier af P 0,05 blev betragtet som signifikante.

Resultater og Diskussion

L1-RTP-niveauer steg i den akutte fase af colitis

Den eksperimentelle protokol for CAC-modellen er illustreret i fig. 1A. Transgene mus, der huser et humant L1-EGFP reporter gen (

HL1-EGFP

) [5], blev anvendt i alle eksperimenter. I denne model, vi med succes opnået colontumorer fra 22 uger gamle mus efter fire injektioner af AOM og fire cyklusser af DSS colitis. Tre til fireogtyve tumorer blev fundet i hver colon (middelværdi = 11,5, 11 mus). Ubehandlede (naive) eller mus behandlet med kun AOM eller DSS udviklede ikke colontumorer. For at undersøge induktionen af ​​L1-RTP, vi først opnåede hele kolon væv fra hver gruppe af mus under tumoren fase (22 uger gamle) eller i den akutte fase efter den første administration af DSS (8 uger gamle). Vi forsøgte oprindeligt at detektere celler, der udtrykker EGFP histologisk eller med flowcytometri; dog EGFP-ekspression var ikke synlig, sandsynligvis på grund af lav forekomst af L1-RTP. Derfor vi kvantificeret hyppigheden af ​​L1-RTP med en PCR targeting retrotranspositioned EGFP som tidligere [22] beskrevet. Som et resultat, fandt vi, at L1-RTP blev øget betydeligt i den akutte fase i AOM + DSS colitis gruppe, men ikke i tumorer eller i baggrunden slimhinde af tumor-bærende koloner (fig. 1B). Induktion af L1-RTP blev ikke set i mus behandlet kun med AOM eller DSS. Disse resultater viser, at induktion af L1-RTP er forbundet med akut colitis, men ikke opretholdes, indtil tumoren fase, og heller ikke direkte involveret i tumorigenese i denne colitis-associerede tumor model.

L1-RTP niveauer korrelerer med colitis sværhedsgrad, men ikke med tumor numre

Selvom L1-RTP var signifikant induceret i den akutte fase af CAC-modellen, niveauet af induktion viste betydelige individuelle forskelle (fig. 1B). Vi derfor yderligere undersøgt relationen mellem L1-RTP med sværhedsgraden af ​​colitis. Vi fandt, at histologiske scoringer, bestående af krypt tab og celleinfiltration, var positivt korreleret med hyppigheden af ​​L1-RTP (Fig. 2A). Fordi vi observeret, at histologisk alvorlig betændelse blev karakteriseret ved massiv infiltration af granulocytter med en lang række af epitelcelle tab (fig. 2B), blev prøver klassificeret af tilstedeværelsen eller fraværet af granulocytinfiltration. En tendens til højere L1-RTP blev observeret i væv med granulocytinfiltration end dem uden granulocytter (fig. 2C). Selvom betydelig L1-RTP ikke blev registreret i tumorer, vi troede det muligt, at tumorer kan have vokset med klonal udvidelse af L1-RTP negative celler, men forekomsten af ​​L1-RTP i colon baggrund slimhinden måske har fremmet udviklingen af ​​tumorer. Derfor undersøgte vi sammenhængen mellem tumor tal og hyppigheden af ​​L1-RTP i baggrunden slimhinde; der var imidlertid ingen signifikant korrelation mellem disse to faktorer (fig. 2D). Disse resultater hævder, at L1-RTP induceres under akut colitis efter sværhedsgraden af ​​inflammation; imidlertid er L1 i colon ikke fastholdt i en aktiveret tilstand fra akut inflammation til udviklingen af ​​tyktarmstumorer efter gentagne anfald af colitis. Således ikke L1-RTP ikke synes at være direkte involveret i colon tumor initiering.

(A) colitis histologiske score og L1-RTP-niveauer i hele distale colon i den akutte fase mus viste en positiv sammenhæng. (B) Typiske histologiske billeder af colitis med neutrofil infiltration (venstre) og uden neutrofil infiltration (højre) er vist. Linjen repræsenterer 100 um. (C) L1-RTP-niveauer blev sammenlignet mellem colon væv uden /med neutrofil infiltration i colon lamina propria i de akutte og tumor faser. Data blev vist som middelværdi ± SD. Den P-værdi blev beregnet med en uparret ensidet t-test. (D) L1-RTP niveau af baggrunden colon mucosa og synlige tumor tal blev ikke korreleret.

L1-RTP blev beriget i colon LP fraktionen i den akutte fase af colitis

Dernæst ønskede vi at identificere de celletyper, hvor L1-RTP fandt sted i tyktarmen. Vi adskilt epitel- og ikke-epitelceller ved mikrodissektion af det mucosale lag af tyktarmen opnået under den akutte fase af inflammation. EC’er blev udstanset, og derefter den resterende mucosale lag blev dissekeret og underkastet DNA-ekstraktion (fig. 3A). Uventet blev L1-RTP beriget i den ikke-epitelcelle brøkdel af LP (fig. 3B). Derfor vi næste forsøgt at identificere de celletyper med L1-RTP ved isolering LPCs med collagenase fordøjelse og cellesortering ved anvendelse af flowcytometri. Som et resultat blev L1-RTP ikke påvist i CD3

+ T-celler, B220

+ B celler /plasmaceller, CD11b

+ /CD11 c

+ /F4-80

+ makrofag /dendritiske celler eller Gr1

+ granulocytter (fig. 3C). L1-RTP var høj i cellefraktion, som var negativ for disse overflademarkører. Baseret på disse resultater, mesenkymale type celler (MES) er mest sandsynligt at være ansvarlig for den øgede L1-RTP under akutte fase colitis. På den anden side, hyppigheden af ​​L1-RTP i andre celletyper forblev på et lavt niveau. Yderligere detaljeret analyse for at identificere de celletyper inducerer L1-RTP mangler at blive undersøgt.

(A) Repræsentant fotografi af en sektion efter mikrodissektion for epitelceller (EF, top), lamina propria (LP, nederst) og de resterende væv (herunder submucosa og muskellag) i colon sektion ved laser mikrodissektion. (B) L1-RTP niveauer blev analyseret i colon EC’er, LP, og submucosa plus muskellag (SM) isoleret ved mikrodissektion fra mus i den akutte colitis fase. Den relative L1-RTP værdi blev normaliseret ved hjælp af ß-actin som en intern kontrol. Hvert plot indikerer en individuel mus. P-værdier blev beregnet med en uparret ensidet t-test. (C) L1-RTP niveauer blev undersøgt i isoleret EC’er eller sorteres EpCAM negativ-gated ikke-EF fraktioner ved flowcytometri fra mus i den akutte colitis fase, som følger: T-celler (EpCAM

-CD3

+) , B-celler (EpCAM

-B220

+), makrofag /dendritiske celler (MO /DCs, EpCAM

-CD11b

+ /CD11 c

+ /F4 /80

+) , neutrofiler (EpCAM

-GR

-1

+) og andre celletyper, sandsynligvis mesenkymale celler (MES, EpCAM

-CD3

-B220

-CD11b

-CD11c

-F4 /80

-GR-1

-). Niveauer af L1-RTP fra puljede celle fraktioner opnået fra fire mus vist.

DNA methylering niveauer af Tg-L1 promotor blev omvendt korreleret med L1-RTP niveauer

Da DNA methylering af L1-promotoren vides at forhindre retrotransposition, vi undersøgte DNA methylering niveauer af den humane L1-promotoren i de transgene mus. Vi valgte forskellige kolon prøver fra naive mus og mus med akut colitis plus AOM, kryptfoci induceret af fire injektioner af AOM, EC’er, og LPCs, sammen med 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo [4,5-b ] pyridin (PhIP) -behandlet mus (en positiv kontrol for det humane L1-RTP reporter [8]), og målte DNA methylering niveauer af CpG ø forbundet med menneske L1 under anvendelse bisulfit pyrosekventering af 5’UTR region i transgenet. Som forventet DNA methylering niveauerne var generelt høj ( 80%) i alle prøver. Dog blev der observeret en statistisk signifikant negativ korrelation mellem DNA methylering niveauer og L1-RTP (Fig. 4) i disse prøver. Uventet methylering niveauer af naive L1-RTP mus ikke den højeste blandt disse prøver, hvilket tyder på forskellige niveauer af DNA-methylering af HL1 promotoren i individuelle naive mus.

DNA methylering niveauer af den transgene humane L1 promotor blev analyseret ved bisulfit pyrosekventering med primerne rettet kun den humane L1 promoter sekvens. Sammenhæng mellem niveauerne af menneskelig L1 promotor DNA methylering og L1-RTP niveauer blev analyseret ved anvendelse af hele distale colon væv med AOM + akut DSS colitis (ingen etiket), isoleret colon EC’er (EF) eller LP (LP) fraktioner fra AOM + DSS colitis, kryptfoci (ACF) induceret af AOM, hel kolon af en naiv mus, eller 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo [4,5-b] pyridin (PhIP) -behandlet mus (en positiv kontrol af human L1-RTP reporter [8]). Den P-værdi blev bestemt ved en to-tailed Pearson beregning.

Dette er den første rapport, hvor L1-RTP var direkte demonstreret

in vivo

, fremkaldt ved indgift af et kræftfremkaldende stof med induktion af colitis. I denne undersøgelse af CAC, viser vi, at L1-RTP ikke induceres i epitelceller eller hæmatopoietiske celler, men mest sandsynligt i en mesenchymal celletype. Endvidere har vi med succes målt DNA methylering niveauer af den humane L1-promotoren i denne musemodel, og fundet en negativ sammenhæng mellem L1-RTP og DNA-methylering af dets promotor. Dette resultat understøtter den antagelse, at hypomethylering af L1 er forbundet med L1-aktivering. På den anden side, har vi ikke finde L1-RTP i colon tumorer eller deres baggrund slimhinde i denne murine tyktarmskræft model, selv om der er etableret en sammenhæng mellem L1-RTP og kræft hos mennesker, som beskrevet i en nylig undersøgelse [23]. I stedet blev L1-RTP forbundet med akut inflammation. Positiv korrelation af L1-RTP niveauer med de histologiske scoringer og graden af ​​celleinfiltration antyder et potentielt bidrag fra L1-RTP til sværhedsgraden af ​​den akutte colitis. I denne forstand kan L1-RTP være involveret i den mekanisme for forværring af betændelse. Vores indledende spekulationer var, at hyppigheden af ​​L1-RTP vil blive øget i løbet af inflammation-associeret tumor udvikling. Men vores samlede resultater tyder, at L1-RTP har begrænset direkte indvirkning på tumorigenese. Mulige årsager til dette uventede resultat er som følger. For det første er vores

in vivo

systemet ikke registrere den endogene muse-L1-RTP, selv om påvisning af RTP af den menneskelige L1 transgen var klart. Niveauer af humant L1-RTP i tyktarmen var generelt lave, og denne afsløring sensitivitet ikke nødvendigvis for den endogene retrotransposition i mus, som kan påvirke frekvensen af ​​CAC. Men det faktum, at vi har registreret øget L1-RTP i akut colitis, men ikke i tumorer viser, at effekten af ​​L1-RTP på tumorigenese er mindst indirekte. For det andet, tidligere undersøgelse rapporterede, at L1 retrotransposition var til stede i præ-neoplastisk leveren, men ikke i den efterfølgende leveren adenocarcinom [24]. Forfatterne fremførte, at tumorudvikling muligvis valgt for tabet af kromosomet der indeholder det aktive L1. Ved CAC kan forekomst af kromosomal tab i tumorer også nedsætte hyppigheden af ​​L1-RTP i tumorer. Endelig i denne musemodel system er tumorekspansion begrænset til den mucosale lag af tyktarmen, og tumorer ikke fortsætte til fremskredne stadier som humane cancere, der viser maligne træk ved invasion og metastase. Derfor kan det ikke være en egnet model til undersøgelse af fremskredent stadium af maligne kræftformer. Således er vores resultater viser, at effekten af ​​L1-RTP om indledningen af ​​tyktarmskræft er begrænset i denne CAC model; dog mulige roller L1-RTP i tumorprogression og metastase forblive ubestemt. For at vurdere den potentielle inddragelse af L1-RTP i fremskredent stadium af kræft ville kræve oprettelse forskellige modeller af fremskreden kræft såsom maligne tumorcellelinjer ved at inducere mutationer i onkogener eller anti-onkogener i disse transgene mus.

For nylig, rolle mesenchymale stromale celler i forskellige inflammatoriske tilstande, herunder colitis er rapporteret. Den reparative og antiinflammatoriske egenskaber af mesenkymale stromaceller er blevet testet i en række dyremodeller og er blevet anvendt i specifikke kliniske indstillinger [25]. Især i AOM + DSS-induceret colitis-model, knoglemarv afledte mesenchymstamceller viste sig at have anti-kræftfremkaldende egenskaber gennem transformerende vækstfaktor-ß signalering [26]. Disse resultater tyder på muligheden for, at L1-RTP, som vi fandt i mesenchymale celler, kan forstyrre antiinflammatorisk cellefunktion. Yderligere undersøgelse af mesenkymale celler som et mål celletype af retrotransposition bliver interessant og kan belyse deres potentielle rolle for at påvirke colitis sværhedsgraden i den tidlige fase af CAC.

Tak

pL1-EGFP (pEF -06R) konstruere til at forberede transgene mus blev venligst stillet til rådighed fra Dr. Eline Tjetske Luning Prak, Klinisk Immunologi Laboratory på hospitalet fra University of Pennsylvania.