PLoS ONE: Kræft-Testikel Antigen Expression i serøs endometriecancer med Tab af X-kromosom Inactivation

Abstrakt

Baggrund

Kræft-testis-antigener (CTA’er) er potentielle mål for kræft immunterapi. Mange CTA’er er placeret på X-kromosomet og er epigenetisk reguleret. Tab af X-kromosomet inaktivering (XCI) observeres i bryst- og ovariecancer og menes at være relateret til overekspressionen af ​​CTA’er. Vi undersøgte sammenhængen mellem ekspressionen af ​​CTA’er og tab af XCI i endometriecancer.

Materialer og metoder

Vi brugte data genereret af The Cancer Genome Atlas Genome Data Analysis Centers og data for

Xist

knockout mus til rådighed på Gene Expression Omnibus.

Resultater

status XCI blev estimeret ved methylering status, og sletning eller gevinst på X-kromosomet. De livmoderkræft blev klassificeret i følgende tre grupper: bevarede inaktiverede X-kromosom (Xi) (n = 281), delvis reaktivering af Xi (n = 52), og to kopier af aktiv X (n = 38). Tab af XCI var mere almindelig i serøs adenokarcinom. Ekspression af CTA’er steg i endometriecancer med tab af XCI, som blev ledsaget af global hypometylering. Ekspression af CTA’er steg ikke i

Xist

knockout-mus.

Konklusioner

Tab af XCI er almindelig i serøs adenokarcinom. Global hypometylering, og ikke tab af XCI, er den vigtigste mekanisme af overekspression af CTA’er

Henvisning:. Kang J, Lee HJ, juni SY, Park ES, Maeng Ls (2015) Kræft-Testikel Antigen Expression i serøs endometriecancer med Tab af X kromosom inaktivering. PLoS ONE 10 (9): e0137476. doi: 10,1371 /journal.pone.0137476

Redaktør: Riccardo Dolcetti, IRCCS National Cancer Institute, ITALIEN

Modtaget: May 10, 2015; Accepteret: August 17, 2015; Udgivet: 11 September, 2015

Copyright: © 2015 Kang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Relevante data er findes på Figshare:. https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1518535

finansiering:. forfatterne har ingen støtte eller finansiering til at rapportere

Konkurrerende interesser: Den forfattere har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

Kræft er immunogen. Cancercellerne aberrerende udtrykker antigene proteiner, der normalt ikke udtrykkes i normale celler. Disse antigene proteiner inducerer cancer immunitet. Cancerimmunterapi øger cancer immunitet [1, 2]. Cancer-testis-antigener (CTA’er) er potentielle mål for cancerimmunterapi [3, 4]. CTA’er er antigene, fordi de ikke udtrykkes i normale celler, bortset fra i kimceller i testikler [5-10]. Mange CTA’er er placeret på X-kromosomet og er epigenetisk reguleret [11]. Global hypometylering af kræftceller forårsager afvigende ekspression af CTA’er i cancerceller [12, 13].

Female har to kopier af X-kromosomer, mens mænd har en. For at kompensere X-kromosom dosering, er en af ​​de to kopier af X-kromosomer tilfældigt inaktiveret under en proces kaldet X-kromosom inaktivering (XCI) i kvindelig. XCI initieres og vedligeholdes af X-inaktiv specifik udskrift (XIST), en 17 kb kodende RNA.

XIST

udskrift frakker de inaktive X-kromosomer (Xi). Tabet af XCI forekommer i æggestokkene og brystkræft [14-17]. Det menes, at dette tab øger X-kromosom dosering og ekspression af onkogener placeret på X-kromosomet [18]. I en tidligere undersøgelse, viste vi, at tabet af XCI forøget ekspression af CTA’er placeret på X-kromosomet (XCTAs), herunder X-antigen familiemedlem 3 (

XAGE3

) og melanom antigen familie A4 (

MAGEA4

). Dette resultat antyder, at ekspression af CTA’er reguleres af ikke eneste globale hypometylering men også ved tab af XCI [15].

Tab af XCI forekommer i high-grade ovarie serøs adenocarcinom og basal-lignende brystcancer [19] . Serøs adenocarcinom af endometrium deler mange clinicopathologic funktioner og genomiske ombygninger med æggestokkene og basale-lignende brystkræft. Endometriecancer er klassificeret i endometrioide adenocarcinom og serøs adenocarcinom [20]. Endometrioide adenocarcinom er forbundet med østrogen overskud og endometriepolyp. Serøs adenocarcinom opstår hos ældre patienter og ofte forbundet med TP53 mutation og høj grad af kromosom kopi nummer variationer (CNV) [19].

I denne undersøgelse har vi fastslået, om tab af XCI forekommer i endometriecancer af serøs type og hvorvidt dette tab resulterer i øget XCTA udtryk.

Materialer og metoder

Den Cancer Genome Atlas (TCGA) data

Vi brugte open source data genereret af TCGA genom dataanalyse centre [19]. Data om methylering 450K blev hentet fra TCGA Data Portal (https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/tcgaHome2.jsp). Data om CNV og RNA udtryk blev hentet fra de overordnede genom dataanalyse center brandslange hjemmeside (https://gdac.broadinstitute.org/). Data om RNA udtryk for

XIST

og kliniske data blev indsamlet ved hjælp af CGDS-R-pakken, som er en pakke af R for at forespørge Cancer Genomics Data Server og er vært ved den Computational Biology Center på Memorial-Sloan- Kettering Cancer center [21]. De beta-værdier for DNA methylering status blev estimeret ved hjælp af Illumina Infinium Menneskelig Methylering 450K arrays. Beta blev beregnet som et skøn over forholdet mellem intensiteter mellem methylerede og umethylerede alleler. Segmenteret kopiantal blev estimeret ved log2 af forholdet mellem den samlede intensitet af tumoren og det normale væv ved hjælp af Affymetrix SNP6.0. Normaliseret RNA-Seq ved forventning maksimering (RSEM) blev anvendt som et estimat for mRNA udtryk [22]. Detaljerede oplysninger om patienter og eksperiment metoder er blevet beskrevet andetsteds [19].

Gene Expression Omnibus data

Vi analyserede genekspression profildata af

Xist

slettet blodceller, herunder B-lymfoid, myeloid, erythroid celler og hæmatopoietiske stamceller, af mus under anvendelse af Cre /LoxP system. Dataene blev hentet fra Gene Expression Omnibus hjemmeside (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/GDSbrowser?acc=GDS4755) [18]. De udtryk data blev genereret fra Affymetrix muse Gene 1.0ST arrays (Affimetrix). Detaljerede eksperimentelle metoder er blevet beskrevet andetsteds [18].

Etik erklæring

Tissue bruges af TCGA blev opsamlet efter at have indhentet godkendelse fra lokale institutionelle anmeldelse bestyrelser (https://cancergenome.nih.gov/abouttcga /politikker /informeret samtykke). Forfatterne til dyr undersøgelse for vævsspecifik

Xist

sletning havde opnået godkendelse fra Institutional Animal Care og brug Udvalg [18].

TCGA molekylær undertype

TCGA forskningsnetværk klassificeret endometriecancer i fire TCGA molekylære undertyper, herunder

POLE

(ultramutated), MSI (hypermutated), kopi-nummer lav (endometrioide) og kopiere-nummer høj (serøs-lignende) [19].

POLE

undertype var endometriecancer med høj mutation frekvens og har

POLE

exonuclease mutationer. MSI subtype var endometriecancer med høj mutationsfrekvens og mikrosatellit instabilitet (MSI) høj. Kopital lav subtype var endometriecancer med lav grad af CNV og endometrioide histologisk type. Copy-nummer høj undertype var endometriecancer med høj grad af CNV og serøs histologisk type.

Clustering analyse af X-kromosom methylering

Vi valgte 5441 methylering array-sonder, der er målrettet CpG øer på X-kromosomet . CpG øer er store websteder af methylering løbet XCI. Beta værdier af udvalgte prober blev analyseret under anvendelse hierarkisk clustering med fuldstændig agglomerering. Den klyngedannelse blev udført separat for hvert serøs og endometrie histologisk type. Angivelse af

XIST

og tab af p eller q arm af X-kromosomet blev vurderet til at vurdere status af X-kromosom inaktivering.

Angivelse af CTA’er

Vi valgte 48 XCTAs og otte CTA’er placeret på somatiske kromosomer til analyse af TCGA data. Mean RNA udtryk for den valgte CTA’er blev sammenlignet i henhold til TCGA molekylær undertype, histologisk type, og status for XCI med

t

-test eller variansanalyse (ANOVA) test. Vi valgte 16 XCTAs (20 array-prober) til analyse af de

Xist

knockout-mus. Mean RNA-ekspression blev sammenlignet ved papirstrimmelskriver analyse. Statistisk analyse blev ikke udført på grund af den lille stikprøve. Navnene på udvalgte CTA’er var opført (S1 Text).

Methylering af somatisk kromosom for at vurdere den globale hypometylering

Vi valgte 239.905 methylering array-sonder, der er målrettet CpG øer på somatiske kromosomer. Mean beta værdier af udvalgte sonder blev sammenlignet i henhold til TCGA molekylær undertype, histologisk type, og status for XCI med

t

-test eller ANOVA test.

Kliniske data og overlevelse

Patient karakteristika og tumor egenskaber blev sammenlignet i overensstemmelse med status XCI. Signifikans blev estimeret under anvendelse af Fishers eksakte test for kategoriske variabler og ANOVA-test for kontinuerlige variabler. Univariate overlevelse analyse blev udført under anvendelse af log-rank test. Multivariat overlevelse analyse blev udført ved hjælp af Cox regression tests for at justere for klinisk fase.

Resultater

Gruppering af X-kromosomet methylering

Vi omfattede to histologiske typer (endometrioide og serøse) i denne undersøgelse. Vi klassificeret 276 endometrioide og 95 serøs endometrie karcinom i seks klynger efter X-kromosom methylering (Fig 1A). Status for XCI af klynger blev karakteriseret med

XIST

udtryk og arm-niveau X-kromosom sletning. Data om

XIST

udtryk var ikke tilgængelig i 253 (68,2%) tilfælde. Klynger A til C var endometrioide adenokarcinomer og Klynger D til F var serøs adenokarcinom. Klynger A og D viste hypermethylering af det meste af loci inkluderet på X-kromosomet (Fig 1A) og høj

XIST

udtryk (figur 1C og 1D). Disse resultater antyder, at Klynger A og D havde både aktive (Xa) og Xi. Klynger B og F viste hypometylering højst loci på X-kromosomet (fig 1A) og lav

XIST

ekspression (Fig 1C og 1D). Både hypometylering af hele X-kromosom og lav

XIST

udtryk angivne fravær af Xi. Fraværet af Xi kunne være resultatet af enten en Xa med den ledsagende deletion af en hel Xi, eller resultatet af flere kopier af Xa uden Xi grundet en adskillelse fejl. Fordi sletning af en hel Xi ikke øgede dosis af X-kromosom, vi afgøres, om fraværet af Xi blev ledsaget med sletning af hele Xi eller ej. Hele X-kromosom sletning blev ikke observeret i Klynger B eller F (Fig 1B). Disse resultater antydede, at Klynger B og F havde to eksemplarer af Xa. Klynger C og E viste høj

XIST

udtryk (figur 1C og 1D), ligesom Klynger A og D, men blev kun delvist hypomethylated (Fig 1A). Den høje

XIST

udtryk foreslog tilstedeværelsen af ​​Xi. Den delvise hypometylering foreslog, at Xi af klynger C og E delvist blev genaktiveret. Selektiv arm-niveau hypometylering af X-kromosom blev observeret ved p arm (de sidste tre tilfælde af Cluster D i figur 1A) og q arm (de sidste fem tilfælde af Cluster E og den tredje sidste tilfælde af Cluster F i figur 1A). Disse selektive arm-niveau hypometylering svarede til arm-niveau sletninger af X-kromosomet (Fig 1B). Den selektive arm-niveau hypometylering foreslået, at deletioner opstod i Xi, men ikke i Xa. De livmoderkræft blev klassificeret i følgende tre grupper: 1) “bevaret Xi” i tilfælde af Klynger A og D og i tilfælde med q arm tab af Xi i Klynger E og F; 2) “delvis reaktivering af Xi” (Xa

+) for Klynger C og E; og 3) “to kopier af Xa” (to Xa) for Klynger B og F.

A) Gruppering af 371 endometrie karcinom med beta værdi methylering på CpG øer på X-kromosomet. Clustering blev udført separat for serøse og endometrioide adenokarcinomer. Kolonne viser methylering array-sonder arrangeret af X-kromosom placering. Rækken viser TCGA tilfælde bestilt af klynge gruppe. Den venstre side-kolonner angiver den histologiske type, klynge, TCGA undertype og

XIST

udtryk. De fleste tilfælde af serøs histologisk type er kopi-nummer høj (serøs-lignende) TCGA undertype. Tilfælde af endometrioide histologiske type er blandet med fire TCGA undertyper. B) farver repræsenterer segmental kopital variation af X-kromosomet for endometrisk carcinoma. Rækken viser TCGA tilfælde arrangeret til at svare til methylering klynger. C, D) Density linjer viser fordelingen af ​​

XIST

udtryk niveau i hver klynge. Klynger er kendetegnet ved forskellige farver. Omfanget af X-aksen er log forvandlet RSEM. A, B) Arrow heads indikerer arm-niveau sletning af inaktive X-kromosom.

Angivelse af CTA’er og tab af XCI

Af de 371 sager, 110 sager (29,6%) var ekskluderet i analysen af ​​ekspressionen af ​​CTA’er, på grund af fraværet af udtryk data. Ekspressionsniveauet blev varieret blandt CTA’er (Fig 2A og figur 3A). De fleste CTA’er sjældent udtrykt og den afvigende ekspression blev beriget i Xa

+ og Two Xa. Men nogle CTA’er var stærkt udtrykt i de fleste tilfælde og over-udtrykt i Xa

+ og Two Xa; disse CTA’er blev maged gen familie,

melanom Antigen Family H

, 1 (

MAGEH1

),

acrosin Bindende Protein

(

ACRBP

) og

CCCTC-Binding Factor (Zink Finger Protein) -lignende

(

CTCFL)

.

A) farven af ​​cellerne repræsenterer RNA udtryk niveau (log transformeret RSEM). Kolonnen viser kræft-testis-antigener placeret på X-kromosomet. Rækken viser sager bestilt af klynge gruppe. Den venstre side-kolonne angiver gruppen af ​​methylering klyngedannelse. B-D) Kassegrafer repræsenterer fordelingen af ​​middelværdien RNA ekspression af cancer-testis-antigener placeret på X-kromosomet (log transformeret RSEM). Toppen og bunden af ​​kassen er den 75. og 25. percentil henholdsvis og linjen i boksen er medianen. Ekspression af cancer-testis-antigener sammenlignes efter status af X-kromosom inaktivering i endometrioide histologisk delmængde (C) og serøs histologisk delmængde (D). NS: ikke signifikant, *:

P

0,05, **:

P

0,01, ***

P

0.001

A) Farven af ​​cellerne repræsenterer RNA udtryk niveau (log transformeret RSEM). Søjlen viser cancer-testis-antigener lokaliseret ved somatisk kromosom. Rækken viser sager bestilt af klynge gruppe. Den venstre side-kolonne angiver gruppen af ​​methylering klyngedannelse. B-D) Box plots repræsenterer fordelingen af ​​gennemsnitlige RNA udtryk for kræft-testis-antigener placeret på somatiske kromosomer (log transformeret RSEM). Toppen og bunden af ​​kassen er den 75. og 25. percentil henholdsvis og linjen i boksen er medianen. D) Ekspression af kræft-testis-antigener placeret på somatisk kromosom sammenlignes efter status X-kromosom inaktivering i endometrioide histologiske delmængde (C) og serøs histologisk delmængde (D). E-G) Box plots repræsenterer fordelingen af ​​gennemsnitlige methylering af CpG øer i somatiske kromosomer (beta værdi). Toppen og bunden af ​​kassen er den 75. og 25. percentil henholdsvis og linjen i boksen er medianen. G) Gennemsnitlig methylering af CpG øer i somatiske kromosomer (beta værdi) sammenlignes i henhold til status for X-kromosom inaktivering i endometrioide histologiske delmængde (C) og serøs histologisk delmængde (D). NS: ikke signifikant, *:

P

0,05, **:

P

0,01, ***

P

0.001

XCTAs blev mere stærkt udtrykt i kopi nummer høj (serøs-lignende) TCGA molekylær undertype og serøs histologisk type end andre TCGA molekylær undertype og endometrioide histologisk type. Xa

+ og to Xa viste højere ekspression af XCTAs end konserveret Xi i både endometrioide og serøse histologiske typer. Men den

P Drømmeholdet værdi var ikke signifikant mellem Xa

+ og bevaret Xi i serøs histologisk type (figur 2).

Angivelse af CTA’er beliggende på somatiske kromosomer var ens med den, XCTAs . Det var højere i kopi nummer høj (serøs-lignende) TCGA molekylær undertype og serøs histologisk type end andre TCGA molekylær undertype og endometrioide histologisk type. Xa

+ og to Xa viste højere ekspression af CTA’er placeret på somatiske kromosomer end konserveret Xi i både endometrioide og serøse histologiske typer.

P Drømmeholdet værdi kun var signifikant mellem to Xa og konserveret Xi i endometrioide histologisk type, men

P Drømmeholdet værdi blandt andre var ikke signifikant (figur 3).

Global hypometylering

Den gennemsnitlige betaværdi af CpG øer af somatiske kromosomer var lavere i kopi-nummer høj (serøs-lignende) TCGA molekylær undertype, serøs histologisk type, Xa

+ og to Xa end andre TCGA molekylær undertype, endometrioide histologiske type og bevarede Xi (fig 3F-3I).

Angivelse af CTA’er i

Xist

knockout-mus

Angivelse af XCTAs var højere i bloddannende stamceller end i andre blodceller, inklusive myeloid, B-celle, og erythroide celler (fig 4a). Det betyder udtryk for XCTAs var ikke signifikant forskellig blandt forskellige

Xist

genotyper, herunder heterozygotisk sletning, homozygotisk sletning, og vild-type (Fig 4B).

Punkterne repræsenterer betyde RNA udtryk for 16 cancer-testis-antigener placeret på X-kromosomet blandt blod celletyper (A) og

Xist

genotyper (B). Barer repræsenterer medianerne (B).

Kliniske og tumor egenskaber

Xa

+ og to Xa var hyppigere i serøs histologisk type og kopi-nummer høj (serøs lignende) TCGA molekylær undertype. Desuden Xa

+ og to Xa meste påvist i kopi-nummer høj (serøs lignende) TCGA molekylær undertype (tabel 1). Xa

+ og to Xa patienter var ældre og i overgangsalderen tilstand end bevarede Xi patienter (tabel 2). Der var ingen statistisk signifikante forskelle i race, etnicitet, klinisk fase, eller residual tumor status blandt de grupper efter status Xi.

Prognostisk betydning

Ud af de 371 patienter, fem (1,3%) og 174 (46,9%) blev udelukket fra den overordnede og sygdomsfri overlevelse analyser henholdsvis på grund af fraværet af tilgængelige data. De to Xa patienter viste dårligere samlet og sygdomsfri overlevelse i univariat overlevelse analyse (figur 5A). Den Xa

+ patienter viste værre samlet overlevelse, men ikke sygdomsfri overlevelse (Fig 5B). Efter justering for klinisk fase forskellen mellem grupperne efter status Xi var ikke signifikant (tabel 3). Den hazard ratio for uønskede kliniske resultater af tab af XCI var ca. 1,6, med en bred fortrolig intern (0,7-3,5). I sub-analyse for hvert histologiske type, viste to Xa værre overlevelsen i endometrioide histologiske type og værre sygdomsfri overlevelse i serøs histologisk type men

P

-værdi var ikke signifikant (S1 Fig). Efter justering for klinisk fase, viste to Xa betydeligt værre sygdomsfri overlevelse i serøs histologisk type (S1 tabel).

Samlet (A) og sygdomsfri overlevelse (B) blev sammenlignet i henhold til status for X kromosom inaktivering. Signifikans blev estimeret ved den samlede log-rank test.

Diskussion

Tab af XCI kan induceres af segregation fejl, der forårsager datter kræftceller til at arve to uniparental Xa ( to Xa) i stedet for én Xa og én Xi [23]. En anden mekanisme for tab af XCI er demethylering af Xi (Xa

+) i forbindelse med den globale hypometylering. Vi har tidligere rapporteret, at både adskillelse fejl og demethylering af Xi forekommer højkvalitets æggestokkene serøs adenocarcinom [15]. I denne undersøgelse forsøgte vi at bestemme, om tabet af XCI forekommer også i serøs adenocarcinom i endometriet. Vi fandt, at tabet af XCI næsten udelukkende forekom i serøs adenocarcinom i endometrium eller serøs-lignende TCGA molekylær subtype. Som i ovariecancer er tab af XCI skyldes både adskillelse fejl og demethylering af Xi i endometriecancer. Den eksklusive forekomst af tab af XCI i serøse adenocarcinomer i endometrium og ovarie er godt korreleret med den høje grad af CNV i disse carcinomer. Dette antyder, at tab af XCI kan forekomme i andre kræftformer med en høj grad af CNV, såsom colorektal cancer, ikke-småcellet lungecancer og hoved og hals pladecellecarcinom [24-27].

vores tidligere undersøgelse, nogle XCTAs, herunder

XAGE3

MAGEA4

blev overudtrykt i kræft i æggestokkene med et tab på XCI [15]. Vi vil gerne vide, om CTA’er også overudtrykt i endometriecancer med tab af XCI. I denne undersøgelse samlet ekspression af XCTAs steg i endometriecancer med tab af XCI, i både to Xa og Xa

+. Endvidere både Xa

+ og to Xa viste global hypometylering og overekspression af CTA’er placeret på somatiske kromosomer. I vores tidligere undersøgelse blev to Xa af ovariecancer globalt hypomethylated, ligesom for endometriecancer [15]. Det var usikkert, at virkningen på ekspressionen af ​​XCTAs af tab af XCI er uafhængig af global hypometylering. Vi analyserede udtryk for XCTAs i

Xist

knockout-mus til at afgøre, om tab af Xi øger ekspressionen af ​​XCTAs uafhængigt af den globale hypometylering. Angivelse af XCTAs steg ikke i

Xist

knockout-mus. Vi konkluderer, at tabet af XCI har en meget mindre effekt på ekspressionen af ​​XCTAs end global hypometylering. Den overekspression af XCTAs i kræft med tab af XCI kan primært forårsaget af den medfølgende globale hypometylering. Men virkningen på ekspressionen af ​​XCTAs af tab af XCI kan ikke generaliseres i andre maligniteter. Endvidere er resultatet af

Xist

knockout-mus har begrænsning at anvende humane faste orgel maligniteter. Yderligere undersøgelser er påkrævet for at generalisere konklusionen.

Tab af XCI er onkogen i mus, hvilket tyder på, at tabet af XCI kunne have en rolle i tumor progression eller dårlig patient prognose. Den hazard ratio for uønskede kliniske resultater af tab af XCI var ca. 1,6 med bred en fortrolig intern (0,7-3,5), som svarer til den af ​​ovariecancer [15]. Det sygdomsfri overlevelse Resultatet var ikke i overensstemmelse med den samlede overlevelse. Denne uoverensstemmelse kan skyldes fordomme på grund af en stor andel af manglende data. Tendensen til dårligere prognose af to Xa blev observeret i sub-analyse af endometrioide og serøse histologiske undergrupper. Kollektivt, vores resultater tyder på, at tabet af XCI er forbundet med en lidt højere risiko for uønskede kliniske resultater, men med begrænset dokumentation.

Konklusion

Vores observationer dokumenterer, at tabet af XCI er almindelig i serøs adenocarcinom i endometrium og i serøs-lignende adenocarcinom, som udviste en høj grad af CNV. Dette resultat antyder, at tab af XCI forekommer ikke kun i serøs ovariecancer eller basal-lignende brystkræft, men også i cancer med høj grad af CNV. Vi fandt, at den globale hypometylering, og ikke tab af XCI, var den vigtigste mekanisme af overekspression af XCTAs, og at tab af XCI har en lidt højere risiko for negative kliniske resultat, men med begrænset dokumentation.

Støtte Information

S1 tekst. Liste over udvalgte kræft-testis-antigener

doi:. 10,1371 /journal.pone.0137476.s001

(DOCX)

S1 Fig. . Sub-analyse for overlevelse af hver histologisk type,

Betydning blev estimeret ved den samlede log-rank test

doi:. 10,1371 /journal.pone.0137476.s002

(TIF)

S1 Table. Sub-analyse for multivariate Cox regression test af hver histologiske typer

doi:. 10,1371 /journal.pone.0137476.s003

(DOCX)

Tak

Vi brugte data, blev genereret af TCGA Research Network. Forfatterne vil gerne takke TCGA Research Network og specimen donorer. Vi vil også gerne takke professor Jeannie T. Lee for at tillade os at bruge data fra knockout-mus.