PLoS ONE: Distinct klinisk-patologisk mønstre i Uoverensstemmelse Repair status i Kolorektal Cancer Stratificeret af KRAS mutationer

Abstrakt

I sporadisk kolorektal cancer (CRC),

BRAF

V600E

mutation er forbundet med mangelfuld mismatch repair (MMR) status og omvendt associeret med til KRAS-mutationer. I modsætning til mangelfulde MMR (dMMR) CRC, data om forekomsten af ​​

KRAS

onkogene mutationer i dygtige MMR (pMMR) CRC og deres forhold til tumor progression er knappe. Vi undersøgte derfor MMR status i kombination med

KRAS

mutationer i 913 kinesiske patienter og korreleret resultaterne opnået med kliniske og patologiske funktioner. MFR status blev bestemt baseret på påvisning af MLH1, MSH2, MSH6 og PMS2 udtryk.

KRAS

mutation og dMMR status blev fundet i 36,9% og 7,5% af tilfældene, hhv. Fire undertyper blev bestemt ved MFR og

KRAS

mutation status:

KRAS

(+) /pMMR (34,0%),

KRAS

(+) /dMMR (2,9%) ,

KRAS

(-) /pMMR (58,5%) og

KRAS

(-) /dMMR (4,6%). En højere procentdel af pMMR tumorer med

KRAS

mutation var mest sandsynligt, at være kvinde (49,0%), proksimal placeret (45,5%), en mucinøs histologi (38,4%), og for at have øget lymfeknude metastaser (60.3 %), sammenlignet med pMMR tumorer uden

BRAF

V600E

og

KRAS

mutationer (36,0%, 29,3%, 29,4% og 50,7%, henholdsvis; alle

P

0,01). Tværtimod sammenlignet med dem med

KRAS

(-) /dMMR tumorer, patienter med

KRAS

(+) /dMMR tumorer viste ingen statistisk signifikante forskelle i køn, tumor placering, pT dybde af invasion, lymfeknudemetastase, pTNM stadium og histologiske. Denne undersøgelse viste, at specifikke epidemiologiske og clinicopathologic egenskaber er forbundet med MMR status stratificeret af

KRAS

mutation. Kendskab til MFR og

KRAS

mutation status kan forbedre molekylær patologiske iscenesættelse af CRC patienter og metastaserende progression i CRC kan estimeres baseret på kombinationen af ​​disse biomarkører

Henvisning:. Li W, Zhi W Zou S, Qiu T, Ling Y, Shan L, et al. (2015) Særskilte klinisk-patologisk mønstre i Uoverensstemmelse Repair status i Kolorektal Cancer stratificeret efter

KRAS

Mutationer. PLoS ONE 10 (6): e0128202. doi: 10,1371 /journal.pone.0128202

Academic Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPAN

Modtaget: Februar 3, 2015; Accepteret: April 24, 2015; Udgivet: 4 jun 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af en bevilling fra Youth Backbone program (til Jianming Ying) af Cancer Hospital, WEBCAMS, Beijing, Kina, Natural Basic Research program Kina (973 program 2014CB542002 ), og National Natural Science Foundation of China (81.401.984). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Kolorektal cancer (CRC) er en heterogen sygdom udvikler sig fra diverse genetiske veje og en nøjagtig vurdering af kræft baseret på tumor funktioner vil tillade personlig kræftbehandling [1,2,3]. I øjeblikket anatomiske og patologiske iscenesættelse er stadig den mest præcise indikator for udfaldet patient [4]. Opdagelsen og validering af genetiske markører, der bestemmer effektiviteten af ​​metastatisk progression af CRC er derfor et vigtigt forskningsområde, med den potentielle værdi af at definere den delmængde af patienterne på højeste eller laveste risiko for tilbagefald. En af de lovende molekylære markører undersøgt i CRC er tilstedeværelsen af ​​tumor mikrosatellit instabilitet (MSI) [5,6,7,8].

CRC opdeles generelt i to velkendte molekylære veje, herunder det kromosomale ustabilitet (CIN) pathway og mikrosatellit instabilitet (MSI) pathway. MSI er resultatet af mangelfuld DNA mismatch repair (dMMR) [9]. En kimlinie mutation i en af ​​MMR-gener, herunder

MLH1

,

MSH2

,

MSH6

eller

PMS2

, er årsagen til dMMR patienter med Lynch syndrom, som er en arvelig sygdom, der øger risikoen for at udvikle CRC [10,11]. Mangelfulde MMR er også observeret i 10% til 20% af patienter med sporadisk CRC, hvoraf størstedelen af ​​dMMR tumorer skyldes hypermethylering af

MLH1

gen promotor, med

MSH2

MSH6

regnskab for en mindre procentdel [5]. Sporadiske dMMR tumorer, men ikke Lynch-syndrom, ofte bære den aktiverende somatiske V600E mutation i exon 15 i

BRAF

onkogen [12,13,14]. Både sporadiske og Lynch syndrom-associerede tumorer med dMMR status har distinkte clinicopathologic funktioner, såsom privilegeret placering i den proksimale colon, fremtrædende lymfatisk infiltrat, mucinøs eller signetring differentiering, og sammen med en gunstig prognose. Data fra PETACC-3 spor rapporterede, at tumor prøver med dMMR status er mere almindelige i stadie II-sygdom end i fase III-sygdom (22%

vs

12%,

P

0,001) og med en procentdel på 3,5% i trin IV tumorer. Disse resultater indikerer, at dMMR tumorer har en nedsat sandsynlighed for at metastaserer og foreslå en gunstigere resultat [9,15].

Ras /Raf /MEK /ERK-kinase kaskade er involveret i kontrollen af ​​celleproliferation, celle overlevelse og invasion i CRC cancerceller [16].

KRAS

er muteret i 35% -40% CRC og mutation af

KRAS

protoonkogene er en tidlig begivenhed i udviklingen af ​​disse kræftformer, udøve en stærk indflydelse på væksten af ​​colon polypper og tidlige cancere [17,18]. Robust tyder den prædiktive værdi af

KRAS

mutation i metastatisk CRC behandlet med anti-EGFR målrettet terapi [19,20]. Men den kliniske betydning af

KRAS

mutation som prognostisk markør er kontroversiel. Nogle undersøgelser rapporterede ingen sammenhæng med overlevelse, mens andre foreslog, at patienter med

KRAS

muterede tumorer har dårligere resultat for enhver mutation undertype [21,22,23,24].

Foreningen af ​​MFR status,

KRAS

BRAF

mutationer på kliniske resultater er ofte dokumenteret. Men udviklingen af ​​et mere præcis forudsigelse om kliniske resultat ved hjælp biomarkør kombinationer stadig en værdig område undersøgelse. Endvidere i modsætning til dMMR CRC, data om forekomsten af ​​

KRAS

onkogene mutationer i dygtige MMR (pMMR) CRC og deres forhold til tumor progression er knappe. Formålet med denne undersøgelse var at evaluere den prognostiske rolle MMR status i kombination med

KRAS

mutationer i 913 kinesiske patienter og karakterisere de angivne undertyper med hensyn til clinicopathologic features.

Materialer og metoder

studiepopulation

Patienter med opereret, histologisk påvist CRC var støtteberettigede. De klinisk-patologiske optegnelser af 913 patienter med tilsvarende paraffinindlejrede materialer til rådighed for molekylær analyse blev retrospektivt indsamlet fra Patologisk Institut, Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing, Kina fra 2011 til 2013. En central patologi gennemgang blev udført. Stratificeringsfaktorer inkluderet: antal metastatiske regionale lymfeknuder (N1: 1-3

vs

N2: ≥4), histologisk bedømmelse (G1-2: godt /moderat differentieret

vs

G3: dårligt differentierede /udifferentierede), tumor diameter, pT klassificering, histologisk subtype, tumorplacering, tumorstørrelse samt pTNM fase. Det pTNM iscenesættelse system 7. udgave AJCC kræft iscenesættelse blev brugt. Evaluering af M etape var primært efter bekræftede patologiske resultater og /eller radiologiske data. Proximale tumorsted inkluderet cecum, opstigende, hepatisk bøjning og tværgående tyktarm; distalt sted inkluderet milt bøjning, faldende og sigmoid colon. Mucinøs differentiering i tumoren blev defineret ved tilstedeværelsen af ​​puljer af ekstracellulære mucinindeholdende klynger af carcinomatøse celler. Når 50% af analyserede tumor påvist mucinous differentiering, tumoren blev klassificeret som mucinøs carcinoma. Undersøgelsen blev godkendt af Institute Review Board of Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences. Hver deltager underskrevet en Institutional Review Board godkendte informeret samtykke i overensstemmelse med gældende retningslinjer.

KRAS

BRAF

V600E

mutation analyse

Vurdering af

KRAS

BRAF

V600E mutationsstatus blev udført i Molekylær Patologi Laboratoriet for Patologisk Institut, Cancer Hospital, WEBCAMS, hjælp kontrolprocedurer passende kvalitet. Mutation status blev bestemt under anvendelse af genomisk DNA ekstraheret fra macrodissected formalin-fikseret, paraffinindstøbt tumorvæv. Begge

KRAS

(codon 12 og 13) og

BRAF

(p.V600E) mutation blev udført ved hjælp af en multiplex allel-specifik PCR-baserede assay (ACCB, Beijing, Kina), sammen med Stratagene Mx3000P (Agilent Technologies Inc, Santa Clara, CA), som vurderer syv forskellige potentielle mutationer i

KRAS

codon 12 og 13 (

Gly12Ala

,

Gly12Asp

,

Gly12Arg

,

Gly12Cys

,

Gly12Ser

,

Gly12Val

, og

Gly13Asp

). Hverken

KRAS

eller

BRAF

V600E

muterede tumorer blev betegnet som vildtype

KRAS

undertype.

DNA mismatch repair proteiner udtryk

MMR protein (MLH1, PMS2, MSH2 og MSH6) udtryk blev udført som en rutinemæssig praksis i vores patologisk afdeling. Alle prøver blev farvet i en automatiske farvningsanordning (Autostainer Link 48, Dako, Danmark). Fire um tykke vævssnit blev afparaffineret i xylen, rehydreret i gradueret alkohol og vasket i destilleret vand. Klar-til-brug primære muse monoklonale antistoffer inkluderet MLH1 antistof (ES05, ​​Dako) og MSH2 antistof (FE11, Dako). Klar-til-brug primær kanin monoklonale antistoffer inkluderet MSH6 antistof (EP49, Dako) og PMS2 antistof (EP51, Dako). MMR proteintab blev defineret som fravær af nukleær farvning i tumorceller, men positiv kernefarvning i normale colon-epithelceller og lymfocytter. Tumorer blev udpeget som dMMR status hvis der blev detekteret tab af mindst ét ​​MMR protein og pMMR hvis alle proteiner var intakte.

MLH1

promotor methylering analyse

Alle DNA prøver var underkastet bisulfit modifikation under anvendelse af EZ DNA-methylering Kit (Zymo Research, CA, USA) ifølge producentens instruktioner. Et ug genomisk DNA fra hver prøve blev bisulfit konverterede og elueret i 18μl elueringspuffer. Methylering-specifik PCR (MSP) blev udført som tidligere beskrevet [25]. De anvendte primere til denne analyse var: 5′-AAT TAA TAG GAA GAG CGG ATA GC-3 ‘og 5′-CCT CCC TAA AAC GAC TAC TAC CCG-3’ for methylerede

MLH1

promotor og 5 ‘ -TGA ATT AAT AGG AAG AGT GGA TAG T-3 ‘og 5′-TCC CTC CCT AAA ACA ACT ACT ACC CA-3’ for umethyleret

MLH1

promotor. MSP PCR primer specificitet blev bekræftet som de ikke amplificere ikke-bisulfit-behandlet genomiske DNA-templates, og MSP produkter fra flere primære tumorer er blevet bekræftet af direkte sekventering med BigDye v3.1 (Applied Biosystems), hvilket indikerer, at vores MSP system er specifik.

Statistisk analyse

Det primære formål med denne undersøgelse var at identificere distinkte clinicopathologic træk forbundet med MMR status og

KRAS

mutation. Logistik regressionsmodeller blev anvendt til at påvise sammenslutninger af disse egenskaber med hver af de

KRAS

mutationer og MMR status. Kruskal-Wallis og χ

2 (eller Fishers eksakte test) blev anvendt til at sammenligne kontinuerlige og kategoriske variabler, henholdsvis. Univariate logistiske regressions modeller blev anvendt til yderligere at kategorisere og definere de endelige covariables anvendes til multivariabel analyse. Statistiske tests var to-sidet, og

P

værdier på 0,05 blev anset for signifikante. For multiple sammenligninger, Bonferroni-justeret

blev rapporteret P

værdier for forskellene mellem

KRAS

mutation og MMR status (α = 0.05 /6). Statistisk signifikante egenskaber baseret på univariate modeller blev derefter inkluderet i multivariable modeller ved hjælp trinvis og baglæns udvælgelsesprocedurer model. Odds ratio og deres konfidensintervaller 95% blev beregnet. Statistik blev udført under anvendelse af SPSS-software (version 16.0 af SPSS, Chicago, IL, USA).

Resultater

I alt de 913 sager blev evalueret ved immunhistokemi (IHC) for tilstedeværelse eller fravær af MLH1, MSH2, MSH6 og PMS2 proteinekspression. Af de 69 tilfælde (69/913, 7,5%) med dMMR, 49 havde et fravær af protein udtryk for MLH1 /PMS2, 9 for MSH2 /MSH6, 5 for MSH6 og 6 for PMS2 alene. For at distinkt Lynch-syndrom-relaterede CRC fra sporadiske MSI kræftformer, udførte vi

MLH1

promotor methylering undersøgelse. Blandt 49 tilfælde med et fravær af protein udtryk for MLH1 /PMS2, 32,6% (16/49) tilfælde havde

MLH1

promotor methylering. Af dem,

KRAS

mutationer i

MLH1

methylerede sporadiske MSI tumorer var 25% (4/16) og mutationsfrekvensen var meget lavere end for de samlede mutationer, 36,9% (337/913 ) (figur 1).

Patient og tumor karakteristika med hensyn til MMR status blev vist i tabel 1. den gennemsnitlige alder ved præsentation for dMMR tumorer var 53,3 ± 12,7 år, hvilket var yngre end af pMMR tumorer (

P

= 0,003). Samlet set blev tumorer med dMMR oftere placeret på den proksimale side af tyktarmen (72,4%

vs

18,9%,

P

0,0001) og var mere tilbøjelige til at blive dårligt differentieret (34,8 %

vs

18,0%,

P

0,001) sammenlignet med pMMR tumorer. Desuden blev tumorer med dMMR også signifikant associeret med mucinøs histologisk undertype (63,8%

vs

32,7%,

P

0,0001) og reduceret lymfeknude metastaser (39,1%

vs

54,6%,

P

= 0,01). Der var ingen statistisk signifikante forskelle i køn og pT scenen.

Mutationer i

KRAS

BRAF

V600E

var gensidigt eksklusiv. Der var 6 tilfælde med dMMR tumorer, nærede

BRAF

V600E

mutationer og disse sager blev udelukket fra analysen.

KRAS

mutationer i codon 12 og 13 blev observeret i 36,9% (337/913) af alle tumorer. En højere frekvens af

blev opdaget KRAS

mutationer i dMMR tumorer (27/69, 39,1%) sammenlignet med pMMR tumorer (310/844, 36,7%), selv om denne forskel ikke nåede statistisk signifikans. Af de 27 dMMR og

KRAS

-mutated tumorer, blev 16 sager, der er defineret med tab af MLH1 /PMS2, 7 med MSH2 /MSH6 og 4 med PMS2 alene.

Patient og tumor egenskaber med hensyn til både MFR og

KRAS

mutation status blev opsummeret i tabel 2. af de 913 tilfælde, hvor både MFR og

KRAS

mutation status blev defineret, 27 (2,9%) tilfælde med dMMR var

KRAS

(+) og 42 (4,6%) var

KRAS

(-), mens 310 (34,0%) tilfælde med pMMR var

KRAS

(+) og 534 (58,5%) var

KRAS

(-). Blandt disse fire grupper, blev der observeret signifikante forskelle for køn {

KRAS

(+) /dMMR tilfælde mere tilbøjelige til at være mand,

P

0,0001}, alder {

KRAS

(+) /dMMR mere tilbøjelige til at have en yngre alder ved diagnose af sygdom,

P

= 0,0001}, klasse {

KRAS

( -) /dMMR mere tilbøjelige til at have lavere kvalitet sygdom,

P

= 0,002}, tumor placering {

KRAS

(+) og

KRAS

(-) /dMMR sager mere tilbøjelige til at blive placeret i den proksimale colon,

P

0,0001} og lymfeknude metastaser {

KRAS

(+) /pMMR tilfælde mere tilbøjelige til at have højere pN etape,

P

= 0,004}. Imidlertid blev ingen forskelle i pT stadium blandt disse fire grupper

Når sammenlignet med dem med

KRAS

. (-) /PMMR tumorer, patienter med

KRAS

(+) /pMMR tumorer var mest sandsynligt, at være kvinde (49,0%

vs

36,0%, OR = 1,85; 95% CI = 1,39-2,46;

P

0,0001) , som skal proksimale placeret (45,5%

vs

29,3%, OR = 2,00; 95% CI = 1,30-3,08;

P

= 0,002), at have en mucinøs histologi (38,4%

vs

29,4%, OR = 1,50; 95% CI = 1,11-2,01;

P

= 0,007), og at have øget lymfeknude metastaser (60,3%

vs

50,7 %, OR = 1,48; 95% CI = 1,11-1,96;

P

= 0,007) (tabel 3). Tværtimod sammenlignet med dem med

KRAS

(-) /dMMR tumorer, patienter med

KRAS

(+) /dMMR tumorer viste ingen statistisk signifikante forskelle i køn, tumor placering, pT dybde af invasion, lymfeknudemetastase, pTNM stadium og histologiske. Men den gennemsnitlige alder ved præsentation for

KRAS

(+) /dMMR tumorer var 51.051.051.0 præsentation til s, n, end

KRAS

(-) /dMMR tumorer (

P

= 0,001).

i analysen ved hjælp af multivariable logistiske regressionsmodeller, vi revideret clinicopathologic karakteristika i tabel 4. Som vist multivariably, tumorer med

KRAS

(+ ) /pMMR statistisk forbundet med proximal placering, mucinøs histologi og øget lymfeknude metastaser.

diskussion

Definition tumor undertyper af CRC baseret på pathway-drevne ændringer har potentiale til at forbedre prognosticering og vejledning målrettet terapi. Tydelige kliniske og patologiske funktioner i CRC med forskellig MMR status har længe blevet identificeret [6,26,27,28]. I denne undersøgelse har vi demonstreret molekylære og klinisk-patologiske træk ved pMMR og dMMR tumorer stratificeret efter

KRAS

mutation status i en stor gruppe af konsekutive kinesiske CRC patienter. Dygtige MMR tumorer, der blev ikke-muteret til

KRAS

BRAF

V600E

var den mest udbredte undertype og udgjorde 58,5% (534/913) af vores undersøgelse kohorte . Sammenlignet med denne subtype, patienter med

KRAS

(+) /pMMR tumorer var mere almindelige i den proksimale colon og at have en mucinøs histologi. Vigtigst, patienter med

KRAS

(+) /pMMR tumorer viste øget lymfeknude metastaser blandt fire undertyper og kan have dårligere overlevelse.

I overensstemmelse med tidligere resultater, vores data tyder på, at tumorer med dMMR status ofte udviser dårlig differentiering, mucinous celletype, proksimal placering og reduceret lymfeknudemetastase. Ud over sin rolle i at identificere unikke patologiske funktioner i CRC har dMMR status også blevet brugt som en prognostisk markør og vejledning til fluoruracil adjuverende kemoterapi [8]. De seneste oplysninger viste, at CRC kan yderligere inddeles i fem præspecificerede undertyper ved hjælp af en biomarkør kombination af

KRAS

BRAF

V600E

mutationer, MMR status og

MLH1

methylering med statistisk signifikante forskelle i clinicopathologic funktioner og patient overlevelsesrater [29]. Således en biomarkør-baserede klassificeringen indeholder vigtige prognostisk information i CRC med konsekvenser for patientbehandlingen. Beviser fra andre rapporter støttede idéen om, at

KRAS

mutation og MMR status er genetiske markører, der opstår tidligt og forbliver biologisk relevant i alle faser af tumor progression [30,31]. Desuden

KRAS

mutationer findes i primære tumorer er bevaret i tilbagefald og metastaser. Derfor vi vurderet de præspecificerede tumor undertyper med hensyn til clinicopathologic funktioner i biomarkører kombinationer af

KRAS

mutationer og MFR-status.

Mangelfuld MFR kræftformer stammer typisk i den proksimale colon [15]. Som forventet, at langt størstedelen af ​​dMMR tumorer i denne undersøgelse (72,4%) var fra den proksimale colon og denne fordeling blev ikke påvirket af

KRAS

mutationer. Selv om de fleste af de pMMR tumorerne var sandsynligvis ikke vil blive proksimale placeret, er det interessant, at når pMMR tumorer stratificeret af

KRAS

mutationer,

KRAS

mutant tumorer (20,9% proksimale) var mere tilbøjelige til at være proksimalt i forhold til

KRAS

(-) /pMMR tumorer (14,7% proksimale). Traditionelt tyktarmskræft udviklet i den proksimale tarm ofte skabt et miljø, hvor CIMP (CpG Island Methylator Fænotype) er mere tilbøjelige til at opstå, og dette synergistisk med

BRAF

mutation at tillade progression af savtakkede polypper [32]. foreslog imidlertid nylige beviser, at

KRAS

mutationer kunne også findes i CIMP høj og CIMP lave tumorer, som ofte er blevet placeret i den proksimale colon [33]. Dette indikerede, at der var mere omfattende mekanismer bag placeringen af ​​tyktarmskræft og mutationsanalyser profiler. Mucinøs karcinom er diagnosticeret, når mindst 50% af tumoren omfatter sekretoriske mucin og er ofte forbundet med dMMR status og savtakket adenocarcinom [34]. Dette er i overensstemmelse med vores fund, at dMMR tumorer demonstrerede mere mucinøs differentiering end pMMR tumorer (63,8%

vs

32,7%). når stratificeret efter

KRAS

mutation status, vi bemærkede dog, at pMMR tumorer med mutant

KRAS

fænotype udviste mere mucinøs differentiering end vildtype

KRAS

undertype (38,4%

vs

29,4%). Dette er i høj grad, fordi

KRAS

mutation er ikke kun knyttet til konventionelle adenomer, men også forbundet med savtakkede adenomer i udviklingen af ​​tyktarmskræft [35].

En signifikant sammenhæng blev fundet mellem tilstedeværelsen af lymfeknude metastaser og pMMR tumorer stratificeret af

KRAS

mutation status. Vores resultater viste, at pMMR tumorer med

KRAS

mutation viste flere positive lymfeknuder og pTNM III-IV stadium af sygdommen end tumorer med

KRAS

(-) /pMMR status. Dette stemmer overens med resultaterne fra en mindre rapport, som viste, at frekvensen af ​​

KRAS

mutationer var højere i pMMR lymfeknude positive tumorer i forhold til pMMR lymfeknude negative tumorer [36,37]. Vores resultater viser, at størstedelen af ​​pMMR tumorer nødvendige

KRAS

mutation at kunne metastaserer og denne aktivering var afgørende for neoplastiske celler at erhverve invasive potentiale. Mutationer i

KRAS

onkogen føre til ændringer i kodede aminosyrer støder op til GTP bindende lomme og reduceret GTPase aktivitet

KRAS

protein efter guanin nukleotid aktiverende protein (GAP) bindende [38]. Begge

in vitro

in vivo

forsøgsmodeller, transfektion af muterede, konstitutivt aktive former af

KRAS

onkogen i tidligere noncancerous celler kan føre til invasive og metastatiske fænotyper. Ektopisk udtryk for aktiv

KRAS

i murine NIH 3T3 fibroblast cellelinje resulterede i øget invasion og erhvervelse af metastatiske egenskaber [39]. Brug haleveneinjektion af transformerede celler,

in vivo

modeller blev observeret af lever- og lunge metastase [40]. Ud over den dokumentation fra celle- og dyreforsøg har kliniske undersøgelser også vist betydelig lymfeknude metastaser i

KRAS

(+) /pMMR tumorer [36,41]. Genekspression profilering afslører, at gener involoving epitelial mesenkymale overgang og matrix remodellering, der kan lette tumor invasion og metastase er opreguleret i mutant

KRAS

-pMMR tumorer [42]. Derfor

KRAS

onkogen aktivering viste sig at være en vigtig mediator af tumor celle invasion og metastase i pMMR tumorer.

Hyppigheden af ​​

KRAS

mutationer i Lynch-syndrom-relaterede CRC og sporadisk CRC er næsten den samme. Men

KRAS

mutationer er betydeligt hyppigere i Lynch-syndrom-relaterede CRC end i sporadiske MSI-H CRC’er [37,43]. Lynch-syndrom-relaterede CRC tendens til at være tidlig debut og proksimale placering. Så dette kan forklare den yngre alder og proksimale placering observeret i

KRAS

+ /MSI tumorer. På trods af disse positive resultater, vores undersøgelse har nogle begrænsninger. For det første fordi det er et retrospektivt studere, er det svært at opsamle prøven blod eller spyt fra patienter til at opdage germline mutationer til yderligere skelne Lynch-syndrom-relaterede CRC fra sporadisk cancer. Så vi kunne ikke beregne den nøjagtige hyppighed af

KRAS

mutationer i arvelige CRC’er, men det er sikker på, at Lynch-syndrom-relaterede CRC i vores undersøgelse viste fortrinsvis

KRAS

mutationer. For det andet, vi ikke undersøge andre mindre almindelige mutationer i

KRAS

codon 61, 117 og 146, hvilket også bidrog til den onkogene transformation af tumorceller.

Denne undersøgelse tyder på, at specifikke epidemiologiske og clinicopathologic egenskaber er forbundet med MMR status stratificeret af

KRAS

mutation i CRC. Kendskab til MFR og

KRAS

mutation status kan forbedre molekylær patologiske iscenesættelse af CRC patienter og metastatisk progression kan også estimeres baseret på kombinationen af ​​disse biomarkører. Validering af yderligere genetiske biomarkører vil bidrage til at forfine beslutninger for individuelle patienter baseret på tumor biologi management. Vigtigt er det, kan det også bidrage til udviklingen af ​​nye terapeutiske mål at hjælpe behandlingen af ​​disse aggressive kræftformer.

Tak

Vi takker alle undersøgelsens deltagere i Patologisk Institut for deres bidrag til dette projekt. Dette arbejde blev støttet af en bevilling fra Youth Backbone Program (til Jianming Ying) af Cancer Hospital, WEBCAMS, Beijing, Kina, Natural Basic Research Program Kina (973 program 2014CB542002) og National Natural Science Foundation of China (81.401.984).