PLoS ONE: Forbedret Expression Long Ikke-Coding RNA hotair er forbundet med udvikling af gastrisk Cancer

Abstrakt

Den lange ikke-kodende RNA hotair er blevet rapporteret at være en dårlig prognostisk biomarkør i en række forskellige maligne tumorer. Men lidt er kendt om foreningen af ​​hotair med mavekræft. Vi undersøgte ekspressionen af ​​hotair i 68 gastrisk cancer prøver ved anvendelse af kvantitativ real-time RT-PCR og analyseret dets korrelation med de kliniske parametre. Den funktionelle rolle hotair blev undersøgt ved at generere humane mavekræft cellelinjer med øget eller undertrykt hotair udtryk. Forankringen -uafhængige vækst blev bedømt ved blød agar-assay. Den øgede eller undertrykt hotair udtrykkende gastriske cancerceller blev injiceret i halevenen eller bughulen af ​​immunsvækkede mus for at undersøge virkningen af ​​dette molekyle på metastase og peritoneal formidling. Ekspressionen af ​​hotair var signifikant højere hos cancerpatienter læsioner end i tilstødende ikke-kræft væv i humane gastriske cancere. I den diffuse type mavekræft, High-hotair gruppe (hotair /GAPDH 1) viste signifikant mere venøs invasion, hyppige lymfeknudemetastaser og en lavere samlet overlevelse sammenlignet med den lav-hotair gruppe (hotair /GAPDH 1). Kolonidannelse på blød agar blev forbedret i en hotair-afhængig måde. Hotair-udtrykkende MKN74 dannet mere levermetastaser sammenlignet med kontrol, når de blev injiceret i halevenen af ​​mus. Desuden reduceret ekspression af hotair i KATO III undertrykt peritoneal formidling. Disse resultater tyder på, at hotair spiller en central rolle i udviklingen af ​​mavekræft

Henvisning:. Endo H, Shiroki T, Nakagawa T, Yokoyama M, Tamai K, Yamanami H, et al. (2013) Øget ekspression af Long Ikke-Coding RNA hotair er forbundet med udvikling af mavekræft. PLoS ONE 8 (10): e77070. doi: 10,1371 /journal.pone.0077070

Redaktør: Dajun Deng, Peking University Cancer Hospital og Institut, Kina

Modtaget: 10 juni, 2013; Accepteret: September 5, 2013; Udgivet: 10. oktober 2013 |

Copyright: © 2013 Endo et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af JSP’er KAKENHI tilskud numbers24791480 og 24.591.022 (https://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html), og tilskud-in-støtte HIROMI Medical Research Foundation (http: //www.smtb .jp /personlige /overdragelsesakt /ledelse /public /eksempel /pdf /naturlig-06a.pdf) og Daiwa Securities Health Foundation (https://www.daiwa-grp.jp/dsh/grant/outline.html). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

forekomsten og dødeligheden af ​​mavekræft er faldet dramatisk i de seneste 50 år i de fleste områder af verden, men det er stadig den næststørste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan [1]. Trods de seneste fremskridt inden for diagnostiske teknikker, såsom forstørrelsesglas endoskopi med snævre bånd imaging (NBI) [2], og i behandling, herunder target terapi [3,4], er der stadig et stort antal mavecancerpatienter med dårlig prognose. Den patogene mekanisme bidrager til den aggressive biologiske funktion i denne kræftform mangler at blive afklaret.

genomsekvensering projekter viste, at det humane genom består af mindre end 2% proteinkodende gener, og mere end 90% af genomet transkriberes som ikke-kodende RNA’er (ncRNA) [5-7]. Disse ncRNAer klassificeres i to grupper afhængigt af nukleotidet størrelse. Micro RNA’er er cirka 18-25 nukleotider i længden, mens lange ikke-kodende RNA består af mere end 200 nukleotider. Hotair er en lang ikke-kodende RNA, der blev identificeret fra en brugerdefineret tilling vifte af HOXC locus. Hotair blev vist at trimethylate Histon H3 lysin-27 i Hoxd locus med Polycomb undertrykkende kompleks 2 (PRC2) og inhibere Hoxd genekspression, som ligger på en anden kromosom [8]. Hotair fremmer metastase gennem interaktion med PRC2 at undertrykke transkriptionen af ​​multiple metastaser suppressorgener i brystcancer [9]. Den forøgede ekspression af hotair er forbundet med invasivitet, metastase og dårlig prognose i en række forskellige cancere, såsom bryst, colon, pancreas og lungecancer [9-12]. Men lidt om udtrykket og /eller funktionen af ​​hotair i gastrisk karcinom udvikling. I den aktuelle undersøgelse, undersøgte vi inddragelse af hotair i human gastrisk udvikling kræft og undersøgt, om dens udtryk ville korrelere med aggressiv adfærd mavekræft.

Materialer og metoder

Væv

68 mavekræft væv blev opnået fra patienter, som gennemgik kirurgi ved Miyagi Cancer center (Natori, Japan), mellem 2007 og 2011. Alle prøver blev straks frosset hurtigt efter resektion i flydende nitrogen og opbevaret ved -80 ° C eller fikseret i 10% pufret formalin og indlejret i paraffinvoks. De gastrisk kræft blev histopatologisk klassificeret som den intestinale type (n = 36), diffus type (n = 32) i henhold til klassificeringen af ​​World Health Organization og tidligere rapporter [13]. Ingen patienter fik kemoterapi og strålebehandling før operationen. Til statistisk analyse blev samlet overlevelse er defineret af død uanset årsag, og Kaplan-Meier-overlevelseskurver blev brugt.

Cellelinjer

mavekræft cellelinjer MKN74 (intestinal type) [14] og KATO III (diffus type) [15] blev opnået fra Riken Bioresource Center (Tsukuba, Japan). Begge cellelinier blev opretholdt i RPMI-1640 (Gibco /Life Technologies Co, CA) indeholdende 10% inaktiveret FBS (EuroClone, Milano, Italien) med 100 enheder /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin (Gibco /Life Technologies Co , CA) og dyrket i en befugtet 5% CO

2 inkubator ved 37 ° C.

RNA-præparat, revers transkription, og kvantitativ real-time PCR

Totalt RNA fra frosne prøver og cellelinjer blev ekstraheret ved ISOGENE (NIPPON GENE, Tokyo, Japan) ifølge fabrikantens protokol. cDNA’er fra alle prøver blev syntetiseret ud fra 1,0 pg totalt RNA ved PrimeScript® 1. strengs cDNA syntesekit (Takara Bio, Siga, Japan) ved at følge fabrikantens protokol. Ekspressionen af ​​hotair blev kvantificeret ved LightCycler Brilliant SYBR Green QRT-PCR-kittet (Roche Applied Science, IN) ved at følge fabrikantens protokol med de specifikke primersæt ifølge den tidligere undersøgelse [9]. Niveauet af hotair ekspression i hver prøve blev normaliseret til det respektive GAPDH ekspressionsniveau. Specificiteten af ​​hver PCR-reaktion blev bekræftet ved smeltekurveanalyse analyser.

hotair ekspression retroviral vektor

Humant hotair cDNA (addgene, Cambridge, MA) blev amplificeret ved PCR og blev indsat i pBabe.puro vektor (pBabe -HOTAIR). Rekombinante retrovirus blev produceret med Platinum-A (Plat-A, Leveret af prof Kitamura) emballering cellelinier som tidligere [16] beskrevne. Kort fortalt blev Plat-A-celler transficeret med pBabe -HOTAIR eller pBabe-puro Vector (EV). Fugene-6 (Roche Applied Science) og Opti-MEM I (Gibco /Life Technologies Co) blev tilsat efter fabrikantens protokol. Otteogfyrre timer efter transfektion blev retrovirus-holdige supernatant opsamles og ledes gennem et 0,45 um filter. MKN74 celler blev inficeret med de rekombinante retrovira og derefter udvalgt med puromycin.

RNA-interferens

For at knockdown hotair i KATO III, vi brugte Knockout ™ RNAi Systems (Ciontech Laboratories, Inc., Mountain View, CA) i overensstemmelse med producentens protokol. Kort fortalt, vi designet fire shRNA sekvens målrettet hotair som vist i tabel 1. Efter annealing af de komplementære shRNA oligonukleotider, vi ligeret de annealede oligonukleotider ind pSIREN vektor (shHOTAIR). Derefter, transficerede vi Plat-A-celler med shHOTAIR eller pSIREN Vector (EV), og inficeret KATO III med de rekombinante retrovira og selekteret med puromycin. Cellerne transduceret med den sh-HOTAIR2 og -3 vektor blev valgt til yderligere undersøgelse. Hver

i vitrto

eksperiment blev udført i tre eksemplarer, gentaget tre gange, og repræsentative data vises.

shRNA

Sequence

shHOTAIR-1sensegatccgaacgggagtacagagagattttcaagagaaatctctctgtactcccgttcttttttganti-senseaattcaaaaaagaacgggagtacagagagatttctcttgaaaatctctctgtactcccgttcgshHOTAIR-2 sensegatccgccacatgaacgcccagagattttcaagagaaatctctgggcgttcatgtggttttttg anti-senseaattcaaaaaaccacatgaacgcccagagatttctcttgaaaatctctgggcgttcatgtggcgshHOTAIR-3 sensegatccgtaacaagaccagagagctgttttcaagagaaacagctctctggtcttgttattttttganti-senseaattcaaaaaataacaagaccagagagctgtttctcttgaaaacagctctctggtcttgttacgshHOTAIR-4sensegatccaattcttaaattgggctggttcaagagaccagcccaatttaagaattttttttganti-senseaattcaaaaaaaattcttaaattgggctggtctcttgaaccagcccaatttaagaattgTable 1. Sekvenser af shRNA indsætter for shHOTAIR udtrykkende vektor.

CSV download CSV

Cellevækst assay

1 x 10

4-celler blev podet per brønd i 96 brønds plader i normal cellevækst medier. 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl- tetrazoliumbromid, gul tetrazol (MTT) assay blev udført under anvendelse af en Celleproliferation Kit I (GE Healthcare Life Sciences, NJ) ifølge fabrikantens protokol. Målinger af absorbans ved 570 nm ved VersaMax (Molecular Devices, CA) blev foretaget til at estimere MTT-formazan produktion efter 24, 48 og 72 timers inkubation. Indekset blev evalueret ved 48 og 72 timer normaliseret til, at der på 24 timer.

blød agar-kolonidannelse assayet

blød agar-assays blev konstrueret i 6-brønds plader. Basislaget af hver brønd bestod af 1 ml med slutkoncentrationer på 1 x medier (RPMI-1640 plus 10% inaktiveret FBS) og 0,6% agarose med lavt smeltepunkt. Plader blev afkølet ved stuetemperatur, indtil fast stof, på hvilket tidspunkt en 1-ml vækst agar lag blev hældt, bestående af 1 x 10

4 celler suspenderet i 1 x medier og 0,3% agarose med lavt smeltepunkt. Plader blev igen afkølet ved stuetemperatur, indtil vækstlag congealed. Yderligere 1 ml 1 x medier uden agarose blev tilsat på toppen af ​​vækstlag på dag 0 og igen på dag 14 i vækst. Celler fik lov til at vokse ved 37 ° C i 4 uger og de samlede kolonier blev talt.

Dyr

6 uger gammel kvinde NOD /Shi-SCID-IL2Rγ

null (NOG ) mus blev indkøbt fra Central Institute for forsøgsdyr (CIEA, Kawasaki, Japan) og anvendt i dette forsøg. De fik lov til at akklimatisere sig i en uge før eksperimenterne. De blev anbragt i et rent rum af dyret pleje facilitet på Miyagi Cancer Research Center og holdes under standard temperatur, fugtighed og tidsbestemte lysforhold og forudsat mus chow /vand ad libitum.

Tail vene assay af kræftcellen metastase

For at vurdere effekten af ​​hotair udtryk på blod-bårne metastase, vi injiceres 1,0 x 10

5 celler af HOTAIR- (n = 9) eller EV-udtrykkende (n = 9) MKN74 med 0,2 ml PBS i halevenen af ​​mus. Mus blev observeret i almindelighed for tegn på sygdom ugentligt for længden af ​​eksperimentet, og de blev aflivet 8 uger efter injektion. Lunger, lever, nyrer, binyrer og milt fra musene blev udskåret og blev undersøgt makroskopisk om tilstedeværelsen af ​​metastaser.

Peritoneal metastase

1,0 x 10

6 celler af shHOTAIR- (n = 5) eller EV-udtrykkende (n = 5) KATO III blev injiceret med 0,2 ml PBS i peritoneum af mus for at evaluere effekten af ​​hotair ekspression på peritoneal metastase. Mus blev observeret i almindelighed for tegn på sygdom ugentligt for længden af ​​eksperimentet, og de blev aflivet 8 uger efter injektion. Tilstedeværelsen af ​​knuder og ascites i bughulen blev undersøgt.

Histologi og Immunhistokemi

Det udskårne væv blev fikseret i 10% pufret formalin i 24 timer, derefter skåret og indlejret i paraffin til mikroskopisk undersøgelse. Prøverne blev skåret i 4-um-tykke sektioner og farvet med hematoxylin og eosin (H 0,05) blev betragtet som statistisk signifikant. Statistisk forskel mellem 3 grupper blev evalueret ved hjælp af Stål Dwass test eller Bonferroni analyse og

P Drømmeholdet værdi ( 0,017) blev betragtet som statistisk signifikant Samlet overlevelse sandsynlighed blev analyseret ved Kaplan-Meier metoder og evalueres af log-rank test, og

P Drømmeholdet værdi ( 0,05) blev betragtet som statistisk signifikant. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp Ekuseru-Toukei 2012 (Social Survey Research Information Co, Ltd, Tokyo, Japan).

P Drømmeholdet værdi ( 0,05) blev betragtet som statistisk signifikant

Etik

Institutional Review Board i Miyagi Cancer Center (MCC) godkendte dette studie protokol,. og skriftligt informeret samtykke blev opnået fra hver patient (Permit nummer: MCC-22-30). Protokollen af ​​dyreforsøg blev godkendt af MCC Animal Care og brug Udvalg (Permit nummer: MCC-AE-2011-12).

Resultater

Den hotair udtryk for humane mavekræft prøver

de hotair ekspressionsniveauerne af kræft og tilstødende noncancerous væv fra mavecancerpatienter blev undersøgt ved QRT-PCR og normaliseret ved GAPDH ekspressionsniveauet. Den gennemsnitlige udtryk niveau hotair var 4,952 ± 6,462 og 3,804 ± 6,721 (hotair /GAPDH ± standardafvigelse) i carcinom og ikke-kræft, hhv. Ekspressionsniveauerne af hotair var signifikant højere i carcinoma læsioner sammenlignet med de fra ikke-kræft læsioner (

P

= 0,019, figur 1A).

A, hotair ekspressionsniveauer af kræft og tilstødende noncancerous væv fra mavecancerpatienter blev undersøgt ved QRT-PCR og normaliseret ved GAPDH ekspressionsniveauet. Ekspressionsniveauerne af hotair var signifikant højere i carcinoma læsioner sammenlignet med de fra ikke-kræft læsioner (

P

= 0.019). B og C, blev De menneskelige mavekræft væv yderligere klassificeres efter hotair ekspressionsniveauet i en High-hotair gruppe (hotair /GAPDH 1,0) og Low-hotair gruppe (hotair /GAPDH 1,0) i den intestinale (B ) og diffus type (C) af mavekræft, hhv.

associering mellem ekspression af hotair og klinisk-patologiske faktorer i human gastrisk kræft

de menneskelige mavekræft væv blev histopatologisk klassificeret i intestinal (n = 36) og diffuse typer (n = 32). De menneskelige mavekræft væv blev yderligere klassificeret i henhold til hotair ekspressionsniveauet i High-hotair gruppe (hotair /GAPDH 1,0) og Low-hotair gruppe (hotair /GAPDH 1,0) (figur 1B og C). Associeringen af ​​hotair udtryk med de klinisk-patologiske træk i den intestinale og diffus type mavekræft er opsummeret i tabel 2 og 3. I den intestinale type mavekræft, blev ingen signifikant korrelation fundet mellem hotair ekspression og klinisk-patologiske fund (tabel 2). Desuden blev ingen signifikant relation set mellem hotair udtryk og den samlede overlevelse, selv om High-hotair gruppe tendens til at vise kortere overlevelse end Low-hotair gruppe (figur 2A). På den anden side blev en signifikant sammenhæng fundet mellem hotair ekspression og lymfeknudemetastaser (P = 0,043), venøs infiltration (

P

= 0,0083), en kort samlet overlevelse (

P

= 0,018) i den diffuse type, gastrisk cancer (tabel 3 og figur 2B). Der var imidlertid ingen sammenhæng mellem scenen og hotair ekspression.

hotair lav

hotair høj

P Drømmeholdet værdi

Age73.07 ± 9.1870.87 ± 10.650.53Gender0.63Male1016female37T0.87T1, T2610T3, T4713N0.26N078N1, N2 , N3615Ly0.68ly069ly1, ly2, ly3714v0.19v089v1, v2, v3514Stage0.501,27153,4680.50Table 2. foreningen af ​​hotair udtryk med klinisk-patologiske funktioner i tarm type mavekræft.

CSV Hent CSV

hotair lav

hotair høj

P Drømmeholdet værdi

Age59.250 ± 10.7566.35 ± 10.160.07Gender0.71male812female48T0.87T1, T212T3, T41118N0.043*N086N1,N2,N3414ly0.40ly067ly1,ly2,ly3613v0.0083*v0119v1,v2,v3111Stage0.311,2783,4512Table 3. Foreningen af ​​hotair udtryk med klinisk-patologiske funktioner i diffus form for mavekræft.

CSV Hent CSV

A, I den intestinale type mavekræft, blev ingen signifikant relation set mellem hotair udtryk og samlet overlevelse, selv om High-hotair gruppe tendens til at vise kortere overlevelse end Low-hotair gruppe. B, viste høj hotair gruppe væsentligt kortere overlevelse end Low-hotair gruppe i diffuse type mavekræft (

P

= 0,018).

Generation of hotair up- og nedreguleret celler og korrelation med cellernes levedygtighed

for at vurdere den funktionelle rolle hotair i gastrisk udvikling af kræft, vi genereret stabilt hotair udtrykker MKN74 celler (MKN-hotair) og stabilt shHOTAIR udtrykker KATO III-celler (KATO- shHOTAIR). QRT-PCR-analyse viste, at MKN-hotair celler udtrykte et niveau af hotair omkring 10 gange den af ​​EV udtrykker (MKN-EV) eller parentale MKN74 celler, og at ekspressionen af ​​dette molekyle blev reduceret med 30 til 70% i KATO-shHOTAIR celler sammenlignet med EV transduceret (KATO-EV) eller parentale KATO III (KATO-EV) celler (figur 3A). Resultaterne af MTT-assayet vist at hverken opregulering eller nedregulering af hotair påvirket gastrisk cancer celleproliferation (fig S1).

A, Relative hotair ekspressionsniveauer i gastrisk cancer cellelinjer blev analyseret ved qRT- PCR-analyse. MKN-hotair celler udtrykte omkring 10 gange højere niveauer af hotair end forældrenes MKN74 celler og MKN-EV. På den anden side, blev ekspressionen af ​​hotair i KATO-shHOTAIR celler reduceret med 30 til 70% i forhold til forældrenes KATO III og KATO-EV celler. B, Søjlediagrammet demonstreret den relative ekspression af hotair i gastrisk cancer cellelinjer, normale og carcinoma væv af analyseret i denne undersøgelse maven. Ekspression af hotair blev normaliseret med den for GAPDH. Værdierne er udtrykt i forhold til 1,00 til ekspression i forældrenes MKN74 celler.

Soft agar kolonidannelse assay

For at belyse funktioner hotair i forankringen-uafhængig vækst af gastrisk kræftceller, vi udnyttet en blød agar-assay. MKN-hotair celler dannede et større antal kolonier end MKN-EV-celler (

P

= 0,009, figur 4A). I overensstemmelse med dette fund viste KATO-shHOTAIR celler signifikante færre kolonier end KATO-EV-celler (figur 4B). Desuden mavens cancerceller med lignende hotair ekspressionsniveau (MKN-hotair og shHOTAIR-3, figur 3B) udformet tilsvarende antal kolonier, hvilket indikerer, at forankringsuafhængig vækst af gastriske cancerceller blev reguleret i en hotair-afhængig måde.

potentiale forankringsuafhængig vækst af gastriske kræftceller blev vurderet ved blød agar assay. MKN-hotair celler dannet betydeligt større antal kolonier end MKN-EV-celler (

P

= 0,009) (A), mens KATO-shHOTAIR celler viste signifikant færre kolonier end KATO-EV-celler i hotair ekspression måde (EV versus SH- HOTAIR2,

P

= 0,016 og EV versus sh-HOTAIR3,

P

= 0,0035) (B).

hotair udtryk og mavekræft celle metastase og peritoneal formidling

Siden hotair forbedret forankringen-uafhængige, men ikke forankring-afhængig vækst af gastrisk kræftceller, vi hypotese, at hotair kan bidrage til fjernmetastaser og /eller peritoneal formidling snarere end direkte invasion til omkringliggende organer. For at løse dette problem, vi ansat en hale vene assay og peritoneal injektion af celler at undersøge, om hotair udtryk fremmer blod -borne metastase og peritoneal formidling hhv. Som forventet, MKN-hotair celler ofte udstillet levermetastaser (

P

= 0,01) sammenlignet med MKN-EV celler. Desuden numre og størrelser af metastatiske levertumorer var signifikant større med MKN-hotair celler end med MKN-EV-celler (

P

= 0,03 og

P

= 0,019 henholdsvis Tal 5A og B). Interessant, en mus injiceret med MKN-hotair viste metastase til nyren og binyren udover leveren, mens med MKN-EV-celler metastatiske tumorer dannet kun i leveren. Konsekvent, blev peritoneal udbredelse væsentligt reduceret (1/5,

P

= 0,009), når hotair blev inaktiveret i KATO III celler, mens alle kontrol celler dannede peritoneal formidling (5/5) (figur 6A og B). De metastatiske tumorer blev histologisk bekræftet og de viste intens positiv farvning for human cytokeratin (figurerne 5C og 6C).

A, Virkningen af ​​hotair på metastase blev undersøgt ved halevenen assay. 1,0 x 10

5 i hotair udtrykkende celler (MKN-hotair, n = 9) og kontrolceller (MKN-EV, n = 9) blev injiceret i halevenen af ​​mus. MKN-hotair celler oftere viste levermetastaser (

P

= 0,01) sammenlignet med MKN-EV-celler (venstre panel). Desuden numrene (midterste panel) og størrelser af de metastatiske levertumorer (højre panel) var signifikant større med MKN-hotair celler end med MKN-EV-celler (

P

= 0,03 og

P

= 0,019, henholdsvis). B, The metastatiske tumorer klart kunne genkendes makroskopisk (pil). C, De tumorceller dannede kirtler og blev anset for at være afledt af de injicerede humane gastrisk cancer cellelinier (venstre panel, HE, orginal forstørrelse x40). Disse tumorceller viste intens immunoreaktivitet til human cytokeratin (højre panel).

A, peritoneal udbredelse blev reduceret signifikant (1/5,

P

= 0,009), når hotair blev inaktiveret i KATO III-celler ved shRNA transduktion, mens alle kontrol celler dannede peritoneal formidling (5/5). B, Musen med peritoneal formidling viste blodige ascites (venstre panel) og knuder (pil i højre panel) i den peritoneale kavitet. C, Knuderne i bughulen bestod af cancerceller, og nogle af dem havde mucin som en signetring cellecarcinom. De blev anset for at være afledt af de injicerede humane gastrisk cancer cellelinier (HE, original forstørrelse x 100), da disse celler viste intens immunoreaktivitet til human cytokeratin (højre panel).

Diskussion

i denne undersøgelse undersøgte vi udtryk for hotair i gastrisk kræft og undersøge dens sammenhæng med de klinisk-patologiske funktioner, herunder patienternes prognose. Vores resultater viste tydeligt forøget ekspression af hotair i cancervæv sammenlignet med ikke-cancervæv i maven, og at højniveauekspression af dette molekyle var forbundet med lymfeknudemetastaser, venøs invasion og ringe overlevelse i den diffuse type mavekræft. Disse resultater stemmer overens med den seneste undersøgelse, der viser, at opregulering af hotair findes i gastrisk cancer sammenlignet med normale væv og er korreleret med tumor stadium og lymfeknudemetastaser [17]. Desuden hotair-udtrykkende mavekræft celler udviste forbedring af forankringsuafhængig cellevækst

in vitro

og metastaser til leveren

in vivo

mens reduceret udtryk for hotair i gastriske kræftceller resulterede i faldt forankringsuafhængig vækst og peritoneal formidling, hvilket tyder på, at hotair spiller en central rolle i mavekræft progression.

Højere ekspression af hotair blev detekteret i cancerceller end i de tilsvarende ikke-tumorceller i forskellige cancerformer, herunder bryst-, tyktarms-, lever, bugspytkirtel og nasopharyngeal cancer [9-11,18-20]. I disse kræftformer blev hotair også vist at være forbundet med metastase og /eller dårlig prognose. Endvidere blev højt hotair ekspression korrelerede med korte sygdomsfri overlevelse i lungekræft [12]. Derfor er vores nuværende resultater stemmer overens med tidligere undersøgelser, der antyder, at ekspressionen af ​​hotair er involveret i det forbedrede aggressivitet af forskellige typer af carcinomceller. På den anden side kunne vi ikke finde negativ prognostisk effekt af hotair i den intestinale type mavekræft, selv på højt hotair gruppe tendens til at vise kortere samlet overlevelse sammenlignet med Low-hotair gruppe. Dette kan skyldes, at det lille antal patienter i den aktuelle undersøgelse, da forceret udtryk for hotair i en intestinal gastrisk cancer cellelinje (MKN74) fik den aggressive fænotype

in vitro

in vivo

. Yderligere undersøgelser med et stort antal prøver i tillæg til den eksperimentel undersøgelse bruger andre intestinale gastrisk cancer cellelinjer ville være nødvendigt at behandle dette spørgsmål.

I den aktuelle undersøgelse, ingen sammenhæng blev fundet mellem hotair udtryk og cellevækst i gastrisk cancer. I bryst-, tyktarms- og leverkræft, ikke er påvist at inddrage hotair i celle vækst [9,10,18], mens hotair fremmes og reducerede celledeling i bugspytkirtelkræft [11] og lungekræft [12], hhv. Yderligere blev ingen signifikant forskel i subkutan tumorvækst i nog mus mellem hotair-udtrykkende celler og kontrolceller i den aktuelle undersøgelse (data blev ikke vist). Baseret på disse resultater er det sandsynligt, at forbindelsen mellem hotair ekspression og celleproliferation er afhængig af typen af ​​cancer. I modsætning hertil blev forankringsuafhængig vækst af gastriske cancerceller klart forbedret i en hotair-afhængig måde. Desuden hotair ekspression forårsaget flere metastaser til leveren og andre organer, og en defekt i hotair undertrykt det peritoneale udbredelse af gastriske carcinomceller. Disse observationer sammen med det faktum, at hotair udtryk bidrager til metastaser i forskellige carcinomer [9-12,18], tyder på, at hotair er hovedsageligt involveret i metastatiske proces snarere end i væksten af ​​primær tumor.

Som konklusion forbedrede hotair ekspression i den diffuse type mavekræft var forbundet med forekomsten af ​​venøs invasion og dårlig prognose uafhængigt af faktor T, og tvunget ekspression af hotair i gastriske cancerceller fremmet forankringsuafhængig cellevækst

in vitro

og metastaser til leveren

in vivo

. Disse resultater indikerer, at hotair sandsynligvis vil blive involveret i udviklingen af ​​gastrisk cancer og kan også være et terapeutisk mål i behandlingen af ​​gastrisk cancer.

Støtte Information

Figur S1.

Foreningen af ​​celleproliferation med hotair udtryk. Resultaterne af MTT-assay evalueres efter 72 timer blev normaliseret med den ved 24 timer. Ingen relation fundet mellem hotair udtryk og mavekræft celledeling

doi:. 10,1371 /journal.pone.0077070.s001

(TIF)

Tak

Vi takker professor Kitamura (The University of Tokyo, Tokyo, Japan) til at tilvejebringe Platin-A-celler.