Denne Finde Angiver et specifikt niveau i Celletype specificitet SMIP Actions

Z ‘elementer til denne analyse, som er baseret på positive og negative kontroller, var mellem 0,62 og 0,67, mens signalet til baggrunden forholdet var fem i begge tilfælde. en ~ dobbelte optrapning blev imidlertid udløst af nogle SMIPs i den del af NKX3.1 positive celler var resultatet diskret sammenlignet med proteasominhibitorer og vil ikke blive bekræftet ved immuno-blotting. Også, når ekspressionen af ​​endogene NKX3.1 blev evalueret i DU145, anden prostatacancer cellelinie med meget lave niveauer af NKX3.1, ingen af ​​de SMIPs opnåede positive.Nutlin-3a

Selvom proteasominhibitorer ført til en stigning i p27-luc-ekspression, der var let mærkbar ved immuno-blotting og luciferase assay ingen af ​​SMIPs var effektive. Dette fund tyder på et bestemt niveau af celltype specificitet SMIP handlinger. Selvom celle-centreret struktur almindeligvis afsløret materialer, robust modulerede afprøvning endpoint- nukleare P27 niveauer – i intakte celler, vores pilot skærm udsættes også manglerne ved denne tilgang, nemlig at de molekylære mål for SMIPs forbliver uidentificeret som den modulerede test endpoint er ikke nødvendigvis kausal til de bedste mobile forgreninger af forbindelserne identificeret. For eksempel er vores RNA-interferens forskning viste, at ikke p27 none p21 var nødvendige for SMIP-induceret G1 forsinkelse i LNCaP-S14 væv. Det er umuligt at ineffektivitet af den lille interfererende RNA knockdown medieret skjult denne type afhængighed SMIP aktioner, da p27 og mangler af p21 faldt den del af cellerne i G1 således afslører, at de knockdown effektiviteter opnås her var funktionelt følgeskader.

Derudover p21 og P27 intervaller i SMIP-håndteret knockdown celler var dog under eller lig med niveauerne i ubehandlede kontrol celler, hvilket indikerer den lille ophobning af CKIs opdaget på SMIP tilsyn knockdown celler vil være utilstrækkelig til at resultere i en celle-cyklus arrest.Two potentiel oplysninger kunne tilbydes at rationalisere dispenserbarheden af ​​p21 og p27 for SMIP-induceret G1 forsinkelse fremkaldt af SMIPs: for det første, er det blevet fastslået, at muse embryonale fibroblaster mangler p27 og p21 ophold dygtige i at give et svar til negative spredning signaler med cellecyklusstop fordi pocket proteiner p107 og p130, som har CKI aktivitet selv, kompensere for dit tab af p27ANDp21. Dernæst SMIPs induceret nedregulering af forskellige gode cellecyklus regulatorer, herunder cycliner E samt en og CDK4, der er blevet fuldstændig bevaret på p27 og p21 knock-down.UNC1215

Derfor er det tænkeligt, at den kombinerede effectation af cyclin /CDK nedregulering andCDK inhibering med lommeproteiner og andre CKIs udgør omkring SMIP-medieret forsinkelse cellecyklus i fravær af p27 og p21. Selv om det synes de identificerede i dagens indledende skærm materialer forårsaget p27 opregulering som en sekundær effekt af celle-cyklus forsinkelse, ved hjælp akkumulering nuklear p27 som en test endpoint let tillod identifikation af cellepermeable stoffer med antiproliferativ aktivitet. Da de forårsager forsinkelse celle-cyklus og apoptose i flere forskellige prostatacancerceller dog ikke i normale humane fibroblaster betydeligt, både SMIPs udviser kræftcelle selektivitet. Desuden har de betragtes som en stram surrogat for in vivo tumorudvikling og inhiberer kolonidannelse i blød agar, som er virkelig en egenskab ved den ændrede fænotype af cancervæv.