PLoS ONE: En delpopulation af cirkulerende endotelceller Express CD109 og er beriget i Blood of Cancer Patients

Abstrakt

Baggrund

endotel er ikke en homogen orgel. Endotelcelle heterogenitet er blevet beskrevet på niveau med cellemorfologi, funktion, genekspression, og antigen sammensætning. Som følge af den genetiske, transkriptom og omgivende miljø mangfoldighed, har endotelceller fra forskellige kar differentierede funktioner og fænotype. Påvisning af cirkulerende endotelceller (de central- og østeuropæiske) ved flowcytometri er en tilgang meget udbredt i kræftpatienter og deres antal, levedygtighed og kinetisk er et lovende redskab at stratificere patient, der modtager anti-angiogenetisk behandling.

Metode /vigtigste resultater

i øjeblikket central- og østeuropæiske lande er identificeret som positive for en nuklear bindende antigen (DNA +), negativ for pan leukocyt markør CD45 den, og positive for CD31 og CD146. Efter en tilgang nylig valideret i vores laboratorium, undersøgte vi udtryk for CD109 på central- og østeuropæiske lande fra det perifere blod fra raske underlagt og kræftpatienter. Den endotel karakter af disse celler blev valideret ved RT-PCR for tilstedeværelsen af ​​m-RNA niveau af CDH5 (Ve-cadherin) og CLDN5 (Claudin5), to endotheliale specifikke transkripter. Før behandling blev signifikant højere niveauer af CD109 + central- og østeuropæiske lande og levedygtig CD109 + CØE fundet i brystkræftpatienter og glioblastom patienter sammenlignet med raske kontrolpersoner, og deres antal faldt markant efter behandling. Højere niveauer af endotheliale specifikke transkripter udtrykt i udviklingen endotelceller CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, blev observeret i sorteret CD109 + centraleuropæiske lande sammenlignet med sorterede CD146 + CØE, hvilket antyder, at disse gener kan spille en vigtig rolle, ikke kun under embryogenese, men også i voksen angiogenese. Interessant, mRNA-niveauer af TEM8 (identificeret som Antrax Toxin receptor1, Antrax1) blev udtrykt i CD109 + CØE + men ikke i CD146 + centraleuropæiske lande.

Konklusion

Samlet vores resultater tyder på, at CD109 repræsenterer en sjælden population af cirkulerende tumorendotelceller, der spiller en potentielt nyttig prognostisk rolle hos patienter med glioblastom. Rolle CD109 ekspressionen i kræft fartøj-specifikke endotelceller fortjener at blive yderligere undersøgt af genekspression studier

Henvisning:. Mancuso P, Calleri A, Gregato G, Labanca V, Quarna J, Antoniotti P, et al . (2014) en subpopulation af Cirkulerende endotelceller Express CD109 og er beriget i blodet hos kræftpatienter. PLoS ONE 9 (12): e114713. doi: 10,1371 /journal.pone.0114713

Redaktør: Lu-Gang Yu, University of Liverpool, England

Modtaget: May 5, 2014 Accepteret: November 13, 2014; Udgivet: 15 December, 2014

Copyright: © 2014 Mancuso et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data og supplerende oplysninger stammer fra flow-cytometri filer og molekylær biologi studie er inden papiret

Finansiering:. Støttet delvist af AIRC (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), Fondazione Umberto Veronesi, og Ministero della Salute. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Angiogenese spiller en afgørende rolle i tumorvækst og progression [1] – [3], og baseret på den teori, at målretning af endothelceller kan være en mere effektiv strategi end at målrette tumorceller, i det seneste årti mange anti -angiogenic lægemidler er blevet introduceret til det kliniske miljø [4] – [8].

for at vurdere cirkulerende biomarkører for angiogenese, der kan forudsige resultatet til antiangiogeniske behandlinger i kræftpatienter, mange tilgange er blevet afprøvet i både prækliniske og kliniske undersøgelser [9] – [11], og blandt disse kvantificering af cirkulerende endotelceller (de central- og østeuropæiske) ved flowcytometri har fundet bred anvendelse [12] – [14].

CØE er modne endotelceller frigivet fra skibe under fysiologisk endotel omsætning eller, hos kræftpatienter, fra tumorvaskulaturen, hvor de sandsynligvis afspejler endotel skader eller dysfunktion. Disse celler er steget i kræftpatienter i forhold til raske forsøgspersoner, og ændringer i antal og levedygtighed har vist prædiktiv, prognostisk, dynamisk eller flygte biomarkør værdi [15] – [18].

endotel er ikke en homogen orgel. Endotelcelle heterogenitet er blevet beskrevet på niveau med cellemorfologi, funktion, genekspression, og antigen sammensætning [19]. Som følge af den genetiske, transkriptom og omgivende miljø mangfoldighed, har endotelceller fra forskellige kar differentierede funktioner og fænotype [20] -. [24], [35]

Currently endoteliale markører anvendt til at identificere CØE er CD34, CD31 og CD146 i kombination med CD45, at udelukke leukocytter, og en nuklear farvning markør (ligesom Syto16, Hoechst eller DRAQ5) for at eliminere optælling af ikke-cellulære endotel mikropartikler [14], [25] – [26].

CD109-genet koder for et glycosyl-phosphatidylinositolanchored glycoprotein, der er medlem af alfa (2) makroglobulin /C3, C4, C5 familie af thioester-holdige proteiner [27]. CD109 interagerer direkte med type I transformerende vækstfaktor -beta (TGF-β) signalering receptor og negativt modulerer TGF-β signalering [28]. Det er udtrykt på en subpopulation af CD34 + celler [29], på aktiverede blodplader og aktiverede T-celler [30] og på en subpopulation af endotelceller [31]. Interessant nok er det blevet rapporteret, at CD109 er en af ​​12 endoteliale markører overudtrykt i tumorendotelceller [23], [24]. For at få et mere indgående forståelse af CEC fænotype, undersøgte vi ekspressionen af ​​CD109 på dyrkede endothelceller og på CØE fra det perifere blod fra raske underlagt og kræftpatienter. Vi anvendte en flowcytometri tilgang valideret i vores laboratorium, og endotel arten af ​​disse celler blev valideret ved RT-PCR og genekspression.

Materialer og metoder Salg

etiske retningslinjer

Alle patienter gav skriftligt informeret samtykke før inklusion i den terapeutiske protokol og til forskning formål. Alle kliniske undersøgelse blev gennemført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-deklarationen

For brystkræftpatienter: Forsøget blev udført på Det Europæiske Institut for Onkologi, Milano, Italien og godkendt af “IRCCS – Istituto Europeo. di Oncologia e Centro Cardiologico Monzino “Etik Udvalg og registreret i instituttets database (# 2007-006025-27)

for glioblastoma patienter:. forsøget blev udført ved Neurologisk Institute” Carlo Besta “i Milano, Italien og godkendt af “Regione Lombardia sezione Fondazione IRCCS Istituto Neurologico Besta” Etik Udvalg og registreret i instituttets database (# 1/08).

Påvisning af CD109 på endotel kolonier

for at validere ved flow-cytometri ekspressionen af ​​CD109 på endotelceller in vitro endotheliale kolonier blev opnået fra perifert blod (PB) af 10 raske donorer (7 kvindelige, 3 mænd) og 23 cancerpatienter som tidligere beskrevet [32].

Kort fortalt, mononukleære celler (MNC) blev isoleret fra PB anvendelse af Ficoll-Paque-gradient centrifugering, resuspenderet i EGM2 medium (Lonza, Walkersville, MD) og podes på collagen i petriskåle (35 mm, BioCoat, BD Labware, Bedford, MA) . Kulturer blev inkuberet ved 37 ° C, 5% CO2, 95% relativ fugtighed i 3-4 uger. Mediet blev udskiftet hver 2. dag i 7 dage og derefter to gange om ugen, indtil første passage, og kultur overvåges til påvisning af endotheliale kolonier på grundlag af morfologiske træk, som tidligere beskrevet [32]. Efter 15-20 dage blev celler fritliggende med trypsin /EDTA (Gibco, BRL, UK) og farvet med monoklonale antistoffer (MoAb’er) anti CD31-PeCy7, CD34-APC, CD45-H7, og 7-AAD (alle fra Beckman Coulter) CD146-Pe (Chemicon), VEGFR-2 PE (R . D) og CD109-Pe (Abcam) til flowcytometri studier

Sortering af CD109 + og CD146 + celler fra perifert blod

for at udføre en microarray analyse for gener udtrykt i cirkulerende endotelceller positive for CD109 (CD109 + central- og østeuropæiske lande) og CEC positiv for CD146 (CD146 + central- og østeuropæiske lande), en tre laser Tilstrømning højhastigheds cellesorteringsapparat (BD) blev anvendt.

Kort beskrevet i to forskellige eksperimenter, 150 ml blod fra 8 raske forsøgspersoner blev opsamlet og efter MNCs isolation med Ficoll- gradient blev celler udtømt for hvide blodlegemer under anvendelse af anti-CD45 antistof koblet med magnet MACS mikroperler (Miltenyi Biotech) ifølge producentens instruktioner. Celler blev farvet for Syto16, CD45, CD31 og CD109 og i det andet eksperiment for Syto16, CD45, CD31 og CD146.

Under sortering procedure, prøver kontinuerligt afkølet til 4 ° C, og en forward scatter puls højde og side scatter analyser blev udført for at udelukke celle klynger og dubletter. En tovejs cellesortering procedure blev udført med A140 um dyse med en 5,5 PSI tryk, og med en begivenheder på 1.000-1.500 hændelser per sekund, ved anvendelse af en slags ren tilstand. Sorteringsanlægget gate blev malet på Syto16 + CD45-CD31 + CD109 + celler og på Syto16 + CD45-CD31 + CD146 + celler. Prøver blev opsamlet i sterile polypropylenrør indeholdende RPMI og anvendt til molekylær analyse. Renhed var altid større end 95% med et opsving på 70-80%.

RT-PCR og genekspression analyse af sorteret CD109 + de central- og østeuropæiske celler og CD146 + central- og østeuropæiske lande

RNA isolering af sorterede CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD146 + CØE, blev udført under anvendelse ArcturusPicoPureRNA Isolation kit, og cDNA blev frembragt fra den totale mængde RNA ved anvendelse af de høj kapacitet cDNA revers transkription kit (Applied Biosystems). Kvantitativ realtids-PCR (QRT-PCR) blev udført efter forudgående amplifikation af cDNA (TaqManPreAmp Master Mix Kit) med en ABI Prism 7000 platform ved hjælp TaqMan Gene Expression Assay for CDH5 (Ve-Cadherin), CLDN5, (Claudin 5) VWF (Von Willebrand Factor), CD34, VCAM-1, CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, ARAP3, TEM8 (ANTRAX1 receptor) [33].

Karakterisering af CD109 + CEC og CD146 + CEC fænotype

for at karakterisere CD109 + CEC og CD146 + CEC fænotype, en kombination af 10 monoklonale antistoffer blev anvendt (SYTO 16 FITC, CD146 PE, 7-AAD, CD31 PeCy7, CD34 ECD, CD13 APC, CD90 APC-AF700, CD117 APC-AF750, CD45 Pacific Blue og CD109 Pacific Orange). CD90 og CD 117 blev købt af Beckman Coulter.

Unlabeled CD109 (Abcam) blev konjugeret med pacific orange, ved hjælp af Zenon

R Kit mærkning teknologier (Life Technologies), i overensstemmelse med producentens anvisninger.

CD34, CD90 og CD117 ekspressionen blev evalueret på DNA + (Syto16 +) CD45-CD31 + CD109 + og på DNA + (Syto16 +) CD45-CD31 + CD146 + celler.

for at bekræfte ved flowcytometri endotel natur CD109 + CØE og CD146 + central- og østeuropæiske lande brugte vi Ulex europeaus lektin og Ac-LDL FITC up tage.

for Ac-LDL FITC up tage, vi samlet 5 ml blod fra 5 forskellige brystkræftpatienter, og efter multinationale selskaber isolation med Ficoll-gradient, blev celler inkuberet med Ac-LDL FITC ifølge producentens instruktion (10 ug /ml i 4 timer ved 37 ° C). Efter Ac-LDL inkubering vi farvede celler med Syto16, CD45, CD31 og CD109 at undersøge tilstedeværelsen af ​​AcLDL + CD109 + celler blandt CD45-Syto16 + (kerneholdige) CD31 + celler. blev udført fem forskellige eksperimenter.

Påvisning af CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD146 + central- og østeuropæiske lande i raske forsøgspersoner og kræftpatienter

Efter et flow-cytometri protokol valideret i vores laboratorium for CEC detektion (fig. 1), [ref 14], at antallet og levedygtighed CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD146 + central- og østeuropæiske lande blev evalueret i det perifere blod hos 50 raske forsøgspersoner og 200 kræftpatienter (66 metastatisk brystkræft og 134 glioblastom patienter).

Fluorescens Minus One for hver fluorescens rapporteres.

Kort fortalt blev kernefarvning Syto16 anvendt til at skelne mellem DNA indeholdende celler, blodplader og cellerester, og 7AAD at bestemme status cellernes levedygtighed. Panelet af MoAbs brug indgår anti-CD45 (for at udelukke hæmatopoietiske celler), anti-CD31 (en endotelcelle differentieringsmarkør), anti-CD34 (som endotel og progenitorceller markør) og anti-CD109 eller anti-CD146.

efter inkubation på 2,5 × 10

6 af total celler med MoAbs (4 ° C i 20 minutter) og celler lysis med ammoniumchlorid (NH

4CL), mindst 2 × 10

6 totale celler blev erhvervet ved flow-cytometer (FACS-Canto, BD fra 2007 til 2010 og Navios, Beckman Coulter, fra 2010 til februar 2013). Analyse blev udført på celler positive for Syto16 (DNA) der er negative for CD45, og positive for CD31 og CD109 eller for CD31 og CD146.

Kombinationen af ​​Syto16 og 7AAD blev anvendt til at evaluere CEC levedygtighed ifølge van der Pol et al. [34]. Nekrotiske celler blev identificeret som Syto16 lav /7AAD positiv, apoptotiske celler som Syto16 lav /7AAD negative og levedygtige celler som Syto16 lyse /7AAD negativt.

Statistisk analyse

Kontinuerlige variabler er rapporteret som middelværdier ± SEM. To-vejs ANOVA, eller to-halet Students t-test blev anvendt efter behov. Statistisk signifikans blev taget på p. 0,05

Resultater

Endotheliale kolonier fænotype

Perifert blod MNC (30 × 10

6 celler belagte) genereret endotel kolonier fra 9 af 10 raske forsøgspersoner og fra 14 ud af 23 patienter. Alle endotel kolonier var positive for CD31, CD146, CD34 og VEGFR-2 og negativ for CD45.

Endotheliale kolonier fra alle raske personer og fra 10 kræftpatienter blev også evalueret for CD109-ekspression. CD109 blev udtrykt på 1/9 endotel kulturer fra sund emne (11%) og på 5/10 (50%) endotel kulturer fra kræftpatienter.

RT-PCR af sorterede CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD146 + central- og østeuropæiske lande

Klap ændringer i ned-eller op-regulerede gener udtrykkes sammenligne cDNA fra CD109 + centraleuropæiske lande til CD146 + central- og østeuropæiske lande som reference- celler (fig. 2).

Klap ændringer i ned-eller op-regulerede gener er udtrykt sammenligne cDNA fra CD109 + til CD146 + -celler som referenceceller. For at sikre biologisk reproducerbarhed blev blod for cDNA kollektion fås fra 8 forskellige donorer.

I begge CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD146 + central- og østeuropæiske lande bekræftede vi udtryk for mRNA niveau af CDH5 (Ve-Cadherin) og CLDN5 (Claudin V), to endotheliale specifikke transkripter, hvilket tyder på, at begge celler er beslægtede og af endotel art [23] – [24]. Samme resultater blev opnået for mRNA niveauer af vWF, VCAM1 og CD34.

Højere niveauer af endotheliale specifikke transkripter udtrykt i udviklingen endotelceller [33] CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, blev observeret i sorteret CD109 + CØE når sammenlignet med sorteres CD146 + centraleuropæiske lande.

Interessant nok blev mRNA-niveauer af TEM8 (identificeret som Antrax Toxin receptor1, Antrax1), udtrykt kun i CD109 + CØE + men ikke i CD146 + centraleuropæiske lande.

CD109 + og CD146 + CEC fænotype

Som vist i fig. 3, blandt Syto16 + 7-AAD-CD31 + CD45- celler, opdaget vi to forskellige befolkning i central- og østeuropæiske lande, som er en positiv for CD109 + men negative for CD146, og én positiv for CD146, men negative for CD109. Både CD146 + central- og østeuropæiske lande og CD109 + central- og østeuropæiske lande var negative for CD90 og CD117, for at bekræfte disse celler sandsynligvis differentierede celler og ikke stamceller. CD34 var positiv på 30% af CD146 + central- og østeuropæiske lande og på 20% af CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD13 var positiv på 50% og 60% af CD146 + central- og østeuropæiske lande og CD109 + central- og østeuropæiske lande henholdsvis bekræfter disse celler aktiveres celler af angiogene vaskulatur [44].

efter udelukkelse af affald (A) og udvælgelse af CD45- (B), nukleeret (Syto16 +) og CD31 + celler (C), CEC blev identificeret som positive for CD109 eller CD146 (E). (D): negativ kontrol. CD109 + CØE og CD146 + CØE blev vurderet ved flowcytometri til ekspression af CD34, CD117, CD90 og CD13.

Både CD146 + CØE og CD109 + CØE var positive for Ulex europeaus lectin (fig. 4 A-B1). At udelukke epitel- celler kontaminering, farvede vi nukleeret (Syto16 +) CD45- celler for EpCAM, og selv om en subpopulation af EpCAM + -celler er til stede, er disse celler negative for CD31-ekspression (fig. 4 C-C1).

EpCAM farvning (4C-C1) bekræftede, at epitelceller selv hvis til stede i DNA + CD45- celle rum, er negative for ekspression af CD31 kun til stede på endotelceller.

for at undersøge CD109 + central- og østeuropæiske lande funktion, udførte vi Ac-LDL-optagelse. Som Ac-LDL optages af makrofager /monocytter, brugte vi disse celler som “intern positiv kontrol” for at bekræfte endocytose aktivitet. Som rapporteret i fig. 5, blandt Ac-LDL + -celler både CD45 + CD31 + CD14 + (monocytter) og CD45-CD31 + CD109 + (endotelceller) blev påvist.

Efter dublets (A) og debris (B) udelukkelse, Ac-LDL + celler blev påvist (C). Blandt disse celler, blev detekteret CD45 + CD31 + og CD45-CD31 + celler (D). CD45 + CD31 + var også positive for CD14 (monocytter, E) og CD45-CD31 + var også positive for CD109 + (endotelceller, F). Ac-LDL + celler blev nukleeret (Syto16 +, F). C1, D1, E1 og F1 er negative kontroller.

Påvisning af CD109 + CØE i raske forsøgspersoner og kræftpatienter

Patienter egenskaber er rapporteret i tabel 1.

Markant højere niveauer af CD109 + central- og østeuropæiske lande, CD146 + central- og østeuropæiske lande levedygtig CD109 + central- og østeuropæiske lande og levedygtig CD146 + central- og østeuropæiske lande (P = 0,0001) blev fundet ved baseline i brystkræftpatienter og glioblastom patienter sammenlignet med raske kontroller (tabel 2). CD109 + central- og østeuropæiske lande var 26 ± 20 /mL i en sund emne (n = 50), 62 ± 43 /mL i metastatiske brystkræftpatienter (n = 66, p 0,0001) og 101 ± 84 /mL i glioblastom patienter (n = 134 , p 0,0001) før behandling. Fraktionen af ​​apoptotiske /nekrotiske CD109 + central- og østeuropæiske lande var 71 ± 18% i raske personer, 51 ± 18% i brystkræftpatienter og 60 ± 21 i glioblastom patienter.

Efter behandling CD109 + central- og østeuropæiske lande og levedygtig CD109 + central- og østeuropæiske lande var 52 ± 42 /mL og 15 ± 20 /mL henholdsvis hos brystkræftpatienter, og 64 ± 60 /mL og 35 ± 30 /mL i glioblastom patienter (tabel 3).

CD146 + central- og østeuropæiske lande var 43 ± 23 /ml i en sund emne (n = 50), 103 ± 83 /mL i brystkræftpatienter (n = 64, p 0,0001) og 117 ± 87 i glioblastom patienter (n = 134, s 0,0001).

Den fraktion af apoptotiske /nekrotiske CD146 + central- og østeuropæiske lande var 67 ± 20% i raske personer, 62 ± 20% i brystkræftpatienter og 66 ± 18 /mL i glioblastom patienter før behandling.

Efter behandling CD146 + central- og østeuropæiske lande og levedygtige CD146 + CØE var 96 ± 121 /ml og 41 ± 88 /mL henholdsvis hos brystkræftpatienter, og 78 ± 84 /mL og 23 ± 31 /mL i glioblastom patienter (tabel 3) .

Discussion

endotelcelle heterogenitet er blevet beskrevet på niveau med cellemorfologi, funktion, genekspression, og antigen sammensætning. Fordi blodkar i hele legemet, er de endothelceller udsættes for et enormt udvalg af væv mikromiljøer, og den brede vifte af signalindgange er tilstrækkelig til at frembringe fænotypisk heterogenitet tværs af vaskulære træ [19], [21], [35] .

Påvisning af cirkulerende endotelceller ved flowcytometri er en tilgang meget udbredt i kræftpatienter, og identifikation af nummeret, levedygtighed og kinetisk af endotelceller er et lovende redskab at stratificere patient, der modtager antiangiogen behandling [ ,,,0],15] – [18]

i øjeblikket er central- og østeuropæiske lande optælles ved en multiparametric flow-cytometri tilgang, der kombinerer CD146, CD31, CD45, en nuklear bindende antigen (Syto16, Dapi eller HOECST) sammen med en levedygtighed cellulær farvning (. like 7-AAD eller Annexin V).

CD109 er et glycosylphosphatidylinositol-forankret celleoverfladeglykoprotein og er en af ​​12 endotel markører overudtrykt i tumor endotelceller [23], [24].

i dette arbejde, efter en tilgang nylig valideret i vores laboratorium [14], vi sorteret CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD146 + central- og østeuropæiske lande, og vi bekræftet ved RT-PCR, både befolkning udtryk for mRNA niveau af CDH5 (Ve-Cadherin) og CLDN5 (Claudin5) to gener udtrykkes selektivt i endotelceller. Højere niveauer af CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, Gpr116 udtrykt i udviklingen endotelceller [33], var til stede i CD109 + centraleuropæiske lande sammenlignet med CD146 + CØE, antyder, at disse gener kan spille en vigtig rolle ikke kun at udvikle endotelceller, men også i voksen angiogenese.

Vi viste, at CD109 + CØE og CD146 + CØE er to forskellige subpopulation af endotelceller, idet disse to antigener udtrykkes ikke på de samme celler, mens CD34 (en markør for øjeblikket anvendes til at identificere stamceller) var positiv på 20% af CD109 + central- og østeuropæiske lande og på 30% af CD146 + central- og østeuropæiske lande.

Vi evaluerede antallet, levedygtighed og kinetisk af CD109 + central- og østeuropæiske lande og CD146 + central- og østeuropæiske lande og observeret, at både delpopulation af endothelceller er beriget i blodet hos glioblastom og brystkræftpatienter, er mere levedygtige i forhold til værdi observeret hos raske emne, og deres antal falde markant efter behandling.

i vores tidligere erfaringer, vi rapporterede, at i patienter med brystkræft behandlet med metronomisk kemoterapi, blev CD146 + CEC niveauer efter to måneders behandling i forbindelse med længerevarende PFS [15]. I et andet klinisk forsøg i brystkræftpatienter behandlet med metronomisk kemoterapi og bevacizumab blev baseline CEC niveauer også forbundet med PFS [36], [37] bekræfter, at kvantificering af CD146 + central- og østeuropæiske lande er nyttigt at identificere patienter, som kan drage fordel antiangiogeniske behandlinger [ ,,,0],38].

i en serie af patienter med glioblastom behandlet med AZD2171, en pan-VEGF-receptortyrosinkinase-inhibitor, fandt Batchelor at levedygtige CEC niveauer var højere hos patienter som oplevede sygdomsprogression under AZD2171 behandlingen sammenlignet med patienter uden progression på dag 112 [39].

Vi har for nylig rapporteret [40], der i glioblastom patienter behandlet med bevacizumab og irinotecan eller med bevacizumab alene, PFS og OS blev øget væsentligt hos patienter med baseline tællinger af CD109 + CØE højere end 41,1 /ml, (1stquartile), mens ingen prognostisk faktor blev forbundet til CD146 + centraleuropæiske lande.

Disse data antyder, at CEC heterogenitet kan afspejle vaskulær tumor kompleksitet og at CD109 + centraleuropæiske lande kan være et potentielt nyttigt prognostisk markør for glioblastom patienter.

Det er blevet rapporteret, at CD109 er overudtrykt i tumorvaskulatur [24], og i denne undersøgelse observerede vi, at alle endotelceller kolonier fra raske personer og fra 10 kræftpatienter var positive for CD31, CD146, CD34 og VEGFR-2 og negativ for CD45, mens CD109 var positiv på 1/9 endotel kulturer fra sund emne (11%) og 5/10 (50%) endotel kulturer fra kræftpatienter.

Desuden m -RNA niveau af TEM8, et celleoverfladeglycoprotein identificeret som Anthrax Toxin Receptor 1, var detekterbar i CD109 + CØE men ikke i CD146 + centraleuropæiske lande. Det er blevet rapporteret, at TEM8 er opreguleret i tumorkar [41], [42]. I TEM8 Knockout mus fysiologiske angiogenese og sårheling opstår normalt, men i tumor bærende mus, er tumorvækst forringet, der viser, at TEM8 kan være nødvendigt for at fremme tumor angiogenese, men ikke normal udvikling [43].

Tilsammen disse resultater antyder, at CD109 kan repræsentere en sjælden population af cirkulerende tumorendotelceller, der spiller en potentielt nyttig prognostisk rolle hos patienter med glioblastom. Rolle CD109 ekspressionen i kræft fartøj-specifikke endotelceller fortjener at blive yderligere undersøgt af genekspressionsstudier.

Konklusioner

Der er et stigende behov i at identificere cirkulerende biologisk markør for at stratificere patienter, der kan fordel for antiangiogen behandling. I dette arbejde rapporterer vi, at CD109 er en potentiel nyttig prognostisk markør i glioblastom patienter, og at dets rolle i cancer angiogenese skal undersøges i forskellige tumor indstilling.

Tak

Støttet delvist af AIRC, (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), Fondazione Umberto Veronesi, og Ministero della Salute.