PLoS ONE: roller DPY30 i spredning og motilitet af mavekræft Cells

Abstrakte

Forskellige typer af histon methylering er blevet forbundet med kræft progression. Afhængigt af methylering stedet i histonproteiner, dens virkninger på transkription er forskellige. DPY30 er et fælles medlem af SÆT1 /MLL histon H3K4 methyltransferase komplekser. Men dens udtryk og roller i mavekræft er blevet dårligt karakteriseret. At afgøre, om DPY30 har patofysiologiske roller i mavekræft, blev dens udtryk og roller undersøgt. Immunhistokemi og real time PCR viste opregulering af DPY30 udtryk i nogle gastrisk cancer cellelinjer og patienternes væv. Dens knockdown af siRNA faldt proliferation, migration og invasion af gastriske kræftceller, mens dens overekspression viste de modsatte virkninger. Disse resultater indikerer, at DPY30 har kritiske roller i proliferation, migration og invasion af gastriske kræftceller, og foreslå DPY30 kan være en terapeutisk mål i mavekræft

Henvisning:. Lee YJ, Han ME, Baek SJ, Kim SY, Oh SO (2015) roller DPY30 i spredning og motilitet af Gastric Cancer Cells. PLoS ONE 10 (7): e0131863. doi: 10,1371 /journal.pone.0131863

Redaktør: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, UNITED STATES

Modtaget: Marts 3, 2015; Accepteret: 8 juni 2015; Udgivet: Juli 6, 2015

Copyright: © 2015 Lee et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af Bio Medicinsk Teknologi Development Program (# 2012M3A9C6050213, OSO) og Basic Science Research Foundation (# 2012R1A1A3010521, HME) af National Research Foundation (NRF) finansieret af den koreanske regering (MEST), og ved en bevilling fra National R 5’CCG GAC AAC AGA ACC UAU UUU UGG A (DTDT) -3 ‘, 5’GAG GCA GCU UUA AUU GCC august AUC A (DTDT) -3 « WDR5 siRNA duplex (Bioneer), 5’GUC CUU GUG AAG CUC GUC U (DTDT) -3 ‘, 5’GUC GUG AUC UCA ACA GCU U (DTDT) -3’, 5’CAG AUU CUA ACC UUC UUG U (DTDT) -3 ‘; RBBP5 siRNA duplex (Bioneer), 5’GUG UGA AAA GGG CUC AGU A (DTDT) -3 ‘, 5’CAG AUU CUC AGG AUC UUG U (DTDT) -3’, 5’GUG GUU GAG AUU AGU AGA U (DTDT) -3 ‘; ASH2L siRNA duplex (Bioneer), 5’GUA UGA ACG GGU UUU GUU A (DTDT) -3 ‘, 5’CUG AGA ACA CCU GAA AUC A (DTDT) -3’, 5’GUC UAC CUU UCA UGA CCA A (DTDT) -3 ‘; krypteret (SCR) siRNA (Thermo Scientific), 5’GAU CCG CAA AAG AGC GAA A (DTDT) -3 “.

DPY30 overekspression

DPY30 cDNA blev klonet i pLenti6.3 -V5 /DEST vektor (lentivirale destination vektor) ved anvendelse af

in vivo

rekombination-baserede Gateway kloningssystemet (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Donoren vektor (pDONR221) huser cDNA-sekvensen af ​​DPY30 blev indkøbt fra Ultimate ORF Kloner (Invitrogen), og rekombineres med tælleren-selekterbare

CCDB

genet af pLenti6.3-V5 /DEST hjælp LR CLONASE enzymblanding (Invitrogen). Den tomme vektor pLenti6.3 /V5-DEST blev anvendt som en mock kontrol. Rekombinante lentivira fremstillet i 293FT celler og anvendt til at inficere SNU216 og SNU638 celler, ifølge producentens instruktioner (ViraPower Lentiviral Expression System; Invitrogen). DPY30-overekspression stabile celler blev oprettet ved selektion med blasticidin (7,5 ug /m) (Invitrogen).

For redning analyser, vi ændrede fulgt en protokol ‘RNAi interferens hjælp Precision Lenti ORF kollektion’ (https://dharmacon.gelifesciences.com/uploadedFiles/Resources/precision-lentiorfs-rnai-rescue-appnote.pdf). Kort fortalt blev cellerne inficeret med rekombinante lentivira (pLenti6.3-V5 /DEST eller DPY30-over konstruktioner). 24 timer efter transduktion blev mediet indeholdende virus fjernet og erstattet med komplet dyrkningsmedium. Den følgende dag, blasticidin blev tilsat i en koncentration på 7,5 ug /ml. Celler blev holdt under selektion i seks dage, erstatter medium eller passage hver 2-3 dage efter behov. De udvalgte populationer af kontrolceller eller celler, der udtrykker DPY30 blev anvendt til transfektion eksperimenter under anvendelse DPY30 siRNA rettet mod det åbne læseramme (ORF) eller 3′-utranslaterede region (UTR).

Real-time PCR

Vævsprøver blev opnået fra 23 ubeslægtede koreanske primære gastrisk kræftpatienter, der undergik kirurgisk resektion ved Pusan ​​National University Hospital og Pusan ​​nationale Universitet Yangsan Hospital og forudsat skriftligt informeret samtykke. Undersøgelsen blev godkendt af Pusan ​​Rigshospitalet-Institutional Review Board (PNUH-IRB) og Pusan ​​Nationale Universitet Yangsan Hospital-Institutional Review Board (PNUYH-IRB). Total RNA fra væv og celler blev ekstraheret ved anvendelse af Trizol-reagens (Invitrogen) eller en RNeasy Mini kit (Qiagen, Valencia, CA, USA), ifølge producentens anvisninger. Kvantitativ real-time polymerasekædereaktion (real-time PCR) blev anvendt til at kontrollere DPY30 mRNA-niveauer. cDNA’er blev syntetiseret med MMLV revers transkriptase (Promega, Madison, WI, USA), dNTP, og oligo-dT-primere. Primersekvenserne anvendte var som følger: DPY30, 5’AAC GCA GGT TGC AGA AAA TCC T -3 ‘og 5’TCT GAT CCA GGT AGG CAC GAG -3 « WDR5, 5’TGT TAC TGG TGG GAA GTG GA -3 og 5’CTG TTG GGT GAC AAG CTG TT -3 « RBBP5, 5’AGT GCA CAC ATC CAT CCA GT -3 ‘og 5’TCA CAG TCG FTT GAA AGA AC -3 « ASH2L, 5’TAC AAG AGC TGC ACG GTT TC -3 ‘og 5’CCA GCC CAT GTC ACT CAT AG -3 « GAPDH, 5’TGG GCC AGG AAA TCA CAT CC 3 ‘og 5′- CTC AGC CCG AGT GGA AAT GG-3’. Real-time PCR blev udført under anvendelse af en LightCycler ™ 96 realtids-PCR-system (Roche, Nutley, NJ) og FastStart Essential DNA Green Master (Roche) ifølge producentens instruktioner. GAPDH blev anvendt som en intern kontrol.

Immunhistokemi

Immunohistokemisk farvning med kanin-anti-humant DPY30 polyklonalt antistof (Sigma-Aldrich) blev udført på en gastrisk cancer tissue array (n = 59) købt fra SUPER BIO CHIPS (Seoul) eller på 4-um sektioner af paraffinindlejrede prøver. Kort fortalt, efter afparaffinering og rehydrering blev objektglassene behandlet med 0,3% hydrogenperoxid i 30 min for at inhibere endogen peroxidaseaktivitet, og blokeret med 10% normalt æsel serum (NDS) og 1% BSA i 1 × phosphatbufret saltvand (PBS). Objektglas blev derefter inkuberet natten over ved 4 ° C i blokeringspuffer indeholdende et kanin-anti-humant DPY30 primære antistof (1:80, Sigma-Aldrich). Sekundært antistof (HRP-konjugeret) binding blev udført ved en fortynding på 1: 200 i blokeringsbuffer i 2 timer ved stuetemperatur. Detektion blev udført med HRP (Vector Laboratories), og slides blev modfarvet ved at behandle dem i 1 minut med hæmatoxylin farvning buffer (Sigma-Aldrich).

Cell proliferation assay

En dag efter transfektion af celler med siRNA blev mediet erstattet med 1% FBS-medium, og fire dage senere blev 10 pi Ez-Cytox (ITSBIO, Seoul) tilsat og inkuberet i 0,5 til 2 timer. For at kontrollere virkningen af ​​DPY30 overekspression på celleproliferation blev celler podet i 10% FBS-medium, og efter tre dages dyrkning, blev 10 pi Ez-Cytox (ITSBIO) tilsat og inkuberet i 0,5 til 2 timer. Cell levedygtighed blev bestemt ved at måle absorbansen ved 450 nm ved hjælp VICTOR3 flere læsere (PerkinElmer, MA, USA).

Boyden kammer assay

En modificeret Boyden transwell kammer (Neuro Probe, Gaithersburg, MD, USA) blev anvendt. Den nederste kammer blev fyldt med 50 pi RPMI indeholdende 10% FBS. For at undersøge virkningerne af DPY30 kendte-down, SNU1 og SNU16 (ikke-adhærente celler) blev transfekteret med ORF-targeting siRNA. En dag efter transfektion blev cellerne vasket, suspenderet med en tæthed på 5 x 10

5 celler /ml i 50 pi RPMI suppleret med 0,5% FBS, og podet ind i det øvre kammer. For at fjerne virkningerne af spredning, blev mitomycin C (0,01 mg /ml, Sigma-Aldrich) tilsættes. Cellerne blev derefter inkuberet i 24 timer ved 37 ° C med 5% CO2. Antallet af migrerede celler blev vurderet ved at tælle celler i bundbrønde. For at undersøge virkningerne af DPY30 overekspression, de stabile celler (adhærente celler; SNU216 og SNU638) blev anvendt. Celler (mock og DPY30-over) blev trypsinbehandlet og podet ved en densitet på 1 x 10

5 celler /ml. For at fjerne virkningerne af spredning, blev mitomycin C tilsat. Cellerne fik lov til at migrere i fire timer blev membraner fikseret og farvet under anvendelse af Diff-quik opløsning (Sysmex, Kobe, Japan) og vasket med destilleret vand. Celleantal i 10 tilfældigt valgte felter blev talt under anvendelse af et lysmikroskop. Eksperimenter blev udført i tre eksemplarer.

Matrigel invasion assay

De invasive evner kræftceller blev vurderet ved hjælp af 8-um porøse BioCoat Matrigel kammer indsatser (BD Bioscience, San Jose, CA, USA). En dag efter transfektion med SCR eller DPY30 siRNA blev celler trypsinbehandlet og suspenderet ved en densitet på 5 x 10

4 celler /ml i 500 pi RPMI suppleret med 0,5% FBS og mitomycin C (0,01 pg /ml, Sigma -Aldrich). Celler blev derefter tilsat til kammer skær og anbringes i brønde fyldt med 0,7 ml medium suppleret med 10% FBS som kemoattraktant. Efter inkubation i 24 eller 48 timer blev ikke-invaderende celler på toppen af ​​membranen fjernes ved skrabning, og invasive celler i bunden af ​​membranen blev fikseret og farvet med Diff-quik opløsning (Sysmex). Celleantal i 10 tilfældigt valgte felter blev talt under anvendelse af et lysmikroskop. Eksperimenter blev udført tre gange og mindst 5 felter blev talt for hvert forsøg.

Statistisk analyse

Resultater er udtrykt som middelværdi ± standardafvigelser (SDS) af tre uafhængige forsøg. De betydninger af forskelle blev bestemt ved hjælp af Students

t

-test for uparrede observationer.

P

værdier af 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

Angivelse af DPY30 i gastrisk kræft væv

For at undersøge DPY30 udtryk i human gastrisk cancer, vi udførte immunhistokemi ved hjælp af en gastrisk kræftvæv vifte eller arkivering paraffin vævssnit. I normale gastrisk væv, DPY30 udtryk var svært at opdage (Fig 1A), men i kræft væv DPY30 protein blev almindeligt overudtrykt (Fig 1B-1D). Især blev DPY30 overudtrykt i invaderende gastriske cancerceller (fig 1B-1D). Desuden vi bestemt mRNA-niveauer af DPY30 i en udødeliggjort normal gastrisk epitelial cellelinje (HFE145) og seks mavekræft-afledte cellelinier (SNU1, SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 og NCI-N87) ved hjælp af real-time PCR. MRNA niveau af DPY30 var betydeligt højere (fold forandring 5) i SNU1 og SNU16 end i HFE145 celler, mens ekspressionsniveauet af DPY30 i SNU216, SNU620 og SNU638 var lig dem i HFE145 celler og var lavere (fold forandring 0.01 (Students

t

test, versus HFE145). (F) Udtrykket af DPY30 i gastrisk cancer væv blev undersøgt ved real-time PCR ved hjælp af specifikke primere for DPY30. GAPDH blev anvendt til at normalisere data. Værdier er middel ± SD’er af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *,

s

0,01; **,

s

0,05 (Students

t

test, versus normal).

roller DPY30 i udbredelsen af ​​gastriske kræftceller

For at bestemme mulige roller DPY30 i gastriske kræftceller, vi først bankede-down DPY30 hjælp af ORF målretning DPY30 siRNA og overvåges sin knockdown effektivitet ved real-time PCR (fig 2A). ORF-targeting DPY30 siRNA (100 nM) nedsatte mRNA-niveauet af DPY30 i HFE145, SNU1, SNU16, SNU216, og SNU638 celler sammenlignet med scrambled siRNA (SCR) med 78%, 89%, 79%, 76%, og 88%, hhv. Fem dage efter transfektion af celler med SCR eller ORF-targeting siRNA, udførte vi proliferationsassays. Knockdown af DPY30 hæmmede de proliferationer af HFE145, SNU1 og SNU16 i forhold til SCR med 31%, 69% og 71%, mens knockdown ikke påvirkede de proliferationer af SNU216 og SNU638 (Fig 2B), hvor udtrykket niveau DPY30 var lav (figur 1E). Dernæst vi producerede DPY30-overekspression cellelinier (DPY30-over) ved hjælp HFE145, SNU216 og SNU638 celler, og derefter sammenlignet DPY30 mRNA-niveauer i mock celler (kontrol) og DPY30-over celler. Real-time PCR-resultater viste, at ekspressionsniveauet af DPY30 var 4,2, 3,5 og 3,2 gange højere i DPY30-overekspression HFE145, SNU216 og SNU638 celler end mock celler, (fig 2A). DPY30 overekspression forbedret de proliferationer af HFE145, SNU216 og SNU638 celler versus mock celler med 1,9, 2,2 og 1,6 gange, respektivt (figur 2B).

(A) Real-time PCR blev anvendt til bestemmelse af effektiviteten af ​​knockdown eller overekspression af DPY30 i HFE145, SNU1, SNU16, SNU216 og SNU638 celler. Knockdown effektivitet blev bestemt efter transfektion af celler med 100 nM DPY30 siRNA rettet mod ORF eller krypteret siRNA (SCR). Overekspression effektivitet blev bestemt i DPY30-overudtrykkende og mock celler. (B) Effekt af DPY30 knockdown eller overekspression på celleproliferation. En celleviabilitetstest blev anvendt til måling af celleproliferation i nærvær af 1% FBS. For DPY30 knockdown eksperimenter blev cellelevedygtighedsassays udført fem dage efter transfektion 100 nM DPY30 siRNA eller SCR. Efter tre dages dyrkning blev cellelevedygtighedsassays udført på DPY30-over og mock celler. (C) Expression analyse af DPY30 efter kendte-down eller overekspression af siRNAs eller DPY30 ORF hhv. ORF-targeting eller 3′-UTR-targeting siRNA blev anvendt til knock-down. (D) Eksogene DPY30-ORF reddet hæmning af spredning af 3′-UTR målretning DPY30 siRNA. Mock eller DPY30-overekspression celler blev transduceret med to slags DPY30 siRNA (3′-UTR-målretning eller ORF-målretning), blev derefter celleviabilitetstest undersøgt. Værdier er middel ± SD’er af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *,

s

0.01 (Students

t

test, versus SCR eller Mock).

For at bekræfte specificiteten af ​​DPY30 siRNA, vi udførte for redning eksperimenter. Til redning eksperimenter, vi brugte en DPY30 siRNA målrettet 3′-UTR stedet for ORF fordi ORF-targeting siRNA også kan nedbryde den exogene DPY30 ORF DNA vi indført. At overudtrykke DPY30, vi transducerede SNU1 og SNU16 med viruspartikler, pLenti6.3-V5 /DEST (kontrol) eller DPY30-ORF-over konstruktioner. DPY30-overekspression SNU1 eller SNU16 celler viste højere udtryk for DPY30 2,1 eller 2,5 gange højere end mock celler, henholdsvis (figur 2C). Den ORF-targeting siRNA førte til nedregulering af DPY30 ekspressionsniveauerne med mere end 75% i mock samt DPY30-overekspression celler. Den 3′-UTR-targeting siRNA down-regulerede DPY30 udtryk ved mere end 85% i mock celler, hvorimod i de DPY30-overekspression celler, det faldt DPY30 udtryk til et niveau, der svarer til SCR siRNA-transficerede celler ( fig 2C). Dette resultat indikerer, at eksogene DPY30-ORF DNA er resistent over for 3′-UTR målretning siRNA og udtrykkes på samme niveau som i endogene DPY30 mRNA. ORF-targeting siRNA inhiberede proliferation af celler uanset den exogene DPY30 ekspression (Fig 2D). Proliferation blev også inhiberet af 3’UTR-targeting siRNA i mock celler, men det blev delvist inhiberet i DPY30-overudtrykkende celler. I DPY30-overudtrykkende celler, ORF-targeting siRNA faldt spredning af SNU1 og SNU16 i forhold til SCR siRNA med 74% og 66%, henholdsvis imidlertid 3′-UTR-målretning siRNA faldt med 20% og 8% . Dette resultat indikerer, at exogen DPY30 redder inhibering af proliferation induceret af 3′-UTR-targeting siRNA, og fænotyper forårsaget af DPY30 specifikke siRNA er ikke ikke-tilsigtede virkninger.

Fordi DPY30 er en komponent af Wards vi undersøgte udtryk og roller andre komponenter i afdelinger. Real-time PCR viste, at mRNA-niveauer af WDR5 og RBBP5 i SNU1, SNU16, SNU216 og SNU638 svarede til dem af HFE145. Imidlertid er mRNA-niveauet af ASH2L var signifikant højere (fold ændring 3) i SNU1 og SNU16 end i HFE145 celler (Fig 3A) som DPY30 i fig 1E. For at undersøge, om WRAD komponenter er forbundet med proliferation af gastriske cancerceller, vi knockdowned hver WRAD komponent ved hjælp af deres specifikke siRNA og overvåget Knockdown effektivitet ved real-time PCR (Fig 3B). Hver siRNA (100 nM) faldt mRNA-niveauerne i SNU1 og SNU16 celler sammenlignet med SCR med 65% -75%. Knockdown af WDR5 og RBBP5 hæmmede udbredelsen af ​​SNU1 og SNU16 celler i forhold til SCR med 30-48% (Fig 3C). Imidlertid ASH2L inhiberede proliferationen af ​​SNU1 og SNU16, hvor ekspressionsniveauet af ASH2L var høj, sammenlignet med SCR med 85% og 75% henholdsvis.

(A) mRNA niveauer af WDR5, RBBP5 og ASH2L i HFE145, SNU1, SNU16, SNU216 og SNU638 celler blev bestemt ved real-time PCR, ved hjælp af specifikke primere for WDR5, RBBP5 og ASH2L. GAPDH blev anvendt til at normalisere data. (B) Knockdown effektivitet blev bestemt ved real-time PCR. Knockdown effektivitet blev bestemt efter transfektion af celler med 100 nM WDR5, RBBP5 og ASH2L siRNA eller krypteret (SCR). (C) Virkninger af WDR5, RBBP5 og ASH2L knockdown på celleproliferation. En celleviabilitetstest blev anvendt til måling af celleproliferation i nærvær af 1% FBS. 24 timer efter transduktion, blev cellelevedygtighedsassays udført. Værdier er middel ± SD’er af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *,

s

0.01 (Students

t

test, versus HFE145 (A) eller SCR (BC)).

roller DPY30 i migration og invasion af gastriske kræftceller

Vi næste undersøgt, om DPY30 regulerer migration af gastriske kræftceller. Knockdown af DPY30 reducerede FBS-inducerede vandringer SNU1 og SNU16 celler versus SCR med 35% og 45%, henholdsvis (figur 4). I modsætning hertil DPY30 overekspression øgede FBS-inducerede vandringer SNU216 og SNU638 celler versus mock celler med 2,5 og 2,2 gange henholdsvis (figur 4). Disse resultater førte os til at undersøge den rolle, DPY30 i invasionen af ​​gastriske cancerceller. I en Matrigel invasion assay DPY30 siRNA hæmmede FBS-inducerede invasioner af SNU1 og SNU16 celler versus SCR siRNA med 65% og 84%, henholdsvis (fig 5A og 5C). Desuden DPY30 overekspression øgede FBS-inducerede invasioner af SNU216 og SNU638 celler versus mock celler med 3,2 og 2,9 gange henholdsvis (Fig 5B og 5C). Disse resultater viser, DPY30 fremmer migration og invasion af gastriske cancerceller.

(A) A Boyden kammer assay blev anvendt til måling af migration af gastriske cancerceller. 10% FBS blev anvendt til at inducere migrationen, og mitomycin C (0,01 ug /ml) blev tilsat for at fjerne virkningerne af proliferation. To dage efter transfektion med 100 nM ORF-targeting DPY30 siRNA eller krypteret (SCR) siRNA blev migration assays (Boyden kammer assay) udført. Migration assays blev udført på DPY30-over og mock-celler efter dyrkning i en dag. Bar = 100 um. (B) migrerede celler blev talt, og resultaterne er præsenteret som et søjlediagram. Værdier er middel ± SD’er af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *,

s

0,01 (Students

t

test, versus SCR eller Mock).

(A-B) En Matrigel invasion assay blev anvendt til måling mavekræft celleinvasion. Præsenteret resultaterne er repræsentative for de opnåede resultater. 10% FBS blev anvendt til at inducere invasion, og mitomycin C (0,01 ug /ml) blev tilsat for at fjerne virkningerne af proliferation. Invasion assays blev udført to dage efter transfektion med 100 nM ORF-targeting DPY30 eller SCR siRNA. Efter dyrkning i en dag, blev invasion assay udført for DPY30-over og mock celler. Bar = 100 um. (C) Invasive celler blev talt og resultaterne vises som et søjlediagram. Værdier er middel ± SD’er af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *,

s

0.01 (Students

t

test, versus SCR eller Mock).

Diskussion

Roller DPY30 i cancer biologi er blevet dårligt karakteriseret selv om dens roller i differentiering af ESC og hæmatopoietiske progenitorceller var blevet rapporteret [10, 12]. I den foreliggende undersøgelse viste vi hidtil ukendte roller DPY30 i gastrisk cancer. DPY30 amplificeres (data ikke vist) og højt udtrykt (Fig 1) i nogle gastrisk cancer væv. Desuden dens knockdown eller overekspression reguleret proliferation, migration og invasion af gastriske cancerceller. Ændringer i ekspressionen, kromosomale translokationer og somatiske mutationer af generne, der koder underenheder af SÆT1 /MLL-komplekser er blevet rapporteret i mange cancertyper. Disse resultater understøtter de kritiske roller medlemmer af SÆT1 /MLL kompleks i kræft progression.

blev observeret opregulering af DPY30 udtryk kun i SNU1 og SNU16 gastriske kræftceller blandt seks gastriske kræftceller, vi har undersøgt. Men dens opregulering blev observeret i mere end halvdelen af ​​mavekræft væv vi har undersøgt (fig 1). Det er svært at forklare denne uoverensstemmelse. Det er imidlertid indlysende, at antallet af gastriske cancervæv vi har undersøgt, er ikke nok. Så er en omfattende udtryk undersøgelse med meget mere antallet af væv forpligtet til at vurdere den kliniske værdi i fremtiden.

Roller SÆT1 /MLL H3K4 methyltransferase kompleks i kræft biologi er kompleks. Regulatory underenheder af SÆT1 /MLL komplekser, herunder WRAD, indeholder både potente oncoproteiner og tumorsuppressorer. For eksempel MEN1 genet koder Menin, en integreret underenhed af MLL1 og MLL2, og er muteret i patienter med Multipel endokrin neoplasi type 1 (MEN1) [18, 19]. Desuden Menin regulerer p18 (CDKN2C) og p27 (CDKN1B) ved at rekruttere MLL1 komplekse [20]. I modsætning hertil WDR5, en komponent af WRAD kompleks, er blevet rapporteret at virke som et onkoprotein i prostatacancer, hvori det overudtrykkes og afgørende for androgen-induceret proliferation af tumorceller [21]. ASH2L, som er en anden komponent af WRAD kompleks og kan interagere med oncoproteinet MYC [22], er afgørende for MYC /Ha-RAS-afhængig transformation af rotteembryofibroblaster. Desuden er det overudtrykkes i mange former for tumorer og er kritisk for proliferation af tumorceller [23]. I den foreliggende undersøgelse, viste vi roller DPY30 som oncoprotein i mavekræft.

Hvad er molekylære mekanismer bag roller DPY30 gastrisk kræft? Selvom vi ikke afsløre, kan foreslås flere hypoteser baseret på tidligere undersøgelser. En af de mulige hypoteser er, at DPY30 overekspression fører til overexpressions af onkogener via øget H3K4MT aktivitet. Udtømning af DPY30 eller ASH2L fører til et fald i H3K4me3, mens WDR5 og RBBP5 er afgørende for alle tre typer af H3K4 (H3K4me1, H3K4me2, og H3K4me3) [6, 8, 10, 11]. Desuden kan overekspressionen af ​​DPY30 alene forøge H3K4MT aktivitet [10]. Da H3K4me2 /3 er en aktiv mærke for transkription [3, 24], øget H3K4MT kan direkte opregulere mange gener, såsom, onkogener eller alternativt indirekte nedregulerer tumorsuppressorer. En tidligere rapport støtter denne hypotese er, at ASH2L, en kritisk komponent i SÆT1 /MLL kompleks, er blevet vist at spille som onkoprotein [25, 26]. En anden tidligere rapport er, at DPY30 direkte aktiverer udtryk for ID-proteiner via H3K4 methylering [13, 27]. ID proteiner hæmmede aktiviteter ETS1 og ETS2 som kan inducere en af ​​tumorsuppressorgen, p16. I den foreliggende undersøgelse viste vi, at komponenter af WRAD (WDR5, RBBP5 og ASH2L) kan inhibere proliferation af gastriske cancerceller (fig 3), hvilket antyder, at DPY30 handling gennem øget H3K4MT aktivitet. Flere undersøgelser er at afsløre mekanismerne bag roller DPY30 i mavens kræftceller.