PLoS ONE: Urinary Niveauer af N-nitrosoforbindelser i forhold til risikoen for gastrisk kræft: Resultater fra Shanghai Kohorte Study

Abstrakt

Baggrund

N

-Nitroso forbindelserne menes at spille en væsentlig rolle i udviklingen af ​​mavekræft. Epidemiologiske data er imidlertid sparsomme i at undersøge sammenhængen mellem biomarkører for eksponering for

N

-nitroso forbindelser og risikoen for mavekræft.

Metoder

En indlejret rets- kontrol undersøgelse inden for en prospektiv kohorte af 18,244 midaldrende og ældre mænd i Shanghai, Kina, blev udført for at undersøge sammenhængen mellem urin niveau af

N

-nitroso forbindelser og risikoen for mavekræft. Information om demografi, sædvanlige indtag kosten, og brug af alkohol og tobak blev indsamlet via i-personers interviews på tilmelding. Urinary niveauer af nitrat, nitrit,

N

-nitroso-2-methylthiazolidine-4-carboxylsyre (NMTCA),

N

-nitrosoproline (NPRO),

N

– nitrososarcosine (NSAR),

N

-nitrosothiazolidine-4-carboxylsyre (NTCA), samt serum

H. pylori

antistoffer blev kvantificeret i 191 gastriske kræfttilfælde og 569 individuelt matchede kontroller. Logistisk regression metode blev anvendt til at vurdere sammenhængen mellem urin niveauer af

N

-nitroso forbindelser og risikoen for mavekræft.

Resultater

I forhold til kontrol, havde gastrisk kræftpatienter generelt sammenlignelige niveauer af urin nitrat, nitrit, og

N

-nitroso forbindelser. Blandt personer seronegative for antistoffer mod

H. pylori

, forhøjede niveauer af urin nitrat var forbundet med øget risiko for mavekræft. De multivariate-justerede odds ratio for det andet og tredje tertiles af nitrat var 3,27 (95% konfidensinterval = 0,76 til 14,04) og 4,82 (95% konfidensinterval = 1,05-22,17), sammenlignet med den laveste tertil (

P

for trend = 0,042). Der var ingen statistisk signifikant sammenhæng mellem urin niveauer af nitrit eller

N

-nitroso forbindelser og risikoen for mavekræft. Urinary NMTCA niveau var signifikant associeret med indtagelse af alkohol og konserveret kød og fisk fødevarer.

Konklusion

Den foreliggende undersøgelse viser, at udsættelse for nitrat, en forløber for

N

-nitroso forbindelser, kan øge risikoen for mavekræft blandt personer uden en historie af

H. pylori

infektion

Henvisning:. Xu L, Qu Y-H, Chu X-D, Wang R, Nelson HH, Gao Y-T, et al. (2015) Urinary Niveauer af

N

-Nitroso forbindelser i forhold til risikoen for gastrisk kræft: Resultater fra Shanghai Cohort Study. PLoS ONE 10 (2): e0117326. doi: 10,1371 /journal.pone.0117326

Academic Redaktør: Jeffrey S. Chang, National Health Research Institutes, TAIWAN

Modtaget: Juli 30, 2014, Accepteret: December 21, 2014; Publiceret: 6 feb 2015

Copyright: © 2015 Xu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Forskning rapporteret i denne publikation blev støttet af National Cancer Institute of National Institutes of Health under tildeling numre R01CA043092, R01CA129534 og R01CA144034. Indholdet er alene forfatternes ansvar og repræsenterer ikke nødvendigvis de officielle synspunkter National Institutes of Health. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

på trods af faldet i incidens og dødelighed af mavekræft verdensplan i de seneste tre årtier, mavekræft er den fjerde mest almindeligt diagnosticeret kræft, og den tredje mest almindelige årsag til kræft død [1]. Selv hvis den nuværende tendens i ratefald fortsætter, vil dette malignitet forblive som en af ​​de mest almindelige kræftformer i hele verden på grund af ældning af de nuværende bestande i områder med høj risiko [2]. Et særkende for mavekræft er den bemærkelsesværdige geografiske variation i incidens og dødelighed i hele verden. Østasien har den højeste incidensrate af mavekræft med mere end 60 per 100.000 personår, hvilket er betydeligt højere end de satser, i Nordamerika og Afrika, som er under 9 pr 100.000 [3]. Det betydelige fald i frekvensen af ​​mavekræft blandt japanske indvandrere til USA i forhold til deres kolleger i Japan i de sidste mange årtier tyder på, at miljømæssige faktorer spiller en væsentlig rolle i udviklingen af ​​mavekræft [4]. Derfor ville identifikation af miljømæssige risikofaktorer for mavekræft informere strategier for primær forebyggelse mod denne malignitet.

N

-Nitroso forbindelser (NOC) har vist kræftfremkaldende effekter i eksperimentelle undersøgelser. Ca. 300 NOCs er blevet testet for carcinogenicitet i laboratorieforsøg, med 90% af dem demonstrere kræftfremkaldende tværs af forskellige dyrearter, herunder højere primater [5, 6]. Visse NOCs er blevet klassificeret som “sandsynligvis kræftfremkaldende for mennesker” af International Agency for Research on Cancer (IARC) [7]. Ifølge 2010 IARC rapporten, indtages nitrat eller nitrit under forhold, der resulterer i endogen nitrosation er formentlig kræftfremkaldende for mennesker [8]. Mennesker udsættes for NOCs fra eksogene kilder og af endogent syntese. Eksogene NOCs kommer direkte fra visse typer af fødevarer, såsom forarbejdet kød, saltet eller røget fisk, og syltede og tørrede grøntsager [9]. Tilgængelige data tyder på, at NOCs i fødevarer findes hyppigere, og ved højere koncentration, i Asien end vestlige lande [10]. Endogene NOCs er dannet af nitrosering af sekundære aminer eller amider med N

2O

3 og (H

2NO

2)

+, som begge er nitrit-afledte nitrosering midler. Nitrit kunne udlede enten direkte fra mad, eller indirekte fra reduktion af nitrat ved mundtlige og enteriske bakterier [11-14]. Endogen dannelse af NOC sandsynligvis katalyseret af hæm jern til stede i rødt kød [15, 16]. Hos mennesker nitrosering finder sted i mere surt miljø såsom maven, især hvor antioxidant C-vitamin er lavt, end i neutralt miljø [17]. Nitrosering reaktioner kan forbedres ved visse bakterier samt under visse inflammatoriske tilstande, såsom oxidativ burst [18]. Ca. 45% -75% NOCs at mennesker udsættes for stammer fra endogen syntese [19]. Personer med høj eksponering til NOC er en hypotese at have en øget risiko for at udvikle mavekræft.

Epidemiologiske studier undersøger sammenhængen mellem NOCs eller NOC-holdige fødevarer og gastrisk kræftrisiko har produceret inkonsistente resultater [20]. Disse uoverensstemmelser var sandsynligvis på grund af målefejl i vurderingen af ​​eksponeringen for NOCs i de fleste, hvis ikke alle, epidemiologiske undersøgelser samt den manglende information om cofaktorer, der har indflydelse på den endogene nitrosation [8]. En biomarkør tilgang, der vurderer samlede NOCs (dvs. summen af ​​både eksogene og endogene kilder) ville overvinde nogle af disse begrænsninger og øge resultaternes gyldighed. I den foreliggende undersøgelse har vi kvantificeret urin niveauer af nitrat og nitrit, to forstadier for NOCs samt

N

-nitroso-2-methylthiazolidine-4-carboxylsyre (NMTCA),

N

-nitrosoproline (NPRO),

N

-nitrososarcosine (NSAR), og

N

-nitrosothiazolidine-4-carboxylsyre (NTCA) 4 store ikke-flygtige NOCs til stede i human urin [19 ]. Halveringstiden af ​​individuelle NOC varierer fra flere timer til flere dage. Den NPRO og NSAR udskilles i urinen næsten uændret, og proportional med den oralt administrerede dosis i rotte model [21].

in vivo

administration af nitrat og

N

-nitrosamine forstadier har vist høj effektivitet i produktionen af ​​NMTCA, NTCA og NPRO [22, 23]. Således overvågning NPRO eller andre NOCs udskilles i urinen viste sig at være en passende procedure til vurdering menneskets daglige eksponering for både endogene og eksogene NOCs [21, 22, 24]. Denne undersøgelse blev indlejret i Shanghai Kohorte, en prospektiv kohorte af 18,244 midaldrende og ældre mænd, i Shanghai, Kina. Det primære formål med denne undersøgelse var at evaluere sammenhængen mellem urin niveauer af NOCs og deres prækursorer og risikoen for mavekræft. Den sekundære formål med denne undersøgelse var at undersøge den mulige modificerende af infektion med

H

.

pylori

bakterier, alkoholforbrug, rygning, og serum /urin antioxidant måling på NOC-gastrisk forening kræft. [25]

Materialer og metoder

Undersøgelse Befolkning

udformningen af ​​Shanghai Cohort Study er blevet beskrevet detaljeret andetsteds [26, 27]. Kort fortalt blev fire små, geografisk definerede fællesskaber over et stort område af byen Shanghai udvalgt til en fremadrettet, kræft epidemiologisk kohorte for studiet af miljømæssig eksponering og kræft. Komplette lister over alle beboere i disse udvalgte lokalsamfund til identifikation af støtteberettigede emner blev opnået fra lokale politistationer. Kriterierne for støtteberettigelse var mænd mellem 45 og 64 år, som ikke havde nogen historie af kræft. Mellem januar 1986 september 1989 18,244 mænd (~ 80% af støtteberettigede emner) deltog i undersøgelsen. Hver deltager blev interviewet i person ved hjælp af en struktureret spørgeskema fremkalde oplysninger om demografi, brug af alkohol og tobak, sædvanlig voksen kost, og sygehistorie. Ved afslutningen af ​​interviewet, en blodprøve 10 ml ikke-fastende og en enkelt-void (dvs. spot) urinprøve blev indsamlet fra hver deltager. Blod- og urinprøver blev opsamlet sædvanligvis fra 17:00 til 21:00 og anbringes i en køleboks (-4 ° C) umiddelbart efter opsamling. Flere portioner af serum og urin fra hvert individ blev fremstillet og opbevaret ved -70 ° C. Fra hver patient en 25 ml hætteglas af urin blev blandet med 100 mg natriumhydroxid (NaOH) før den blev opbevaret ved -70 ° C til langsigtet opbevaring. Alle deltagere, forudsat at deres skriftlige samtykke til deltagelse i denne undersøgelse på tilmelding. Den samtykkeerklæring til samtale og indsamling af biospecimens ved baseline blev godkendt af Institutional Review Board i Shanghai Cancer Institute, Shanghai Kina. Alle overlevende kohorte deltagere gav også deres skriftlige samtykke til fortsat at deltage i kohorteundersøgelse under årlig opfølgning i-personers interviews. Den samtykkeerklæring for fortsat deltagelse i denne undersøgelse blev godkendt af Institutional Review Boards i Shanghai Cancer Institute og University of Pittsburgh. Denne undersøgelse er blevet godkendt af Institutional Review Boards i Shanghai Cancer Institute, University of Minnesota, og University of Pittsburgh.

Aktuel kost blev vurderet gennem en fødevare frekvens spørgeskema, der omfattede 45 fødevarer der repræsenterer almindeligt forbruges lokale fødevarer i Shanghai, Kina, i begyndelsen af ​​1980’erne. Årlig opfølgning for hændelsen kræft og dødsfald er blevet udført siden 1986. Alle overlevende deltagere blev kontaktet in-person årligt for vital status og kræft diagnose. Vi udførte også rekord koblingsanalyse med databaser i Shanghai Cancer Registry og Shanghai Municipal Vital Statistics. Ved udgangen af ​​2012 var der kun 609 (3,3%) originale kohorte deltagere tabt for vores årlige opfølgende interview. Desuden 573 (3,1%) forsøgspersoner afviste vores anmodning om årlige opfølgende interviews, selv om deres kræft og vital status er blevet konstateret og opdateret gennem den årlige rekord kobling analyser. Således opfølgning for forekomst af kræft og dødsfald blandt kohorte deltagerne var næsten færdig. Den foreliggende undersøgelse omfattede 197 patienter med hændelse mavekræft hvis oprindelige diagnose blev foretaget mellem tidspunktet for indskrivning og marts 1998. Diagnoser af 179 (91%) kræftformer var baseret på histopatologiske beviser. De resterende 18 (9%) tilfælde blev diagnosticeret baseret på radiografiske forestiller sig med konsekvent klinisk evidens (n ​​= 14) eller dødsattest kun (n = 4). Der var 45 patienter med kræft på gastrisk mavemunden og 146 ved ikke-Cardia.

For hver sag, valgte vi tre kontrolpersoner tilfældigt blandt alle berettigede deltagere i kohorteundersøgelse, der mødtes de matchende kriterier. Alle tre udvalgte kontroller blev individuelt tilpasset indeks tilfælde efter alder (± 2 år), måned og år for biospecimen samling, og kvarter bopæl på rekruttering.

laboratorieanalyser

portioner af urin prøver af de emner, blev trukket fra biospecimen arkivet og derefter sorteret i de matchede case-kontrol sæt. Alle 4 urinprøver i en given matchet case-kontrol sæt (dvs. 1 tilfælde og 3 kontroller) blev anbragt i en tilfældig rækkefølge og testet i samme parti for alle laboratoriemålinger. status Sagen /kontrol af test urinprøver var blind for laboratoriepersonalet.

NSAR, NPRO, NTCA og NMTCA blev analyseret ved en gaskromatografi kombineret med termisk energi analysator (GC-TEA) i henhold til den beskrevne metode tidligere [22]. Kort fortalt en 7,5 ml alikvot af NaOH-behandlet urin blev ekstraheret 3 gange med 20 ml methanol-dichlormethan (1: 9, vol /vol) efter tilsætning af 75 ng

N

-nitrosopipecolic syre (NPIC) som intern standard, 2,0 g natriumchlorid (NaCl), og 1,5 ml 20% ammoniumsulfamat løsning i 1,8

M

H

2SO4. De kombinerede ekstrakter blev tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentreret til tørhed ved rotationsfordamper ved 30 ° C, og derivatiseret i 2 ml ether med overskydende diazomethan (fremstillet med 2 g

N

Methyl

N

-Nitroso-p-toluensulfonamid, 60 ml ether, 12 ml 60% kaliumhydroxid og 12 ml methanol) .Den methylesteren af ​​de fem

N

-nitrosamino syrer i etherisk opløsning blev koncentreret til 0,1 ml og kvantificeres med en 10 pi alikvot ved GC-TEA. Til gaskromatografi, en glaskolonne (2 m x 3 mm i.d.) pakket med 5% FFAP på Chromosorb WHP (80-100 mesh) blev anvendt ved en temperatur på 180 ° C. Temperaturen af ​​injektionsporten af ​​gaskromatografi var 200 ° C, og strømningshastigheden af ​​nitrogen transporterer gas var 50 ml /min. Til termisk energi-analyse, temperaturen af ​​pyrolyseovnen var 500 ° C, grænseflade var 200 ° C, og vakuum til 0,9 mm Hg. Tallene for genfindelse af NSAR, NPRO, NMTCA, og NTCA tilføjet på 30 ug /l hver var 75%, 79%, 91% og 96%, hhv. Detektionsgrænserne spændte fra 0,1 til 0,5 ug /l, afhængigt af forbindelsen.

Nitrat og nitrit blev analyseret ifølge den tidligere beskrevet med en vis modifikation [25] metode. Cadmium blev fremstillet ved omsætning af zink med 20% cadmium sulfat. Ammoniumchloridet pufferopløsning blev indstillet til pH 9,6-9,7. Urinprøver blev deproteined før måling af nitrit og nitrat blev udført. Urinprøve blev indstillet til pH 8-9, blev blandingen inkuberet ved 50-60 ° C i 10 minutter, derefter 2 ml 12% ZnSO

4-opløsning blev tilsat og inkuberet ved 50-60 ° C i yderligere 10 min, og yderligere 1 ml 0,5

N

NaOH blev tilsat før indholdet afkølet til stuetemperatur. Efter tilsætning 17,6 ml vand, blev prøven passeret gennem filtrerpapir, og filtratet blev opsamlet efter kassering af de første 10 ml filtrat. Til måling af nitrit, 5 ml 0,5% sulfanilamid og 2 ml 0,5%

N

– (1-naphthyl) ethylendiamin-dihydrochlorid blev tilsat til 10 ml prøve af filtratet beskrevet ovenfor, før absorbansen af ​​den endelige opløsning blev aflæst ved 540 nm. Til bestemmelse af nitrat, 5 ml NH

4OH pufferopløsning og 18 ml vand blev tilsat til 2 ml filtrat, før det ledes gennem en Cd-søjle ved 3-5 ml /min. Søjlen blev vasket med 15 ml vand og den kombinerede spildevand opsamlet. Efter tilsætning af 5 ml 0,5% sulfanilamid og 2 ml 0,5% N- (1-naphthyl) ethylendiamin-dihydrochlorid, absorbansen af ​​den endelige opløsning blev aflæst ved 540 nm efter henstand i 20 min. De endelige koncentrationer af nitrit og nitrat blev beregnet under anvendelse af standardkurven. Til kvalitetskontrol formål, to partier af urinprøver med tre dubletter hver, der var blind for laboratoriepersonale blev spredt blandt de prøver. De intra- og inter-assay variationskoefficienter for alle NOCs og deres forstadier målte var 4-15% og 12-33 %% henholdsvis.

En historie om infektion med

H

.

pylori

blev bestemt ved påvisning af serum immunoglobulin G (IgG) antistoffer mod

H

.

pylori

anvendelse af et enzym-bundet immunsorbentassay (ELISA) beskrevet tidligere [28]. Denne ELISA blev udviklet og valideret ved hjælp af

H

.

pylori

stammer, der var fremherskende i undersøgelsen befolkningen [28]. Fremgangsmåderne til kvantificering af antioxidanter, herunder serum carotenoider (dvs. α-caroten, β-caroten, β-cryptoxanthin, lycopen, lutein /zeaxanthin, retinol, α-tocopherol, γ-tocopherol og C-vitamin) og urinveje catechiner herunder epigallocatchin ( EGC) blev beskrevet i tidligere rapporter af denne undersøgelse population [29, 30].

Statistisk analyse

af 197 sager og 591 kontroller, urinprøver af 6 tilfælde (og 18 deres matchede kontroller) og yderligere 4 kontroller havde manglende værdier af en eller flere urin målinger. Derfor er den nuværende undersøgelse omfattede 191 sager og 569 matchede kontrolpersoner efter udelukke disse emner med manglende værdier i de primære analyser. Derudover har vi tilføjet urin nitrit assay sent på studiet prøver og havde værdier for nitrit på 104 sager og 308 matchede kun kontrol, hvor alle statistiske analyser involverer urin nitrit var baseret på.

Koncentrationerne af urin nitrat, nitrit og 4 NOCs målte blev udtrykt som pg /g creatinin at tage hensyn til varierende vandindhold i urinen på forskellige individer. Fordelingerne af koncentrationerne af disse urinære analytter blev markant skæv med få individer besidder høje værdier, som var normaliseret, i vid udstrækning ved deres logaritmisk transformation. Derfor formelle statistiske test på kontinuerlige værdier af NOCs, nitrat og nitrit blev udført på logaritmisk transformerede værdier. Spearman rank korrelation analyse blev udført for at vurdere forholdet mellem de enkelte urin NOC, serum antioxidanter og urin EGC. Den χ

2 test blev anvendt til at sammenligne fordelinger af udvalgte demografi, rygning, alkoholforbrug og IgG-antistoffer mod

H

.

pylori

mellem cases og kontroller. Analysen af ​​kovarians metoden blev anvendt til at undersøge forskelle i det geometriske gennemsnit af urin nitrat, nitrit og NOCs tværs af forskellige niveauer af rygning, alkoholforbrug, eller serologisk status

H

.

pylori

infektion, indtagelse af friske mørkegrønne grøntsager, indtag af saltede /syltede grøntsager, eller indtagelse af konserverede kød, fisk eller æg blandt kun kontrolpersoner.

Wilcoxon

statistik metode blev anvendt til at vurdere forskellen i fordelingen af ​​urin NOC eller deres prækursorer mellem cases og kontroller.

Betinget logistisk regression metode blev anvendt til at vurdere sammenhængen mellem niveauerne af urin NOC, nitrat og nitrit og mavekræft risiko [31]. Foreningerne blev målt ved odds ratio (OR) og deres tilsvarende 95% konfidensinterval (CIS) og

Ps

for trends. Undersøgelse emner blev grupperet i tre niveauer (lav, mellemliggende og høje) baseret på tertil eller høj /lav fordelinger af påviselige urin NOC blandt alle kontrolpersoner. Den lineære trend test for eksponering-sygdom risikofaktorer foreninger var baseret på ordinale værdier (0-2) for de tre eksponeringsniveauer. Vi undersøgte også NOC-gastrisk kræftrisiko forening i undergrupper stratificeret ved cigaretrygning (eller aldrig), alkoholforbrug (eller aldrig), serologisk status

H

.

pylori

(negativ eller positiv), niveauer af serum antioxidanter (under og lig med eller over medianen), eller niveauet af urin EGC (under og lig med eller over medianen), samt ved subsite af mavekræft (mavemunden og ikke-cardia). For undergruppen analyser, blev matchet sæt brudt og ubetinget logistisk regression blev anvendt til at maksimere stikprøvestørrelsen rådighed for stratificeret statistisk analyse. De matchende faktorer (alder, årgang biospecimen samling, og naboskab bopæl på rekruttering) blev inkluderet i alle ubetingede logistiske regressionsmodeller som kovariater. Tilstedeværelsen af ​​

H

.

pylori

antistoffer i serum, rygning, stort alkoholforbrug, serumniveauer af β-caroten og C-vitamin, og urin niveau af EGC blev identificeret risikofaktorer /beskyttende faktorer for mavekræft i dette studie population [28-30 , 32]. Disse faktorer blev medtaget i de multivariable logistiske regressionsmodeller ved undersøgelsen den uafhængige effekt af NOCs om gastrisk kræftrisiko.

Statistisk computing blev udført ved hjælp af SAS-version 9.2 (SAS Institute Inc., Cary, NC). Alle

P ‘

S indberettet er to-sidet, og dem, der var mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

Den gennemsnitlige alder (standardafvigelse) case patienter med kræft diagnose var 63,4 (5,6) år. Det gennemsnitlige tidsinterval mellem biospecimen indsamling og kræftdiagnose var 5,1 (3,0) år (fra 1 måned til 12 år). Der var ingen signifikant forskel i body mass index (kg /m

2) eller uddannelsesniveau mellem tilfælde og kontroller. Personer, der har udviklet mavekræft forbruges flere cigaretter og alkohol, og var mere tilbøjelige til at være seropositive for IgG antistoffer mod

H

.

pylori

end deres matchede kontroller (tabel 1).

De korrelationskoefficienter blandt nitrat, nitrit og fire NOCs varierede fra 0,03 til 0,70 (tabel 2). Den højeste korrelationskoefficient var for NPRO med NTCA (r = 0,70), efterfulgt af NPRO med nitrat (r = 0,50) og ved NTCA med NMTCA (r = 0,48). Der var ingen eller svag sammenhæng mellem urin NOCs eller deres prækursorer og antioxidant målinger, herunder urin EGC og serum carotenoider, retinol, tocopheroler og vitamin C (alle korrelationskoefficienter 0,25) (data ikke vist)

tabel 3 viser geometriske hjælp af urin NOC, nitrit og nitrat blandt kontrolpersoner. Regelmæssige alkohol drikker fordoblet deres niveauer af urin NMTCA forhold til nondrinkers. Foreningen var dosisafhængig; de geometriske middelværdier for NMTCA var 1,70 (mg /g kreatinin) for ikke-drikkende, 3,75 for 2 drikkevarer /dag og 4,21 for ≥2 drikkevarer /dag (

P

for trend 0,0001). Rygere eller dem positive for antistoffer mod

H

.

pylori

var forbundet med statistisk borderline signifikant stigning i urin nitrit. Der var ingen signifikant relation til andre urin NOCs eller deres forstadier med alkoholindtag, rygning eller tidligere

H

.

pylori

infektion (tabel 3). Vi undersøgte også sammenhængen mellem indtagelse frekvenser af friske mørkegrønne grøntsager eller konserves og urin niveauer af NOCs eller deres forløbere blandt kontrolpersoner. Høj indtagelse hyppigheden af ​​total konserveret kød, fisk og æg kombineret var forbundet med høje niveauer af urin NMTCA (

P

for trend = 0,032). Der var ingen statistisk signifikant sammenhæng mellem indtag af friske /konserverede grøntsager eller konserveret kød /fisk /æg og urin niveauer af nitrit eller andre NOCs (tabel 3).

Høj indtagelse af saltet /syltede grøntsager blev omvendt forbundet med urin nitrat niveau i en dosisafhængig måde (

P

for trend = 0,002), mens højt indtag af friske mørkegrønne grøntsager var forbundet med en statistisk ikke-signifikant stigning i nitrat niveauet generelt (

P

for trend = 0,248), selv om der var ingen sammenhæng mellem indtagelse frekvenser af friske og konserverede grøntsager (r = 0,02,

P

= 0,58). Vi undersøgte den modificerende effekt af saltet /syltede grøntsager på sammenhængen mellem indtag af friske mørkegrønne grøntsager og urin niveauer af nitrat. Blandt kontroller, der ikke forbruge saltede /syltede grøntsager, de geometriske middelværdier (95% CIS) urin nitrat for enkeltpersoner forbrugende 1, 1, og 2 eller flere gange /dag i friske mørkegrønne grøntsager var 206,0 (151,5-280,0) , 201,3 (144,4 til 280,5), og 523,0 (274-995,8) mg /g creatinin, henholdsvis (

P

for trend = 0,069). Blandt kontroller, der forbruges en eller flere gange af saltet eller syltede grøntsager om ugen, var de tilsvarende tal 141,9 (110-181,7), 154,8 (117,9 til 203,1), og 120,0 (70,9 til 202,6) mg /g creatinin, henholdsvis (

P

for trend = 0,84). Der var en statistisk signifikant vekselvirkning mellem indtag af friske mørkegrønne grøntsager og saltet /syltede grøntsager på urin niveau af nitrat (P for interaktion = 0,037).

I den undersøgte population, medianen niveauer af urin nitrat (170 -190 mg /g kreatinin) var mere end 20 gange højere end i nitrit (7-8 mg /g creatinin) i begge tilfælde og kontroller. Blandt fire NOCs målt, NTCA var på det højeste niveau, efterfulgt af NPRO og NMTCA mens NSAR var på det laveste; mere end 60% af forsøgspersonerne var målbart for NSAR i urin. Samlet var der ingen signifikant forskel i urin koncentrationer af nitrat, nitrit eller andre NOCs målt mellem gastrisk kræftpatienter og kontrolpersoner (tabel 4). Sammenlignet med lave niveauer (dvs. målbart eller laveste tertil), højeste niveauer af de enkelte NOC eller deres forstadier var ikke associeret med øget risiko for mavekræft i alle fag efter justering for alkoholindtag, rygning,

H

.

pylori

serologiske status, antioxidant målinger, som omfattede urin EGC og serum β-caroten og vitamin C (tabel 5).

Da infektion med

H

.

pylori

er en underliggende årsag til mavekræft, vi undersøgte også associationer mellem urin niveauer af nitrat, nitrit og individuelle NOCs og risiko for mavekræft separat i individer positive eller negative for

H

.

pylori

antistoffer (tabel 6). Blandt personer negative til

H

.

pylori

antistoffer, forhøjet urin nitrat var forbundet med en statistisk signifikant øget risiko for mavekræft; de multivariate justeret yderste periferi (95% CIS) for det andet og tredje tertiles af nitrat var 3,27 (0,76 til 14,03) og 4,82 (1,05 til 22,17), sammenlignet med den laveste tertil (

P

for trend = 0,042). Der var ingen evidens for effekt modifikation af

H

.

pylori

serologisk status på sammenhængen mellem nitrit eller andre NOCs og risiko for mavekræft (tabel 6). Vi har også gennemgået og fundet nogen modificerende effekt af rygning, alkoholforbrug, niveauer af serum β-caroten og C-vitamin, og urin EGC på sammenhængen mellem NOCs eller deres prækursorer og mavekræft risiko (data ikke vist).

Sammenhængen mellem urin niveauer af nitrat, nitrit eller NOCs og risiko for mavemunden eller ikke-cardia kræft blev undersøgt. Samlet nogen statistisk signifikant sammenhæng blev fundet for urin NOCs eller deres forstadier med risiko for enten mavemunden eller ikke-cardia kræft (data ikke vist).

Diskussion

Så vidt vi ved, er foreliggende undersøgelse var den første anvendelse af en biomarkør tilgang til at undersøge sammenhængen mellem NOCs og deres prækursorer og risikoen for at udvikle gastrisk cancer i et prospektivt kohorte studie. Vi observerede en statistisk signifikant positiv sammenhæng mellem urin nitrat og gastrisk kræftrisiko blandt individer negative for IgG antistoffer mod

H

.

pylori

(dvs. ingen historie infektion med

H

.

pylori

). Derudover blev forhøjede niveauer af urin-nitrit forbundet med seropositivitet til

H

.

pylori

, hvilket tyder på, at infektion med

H

.

pylori

kan øge reduktionen af ​​nitrat til nitrit

in vivo

. Den foreliggende undersøgelse viste en hidtil ukendt dosisafhængig sammenhæng mellem alkohol og urinveje niveauer af NMTCA, hvilket antyder, at alkoholindtagelse kan spille en rolle i dannelsen af ​​NOC

in vivo

.

Infektion med

H

.

pylori

er en stærk risikofaktor for mavekræft [33]. Tilstedeværelsen af ​​

H

.

pylori

i maven forårsager inflammatorisk skade på mavens slimhinde, som kan forbedre den endogene dannelse af NOCs i maven [18, 34, 35]. Et forhøjet niveau af urin nitrit i individer seropositive for antistoffer mod

H

.

pylori

understøtter denne hypotese, at

H

.

pylori

kan bidrage til nitrosation proces i maven. Den interaktive rolle

H

.

pylori

N

-nitroso forbindelser i udviklingen af ​​mavekræft kræver yderligere undersøgelser.

Blandt individer seronegative for IgG antistoffer mod

H

.

pylori

, urin niveauer af nitrat, en forløber for

N

-nitroso forbindelser, var positivt forbundet med risiko for mavekræft. Kronisk infektion med

H

.

pylori

er en etableret risikofaktor for mavekræft. Det er ikke overraskende, at sammenhængen mellem nitrat og mavekræft risiko var mere tydelig blandt personer uden

H

.

pylori

infektion, en risiko befolkning forholdsvis lav. Resultaterne af denne undersøgelse tyder på, at effekten af ​​nitrat gennem nitrosation vej kunne være maskeret af

H

.

pylori

infektion, især i nærværende undersøgelse befolkning, hvor

H

.

pylori

infektion er meget udbredt. I betragtning af den lille prøvestørrelse og flere sammenligning spørgsmål, fortolkningen af ​​den foreliggende undersøgelse resultater med en positiv sammenhæng mellem urin nitrat og mavekræft risiko blandt personer med negativ

H

.

pylori

bør foretages med forsigtighed på grund af mulige chance fund. De fremtidige studier med et større stikprøve er berettiget til at bekræfte disse resultater.

Denne undersøgelse viser, at højere niveauer af NMTCA i urinen af ​​alkohol drikker i forhold til ikke-drikkende. Undersøgelser har vist, at samtidig administration af acetaldehyd (en metabolit af ethanol), L-cystein og nitrit signifikant øget urinudskillelse af NMTCA i mennesket [24]. Den foreliggende undersøgelse viste for første gang i fritlevende individer, alkoholforbrug resulterede i en signifikant øget niveau af urin NMTCA. Høj indtagelse af konserverede kød (herunder saltet svinekød, saltet kød, pølser og skinke), saltet fisk og konserverede æg også var forbundet med forhøjede niveauer af NMTCA (

P

for trend = 0,03). Vores resultater var i overensstemmelse med resultatet fra en nylig undersøgelse viser, at NMTCA blev ofte fundet i forarbejdede kødprodukter [36, 37].