PLoS ONE: Detection og kliniske betydning af intratumoral EGFR Mutationsanalyse Heterogenitet i kinesiske patienter med fremskreden Ikke-småcellet Cancer

Abstrakt

Formål

Denne undersøgelse evaluerede forekomst og potentielle kliniske betydning af intratumoral

EGFR

mutational heterogenitet i kinesiske patienter med ikke-småcellet lungekræft (NSCLC).

Materialer og metoder

Eighty-fem trins IIIa-IV NSCLC patienter, som havde undergået palliativ kirurgisk resektion blev inkluderet i denne undersøgelse. Af disse 45 patienter udført

EGFR

mutationer (gruppe-M) og 40 patienter var vildtype (gruppe-W). Hver tumor prøve blev mikrodissekeres at give 28-34 tumor foci og intratumoral

EGFR

mutation blev bestemt ved hjælp Denaturering højtryksvæskekromatografi (DHPLC) og Amplification Refractory Mutation System (ARMS).

EGFR

kopiere numre blev målt ved hjælp af fluorescens in situ hybridisering (FISH).

Resultater

mikrodissektions gav 1431 tumor foci fra

EGFR

mutant patienter (gruppe -M) og 1.238 foci fra patienter vildtype (gruppe-W).

EGFR

mutanthyppighed i gruppe-M var 80,6% (1154/1431) og 87,1% (1247/1431) ved hjælp af DHPLC og ARMS hhv. En kombination af

EGFR

-mutated og vildtypeceller blev påvist i 32,9% (28/85) af prøver af DHPLC og 28,2% (24/85) af ARMS, støtte forekomsten af ​​intratumoral heterogenitet. Enogtredive patienter (36,5%) blev identificeret som

EGFR

FISH-positive. Patienter huser intratumoral mutations heterogenitet besad lavere

EGFR

kopi antal end de tumorer indeholdt mutant celler alene (16,7% vs. 71,0%,

P

0,05). Blandt 26 patienter, der havde modtaget EGFR-TKI’er, middelværdien

EGFR

mutation indholdet var højere hos patienter, der viser delvis respons (86,1%) eller stabil sygdom (48,7%) sammenlignet med patienter, der oplever progressiv sygdom (6,0%) (

P

= 0,001). Der viste også sammenhæng mellem progressionsfri overlevelse (PFS) og forskelligt indhold af EGFR mutation grupper (ren vildtype EGFR, EGFR mutation med heterogenitet og ren muteret EGFR) (

P

= 0,001).

Konklusion

Ca. 30% af patienterne præsenterede intratumoral

EGFR

mutations heterogenitet, ledsager med relativt lavt EGFR kopi nummer.

EGFR

mutant indhold blev korreleret med respons og prognose af EGFR-TKI’er

Henvisning:. Bai H, Wang Z, Wang Y, Zhuo M, Zhou Q, Duan J, et al. (2013) Detection og kliniske betydning af intratumoral

EGFR

Mutationsanalyse Heterogenitet i kinesiske patienter med fremskreden ikke-småcellet lungekræft. PLoS ONE 8 (2): e54170. doi: 10,1371 /journal.pone.0054170

Redaktør: William CS. Cho, Queen Elizabeth Hospital, Hongkong

Modtaget: August 21, 2012; Accepteret: December 7, 2012; Publiceret: 13. februar 2013 |

Copyright: © 2013 Bai et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af National Naturvidenskab Foundation Distinguished Young Scholars [81025012] og National Natural Sciences Foundation generelle program [81172235]; og Beijing Health Systems Academic Leader [2011/02/22]. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

epitelvækstfaktor receptor-tyrosinkinaseinhibitorer (EGFR-TKI’er) såsom gefitinib og erlotinib var blevet anvendt bredt til behandling af ikke-småcellet lungekræft (NSCLC). Flere rapporter har antydet, at patienter behandlet med EGFR-TKI’er udviser forbedret behandlingseffekt og overlevelse tidspunkter, hvor de bære aktiverende mutationer i

EGFR

[1] – [6]. Na et al rapporterede imidlertid, at de kvindelige adenocarcinom patienter med EGFR mutation fremlagt mere postoperative gentagelse og kortere overlevelse end med vildtype-EGFR [7]. Der findes også

EGFR

-mutated NSCLC patienter, som udviser dårlige reaktioner på EGFR-TKI’er eller som tilbagefald efter en periode med sygdomsbekæmpelse, hvilket tyder på, at der er yderligere faktorer, der medierer den respons på EGFR-TKI’er. Sekundær mutation (T790M) i exon 20 i

EGFR

samt andre genetiske aberrances af EGFR relaterede bypass og nedstrøms veje, såsom

C-MET

amplifikation [8] – [10] ,

IGF-1R

mutation [11] var blevet identificeret i forhold til TKI’er resistens. Men omkring 30% af patienternes resistensmekanismer fortsat uklare. For nylig har intratumoral heterogenitet

EGFR

mutationer vundet opmærksomhed som en potentiel kilde til behandlingssvigt og lægemiddelresistens til EGFR-TKI’er [12], [13].

tumorgenese for lungekræft er en flertrins proces, hvorved monoklonale cancerceller gradvist bliver heterogen på grund af klonal evolution og genetiske /epigenetisk ustabilitet. Selvom alle maligne celler menes at stamme fra et fælles precursor-celle, erhvervet genetisk ustabilitet medfører efterfølgende generationer udtrykker unikke egenskaber, såsom aktiverede onkogener og tumorsuppressorgener [14]. Men de seneste undersøgelser med intratumoral genetisk heterogenitet genereret modstridende resultater. Gerlinger et al (2012) [15] rapporterede markant intratumoral heterogenitet med hensyn til somatiske mutationer i fører og passager gener, som kan fremme tumor tilpasning og terapeutisk svigt via darwinistisk udvælgelse. Snuderl et al (2011) [16] rapporterede stabil sameksistens mellem heterogene kloner besidder forskellige receptortyrosinkinase forstærkning (

EGFR, MET

, og

PDGFRA

) inden for samme tumor. Som en driver gen,

EGFR

blev foreslået at være associeret med resistens over for EGFR-TKI’er når mutationer i dette gen udviste intratumoral heterogenitet. Vores seneste undersøgelse (2012) [17] anførte også, at

EGFR

mutation skift stammer fra chemotherpy kan være relateret til uensartethed intratumoral

EGFR

mutation og til forskellige kemosensitivitet niveauer af mutant og Wild- skriv celler, i modsætning hertil Yatabe et al (2011) [18] rapporterede, at

EGFR

heterogenitet forekom yderst sjældent i lunge adenocarcinom. Disse forfattere spekuleret på, at den observerede i tidligere undersøgelser heterogenitet var et artefakt som enten skyldes en mutant allel-specifik ubalance og uensartet fordelt

EGFR

forstærkning eller fra en forskel i

EGFR

mutation afsløring følsomhed over forskellige metoder.

Baseret på de forskellige resultater af de tidligere serielle undersøgelser af intratumoral heterogenitet, vi har forsøgt at undersøge

EGFR

mutation status ved multi-fokale mikrodissektion analyse ved hjælp af forskellige metoder (DHPLC vs ARMS), udforske foreningen af ​​intratumoral heterogenitet med

EGFR

kopi antal og imfluence af

EGFR

mutation indhold på respons af EGFR-TKI-behandling for patienter med lokalt eller fremskreden NSCLC.

Materialer og metoder

Patienter og prøver

Alle prøver anvendt i denne undersøgelse blev opnået fra en vævsbank ved Institut for thorax Medical Oncology, Peking University Cancer Hospital, som blev etableret i juni 1999 og har besat omkring 1900 patienter med væv prøver, der var blevet genotypede for

EGFR

mutation status ved hjælp af rutinemæssige metoder (DHPLC). Vi valgte patienter fra væv bank i overensstemmelse med følgende kriterier: 1) histologisk bekræftet fase IIIa-IV NSCLC (patologi rapport); 2) havde modtaget palliativ operationelle resektion; 3) kunne give tilstrækkelige prøver primære væv til mikrodissektion og molekylær analyse. De eksklusive kriterier omfattede: 1) havde væv men var metastatiske websted prøver; 2) tumorcellen indhold var for lav til analyse. De palliative operationelle resektioner blev defineret som den udføres i patienter med fremskreden NSCLC, som havde små intra-lungeknuder, solitær metastase i enkelt organ eller præoperativ uidentificeret metastatisk sygdom operation.

Endelig 85 patienter mødte ovenstående kriterier og blev inkluderet i denne undersøgelse, som indeholdt 45 prøver skrives som

EGFR

mutant (gruppe-M) og 40

EGFR

vildtype prøve (gruppe-W). Alle patienter skal have skriftligt informeret samtykke til biomarkør analyse. Undersøgelsen protokol Den blev godkendt af Institutional etiske komité på Peking University Cancer Hospital.

mikrodissektion og DNA-ekstraktion

Alle prøver var blevet evalueret for

EGFR

mutation af DHPLC rutinemæssigt og blev sorteret i 40 vildtype- og 45 mutant-type prøver. Fra hver Formalin-paraffinindlejret (FFPE) blok, blev en 15-um-tyk sektion farvet med hematoxylin og eosin (H . 40% af cellerne). Prøver blev klassificeret som FISH-positive, hvis de udviste et højt polysomy (≥ 4 eksemplarer af

EGFR

i ≥40% af celler), eller hvis de viste genamplifikation, defineret som tilstedeværelsen af ​​stramme

EGFR

gen klynger og et forhold mellem

EGFR-service /kromosom 7 centromer på 2 eller mere pr celle eller 15 eller flere kopier af

EGFR

per celle i mindst 10% af analyserede celler .

Statistik

χ2 testen blev anvendt til at analysere sammenslutning af mutation indhold med kopi nummer. McNemar test blev anvendt til at sammenligne ulighed af

EGFR

mutation heterogenitet mellem DHPLC og arme. Wilcoxon rank sum test blev anvendt til at sammenligne den mutante overflod mellem de forskellige mutation grupper. Ikke-parametriske tests blev anvendt til at analysere mutation indhold mellem forskellige grupper. To-sidet P-værdier 0,05 blev anset for signifikante. evaluering af data blev udført med Alle beregninger blev udført ved hjælp af SAS Version 10.0 (SAS Institute, Inc., Cary, NC).

Resultater

Karakterisering af patienter

Under perioden oktober 2005- december 2011 85 patienter blev inkluderet i denne retrospektive undersøgelse. Histologiske undertyper af hver NSCLC prøve blev evalueret baseret på World Health Organization (WHO) kriterier [21]. Adenocarcinom var den mest almindelige histologiske subtype (63 patienter, 74,1%). Cancer staging blev udført ifølge den UICC-AJCC-TNM-system (version 7, 2009) [22]. Fremskreden sygdom (trin III B – IV) blev identificeret i 61,2% af tilmeldte patienter. Patientdata data er sammenfattet i tabel 1. Femogfyrre patienter blev bekræftet at være

EGFR

mutant type (gruppe-M), herunder 25 patienter med exon 19 deletioner (gruppe-M /E19) og 20 patienter med exon 21 mutationer (gruppe-M /E21).

Meget forskellige EGFR mutation opdaget af DHPLC og ARMS

Tumor mikrodissektion gav 2.699 foci, herunder 1.238 foci fra vildtype

EGFR

(gruppe-W) og 1.431-gruppe-M sager. Den samlede mutant frekvens i gruppe-M var 80,6% af DHPLC (1154/1431) og 87,1% (1247/1431) af ARMS. Mutant frekvenser varierede meget i hele individuelle tumorer, der spænder mellem 5% -100% af DHPLC og 1% -100% af ARMS. Gruppe-M prøver blev opdelt efter mutation indhold som følger: 1) ren

EGFR

mutation (100%) eller ingen mutational heterogenitet blev påvist i 21 tilfælde af DHPLC (12 gruppe-M /E19, 9 gruppe-M /E21) og i 31 tilfælde af ARMS (20 gruppe-M /E19, 11 gruppe-M /E21); 2) moderat mutant indhold (≥50%) eller moderat niveau heterogenitet blev påvist i 16 tilfælde af DHPLC (10 gruppe-M /E19, 6 gruppe-M /E21), og i 9 tilfælde af ARMS (2 gruppe-M /E19 , 7 gruppe-M /E21); og 3) lav mutant indhold eller højt niveau heterogenitet ( 50%) blev påvist i 8 tilfælde af DHPLC (3 gruppe-M /E19 og 5 gruppe-M /E21), og i 5 tilfælde af ARMS (3 gruppe-M /E19 og 2 gruppe-M /E21).

Blandt de 40 gruppe-W sager, 4 tilfælde viste lave mutanthyppighed spænder fra 5,0% til 8,0%, når Mikrodissekterede tumor foci blev analyseret ved DHPLC. Tre af disse sager foretaget en

EGFR

exon 19 mutation, og ét tilfælde foretaget en

EGFR

exon 21 mutation. ARMS bekræftede disse 4 tilfælde og identificeret 6 yderligere tilfælde viser meget lave mutanthyppighed spænder fra 1,0% til 5,0%. Ved at kombinere de gruppe-M tilfælde udføre både Wild- og mutant-typen

EGFR

celler og gruppevise W sager, der indeholder mutant celler ved lav frekvens, 32,9% (28/85) og 28,2% (24/85 ) af prøverne blev identificeret til at bære intratumoral

EGFR

mutations heterogenitet af DHPLC og ARMS hhv. Forskel på intratumoral

EGFR

mutations heterogenitet identificeres ved to metoder var ikke statistisk signifikans (

P

= 0,031, McNemar test) (figur 1).

Den anden farve af kagen repræsenterer forskellige EGFR mutation heterogenitet. Den venstre tre dele (lyseblå, lilla og grøn) for hver cirkeldiagram repræsenterer procentdelen af ​​sager med EGFR heterogenitet.

Semikvantitativ analyse af exon 19 mutation af DHPLC

Vi har også målt semikvantitativt

EGFR

mutant overflod ved at beregne M /W peak højdeforhold fra DHPLC grafen. Vi begrænsede denne analyse til exon 19 udgår, da den tilsvarende M og W-toppe ikke overlapper under udenaturerede forhold (50 ° C) (figur 2). Medianen M /W forhold mellem exon 19 var 2,43 (interval, 0,40-18,15) blandt gruppe-M prøver og 0,12 (interval, 0,06-0,22) blandt gruppe-W prøver (

P

= 0,005). Under delvis denatureret betingelser (62,2 ° C), M og W toppe svarende til exon 21 substitution overlappede, udelukker enhver bestemmelse af deres relative højder.

Den venstre graf viste rutine EGFR mutation status detektion af DHPLC og tilsvarende bulk-væv. Den rigtige graf repræsenterer EGFR mutation heterogenitet ved mikrodissektion. De to ovennævnte paneler repræsenterer mutant EGFR i løs væv viste ren mutation og mutation med heterogenitet ved mikrodissektion hhv. Nedenstående to paneler repræsenterer wild EGFR i løs væv med ren vild type EGFR eller blandet med lav frekvens af mutation celler ved mikrodissektion.

EGFR kopi nummer

FISH-analyse blev udført på 85 tumorprøver at måle

EGFR

kopiere numre. Enogtredive tilfælde (36,5%) blev betragtet FISH-positive. Foreningen af ​​

EGFR

mutations heterogenitet som påvist ved ARMS med

EGFR

kopi nummer er beskrevet nedenfor. Blandt de 31 patienter med 100%

EGFR

-mutated celler (ingen heterogenitet), 71,0% (22/31) blev klassificeret som FISH-positive (høj polysomy eller genamplifikation). Derimod lave

EGFR

-mutated gruppe udviste ca. 13,3% FISH-positivitet (2/15, herunder 10 lavfrekvente mutant tilfælde i gruppe-W og 5 lavfrekvente mutant tilfælde i gruppe-M) , og den moderate

EGFR

-mutated gruppe vises ca. 22,2% (2/9) FISH positivitet (

P

0,05, figur 3 og 4), som svarede til det påvist i 30 patienter med vildtype

EGFR

fra hvem mikrodissektions foci blev analyseret ved hjælp af ARMS (5/30, 16,7%,

P

= 0,75).

De forskellige

EGFR

mutation indhold er afbildet i legenden.

Evaluering af EGFR-genet kopi nummer ved FISH blev udført ved hjælp af

EGFR

(orange) /CEP 7 (grøn) sonde (Beijing GP medicinsk Tec., LTD, Kina). Paneler illustrere tumor prøver, der repræsenterer genamplifikation (A) og disomi (B).

Heterogeneity af histologiske type og iscenesætte

Adenocarcinom var den mest almindelige histologiske mønster identificeret i denne undersøgelse (74,1 % af forsøgspersonerne); dette var forventet i en overvejende kirurgisk serie. Den positivitet af

EGFR

mutation i adenocarcinom, hvilket bekræftes af mikrodissektion analyse, var 91,8%. M /W-forholdet var 2,57 (interval, 0,13-18,15). Til sammenligning

EGFR

mutationshyppighed var lavere blandt andre histologiske mønstre (70,9%), og kun 3 sager foretaget

EGFR

19 mutation med M /W-forholdet 1,53. Baseret på UICC-AJCC-TNM tumor staging-system blev 50 tumorer klassificeret som fase IIIa og IIIb (lokalt avanceret) og 35 blev klassificeret som stadie IV (avanceret). Der blev ikke observeret nogen signifikante forskelle i mutationen positive sats og mængderne mellem lokalt avancerede og fremskredne stadier NSCLC (rente 87,7% vs. 86,3%,

P

= 0.875 M /W-forholdet, 2,12 vs. 2,86,

P

= 0,662).

Virkningen af ​​EGFR mutations heterogenitet på respons på EGFR-TKI’er

Blandt 85 sager, 26 patienter fik EGFR-TKI’er som første-linje eller multi- line behandlingsformer. 9 patienter udviste et partielt respons (PR), 7 havde stabil sygdom (SD), og 10 erfarne progressiv sygdom (PD). Ifølge ARMS resultater, var den gennemsnitlige mutant indhold 86,1% (247/287) i PR-gruppen, 48,7% (110/226) i SD-gruppen, og 6,0% (19/317) i PD-gruppen, og med en signifikant forskel (

P

= 0,001).

Vi delte 26 patienter i tre undergrupper efter EGFR mutation heterogene status, som var “ren vildtype EGFR”, “EGFR mutation med heterogenitet”, og “ren muteret EGFR”. Den PFS var 3,01 måneder (95% CI 0,51-5,52), 11,35 måneder (95% CI 6,37-15,21) og 16.21 måneder (95% CI 8,21-25,19) for de tre grupper, henholdsvis (P = 0,001).

diskussion

intratumoral

EGFR

mutation homogenitet længe har været antaget i lungekræft. Som sådan bestemmelse af en patients

EGFR

mutation status blev fortolket ved hjælp af kvalitative metoder. Men kun en brøkdel af patienterne huser

EGFR

mutationer reagerer på EGFR-TKI’er, tyder på, at andre faktorer ud over EGFR mutation bidrage til en patients medicin respons. Ud over flere relaterede biomarkører (

f.eks

., K-ras, T790M, C-met), intratumoral

EGFR

mutations heterogenitet er blevet foreslået som kandidat formidler af modstanden mod EGFR- TKI-terapi, selv om eksistensen af ​​en sådan heterogenitet er blevet anfægtet [15] – [17]. I den foreliggende undersøgelse, observerede vi signifikant intratumoral mutations heterogenitet ved hjælp af både DHPLC og arme metoder.

En af kontroverserne om intratumoral heterogenitet

EGFR

mutation er, om den heterogenitet attributter til at bruge en lav følsom påvisningsmetode, især når muteret signal er under tærsklen for detektion. For at udelukke muligheden, vi udnyttet to testmetoder, DHPLC og ARMS, at evaluere

EGFR

mutation status i mikrodissekeret intratumoral foci. ARMS er tænkt som en høj følsom analyse for

EGFR

mutation afsløring. Betragtninger DHPLC metode ikke har været meget anvendt til

EGFR

mutation analyse, men det er høj følsomhed og specificitet er blevet påvist i vores og andre undersøgelser (detektionsgrænse 3% ~ 10%) [19], [23] – [26]. Resultaterne viste den del af prøver fra lokalt avanceret og avanceret NSCLC præsenterede sameksistensen af ​​

EGFR

mutant og vildtypeceller uanset den DHPLC eller ARMS bliver brugt, hvilket tyder på, at den intratumoral

EGFR

muteret heterogenitet faktisk eksisterede og ikke stammer fra den skævhed af påvisningsmetoder eller lave intratumorale muterede frekvenser.

for bedre at karakterisere intratumoral heterogenitet

EGFR

, vi mikrodissekeres bulk-tumor væv for at opnå 28-34 foci pr tumor og analyseret hver fokus for

EGFR

mutation status ved hjælp af kvalitative og semi-kvantitative metoder. De fleste af de mikrodissektions foci blev identificeret som

EGFR

mutant-type med

EGFR

mutation indhold i området fra 1% til 100%. Teoretiske og eksperimentelle undersøgelser har rapporteret, at kræftceller fra samme genotype lokalisere sammenhængende [27]. Analyse af en lille prøve udskåret fra tumorvæv sandsynligvis ville indikere en genetisk identisk population af cancerceller. Men vores analyse af

EGFR

mutation statusser fra mange intratumorale foci angivet heterogenitet. Vi udelukkede ikke maligne websteder ved mikroskopisk visualisering, og hver microsampled prøve var cross-kontrolleret for at bekræfte, at procentdelen af ​​tumorvæv var mindst 90%, der sikrer, at Mikrodissekterede områder ikke var forurenet med ikke-cancerceller. , Vores data bekræftede således eksistensen af ​​intratumoral

EGFR

mutations heterogenitet.

Yatabe et al. (2011) [17] rapporterede, at heterogene fordelinger af

EGFR

mutationer i lunge adenocarcinom var yderst sjældne. Forfatterne foreslog, at tumoren heterogenitet rapporteret af andre var faktisk en pseudoheterogeneity følge af en mutant allel-specifik ubalance (MASI) eller fra uensartet fordelt

EGFR

amplifikation. Flere undersøgelser støttede forekomsten af ​​MASI i EGFR-muterede tumorceller, og dette fænomen er forbundet med forøget mutant allel transkriptionel aktivitet [28] – [30].

EGFR

mutationer, genkopital gevinster og MASI forekommende sammen i tumorceller tilsyneladende synergistisk at foretage en mere malign fænotype end disse ændringer enkeltvis [28] – [30]. Vi observerede en forhøjet

EGFR

kopi nummer blandt patienter med ren

EGFR

mutationer, hvilket tyder på, at en høj frekvens af

EGFR

mutationer forekommer hyppigt med en forhøjet

EGFR

kopi nummer (MASI). Men hos patienter viser intratumoral heterogenitet,

, EGFR

kopi nummer var lavere end hos patienter med ren

EGFR

mutant tumorer. Den mulige forklare er, at heterogene tumorer indeholdt ikke kun

EGFR

mutantceller men også vildtypeceller og selektiv amplifikation af mutante alleler kan fortyndes ved vildtype alleler, hvilket giver anledning til et relativt lavt

EGFR

kopi nummer.

Blandt bulk-tumorer huser vildtype

EGFR

, 10 af 40 sager udstillet langt lavere mutanthyppighed (5-8%) via mikrodissektion analyse i forhold til 45 patienter huser mutant

EGFR

. Denne såkaldte “falsk negativitet” målt fra bulk-væv kan på grund af manglende evne DHPLC at detektere spormængder af mutant DNA, når få mutantceller er indeholdt i en prøve. Vi har også semikvantitativt bestemt mutant overflod ved at beregne forholdet mellem tophøjder (M /W) fra DHPLC grafen. Ifølge vores oplysninger, median M /W-forholdet varierede fra 0,13 til 18,15 i

EGFR

mutant tilfælde og 0,06-0,22 i vild type sager, der tyder på, at kræftceller i bulk tumorvæv normalt indeholde mutant og ikke-mutante typer samtidig. Til vores viden, dette er den første undersøgelse at anvende M /W ratioen til semi-kvantitativt bestemme

EGFR

mutation status og udlede intratumoral heterogenitet.

Kun 26 patienter fik EGFR-TKI’er, som begrænsede den statistiske styrke af denne arm af undersøgelsen. Men vi registreret en markant højere mutation sats i foci fra PR og SD patienter sammenlignet med PD patienter. Disse resultater stemte overens med adskillige andre undersøgelser. Taniguchi et al [31] analyserede forholdet mellem

EGFR

heterogenitet og respons på EGFR-TKI’er ved mikrodissektion i den tidlige fase NSCLC tumorer, og rapporterede, at patienter med en større

EGFR

mutationshyppighed var mere følsomme over for EGFR-TKI’er og viste længere progressionsfri overlevelsesrater gange end patienter med lave

EGFR

mutationsrater. Vi spekuleret på, at hurtige tumorprogression kan forekomme i prøver med en lav procentdel af

EGFR

mutant celler, på grund af den kendsgerning, at apoptotiske

EGFR

mutant celler reagerer på EGFR-TKI var undertal prolifererende ikke-mutantceller. Baseret på denne spekulation, foreslår vi, at intratumoral heterogenitet kan være en vigtig faktor, der bidrager til EGFR-TKI modstand. Patient svar kan ved forbedret ved at administrere en kombination af EGFR-TKI-terapi og andre lægemidler i stand til at rydde ikke-

EGFR

mutant tumorceller i en samtidig eller sekventiel måde.

Alt i alt, vores resultater tyder at patienter med fremskreden lungecancer nærede markeret EGFR mutations heterogenitet. Den vigtigste kliniske betydning af EGFR mutations heterogenitet kan være i stand til at forklare resistensmekanisme af EGFR-TKI. Sekundært, intratumoral heterogenitet EGFR mutation indikerer også, at enkelt punkt eller eneste gang biopsi måske ikke optimal metode til at bestemme personlig EGFR-TKI-terapi. Kombinatorisk histologiske og genetiske metoder, der anvender oplysninger om overlevelse og respons profiler kan give bedre slutninger for effektiv forebyggelse og helbredelse sygdomme i fremtiden.

Tak

Vi takker Prof Keneng Chen i Department of Thoracic Surgery for at give delvis prøver, Dr. Ning Wang i Radiologisk afdeling for vurderinger af respons af behandlingen, Dr. Yu Sun i Patologisk Institut for hendes bidrag i analysen af ​​Peking University Cancer Hospital Institut. Vi takker Prof Chen Yao (Peking University Clinical Research Institute) og Dr.Guoshuang Feng (Chaoyang District Center for Disease Control og Forebyggelse) til statistisk analyse.