PLoS ONE: Gradvis telomer afkortning og øge Kromosomal ustabilitet blandt Panin kvaliteter og Normal Ductal epitheler med og uden kræft i bugspytkirtlen

Abstrakte

En stor mængde beviser understøtter en central rolle for telomer dysfunktion i carcinogenese på grund af induktion af kromosomale ustabilitet. At studere telomer afkortning i forstadier læsioner i bugspytkirtlen, vi målte telomer længder ved hjælp af kvantitativ fluorescens

in situ

hybridisering i den normale pancreas kanalen epitel, pancreas intraepithelial neoplasi (PanINs) og kræft. De anvendte materialer inkluderet kirurgisk resektion pancreas enheder uden cancer (n = 33) og med invasiv duktal carcinom (n = 36), samt kontrol obduktion tilfælde (n = 150). I sammenligning med normale kanaler blev telomerlængde faldt i Panin-1, -2 og -3 og cancer. Desuden telomerer var kortere i kræft end i Panin-1 og -2. Telomer længde i kræft var ikke forbundet med histologiske type, læsion placering eller kræft scene. PanINs med eller uden kræft viste lignende telomer længder. Forekomsten af ​​atypiske mitose og anafase broer, som er morfologiske karakteristika kromosomal ustabilitet, var negativt korreleret med telomer længde. De telomerer i normal kanal epitel blev kortere med aldring, og dem i PanINs eller kræft var kortere end i alders-matchede kontroller, hvilket tyder på, at telomer afkortning sker, selv når histologiske forandringer er fraværende. Vores data tyder på, at telomer afkortning sker i de tidlige stadier af pancreas carcinogenese og skrider med præcancer udvikling. Telomer afkortning og kromosomal ustabilitet i kanalen epitel kan være forbundet med carcinogenese i bugspytkirtlen. Bestemmelse af telomer længde i bugspytkirtlen ductusceller læsioner kan være værdifulde for nøjagtig påvisning og vurdering af bugspytkirtelkræft risiko

Henvisning:. Matsuda Y, Ishiwata T, Izumiyama-Shimomura N, Hamayasu H, Fujiwara M, Tomita Ki, et al. (2015) Gradvis telomer Afkortning og øge Kromosomal ustabilitet blandt Panin kvaliteter og Normal Ductal epithel med og uden kræft i bugspytkirtlen. PLoS ONE 10 (2): e0117575. doi: 10,1371 /journal.pone.0117575

Academic Redaktør: Arthur J. Lustig, Tulane University Health Sciences Center, UNITED STATES

Modtaget: 28 oktober, 2014 Accepteret: December 28, 2014; Publiceret: 6 feb 2015

Copyright: © 2015 Matsuda et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet delvist af et tilskud-in-støtte fra Japan Society for fremme af Science (C, nr 25.462.127) og tilskud fra Cancer Research Institute of Kanazawa Universitet og sammenslutning af tidligere Kagawa University Fakultet Sanjukai til Y. Matsuda. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Den årlige forekomst af pancreascancer er steget på verdensplan [1], er en førende årsag til cancer-relaterede dødsfald [2]. Prognosen for kræft i bugspytkirtlen er stadig fattige med en samlet 5-års overlevelse på ca. 5% [1] på grund af sin aggressive vækst og høj metastaser. Nylige undersøgelser har vist, at pancreascancer ikke opstår de novo, men snarere skrider frem gennem en flertrinsproces, der involverer ikke-invasive forstadielæsioner kendt som pancreas intraepithelial neoplasier (PanINs), og som afsluttes med invasiv cancer [3,4,5]. Mutationer af

KRAS, CDKN2A, TP53

, og

Smad4

, som er chauffør mutationer i pancreascancer, akkumulerer i henhold til den histologiske kvalitet af PanINs og køre neoplastisk transformation og tumorprogression [6,7 ]. Der er en slående sammenhæng mellem høj alder og en øget forekomst af pancreascancer [8,9], og dette kan repræsentere de kombinerede virkninger af mutation belastning, epigenetisk regulering, telomer dysfunktion, og en ændret stromal miljø [10,11].

Telomerer er tandem gentagelser af sekvensen TTAGGG ved kromosomal ender i eukaryoter, og spiller en central rolle i forebyggelsen af ​​kromosomal ustabilitet [12,13,14]. Mens telomerase-medieret bevarelse af telomer funktion har vist sig at fremme udviklingen af ​​avancerede maligniteter [15], der er lige så overbevisende eksperimentelt bevis for, at mangel på telomerase-aktivitet og en transient periode med telomer afkortning og dysfunktion drev kræft initiering ved induktion af kromosomal ustabilitet [11,16]. Kræft i bugspytkirtlen er præget af genomisk kompleksitet og ustabilitet; telomer afkortning, tab af TP53,

K-RAS

mutation, unormal mitose og nukleare abnormaliteter er alle bidragydere til denne fænotype [17]. Panin huser også kromosomal ustabilitet såsom telomer afkortning [18], aneuploidi [19], tab af heterozygositet [20], og en DNA-skade responset udløst ved aktivering af ataksi-telangiectasia-muteret (ATM)-celle cyklus checkpoint kinase-2 (Chk2) checkpoint vej [21]. Telomer afkortning synes at gå forud for udviklingen af ​​

TP53

mutationer under bugspytkirtlen carcinogenese [18,22,23]. Imidlertid har enhver ændring af telomer funktion under carcinogenese trin forblev uklart.

Brug Southern blotting, har vi analyseret længderne af telomerer i de fleste menneskelige organer og væv, herunder pancreas hoved, og bekræftede, at telomererne forkortes med alder, bortset fra dem i hjernevæv [24,25,26,27,28,29]. Den estimerede årlige reduktion på telomer længde i bugspytkirtlen var 36 basepar [27]. Vi har også bekræftet de telomer længde fordelinger af forskellige celletyper i tungen, spiserør, mave, bryst, hud, og pancreas-ø ved hjælp af kvantitativ fluorescens

in situ

hybridisering (Q-FISH) og vores oprindelige software, Tissue Telo, ansætte de telomer: telomer /centromer ratio (TCR) eller normaliserede TCR (NTCR) [30,31,32,33,34,35,36,37,38]. Telomerer i uengagerede epitel omkringliggende pladecellekræft

in situ

(CIS) af tungen og spiserøret var kortere end i alders-matchede kontroller [34,39,40].

I den nuværende undersøgelse, vi postuleret, at kræft i bugspytkirtlen er sandsynligvis vil opstå i kanal epitel med forkortede telomerer og kromosomal ustabilitet. Ved hjælp af vores Q-FISH måleteknik blev telomer længder estimeret i pancreas kanalen epitel med eller uden kræft, PanINs, og pancreascancer. Vi sammenlignede telomer længde pancreas kanalen epitel mellem tilfælde viser kræft forandring og alders-matchede sager kontrol. Vi har også histologisk anslået tilstedeværelsen af ​​atypiske mitose og anafase broer som mulige morfologiske indikatorer for kromosomal ustabilitet [41].

Materialer og metoder

Patienter og væv

pancreas væv brugt i denne undersøgelse blev opnået fra patienter, som gennemgik kirurgisk behandling på Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital (S1 tabel). For at analysere telomer længde i bugspytkirtel prøver uden nogen patologisk forandring, vi brugte obduktion prøver opnået ved Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital og den japanske Røde Kors Medical Center (S2 tabel). Disse obduktion prøver blev ansat på grund af vanskeligheder med at opnå prøver af normale bugspytkirtel ikke-tilknyttede med malignitet eller betændelse fra kirurgisk resektion materialer. Selvom vi var bekymret for, at postmortem ændringer kan påvirke telomer længde, havde vi tidligere studeret telomer længder i prøver af cerebrum og hjerte opnået efter forskellige postmortem intervaller ved hjælp af Southern blotting, og fandt ingen signifikante ændringer blandt de samplede tidspunkter [26]. Den foreliggende undersøgelse blev gennemført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen, 2013, og alle forsøg blev godkendt af de etiske komiteer i Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital og den japanske Røde Kors Medical Center. Informeret skriftligt samtykke til brugen af ​​væv blev opnået fra alle patienter eller efterladte familier.

Tissue behandling og histologisk vurdering

Væv blev fikseret i 10% bufferet formalin og derefter underkastes standard vævsbehandling og paraffin indlejring. Vævene blev skåret serielt i sektioner 3 um tykke for hematoxylin og eosin (H Fasmac, Kanagawa, Japan) og centromeren (Cenp1-FITC probe, ‘5-CTTCGTTGGAAACGGGGT-3’; Fasmac) og kernerne blev farvet med DAPI (Molecular Probes, Eugene, OR, USA).

FISH billeder blev optaget af et CCD-kamera (ORCA-ER-1394 Hamamatsu Photonics KK, Hamamatsu, Japan) monteret på et mikroskop (80i, Nikon, Tokyo, Japan). Mikroskop kontrol og erhvervelse billede blev udført ved hjælp af Image-Pro Plus softwarepakke (version 5.0, Media Cybernetics Co. Ltd., Silver Spring, MD, USA). De optagne billeder blev analyseret ved hjælp af vores egen software, ‘TissueTelo Ver. 3.1 ‘, der estimerer TCR’er enkelte kerner, som tidligere [30,31,32,33,44] rapporteret. Da der ikke er nogen garanti for, at hele kernen vil blive fanget under en bestemt vævssnit, den samlede korrigerede telomer signal for hver kerne normaliseres ved den tilsvarende integrerede optimal tæthed af centromeren [30,32]. TCR-værdier blev bestemt ud fra individuelle celler af N-lille, N-store, Panin og cancer, baseret på de histologiske fund af seriel H 0

0,05 for alle analyser. Baseret på TCR, analyser receiver-operator karakteristik (ROC) blev udført, og arealet under kurven (AUC) værdi blev bestemt. Statistiske analyser blev udført ved hjælp af StatView J-version 5.0 softwarepakke (SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA) og XLSTAT (Addinsoft, New York, NY, USA).

Resultater

telomer afkortning i bugspytkirtlen forstadier til kræft

Som kontrol i Q-FISH-analyse, blev en TIG-1 celle blok placeret på samme glas sammen med hver bugspytkirtel prøve (fig. 1A). Telomerer (rød) var tydelige i kernerne i den normale kanalen (fig. 1B og C, pile), medens Panin-1, -2 og -3, og kræft viste svage telomer signaler (fig. 1D, E, F og G ). Vi bestemt TCR af hver læsion ved hjælp af Tissue Telo softwarepakke. Fordelingerne af telomer intensitet angivet med TCR viste et fald på telomer længde i PanINs og kræft i sammenligning med den normale kanal (S2 fig. A og B). Sammenlignet med den normale kanal (N-lille og N-store), blev NTCR værdier for Panin-1, -2, og -3 og cancer faldt betydeligt (figur 1 H,

P. 0

.05 ). Desuden NTCR værdier for kræft var lavere end for Panin-1 og -2 (Fig 1 H,

P. 0

0,05). Der var ingen signifikant forskel mellem små og store kanal epitel. Den NTCR for normale kanaler og PanINs med og uden cancere viste heller ingen signifikante forskelle (S3 Fig., Grå bar vs hvid bar). Den NTCR for pancreascancer viste ingen korrelation med tumor stadie, placering eller histologisk klassifikation (S3 tabel).

Original forstørrelse, x400. Rød, telomer-Cy3 signal; grøn, centromere-FITC signal; blå, DAPI modfarvning for DNA. (A) Q-FISH billede af kontrollen TIG-1 celle blok placeret på samme dias sammen med bugspytkirtlen sektioner. (Bg) Q-FISH billeder af normal lille kanal (N-lille) (b), normal store kanal (N-store) (c), Panin-1 (d), Panin-2 (e), Panin-3 ( f), og pancreas invasiv duktal adenokarcinom (g). Telomere signaler var tydelige i normal lille kanal (b, pile) og normal stor kanal (c, pile), medens telomer signaler faldt fra Panin-1 til Panin-3 baseret på visuel bedømmelse (d, e og f). Telomer signaler var knap synlige i cancer celler (g). (H) Box-and-whisker plot af NTCR for hver af de pankreatiske duktale læsioner kirurgisk resektion fra patienter med kræft i bugspytkirtlen (n = 36) og uden bugspytkirtelkræft (n = 33). *

P. 0

05

vs N-små og N-large. †

P .. 0

05

vs N-lille, N-large, Panin-1 og -2

telomer længde og kromosomal ustabilitet

Atypiske mitoser herunder multipolære mitoser (fig. 2A) og ring mitoser (fig. 2B) samt anafase broer (fig. 2C), blev observeret i pancreascancer. Mitose var meget få i den normale kanal, mens Panin og kræft viste en øget antal mitoser (tabel 1, *

P 0

05, ** P .. 0

01

). Atypisk mitose og anafase broer blev ikke påvist i den normale kanal, men blev forøget i cancer (tabel 1, *

P 0

05, ** P .. 0

01

). Pancreascancer havde en mitotisk indeks på 0,7%, og 26% af mitoser var atypiske eller involveret anafase broer.

(a-c) Repræsentative atypiske mitotiske figurer. Pile viser multipolær mitose (a), ring mitose (b), og en anafase bro (c). (D og e) Korrelation mellem NTCR og mitose for læsionerne som helhed (d) og samlet minus cancer (e). Data er vist som procent af de samlede mitotiske figurer blandt de totale celletal. (F og g) Korrelation mellem NTCR og procentdelen af ​​atypiske Mitoser eller anafase broer blandt læsioner som helhed (f) og samlet minus cancer (g). Data er vist som den procentdel af atypiske mitoser eller anafase broer blandt det samlede antal mitotiske figurer.

Vi fandt en negativ sammenhæng mellem NTCR og forekomsten af ​​Mitoser (fig. 2D, alle læsioner,

P 0

0001

, R

2 = 0,075;… figur 2E, læsioner bortset kræftformer,

P = 0

0098

, R

2 = 0,031). Forekomsten af ​​atypiske mitoser eller anafase broer viste også en negativ korrelation med NTCR (Fig 2F, alle læsioner,

P. 0

0001

, R

2 = 0,121;. Fig . 2G, læsioner bortset kræftformer,

P = 0

.

0262

, R

2 = 0,023).

telomer afkortning i ikke-kræft kanal epitel

for at vurdere ændringer af telomerer i celler uden histologisk forandring, vi analyserede telomer længde i ikke-kræft kanal epitel (N-store) ved hjælp af obduktion prøver. Den NTCR for normal kanal epitel er negativt korreleret med øget alder (figur 3A, sort linje,

P .. 0

0001

, R

2 = 0,327). Vi delte de obduktion sager i to grupper, nemlig dem med og uden PanINs, og patienter med Panin var ældre end kontrolpatienter (S2 Table, ***

P. 0

0001

). I kontrol- og Panin grupper var der en negativ korrelation mellem NTCR og alder (figur 3A,. Kontrol, blå linje,

P. 0

0001

, R

2 = 0,296, Panin, grøn linje,

P. 0

0001

, R

2 = 0,252). Den NTCR for den normale kanal epitel blev reduceret med 29% i Panin gruppen i forhold til kontrolgruppen (Fig 3B, **

P .. 0

01

vs kontrol). Alders-matchede analyser viste en negativ sammenhæng mellem NTCR for normal kanal epitel og alder (fig. 3C, sort linje,

P = 0

.

0001

, R

2 = 0,111 ). I Panin gruppen var der en negativ korrelation mellem NTCR for den normale kanal epitel og alder (figur 3C.. Grønne linje,

P = 0

0002

, R

2 = 0,183), mens dette forhold var ikke statistisk signifikant i kontrolgruppen (figur 3C. blå linje,

P = 0

1934

, R

2 = 0,041).. Den NTCR for den normale kanal epitel blev reduceret med 16% i gruppen i forhold Panin til aldersmatchede kontroller (fig 3D, *

P .. 0

05

vs kontrol)

(a) NTCR i den normale kanal epitel i 150 obduktion tilfælde var negativt korreleret med alder for de overordnede sager (n = 150, sort), kontrolgruppen (n = 77, blå) og Panin gruppen ( n = 73, grøn). (B) Sammenligning af NTCR i den normale kanal epitel mellem kontrolgruppen og Panin grupper. **

P. 0

01

vs kontrol. (C) NTCR i normal kanal epitel fra personer i alderen over 50 år (n = 113). Blå, kontrol (n = 43); grøn, Panin gruppe (n = 70). (D) Sammenligning af NTCR i den normale kanal epitel mellem kontrolgruppen og Panin grupper. *

P 0

05

vs kontrol

For aggregerede analyser af obduktion og kirurgisk resektion tilfælde, vi delte sagerne i tre grupper:.. Kontroller ( uden Panin og kræft i bugspytkirtlen), tilfælde med Panin, og sager med kræft i bugspytkirtlen. Den NTCR for den normale kanal epitel viste en negativ korrelation med alderen (figur 4A;. Sort linje,

P 0

0001

, R

2 = 0.290.). I kontrolgruppen og Panin grupper blev NTCR negativt korreleret med alderen (figur 4A,. Kontrol, blå linje,

P 0

0001

, R

2 = 0,293;. Panin , grøn linje,

P. 0

0001

, R

2 = 0,220). I bugspytkirtelkræft gruppen, forholdet mellem alder og NTCR var ikke statistisk signifikant (fig. 4A, rød linje,

P = 0

.

5147

, R

2 = 0,015) . I Panin gruppen og bugspytkirtelkræft gruppen blev NTCR reduceret med 26% og 23%, i forhold til kontrolgruppen (Fig 4B, *

P .. 0

05

, **

P. 0

01

vs kontrol). Alders-matchede analyser viste en negativ sammenhæng mellem NTCR for den normale kanal epitel og alder (fig. 4C, sort linje,

P = 0

.

0001

, R

2 = 0,081). De Panin grupper viste også en negativ sammenhæng mellem NTCR og alder (fig. 4C, grøn linje,

P = 0

.

0002

, R

2 = 0,155), mens der ikke sådan korrelation var tydelig i kontrol- og bugspytkirtlen kræft grupper (figur 4C,. kontrol, blå linje,

P = 0

1004

, R

2 = 0,048;. kræft i bugspytkirtlen, rød linje,

P = 0

.

5147

, R

2 = 0,015). Den NTCR blev reduceret med 15% i Panin gruppen og med 9% i bugspytkirtelkræft gruppen i forhold til alder-matchede kontroller (Fig 4D, *

P .. 0

05

vs kontrol).

(a) NTCR i den normale kanal epitel i 150 obduktion og 69 kirurgisk resektion tilfælde var negativt korreleret med alder i sagerne samlet (n = 219, sort), kontrolgruppen (n = 91, blå) og Panin (n = 92, grøn), men forholdet var ikke statistisk signifikant i pancreascancer (n = 36, rød). (B) Sammenligning af NTCR i den normale kanal epitel mellem kontrol, Panin og bugspytkirtelkræft grupper. *

P. 0

05

vs kontrol. **

P. 0

01

vs kontrol. (C) NTCR i den normale kanal epitel fra personer i alderen over 50 år (n = 182). Blå, kontrol (n = 57); grøn, Panin (n = 189); rød, pancreascancer (n = 36). (D) Sammenligning af NTCR i den normale kanal epitel blandt kontrolgruppen, Panin og bugspytkirtelkræft grupper. *

P .. 0

05

vs kontrol

Diskussion

Den foreliggende undersøgelse viste, at telomerer i histologisk normal kanal epitel forbundet med PanINs eller kræft var kortere end i normal kanal epitel uassocieret med PanINs eller kræft, og at telomerer forkortede progressivt fra Panin-1 til Panin-3. Aging, sammen med den øgede forekomst af PanINs, blev også korreleret med markant afkortning af telomerer i den normale kanal epitel. Disse resultater indikerer, at hos ældre, kan kanalen epitel, som huser forkortede telomerer, give anledning til PanINs og pancreascancer. Som i forhold til alder-matchede kontroller, telomerer i histologisk normal kanal epitel blev forkortet i personer med PanINs eller kræft, hvilket tyder på, at andre end alder faktorer kan have indflydelse på telomer længde. Tidligere har vi rapporteret, at baggrunden epitel af CIS i spiserøret, tunge, og hud har kortere telomerer og mere kromosomal ustabilitet end kontrol væv [34,36,40]. Tilsammen kritisk telomer dysfunktion i baggrunden, muligvis på grund af højere årlig telomer nedslidning, kan give anledning til kromosomalt ustabilitet og carcinogenese i bugspytkirtlen duktalt epitel.

En tidligere undersøgelse ved hjælp FISH-analyse har vist, at telomer afkortning var næsten universelle i alle histologiske kvaliteter af Panin [18]. I denne undersøgelse, Heek et al. beslutsom telomer længde i 10 kerner fra hver læsion, og derfor heterogenitet telomer fordeling længden kan have påvirket deres resultater. I modsætning hertil vi bestemt telomer længde i over 100 kerner fra hver læsion, og fandt en omvendt korrelation mellem telomer længde og Panin histologisk klasse. Vores resultater antyder, at telomer forkortning i noninvasive læsioner i pancreas kanalen inducere akkumulering af kromosomafvigelser, fører til udviklingen af ​​invasive duktale adenokarcinomer.

Både celleproliferation og telomeraseaktivitet indflydelse telomer afkortning. I nærværende undersøgelse blev mitoseindeks negativt korreleret med telomer længde, hvilket afspejler, at telomerer bliver kortere, hver gang en celle deler. Et højere celleproliferation på grund af betændelse og efterfølgende vævsregenerering kan føre til hurtigere telomer afkortning. Men vi ikke analysere forholdet mellem telomerase-aktivitet, cellevækst ratio og telomer længde, fordi gjort dette umuligt brugen af ​​formalin-fikserede paraffin-indstøbt væv.

I pancreascancer, vi identificeret også høje forekomster af anafase broer og atypiske mitotiske tal, der tegner sig for omkring en fjerdedel af alle mitoser. En tidligere undersøgelse af pancreas cancer cellelinjer viste, at anafase broer var påviselige i 14-50% af anafase celler i association med broen-brud-fusion cyklus induceret af telomere dysfunktion [18]. Maligne tumorer synes at repræsentere en heterogen gruppe, der kan kategoriseres på grundlag af både kromosomal ustabilitet og telomer vedligeholdelse mekanisme. Blandt rektale cancere, dem med kromosomal ustabilitet viser forkortede telomerer og telomerase-aktivering, hvorimod de med kromosomal stabilitet show forlængelse af telomerer uden afkortning og telomerase-aktivering [47]. I den foreliggende undersøgelse, alle de invasive pankreatiske duktale adenocarcinomer viste markant forkortede telomerer. En tidligere rapport har vist, at acinære-til-duktale metaplasi sameksisterende med Panin udstiller også telomer afkortning; derfor acinar-til-duktalt metaplasi er blevet betragtet som en precursor læsion af pancreascancer [48]. Tilsammen er de tilgængelige data tyder på, at telomer-afhængige kromosomal ustabilitet kan have en væsentlig rolle i bugspytkirtlen carcinogenese.

Vores nuværende fund tyder på, at bestemmelsen af ​​telomer længde i celler opnået ved biopsi eller i prøver af bugspyt kan være af værdi for både påvisning og vurdering af bugspytkirtelkræft risiko. ROC analyser for skelnen mellem bugspytkirtelkræft læsioner (herunder Panin-3 og kræft) og ikke-kræft væv (herunder normal kanal, Panin-1 og -2) ved hjælp NTCR afslørede nytten af ​​telomer længde som en indikator for kræft modtagelighed (S4 Fig .). AUC for NTCR var 0,869, bliver der svarer til serum CA19-9 [49,50].

pancreas neuroendokrine tumorer viser ofte ændret forlængelse af telomerer (ALAT), der detekteres som større pletter af telomer signaler [51], men i den foreliggende undersøgelse, ikke større pletter af telomer signaler var tydelige i pancreas kanalen og cancere. Selvom vores Q-FISH-metoden er meget nøjagtig og reproducerbar, det har flere ulemper: (1) Tilstedeværelsen af ​​telomer fusion kan ikke vurderes. (2) Enhver abnormitet af centromer kan påvirke telomer /centromer forholdet. (3) Som med andre FISH metoder, er det ikke muligt at detektere telomer og centromerfusioner signaler, hvis fikseringen metoder eller andre prøveforberedelse teknikker er uegnede.

Som konklusion, telomer afkortning sker i bugspytkirtlen ductal epitel i tidlige fase af carcinogenese i mangel af klare histologiske forandringer. Kritisk forkortede telomerer i pankreasgangen epitel og i noninvasiv duktale læsioner fører til akkumulering af kromosomafvigelser, og til gengæld til udviklingen af ​​pancreas invasive duktale adenocarcinomer via PanINs. Bestemmelse af telomer længde i bugspytkirtlen ductusceller læsioner kan være af værdi for nøjagtig påvisning og risikovurdering af kræft i bugspytkirtlen.

Støtte Information

S1 Fig. Pancreas kanal, invasive duktalt læsioner og invasive duktale adenokarcinomer.

(A) Repræsentative billeder af N-small (intralobular kanal, pile), N-large (interlobulære kanaler, pile), Panin-1, -2, og -3 og bugspytkirtelkræft. (B og c) Forekomsten af ​​Panin efter alder i kirurgisk resektion (b, n = 36) og obduktion (c, n = 150) tilfælde af bugspytkirtelkræft. Panin-1 blev mere almindeligt med alderen, mens Panin-3 ikke blev fundet i sager uden bugspytkirtelkræft

doi:. 10,1371 /journal.pone.0117575.s001

(TIF)

S2 Fig. Udlodning af telomer intensitet udtrykt som TCR i TIG-1 celler, pancreas kanalen og duktale læsioner.

TCR havde tendens til at være lavere i Panin og kræft læsioner end i den normale kanal epitel (N-små og N-store) i et tilfælde af kræft i bugspytkirtlen (a), og i en sag uden bugspytkirtelkræft (b)

doi:. 10,1371 /journal.pone.0117575.s002

(TIF)

S3 fig. Sammenligning af NTCR i forskellige typer af væv mellem bugspytkirtlen kræfttilfælde og kontroller.

Der var ingen statistisk signifikante forskelle i NTCR mellem kræfttilfælde (grå bar) og kontroller (hvid bar). ND, ingen forskel

doi:. 10,1371 /journal.pone.0117575.s003

(TIF)

S4 Fig. ROC-kurve analyse af NTCR til påvisning af pancreascancer.

NTCR for kirurgisk resektion tilfælde blev anvendt i ROC analyse for skelnen mellem pancreascancer (herunder cancer og Panin-3) og ikke-kræft kanal (inklusive normal kanal og Panin-1 . og -2)

doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s004

(TIF)

S1 tabel. Karakteristika og forekomst af PanINs i kirurgisk resektion tilfælde

doi:. 10,1371 /journal.pone.0117575.s005

(DOCX)

S2 Table. Karakteristika og forekomst af PanINs i obduktion tilfælde

doi:. 10,1371 /journal.pone.0117575.s006

(DOCX)

S3 Table. Telomer længde og klinisk-patologiske karakteristika kirurgisk resektion sager bugspytkirtelkræft

doi:. 10,1371 /journal.pone.0117575.s007

(DOCX)