PLoS ONE: genetiske polymorfier i CASP8 Gene Arrangøren kan ikke være associeret med kolorektal cancer i Han kinesisk fra Southwest China

Abstrakt

Formål

Caspase 8 (CASP8) spiller en afgørende rolle i den apoptotiske vej og afvigende regulering af denne vej forårsager mange sygdomme, herunder kræft. Genetiske varianter rs3834129 (CTTACT /-) og rs3769821 (T /C) i promoter region af

CASP8

gen blev dokumenteret at være forbundet med flere solide kræft og non-Hodgkins lymfom (NHL), henholdsvis, på trods af nogle kontroverser. Vi havde til formål at skelne potentiel forening af disse to varianter og rs113686495 (CTGTCATT /-)., Samt

CASP8

mRNA og protein udtryk niveauer med kolorektal cancer (CRC) i han-kinesere

Metoder

Vi genotype

CASP8

genetiske varianter i 305 CRC patienter og 342 raske personer fra Kunming, sydvestlige Kina. Ekspressionsniveauer af

CASP8

mRNA og protein blev kvantificeret i parrede ondartede og paracancerous normale væv ved hjælp af real-time kvantitativ PCR og western blot hhv. Vi sammenlignede frekvenserne af alleler, genotyper og haplotyper mellem cases og kontroller. Korrelation af

CASP8

mRNA og protein udtryk niveauer i parrede ondartede og paracancerous normale væv fra patienter med forskellige genotyper og klinisk udtryk blev også evalueret.

Resultater

Der var ingen sammenhæng af de

CASP8

genetiske varianter med CRC i vores case-kontrol undersøgelse.

CASP8

gen mRNA ekspressionsniveauer i kræft og paracancerous normale væv var ens, og der var ingen signifikant forskel mellem individer med forskellige genotyper og kliniske funktioner. Vi fandt imidlertid, at CASP8 proteinniveauet var signifikant lavere i ondartede væv end i parrede paracancerous normale væv.

Konklusioner

Vores resultater tyder på, at de tre

CASP8

genetiske varianter kan ikke forbundet med CRC risiko i han-kinesere fra det sydvestlige Kina. Afvigende CASP8 protein ekspression kan spille en rolle i patogenesen af ​​CRC

Henvisning:. Xiao M-S, Chang L, Li W-L, Du Y-S, Pan Y, Zhang D-F, et al. (2013) genetiske polymorfier af

CASP8

Gene Arrangøren kan ikke være associeret med kolorektal cancer i Han kinesisk fra sydvestlige Kina. PLoS ONE 8 (7): e67577. doi: 10,1371 /journal.pone.0067577

Redaktør: Jirong Lang, Vanderbilt University, USA

Modtaget: Marts 27, 2013; Accepteret: 20 maj 2013; Udgivet: 2 juli 2013

Copyright: © 2013 Xiao et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af Top talenter Program for Yunnan-provinsen (2009CI119), National Natural Science Foundation of China (30.925.021) og Chinese Academy of Sciences. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Kolorektal cancer (CRC) er en af ​​de mest udbredte kræftformer i verden, med en 5-års overlevelse på 30-65% [1]. Selvom størstedelen af ​​CRC (næsten 80%) er sporadisk [2], [3], ca. 35% af CRC patienter kan tilskrives genetisk baggrund ifølge undersøgelsen af ​​enæggede tvillinger [3], hvilket betyder, at både genetiske og miljømæssige faktorer har afgørende roller i patogenesen af ​​CRC. Mange mennesker blev udsat for miljømæssige risikofaktorer, såsom rygning [4], drikke [4], usund kost og livsstil [5], [6], men kun nogle af dem lidt fra CRC, tyder på, at genetiske variationer delvist bestemme modtagelighed til CRC.

Apoptose, også kaldet programmeret celledød, er involveret i at opretholde vævshomeostase, udvikling og fjerne uønskede celler i multicellulære organismer [7]. Dysfunktion af denne proces ville resultere i tumorigenese [8]. Apoptotisk celledød medieres af en familie af stærkt konserverede caspaser (cystein-afhængige aspartat-specifikke proteaser), der kan opdeles i “initiator-” caspaser og “effektor” caspaser [9]. Der er primært to apoptotiske veje i human:. Den ydre eller receptor-medieret vej og den intrinsiske eller mitokondrie pathway, både ansætte caspaser kaskade [10], [11], [12]

Caspase 8, som kodes af

CASP8

gen (som er placeret på kromosom 2q33-q34 og har 14 exons), fungerer som initiativtager caspase i apoptosecyklus og et afgørende defensiv barriere mod ondartet spredning og tumorigenese [7], [8] [11], [13]. Den Indel polymorfi, rs3834129 (CTTACT /-, skrives som 6 bp /del i den følgende tekst), i promoter region af

CASP8

gen blev rapporteret at være forbundet med følsomhed over for en bred vifte af kræftformer, herunder CRC i kinesiske befolkning [14]. Selv om denne variant efterfølgende blev rapporteret at være forbundet med en risiko for kul arbejdere og blære kræftformer i kinesiske befolkningsgrupper [15], [16], den positive Foreningen blev ikke gentaget i de efterfølgende storskala case-kontrol studier i europæiske og amerikanske befolkning [17 ], [18]. Genotyper TC og CC af en anden enkelt-nukleotid polymorfisme (SNP), rs3769821 (T /C), som også er placeret i promotorregionen af ​​

CASP8

genet, blev fundet at påvirke genetisk disposition for non-Hodgkins lymfom (NHL) i en samlet analyse af tre populationer fra USA og Australien [19]. Dette blev dog positivt resultat ikke bekræftet i vores seneste genetisk analyse for Han-kinesere med NHL og luciferaseanalyse [20].

For at skelne, om rs3834129 og rs3769821 bidrager til genetisk modtagelighed for CRC i Han kinesisk fra sydvest Kina, vi genotypet disse to varianter, sammen med rs113686495 (CTGTCATT /-, skrives som 8 bp /del i den følgende tekst, som er placeret på 50 bp nedstrøms rs3769821). Vi yderligere kvantificeret mRNA-ekspression af den

CASP8

gen i både cancrøse og paracancerous normalt væv i CRC patienter med forskellige genotyper for at identificere potentielle virkning af forskellige alleler på genekspression. Desuden har vi sammenlignet mRNA-niveauer i CRC patienter med forskellige kliniske karakteristika. Den CASP8 proteinniveauet blev målt i parrede kankrøse og paracancerous normale væv fra i alt 39 patienter, at sammenligne med det mønster af mRNA-ekspression. Vores resultater viste, at

CASP8

genetiske varianter og mRNA-ekspression niveau sandsynligvis ikke at være forbundet med CRC i han-kinesere. Vi fandt imidlertid, at kræft væv havde en signifikant lavere CASP8 protein end paracancerous normale væv, hvilket tyder på, at potentielle post-transkriptionel regulering af dette gen spiller en aktiv rolle i udviklingen af ​​CRC.

Materialer og metoder

Etik Statement

Denne undersøgelse blev godkendt af institutionelle gennemgang bestyrelsen for Kunming Institute of Zoology. Skriftligt informeret samtykke i overensstemmelse med grundprincipperne i Helsinki-deklarationen blev opnået fra hver deltager forud for undersøgelsen.

Undersøgelse Befolkning og vævsprøver

Kræft væv blev indsamlet fra 305 han-kinesere med CRC. Disse patienter blev opereret på First Affiliated Hospital i Kunming Medical University fra 2010 til 2011. Alle patienter blev histopathogically bekræftet at være CRC og modtog ingen medicinsk behandling (med undtagelse af 12 patienter) forud for operation for at fjerne svulsten. Den fase af kræft blev klassificeret i henhold til 7. udgave af AJCC Cancer Staging Handbook [21]. Blodprøver blev opnået fra 342 raske individer (herunder 133 rapporteret i vores tidligere undersøgelse [20]). Demografiske informationer og histopatologiske karakteristika for CRC patienter og raske kontroller blev vist i tabel 1. Vi indsamlede også paracancerous normale væv for nogle patienter; denne normale væv blev placeret i en region fem centimeter væk danner grænsen af ​​kræft væv, og patologisk undersøgelse af dette væv viste ingen tegn på maligne celler.

Genotypebestemmelse arrangøren genetiske varianter af den CASP8 Gene

Genomisk DNA blev ekstraheret fra cancervæv af CRC patienter og blodprøver fra raske kontroller ved anvendelse af standard phenol /chloroform-metoden. Vi fulgte samme fremgangsmåde og tilstand beskrevet i vores tidligere undersøgelse til genotype de tre genvarianter i

CASP8

promoter region [20]. Kort fortalt 6 bp /del og 8 bp /del polymorfier blev bestemt ved polymerasekædereaktion (PCR) og polyacrylamidgelelektroforese (PAGE). SNP rs3769821 blev genotypebestemt ved PCR-RFLP-assayet.

Kvantitativ RT-PCR for CASP8 mRNA-ekspression

Totalt RNA blev isoleret fra parrede cancerøse og paracancerous normale væv af 99 CRC patienter, som ikke fik strålebehandling og /eller kemoterapi behandling før operationen ved anvendelse af TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA) ifølge producentens instruktioner. Et mikrogram af total RNA blev anvendt til at syntetisere enkeltstrenget cDNA ved anvendelse af en oligo (dT) 18-mer som primer og MMLV revers transkriptase (Promega, Madison, WI) i et endeligt reaktionsvolumen på 25 pi. Primere CASP8-F (5′-GCAGAGGGAACCTGGTACAT-3 ‘) og CASP8-R (5′-TCATCCTTGTTGCTTACTTCATAG-3’) blev anvendt til at detektere

CASP8

mRNA-transkripter A (Genbank NM_001228.4), B (NM_033355.3), C (NM_033356.3), F (NM_001080124.1) og G (NM_001080125.1). Real-time PCR blev udført på IQ2 Real-Time PCR systemet (Bio-Rad, Hercules, CA) med SYBR

Premix Ex Taq

II (Tli RNaseH Plus, TaKaRa, Otsu, Shiga) og følgende amplifikation betingelse: en indledende denaturering ved 94 ° C i 3 minutter, efterfulgt af 35 cykler ved 94 ° C i 15 s, 50 ° C i 15 s og 72 ° C i 20 s, og en endelig forlængelse cyklus ved 72 ° C i 5 min.

GAPDH Hotel (Glyceraldehyd 3-fosfat dehydrogenase) genet blev forstærket til normalisering. Vi anvendte primerpar 5′- CAACTACATGGTTTACATGTTC 3 ‘/5′-GCCAGTGGACTCCACGAC-3’ og samme termiske cykliseringsparametre (bortset fra en ændring af annealingstemperatur til 55 ° C), mens den for

CASP8

gen til forstærke

GAPDH

gen. Hver prøve blev udført i to kopier.

Western blot-analyse for CASP8 Protein

Væv blev vasket med kold ACK buffer for at fjerne røde blodlegemer og blev mashed i lysepuffer leveres med proteasehæmmere ved hjælp pelleten Pestle (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Proteinkoncentrationer blev bestemt ved BCA assay ifølge producentens anvisninger (Beyotime, Haimen, Jiangsu) under anvendelse af bovint serumalbumin som en standard. Femogtyve mikrogram totalt protein blev separeret på 15% SDS-PAGE og overført til en PVDF-membran (Roche Diagnose, Indianapolis, IN). Efter blokering med 5% fedtfri mælk i 2 timer ved stuetemperatur blev membranen blottet med muse-anti-caspase-8-antistof (1:4000, Cell Signaling Technology, Danvers, MA) ved 4 ° C natten over. Membranen blev vasket med TBST tre gange i 10 min hver, efterfulgt af inkubering med gede-anti-muse-IgG sekundært antistof (1:10000, KPL, Gaithersburg, MD) i 1 time ved stuetemperatur. Membranen blev vasket med TBST som beskrevet ovenfor og udviklet ved anvendelse af Immobilon Western Chemiluminescent HRP substrat (Millipore, Billerica, MA). Den β-actin blev kvantificeret i hver prøve efter samme procedure ved hjælp muse-anti-β-actin antistof (1:100000, Zhongshan Goden Bridge Biotechnology Co., Ltd, Beijing) til normalisering. Tætheden af ​​hvert proteinbånd blev beregnet under anvendelse Image J software (NIH, Bethesda, MD).

Statistical Analysis

Statistisk analyse blev udført ved anvendelse af R-programmet (version 2.11.1, Wien , Østrig) og et

P Drømmeholdet værdi mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Power beregninger blev udført ved anvendelse af Quanto software [22]. Afvigelse fra Hardy-Weinberg ligevægt (HWE) blev vurderet for hver variant ved hjælp af

χ

2-test (df = 1). Allel frekvenser af de tre varianter mellem cases og kontroller blev også sammenlignet ved hjælp af

χ

2-test. Den parvise D ‘værdi på tværs varianter rs3834129, rs3769821 og rs113686495 i sager og kontroller blev bestemt ved Haploview V4.2 [23]. Haplotyper og deres frekvenser blev estimeret baseret på Bayes metode ved hjælp af fase 2.1 [24]. Ubetinget logistisk regressionsanalyse blev anvendt til at beregne odds ratio (OR) og 95% konfidensintervaller (CI), til estimering af potentielle sammenslutning af forskellige genotyper af rs3834129, rs3769821, og rs113686495 med CRC. Genotyper 6 bp /6 bp rs3834129, TT af rs3769821, og del /del af rs113686495 og de vigtigste haplotype blev brugt som reference korrigeret for alder (≤50 og 50 år) og køn. Parret

t

-test blev anvendt til at bestemme forskellen mellem de

CASP8

genekspressionsniveauer mellem to grupper. ANOVA blev anvendt til at sammenligne gennemsnitshøjden af ​​

CASP8

genekspression blandt grupper mere end to.

Resultater

Manglende associering mellem tre genetiske varianter af den CASP8 arrangøren og CRC

Vores stikprøvestørrelse (305 patienter versus 342 kontroller) under matchet case-kontrol design med en log-additiv arv tilstand havde tilstrækkelig statistisk styrke til foreningen studiet. Blandt de tre varianter analyseret i kontrolpopulationen, mindre allel frekvens (MAF) varierede fra 21,1% til 26,7%. I betragtning af MAF af 0,211, den statistiske styrke til at opdage en odds ratio (OR) værdi på 1,5 for risiko allel var forventet at være 85%, mens den strøm til MAF af 0,267 forventedes at være 90%.

allelfrekvenserne af rs3834129, rs3769821, og rs113686495 af

CASP8

gen promotor i tilfælde og kontrolgrupper blev anført i tabel 2. Genotype distribution af alle disse varianter ikke blev fraveget HWE. Ingen statistisk signifikant forskel blev observeret mellem de tilfælde og kontroller for hver allel af rs3834129, rs3769821, og rs113686495. Bemærk, at der var nogle små forskelle mellem de allelfrekvenserne af rs3834129 i vores prøver og CRC prøver fra Sun et al. [14] (tabel 2), hvilket kan afspejle den regionale forskel. Der var ingen sammenhæng af visse genotype af de tre varianter med CRC (tabel 3).

Da varianter rs3769821 og rs113686495 var i stærk koblingsuligevægt i både tilfælde og kontrol populationer (figur 1) vi udledte haplotyper baseret på varianter rs3834129 og rs3769821 kun og vurderet potentielle sammenhæng mellem haplotype og CRC risiko. Ligeledes observerede vi ingen associering haplotype med CRC (tabel 4). Tilsammen foreslog vores resultater, at genetiske varianter i

CASP8

genpromotorregion ikke sandsynligt, at give stor risiko for CRC i Han kinesisk fra sydvest Kina.

Tallene inden for de pladser vises for D ‘og r

2 scoringer (x100) for parvis koblingsuligevægt (LD) med en rød-til-hvid gradient afspejler højere til lavere LD scoringer.

CASP8 mRNA ekspression niveauer i CRC Væv og den tilsvarende normale væv er Lignende

for at undersøge, om

CASP8

ekspressionsniveauerne variere mellem patienter og inden matchede normale og tumor prøver og derefter at tage fat om der er nogen sammenhæng med genotype vi analyserede

CASP8

mRNA udtryk niveau i parrede ondartede og paracancerous normale væv fra 99 patienter, som fik nogen behandling før operation. Svarende til genotypebestemmelse resultat, var der ingen statistisk signifikant forskel i

CASP8

mRNA-niveau i enten cancerøse eller paracancerous normale væv hos patienter med forskellige genotyper (figur 2). Bemærk, at mRNA-ekspression i væv med genotyper del /del af rs3834129, CC af rs3769821, og 8 bp /8 bp af rs113686495 viste en relativt lavere værdi end de andre genotyper (figur 2), og dette kan tilskrives mindre antal af patienter med disse genotyper, hvis ikke var forårsaget af cis-forordningen, da disse SNPs er i promoter region af

CASP8

gen.

Blandt 99 ubehandlede patienter målt til

CASP8

mRNA-ekspression, en patient ikke skal genotypebestemmes og blev udelukket.

for at afsløre potentielle effekt af

CASP8

gen på patogenese og kliniske karakteristika for CRC, vi sammenlignet

CASP8

mRNA ekspressionsniveauer i kræft væv og paracancerous normale væv i alle patienter, men ikke observeret nogen signifikant forskel (

P

= 0,102, figur 3a). Tilsvarende

CASP8

mRNA-ekspression i cancervæv fra patienter med forskellige kliniske karakteristika viste ingen signifikant forskel (figur 3b, c, d, e, f). Kræft og paracancerous normale væv fra patienter på forskellige stadier af kræft udvikling og progression havde et tilsvarende niveau for

CASP8

mRNA-ekspression (figur 4), selv om kræft væv fra patienter på T4 stadie havde en marginalt signifikant højere mRNA udtryk end parrede paracancerous normale væv (

P

= 0,045, figur 4c). Tilsyneladende blev den

CASP8

gen mRNA ekspressionsniveauet ikke stramt forbundet med CRC i vores patienter.

TNM mellemstationer blev klassificeret i henhold til den 7. udgave af AJCC Cancer Staging Handbook [21], og placeringen og differentiering af cancerøse væv blev bestemt ved kirurgisk og histopatologisk undersøgelse, hhv. Der var ingen signifikant forskel i

CASP8

mRNA-ekspression i cancerceller og paracancerous normale væv fra alle 99 patienter (a).

CASP8

mRNA-ekspression i cancervæv fra patienter med forskellige kliniske karakteristika viste ingen signifikant forskel (b-f). A-kolon, T-kolon, D-tyktarm og endetarm står for colon ascendens, tværgående tyktarm, faldende tyktarm og endetarm, hhv.

TNM mellemstationer blev klassificeret i henhold til den 7. udgave af AJCC Cancer iscenesættelse Handbook [21].

CASP8 Protein Level blev signifikant reduceret i cancervæv Sammenligning med parrede Paracancerous normale væv

Mange gener reguleres via en post-transkriptionel mekanisme, f.eks opregulering af placental vækstfaktor ved vaskulær endotel vækstfaktor i endotelceller [25]. For at undersøge om det

CASP8

gen har en rolle i CRC udvikling gennem et post-transkriptionel regulering, valgt vi parret ondartede og paracancerous normale væv fra 39 patienter med forskellige

CASP8

promoter genotyper, mRNA-ekspression og kvantificeres proteinekspression niveau (tabel S1). Vi observerede en signifikant lavere CASP8 protein i kræft væv end paracancerous væv (

P

= 0,005), selv om

CASP8

mRNA-niveauer i disse prøver var ens (

P

= 0,464, figur 5).

genotype og kliniske oplysninger for disse patienter blev anført i tabel S1.

diskussion

Caspase 8 (

CASP8

) er et velkendt indkøber af død signal i den apoptotiske vej, der var involveret i døden receptorstimulering, permeabilisering af den ydre mitokondriemembran og frigivelse af pro-apoptotiske proteiner i cytosolen fra mitokondrierne [26]. Det fungerer som et afgørende defensiv barriere mod ondartet spredning og tumorigenese [7], [10], [27]. Tidligere undersøgelser har præsenteret modstridende resultater vedrørende den potentielle rolle af genetiske varianter i

CASP8

genpromotorregion i tumorigenese [14], [15], [16], [17], [18], [20] , [28], [29], [30]. I en pioner undersøgelse, genetisk variant (rs3834129) i

CASP8

promotor-regionen var forbundet med en lang række solide kræftformer, herunder lunge, esophageal, gastrisk, kolorektal, livmoderhalskræft og brystkræft i kinesiske befolkningsgrupper ved at påvirke Sp1 transkriptionel faktor bindingssted og

CASP8

genekspression [14]. Denne indledende fund blev bekræftet i efterfølgende case-kontrol-associationsstudier i uafhængige kinesiske prøver med blærekræft [16] og kul arbejdstagernes pneumokoniose [15]. Men flere andre rapporter undladt at replikere sammenhængen mellem dette 6 bp /del polymorfi og flere kræftformer i forskellige populationer [18], [30], [31], [32]. Disse inkonsistente resultater kan forklares ved forskellige genetiske baggrunde af befolkningerne i forskellige undersøgelser [33], som frekvensen af ​​6-bp del allel var signifikant forskellig mellem asiatiske og kaukasiske populationer (22,4% vs. 49,1%) [32], [34 ]. I en nylig undersøgelse, Lan og kolleger [19] bevis for, at en anden SNP rs3769821 i

CASP8

promotor-regionen var signifikant forbundet med genetisk risiko for NHL. Vi har imidlertid ikke replikere dette resultat i Han-kinesere med NHL og cellulær luciferaseanalyse viste ingen forskel af promotorregionen indeholder forskellige alleler [20]. Hidtil om

CASP8

genekspression kan påvirke patogenesen af ​​CRC er stadig kontroversiel [35], [36], [37]. Der er en nødvendighed for at revurdere den potentielle effekt af promoter varianter og udtryk for den

CASP8

gen på CRC.

I denne undersøgelse ved at analysere CRC patienter fra Kunming, Yunnan-provinsen, vi bestemt at besvare, om

CASP8

gen var aktivt involveret i udviklingen af ​​CRC. Vi screenede først tre genetiske varianter i

CASP8

genpromotorregion, hvor to er blevet rapporteret at være forbundet med solide tumorer (rs3834129 [14]) og NHL (rs3769821; [19]). Vi kvantificeres derefter

CASP8

mRNA niveau i parrede ondartede og paracancerous normale væv til yderligere skelne potentiel sammenhæng mellem

CASP8

genotyper og mRNA-ekspression. Vi fandt ingen sammenhæng i

CASP8

promotor varianter med CRC i case og kontrolprøver (tabel 2 og 3). Desuden fandt vi ikke nogen statistisk signifikant forskel i

CASP8

mRNA niveau hos patienter med forskellige genotyper (Figur 2). Disse negative resultater var i overensstemmelse med vores tidligere luciferaseanalyse [20], hvor vi observeret nogen forskel for vektorer med forskellige alleler i

CASP8

promotor.

De tilgængelige kliniske data for patienter tilbudt os en mulighed for at vurdere sammenhængen mellem

CASP8

genekspression og udvikling af CRC. Ved at gruppere patienter i henhold tumor stadium, metastase, og differentiering status, fandt vi ingen signifikant forskel i

CASP8

mRNA ekspressionsniveauer mellem kræft og paracancerous normale væv og mellem patienter med forskellige kliniske træk (figur 3 og 4), tyder på, at

CASP8

mRNA-ekspression ikke kunne spille en afgørende rolle i CRC. Svarende til vores konklusion, Pan et al. [36] heller ikke identificere nogen signifikant forskel i

CASP8

mRNA-niveauer i normal slimhinde, polypper, og CRC. i modsætning til to tidligere rapporterede undersøgelser, at

CASP8

udtryk blev opreguleres under kolorektal carcinogenese [35], [37], viste dog, at det CASP8 proteinniveauet i kræft væv var betydeligt lavere end for parret paracancerous normale væv (figur 5). Den usammenhængende mønster af

CASP8

mRNA og protein udtryk niveauer i denne undersøgelse foreslået, at en post-transkriptionel regulering, såsom overdreven ubiquitin af CASP8 protein i tumorvæv og /eller miRNA regulering, kan spille en afgørende rolle i udviklingen af ​​CRC. Yderligere karakterisering skal udføres i fremtiden at størkne denne spekulation.

Vores undersøgelse havde flere begrænsninger. Først prøvens størrelse (305 tilfælde og 342 kontroller) for foreningen analyse var relativt lille og kun tre varianter i promoter region af

CASP8

gen blev genotype, som måske ikke har tilstrækkelig magt til at opdage virkningerne under forudsætning af en forholdsvis lav odds ratio. Yderligere undersøgelser med større antal prøver og flere genetiske varianter vil være afgørende for at kontrollere vores konklusion. For det andet, vi kun analyseret

CASP8

mRNA og protein-ekspression i en delmængde af CRC patienter. Som nævnt ovenfor, observerede vi en reduceret ekspression inden for visse genotyper (figur 2). Flere patienter bør analyseres til helt udelukke potentiel skævhed forårsaget af et lille antal patienter i disse grupper. For det tredje har vi ikke hente alle

CASP8

udskrifter /forstadier i denne undersøgelse. Vores måling for

CASP8

mRNA-transkripter A, B, C, G og G i ét assay kunne ikke skelne hvilken transkript spiller en vigtig rolle i vævet af interesse. Endelig gjorde vi ikke skærmen mutation i den kodende region af

CASP8

gen. Det er fortsat uvist, om specifik CASP8 mutant ville påvirke CRC udvikling. Kim og kolleger [38] rapporterede, at tilstedeværelsen af ​​mutationer i

CASP8

gen kodende område kan forårsage dysfunktion af apoptotiske vej, der endeligt vil bidrage til udviklingen af ​​CRC.

Kollektivt, vi spekuleret på, at

CASP8

gen kunne indlede CRC udviklingen og progressionen eventuelle via regulering af proteinniveau og /eller kodende region funktionel mutation (er), i stedet for mRNA-ekspression.

konklusioner

Vi fandt, at genetiske varianter rs3834129, rs3769821 og rs113686495 i

CASP8

promoter region var ikke forbundet med genetisk disposition for CRC i Han kinesisk fra sydvestlige Kina. Yderligere analyser af

CASP8

genekspression i kræft og paracancerous væv viste ingen korrelation af mRNA-ekspression niveau med forskellige genotyper og fremskridt i CRC. Vi fandt imidlertid, at CASP8 protein var signifikant lavere i ondartede væv end i parrede paracancerous normale væv, om end begge prøver havde lignende niveau af mRNA-ekspression. Disse resultater antydede, at afvigende udtryk og /eller fejl i CASP8 protein ville spille en aktiv rolle i CRC udvikling og progression. Der er behov for Uafhængig befolkning med større prøve størrelse og funktionelle assays til yderligere at bekræfte vores resultater.

Støtte Information

Tabel S1.

Genotype og patologiske oplysninger for 39 patienter, der blev analyseret for CASP8 proteinekspression

doi:. 10,1371 /journal.pone.0067577.s001

(DOC)

Tak

Vi takker patienterne for at donere væv. Vi takker også de to anonyme dommere for deres konstruktive kommentarer.