PLoS ONE: prognostiske værdi af diske Large Homolog 7 transkriptniveauer i Prostata Cancer

Abstrakt

Hypoxi er blevet forbundet med malign progression, metastaser og modstandsdygtighed over for terapi. Derfor studerede vi udtryk for hypoxi-regulerede gener i 100 prostatakræft (CaP) bulk-væv og 71 tilstødende godartede væv. Vi fandt 24 transkripter signifikant overudtrykte (p≤0.02). Vigtigere, højere transcript niveauer af disken store (Drosophila) homolog-associeret protein 5 (DLGAP5) /diske stor homolog 7 (DLG7) /hepatom opreguleret protein (HURP), hyaluronan-medieret motilitet receptor (HMMR) og cyclin B1 (CCNB1 ) var forbundet med højere Gleason score og mere avancerede systemisk progression. Da produkter af HMMR og CCNB1 er blevet identificeret for nylig som molekylære markører for CaP progression, vi postulerede, at DLG7 har prognostisk værdi også. For at teste denne hypotese, vi målte transkriptniveauer for DLG7 i en 150-pair case-control kohorte. De sager (progression til systemisk sygdom inden seks år efter kirurgi) og kontroller (ingen progression inden for otte år) blev matchet til kliniske og patologiske prognostiske variabler, herunder kvalitet, scene, og præoperative serumniveauer af PSA. Den samlede prognostiske evne DLG7, som testes i modtageren driftskarakteristik analyse var på 0,74 (95% konfidensinterval; 0,68 til 0,8). Samlet set vores data viser, at ekspressionen af ​​DLG7, en hypoxi-kontrolleret gen, holder prognostisk potentiale i højrisiko CaP; Dette viser også, at variation af ilt spændinger kan udgøre et værktøj til identifikation af nye biomarkører for CaP

Henvisning:. Gomez CR, Kosari F, Munz J-M, Schreiber CA, Knutson GJ, Ida CM, et al. (2013) prognostiske værdi Discs Stor Homolog 7 transkriptniveauer i prostatakræft. PLoS ONE 8 (12): e82833. doi: 10,1371 /journal.pone.0082833

Redaktør: Sharon A. Glynn, National University of Ireland Galway, Irland

Modtaget: Maj 20, 2013; Accepteret: 29 oktober 2013; Udgivet: 9. december 2013 |

Copyright: © 2013 Gomez et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af DOD PC094680 (CRG), PCF Kreativitet Award (CRG), Minnesota partnerskab for bioteknologi og Medicinsk Genomics (GV), og Mayo Clinic Prostata SPORE 5P50CA091956 (FK). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

rolle ilt spænding (

potentia oxygenii

,

s

O

2) i tumor biologi har været unappreciated længe; en grund til det har været den relative oxygen-uafhængighed af tumorer ( “Warburg-effekten”,. ref [1]), der førte til den antagelse af tumor ufølsomhed over for ændringer i oxygenspænding. For nylig er tumorassocieret hypoksi blevet associeret med malign progression, metastase, modstandsdygtighed over for terapi, og dårlig klinisk resultat [2,3]. I lighed med andre solide tumorer,

s

O

2 i prostatakræft (CaP) svinger, der giver anledning til akut og kronisk hypoxi [4]. Nogle hævder, at lave

s

O

2 er en uafhængig indikator for dårlig klinisk resultat af Cap patienter [5], men

s

O

2 værdier målt i CaP nidus ikke altid hænger sammen med kliniske resultater [4] tyder behovet for mere relevante hypoxi-associerede biomarkører for aggressiv CaP.

i øjeblikket anvendte markører, der forudsiger udfaldet hos mænd med CaP omfatter Gleason score, TNM stadie, kirurgisk margen status, og præoperative serumniveauer af prostata-specifikt antigen (PSA) [6-8]. Ud fra følgende betragtninger stratificering efter disse variabler ofte effektivt forudsiger forløbet af sygdommen, kan tumorer med lignende biokemiske, histopatologiske og kliniske tilstande stadig opfører sig meget forskelligt. For nylig, transkriptom studier af CaP identificeret flere gener forbundet med udfaldet sygdom. Blandt dem, ekspression af hypoxi-regulerede molekyler [dvs. vaskulær endotel vækstfaktor (VEGF), hypoxi-inducerbar faktor (HIF) -1, osteopontin, lysyloxidase (LOX) og glucosetransporter-1 (GLUT-1)] korrelerede med patologiske status og patient funktioner (anmeldt i ref [4].). Disse undersøgelser viser muligheden for at identificere biomarkører forbinder CaP, hypoxi og prognose og oprettelse bidrag hypoxi-associerede gener til cap progression. Identifikation af hypoxi-relaterede biomarkører kan hjælpe med at identificere de patienter, der kunne drage fordel af hypoxi-målrettede behandlinger [4]. Her rapporterer vi studiet af transskription af gener, der tidligere fundet under hypoxi kontrol, i Cap-patienter. Vores data viser, at hypoxi-følsomme gener har en prognostisk værdi i høj risiko CaP og at variation af ilt spændinger kan udgøre et værktøj til yderligere identifikation af biomarkører for CaP.

Materialer og metoder

Prostatakræft transkriptom

Alle undersøgelser i denne rapport blev godkendt af Mayo Clinic Board Institutional Review. Generelt er vi fulgt vores tidligere beskrevne metode [9]. Kort fortalt brugte vi frosne væv til at studere transkriptomet i cancer celler isoleret ved hjælp af laser-capture mikrodissektion (LCM) eller uden isolering ( “bulk-væv”). Prøver blev opnået fra ikke-neoplastisk prostatavæv, primær prostatacancer, og prostatakræft metastaser. Detaljer for frosset prøvetagning, præservering, sektionering, hematoxylin og eosin-farvning, patologisk vurdering, LCM, analyse af RNA integritet, og lineær amplifikation er blevet offentliggjort tidligere [10]. Vi opnåede og analyseret transkriptomet af 102 LCM-isoleret prostatakræft celleprøver; 19 prøver af ikke-neoplastisk prostata epitel støder op til tumor; 10 prøver af benign prostatahyperplasi (BPH); og fem prøver af høj kvalitet prostata intraepitelialneoplasi (HGPIN). Tumorprøver inkluderet Gleason mønster (GP) 3 celler fra 28 Gleason score (GS) (3 + 3) patienter og tre GS (3 + 4) patienter; GP4-celler fra 10 GS (4 + 4) patienter, 4 GS (4 + 3) patienter og 6 GS (4 + 5) patienter; og GP5 celler fra 5 GS (5 + 5) patienter og 5 GS (5 + 4) patienter. Tumor prøver omfattede også syv CaP metastaser fra lymfeknuder. Expression profiler af bulk-prøver (n = 37) blev opnået fra højrisikopatienter med GS7 og højere; disse tumorer var uafhængige af dem udsættes for celle isolering ved LCM. Prøverne omfattede tumorer fra 18 patienter, hvis sygdom skred systemisk, og som døde i mindre end seks år efter operationen (aggressiv sygdom) og 19 patienter, som overlevede mere end otte år efter operation (ikke-aggressiv sygdom). Resultatet Sygdom blev ikke afsløret for forskere på denne undersøgelse inden afslutningen af ​​eksperimenter og indgåelse af alle analyser.

Probe sæt udtryk værdier blev opnået fra de rå microarray data (.cel filer) ved hjælp af gcrma pakke i R Project til Statistisk Computing (https://www.r-project.org/). For yderligere analyse valgte vi sonderne overudtrykt dobbelt eller mere i CaP over betyder ekspressionsniveauerne i ikke-neoplastisk prostata væv og BPH væv, både i løs vægt og i LCM-isolerede celler.

Case-kontrol matchning af mænd med

prostatakræft højrisiko

Et hundrede halvtreds mænd, hvis CaP systemisk skred (SP, dokumenteret ved biopsi eller radiografisk bevis på metastaser), eller som døde med metastatisk CaP inden seks år efter prostatektomi blev identificeret i Mayo Clinic Radical prostatektomi database for årene 1994 til 2004. Vævsprøver for de patienter blev arkiveret; beviser på biomarkør opdagelse og validering projekter for denne studiegruppe er tidligere blevet publiceret af os [9,11,12]. Et edb-system [7] matches disse patienter med 150 kontrol mænd, hvis sygdom ikke forværredes, og som ikke dø for mindst otte års opfølgning; matchende kriterier inkluderet Gleason score, TNM stadie, status margin, præoperativ PSA, og GPSM score (tabel 1). Multivariat analyse, der omfattede DLG7 og nogen af ​​de kliniske parametre ikke føje til nøjagtigheden af ​​modellen i forhold til en model, der omfattede DLG7 alene. Prøver blev blindet for klinisk status og revideret af J.C.C., et bord-certificeret patolog. Af de i alt 300 prøver blev 141 SP prøver og 117 kontrolprøver udvalgt af patologiske kriterier og af, at de gav tilstrækkeligt væv af højeste Gleason mønster for eksperimentel analyse. For SP patienter median opfølgning fra radikal prostatektomi til progression eller sidste opfølgning var 2,4 år; for kontrolpatienter median opfølgning var 13,2 år.

styrer

Sager

p-værdi

†

Patologisk Gleason score (GS) 0.77GS542GS654GS76182GS82317GS93738GS1012TNM stage0.46T2aN0129T2bN02721T3aN02033T3b4N03454TxN + 2928Margin status0.540455518690Preoperative serum PSA0.67mean (interval) ng /ML19 0,0 (0,9 – 119) 20,1 (1,3 – 143) GPSM0.56mean (interval) 11,5 (6,0-16,0) 11,7 (6,0-16,0). tabel 1. Kliniske parameterværdier i tilfælde og kontroller

† p -værdier henvises til sammenligning af cases og kontroller. CSV Hent CSV

RNA ekstraktion og real-time PCR for case-kontrol undersøgelse

Hematoxylin og eosin-farvede tumor sektioner opnået fra formalin-fikseret paraffinindlejrede blokke blev blindet med hensyn til, om de tilhørte SP prøver eller kontrolprøver; sektionerne blev gennemgået af patologer C.M.I. og J.C.C. der er tildelt den primære og sekundære, men ikke tertiære Gleason mønstre. Blokken tildelt den højeste score for primær eller sekundær Gleason mønster og indeholder den mest tumorvæv af dette mønster blev udvalgt til yderligere analyse. Hver blok blev skåret i 10 um tykke snit. Tumorvæv blev afparaffiniseret i xylen og skrabet fra slide under RNase-fri betingelser i et 1,5-ml rør indeholdende fordøjelse buffer (RECOVERALL kit, Ambion, Carlsbad, CA). Detaljer om RNA ekstraktion fra paraffinblokke og kvalitetskontrol er blevet offentliggjort tidligere [9]. Totalt RNA blev isoleret ifølge RECOVERALL procedure og behandles med DNase hjælp Ambion Turbo DNA-free kit ifølge producentens anvisninger. RNA blev kvantificeret med Quant-iT RiboGreen kit (Invitrogen, Carlsbad, CA). Kvantitativ PCR blev anvendt som rapporteret tidligere [11] for at vurdere transkriptniveauer for skiverne store homolog 7 (DLG7) [også kendt disk store (Drosophila) homolog-associeret protein 5 eller hepatom opreguleret protein], hyaluronan-medieret motilitet receptor (HMMR) og cyclin B1 (CCNB1). Vi omvendt transkriberet 500 ng RNA i 40-pi reaktionsvolumen ved anvendelse af Superscript III First Strand Synthesis System (Invitrogen). Primere til kvantitativ PCR blev designet ved anvendelse af Primer Express software (Applied Biosciences, Carlsbad, CA) for at amplificere en 70 bp til 85 bp fragment svarer til det mål sekvens på Affymetrix microarray. Forskelle i tærskel cyklus, Δ (

Ct

), blev opnået ved at trække

Ct Drømmeholdet værdi af normaliserende genet fra

Ct Drømmeholdet værdi af testen gen af ​​det samme revers transkriptionsreaktion. Den normaliserende gen, 40S ribosomale protein S28 (RPS28), blev valgt tidligere som den mest stabilt udtrykt i alle normale og Cap prøver [12]. Niveauer af DLG7 og RSP28 udskrifter i 22 aggressive og 32 ikke-aggressive tumorer blev ikke bestemmes på grund af utilstrækkelig RNA kvalitet.

Statistiske metoder

Vi analyserede data med R-pakken (https://www.r-project.org/). Udlodning af kliniske og patologiske parametre blev sammenlignet med de χ

2 og

t

tests. Modtager drift karakteristik (ROC) kurve områder blev anslået til kliniske og patologiske parametre for alle patienter. Standard fejl middelværdien for områder under kurverne blev beregnet af rang korrelation for censurerede data (rcorr.cens) test.

Resultater

Hypoxi-kontrollerede udskrifter er forbundet med sygdom scene og prognose

Fordi CaP vises kendetegnet ved en hypoxisk transkriptom [13-15], vi hypotese, at hypoxi-regulerede gener vil give yderligere indsigt i mekanismerne i CaP progression. Vi testede denne hypotese ved supplerende data mining [16]. Vi analyserede de 88 hidtil kendte udskrifter reguleret af hypoxi-inducerbare faktor 1 (HIF-1) [17]; 500 hypoxi-associerede gener identificeret i cellelinier [17]; 23 gener af det konserverede kerne hypoxi signatur [18]; tolv HIF-1 mål testet i CaP [13]; og 708 gener i den opfindsomhed hypoxi signalvejen [19]. Blandt alle hypoksi-regulerede gener, i vores prøver vi identificeret 24 gener væsentligt overudtrykt i CaP med mindst to

både

i bulk væv og LCM-isolerede celler (

s

≤0.02; Tabel 2 ). Vigtigere, transcript niveauer for DLG7, CCNB1, og HMMR var højere i prøver karakteriseret ved højere Gleason score og hos patienter med dårligere prognose (figur 1). Vi beskrev prognosen for patienterne i denne undersøgelse tidligere [9].

Bulk væv

LCM

Symbol

Navn

CaP /N log

2-forhold

p-værdi

CaP /N log

2 forholdet

p-værdi

ACACAacetyl-coenzym A-carboxylase alpha1.501.20.002123CDCA3cell division cyklus-associeret protein 31.701.50CEP55centrosomal protein 55kDa1.801.40CCNB1cyclin B11. 801.30CKS2cyclin-afhængige kinaser regulatoriske subunit 21.10.0000431.20.000001DLGAP5discs stor homolog 7 (DLG7) 1.801.50SLC7A1high affinitet kationiske aminosyre transporteren 11.601.20.000023HMMRhyaluronan-medieret motilitet receptor2.101.70HIG2hypoxia-inducerbart protein 21.501.20.000001LOXlysyl oxidase1.10.0000441.50MMP10matrix metalloproteinase -10 1.20.0215211.40.000066MCOLN2mucolipin 2 (kation kanal protein) 1.10.0003321.40NLNneurolysin (metallopeptidase M3 familie) 1.201.20.000012PDLIM5PDZ og LIM domæne 5 (Stillads protein) 1.101.20.000121PSD3pleckstrin og Sec7 domæne, der indeholder 31.10.0000011.20C20orf74Ral GTPase-aktiverende protein subunit alfa-21.301.20.000092FAM80Aribosomal modifikation protein rimK-lignende familie A1.701.20.000013SDK1sidekick homolog 1, celleadhæsion molecule1.501.50STC2stanniocalcin-2 (udskilt) 1.20.0090531.30.000059SOX4transcription faktor SOX-41.201.20.000001TMEM200Atransmembrane protein 200A1.301.30. 000886TFF3trefoil faktor 3 (tarm, stabil sekretorisk protein) 1.20.0018891.20.001276UBE2Cubiquitin-konjugerende enzym E2 C1.401.20UBE2E3ubiquitin-konjugerende enzym E2 E3 1.801.30.000079Table 2. Hypoxi-associerede gener væsentligt overudtrykt i CaP bulk-væv og prøver isoleret af LCM.

Forkortelser: CaP, prostatakræft; N, normal; LCM, laser capture microdissection CSV Hent CSV

Blandt de hypoxi-regulerede gener væsentligt overudtrykt i CaP, cyklin B1 (CCNB1), DLGAP5 og hyaluronan-medieret motilitet receptor (HMMR) var forbundet med Gleason score og resultater sygdom.

Figur 2 viser udskriften niveauer for CCNB1, DLGAP5, og HMMR gener på forskellige sygdomsområder stadier. Både i tumorvæv og LCM-isolerede celler, transkriptniveauer var højere i CaP end i normalt væv. Også blev disse udskrifter til udtryk på betydeligt højere niveauer i celler isoleret fra Cap væv på stadier GP4 og GP5 end i GP3 stadie, hvilket tyder på en forening med tumor progression. Desuden udskrifter niveauer var højere i metastaser fra patienter, der udviklet sig til døden, hvilket tyder på en forening med udfald sygdom (se metoder) (Figur 2).

Paneler til venstre sammenligne transkriptniveauer i CaP bulk-væv (fuld symboler ) med de niveauer, der måles i benign prostata væv (åbne symboler) fra mænd fri for CaP (BP) og i godartet prostata væv (BPC) støder op til CaP af kombineret Gleason score 6 (gs6). Paneler på de rigtige display transkriptniveauer målt i ikke-neoplastiske prostata epitelceller isoleret ved laser capture mikrodissektion (LCM) i godartede væv (åbne symboler): BP, benign prostatahyperplasi (BPH) og BPC støder op til CaP af den angivne Gleason score ( gs). Fuld symboler i paneler på højre betegne transkriptniveauer målt i LCM-isolerede CaP celler: high-grade prostata intraepitelialneoplasi (HGPIN), de celler isoleret fra områder med kombineret Gleason score 6 til 8 og celler isoleret fra lymfeknudemetastaser (opfyldt) . CCNB1, cyclin B1; DLG7, skiver store homolog 7; HMMR, hyaluronan-medieret motilitet receptor.

De produkter, CCNB1 [20] og HMMR gener [16] er for nylig blevet identificeret som molekylære markører for CaP progression. Derfor vi postulerede den potentielle anvendelighed af hypoxi-associerede gener CAP biomarkører med prognostisk værdi. For at granske denne idé, vi korreleret de DLG7 transkriptniveauer med dem af DNA topoisomerase 2α (TOP2A), et gen, hvis udskrifter er af prognostisk betydning i CaP [21], især i form af høj risiko [11]. Vi fandt en høj korrelation mellem niveauerne af de to udskrifter (Pearson koefficient = 0,816). Den afslørende af denne forening fik os til at hypotesen, at DLG7 udskrifter selvstændigt kunne forudsige udfaldet sygdom hos mænd med høj risiko CaP.

DLG7 udskrifter som potentielt en selvstændig indikator for CaP udfald

Vi undersøgte foreningen af DLG7 udskrift med systemisk progression og død ved CaP i en 150 par case-kontrol kohorte [11]. De sager og kontroller var nært beslægtet i kliniske og patologiske træk med undtagelse af DNA ploidi [11]. Af ROC-analyse fandt vi arealet under kurven (AUC) for DLG7 på 0,74 (95% konfidensinterval; 0,68 til 0,8); for HMMR på 0,67 (95% CI, 0,60-0,74); og for CCNB1of 0,64 (95% CI, 0,57-0,71). ROC scorer for DLG7 demonstrerer den overordnede adskillelse af sager og kontroller (Figur 3). Konkluderer vi derfor, at DLG7 transkriptniveauer forudsige udfaldet sygdom hos mænd med høj risiko fra CaP. Desuden fandt vi, at udskrift niveauer af hypoxi-kontrollerede gener CCNB1 og HMMR-tidligere identificeret som molekylære markører for CaP progressionsfri var forbundet med Gleason score og sygdom prognose så godt.

Arealet under kurven var 0,74 (95% CI, 068 til 0,80). Indsat: Scatter plot af de normaliserede udtryk værdierne for tilfælde (rød) og kontroller (grøn)

Diskussion

Gene ekspressionsmønstre er blevet brugt som et redskab til at identificere prognostiske markører for. CaP [22-26]. Tidligere har vi og andre bevist den prognostiske værdi af udvalgte udskrifter for mænd, der gennemgår radikal prostatektomi [9,11,12,27]. I denne meddelelse viser vi, at udskrifter af DLGAP5, en hypoxi-associeret gen [17], har en prognostisk værdi i højrisiko-CaP.

Selvom kvantificere

s

O

2 i CaP væv

in situ

er på et indledende stadium [4,28], har hypoxi været en uafhængig indikator for dårligt resultat [5] i forbindelse med kliniske og patologiske variabler [28]. Vigtigere er transcript niveauer af hypoksi-responsive molekyler [dvs. VEGF, HIF-1α, osteopontin, LOX og GLUT-1] positivt korreleret med patologi og aggressivitet (gennemgået af Stewart et al., Ref [4].). Disse undersøgelser viser muligheden for at identificere biomarkører forbinder hypoxi og prognose i CaP og oprettelse bidrag hypoxi-associerede gener til Cap progression.

På grund af den tilsyneladende sammenslutning af den hypoxisk transkriptom og CaP [13-15], vi antog, at hypoxi-associerede gener kunne give yderligere indsigt i mekanismerne i CaP progression. Ved data mining identificerede vi hypoxi-associerede gener med udtryk væsentligt ændret i CaP, både i bulk væv og CaP væv isoleret af LCM. Af disse gener, fandt vi, at transkriptniveauer af DLGAP5, CCNB1, og HMMR blev associeret med Gleason score og systemisk progression. Bemærkelsesværdigt, blev sammenhængen mellem transskription og resultatet sygdommen ikke er konstateret for andre hypoxi-kontrollerede gener tidligere rapporterede som potentielle prognostiske biomarkører (Lox, ref [13] .; tabel 1), hvilket tyder på potentiale udskrifter for DLG7, CCNB1 og HMMR som hypoxi -regulated biomarkører specifikke for CaP.

da produkter fra CCNB1 og HMMR gener er blevet tidligere var forbundet med transformerede celler og foreslået som markører for dårlig prognose for mange maligniteter [29-33] herunder CaP [16,20 ], fokuserede vi på DLGAP5. Den DLGAP5 genet koder for et celle-cyklus-reguleret, mikrotubulus-associeret protein kendt som DLG7, DAP-5 eller HURP [34] der fungerer som en Ran GTPase effektor involveret i stabiliseringen af ​​det mitotiske kinetochore fiber [35]. I hepatocellulært carcinom [36], meningeom [37] og adrenocorticale tumorer [38] niveauerne af udskrifter koder DLG7 steget med sygdom aggressivitet. Disse udskrifter blev påvist i lever og colon tumorer, men ikke i normale tilstødende væv tyder en sammenslutning af DLG7 og carcinogenese [39,40]. Imidlertid er oplysninger om DLG7 i urologiske sygdomme og især i CaP begrænset [34]. I en undersøgelse blev påvist transkripter for DLG7 i næsten 90 procent af overgangs- cellecarcinom (TCC) i blæren, men ikke i benigne urologiske sygdomme; et højt transkripter for DLG7 blev fundet i tilbagevendende TCC [41].

På baggrund af oplysninger, der tyder DLG7 som prognostisk markør, vi udforskede sit potentiale som resultat prædiktor i højrisiko-CaP. Derfor har vi analyseret korrelationen af ​​transkriptniveauer til DLG7 og TOP2A fordi den prognostiske værdi af TOP2A i CaP er veldokumenteret [21,26,42]. Især rapporterede vi, at TOP2A udskrifter [11] og protein produkt [12] var prognostiske af høj risiko CaP. Vi fandt, at transkriptniveauer for DLG7 og TOP2A var stærkt korreleret og foreslå, at DLGAP5 gentranskription bør yderligere undersøgt for dens potentiale som indikator for udfaldet i høj risiko CaP. Notatet har overekspression af udskrifter til TOP2A og DLG7 nylig blevet identificeret i grad III meningeom i forhold til lønklasse jeg meningeom [37]. Denne information tilføjer værdi til forestillingen om, at co-ekspression af TOP2A og DLG7 er relevant i tumorigenese og bør undersøges nærmere i jagten på biomarkører for fremskreden sygdom.

For at give mulighed for at teste den prognostiske værdi af DLG7 i høj risiko CaP i sammenhæng med andre prognostiske udskrifter, vi undersøgte patienter, vi undersøgt tidligere [9,11,12]. Mænd, der gjorde, og gjorde ikke systemisk fremskridt eller dø af CaP blev matchet på Gleason score, TNM stadie, status margin, og præoperativ serum PSA. AUC for DLG7 var 0,74 (95% konfidensinterval; 0,68 til 0,8). Interessant AUC for DLG7 svarede til værdien rapporteret for TOP2A alene (0,71; ref [11].). ROC for HMMR [0,67 (95% CI, 0,60-0,74)] og CCNB1 [0,64 (95% CI, 0,57-0,71)] afslørede lavere AUC-værdier for disse gener end for DLG7. Derfor har vi ikke inkluderer HMMR og CCNB1 i en prognostisk cancer model. Ikke desto mindre, når der sammenlignes med HMMR og CCNB1, DLG7 udstillet en højere AUC tyder en overlegen prognostisk værdi for højrisiko-CaP.

Biologi af DLGAP5 genet er kompatibel med inddragelse i formation kræft og progression og foreslår, at gen og dets produkt være potentielle terapeutiske mål. DLGAP5 transkription stiger i S-fasen og holdes ved både G2-fase og M-fasen af ​​cellens cyklus [43]. DLG7 lokaliserer på spindel poler under mitose [34], hyperstabilizes mitosespindelen og aktiverer spindel checkpoint, dermed udøve kontrol på spindel stabilitet i hele cellecyklus [44]. De seneste data i æggestokkene cancerceller viser, at DLG7 er en direkte downstream mål for Notch 3 [45]. Denne information tilføjer Notch vej til de molekylære signalsystemer netværk kontrollerer DLG7 udtryk og giver en ny avenue værd at forfølge, når udforske mulighederne for terapeutisk målretning af DLG7. Når overudtrykkes i 293T-celler, DLG7 forøget cellevækst ved lave serumniveauer og øget kolonidannelse [34]. Lignende resultater blev fundet i NIH3T3 embryonale fibroblaster overudtrykker DLG7 [46]. For nylig er det blevet foreslået, at DLG7 er oncogen ved sin virkning, at niveauerne af tumor suppressor p53 protein [47]. Overekspression af DLG7 i NIH3T3 celler forbedret modtagelighed for deoxycytosin analoger [46]; derfor, udforske målretningen af ​​DLG7 (fx ved at gribe ind med de mekanismer, der styrer DLG7, som dem påvirkes af aurora-A kinase eller Notch) kunne forbedre effektiviteten af ​​kemoterapeutiske midler i kastrationsresistent CaP. Disse observationer støtter rolle DLG7 i kræft progression og foreslå det som en potentiel terapeutisk target værdig yderligere forskning.

Selvom rolle hypoxi i DLG7 udtryk ikke er påvist direkte, det er blevet udledt af konstateringen at DLG7 er et hak 3 mål i æggestokkene cancerceller [45]. Det er blevet påvist, at hypoksi kontrol transkription af Notch mål i neuroendokrine differentiering af humane CaP-celler [48]; dette indebærer muligheden for Notch signalering i hypoxi-medieret styring af DLG7 udtryk i CaP og dens rolle i manifestationen af ​​tumor aggressivitet. For at lede efter den potentielle mekanistiske grundlag af DLG7 følsomhed over for hypoxi, vi søgte promotorområdet af DLG7 for bindingssteder af transskription faktor HIF. Brug af offentliggjorte oplysninger om den minimale

cis

reguleringsmyndigheder elementer, der kræves for HIF-afhængig transaktivering [49,50] vi fundet fem formodede HIF bindingssteder ligger 1134, 2498, 2616, 3815, og 8310 nt opstrøms for DLG7 transskription start, henholdsvis (CRG og AEK, upubliceret data). De fleste af disse steder er beliggende i et stærkt methyleret region; da promotor methylering regulerer ekspressionen af ​​hypoxi-kontrollerede gener i en kontekst-afhængig måde [50], virkningerne af ilt spænding på ekspressionen af ​​DLG7 fortjener mere undersøgelse.

Vores resultater validerer udskrifter af DLGAP5, en

s

O

2-reguleret gen [17], som en uafhængig prognostisk biomarkør i CaP. Dens potentielle anvendelser omfatter forbedring af de nuværende prognostiske værktøjer til CaP og bedre prædiktorer for terapeutisk resultat. Beviset for væsentlig følsomhed Cap celler til hypoxi kan føre til øget effektivitet af behandlingen ikke kun for CaP, men det kan også tjene som et paradigme for andre former for kræft.

Tak

Vi tak Drs. Lucio Miele og Mohamed Hassan til kritisk læsning af manuskriptet.