PLoS ONE: genetisk polymorfi i en VEGF-uafhængig angiogenese Gene ANGPT1 og samlet overlevelse af tarmkræft Patienter efter Kirurgisk Resection

Abstrakt

Baggrund

VEGF-uafhængig angiogene signalering spiller en vigtig rolle i udviklingen af ​​colorectal cancer (CRC). Men dens konsekvenser i det kliniske resultat af CRC ikke er blevet rapporteret,. Denne undersøgelse havde til formål at undersøge sammenhængen mellem genetiske variationer i flere større VEGF-uafhængig signalering pathway gener og den samlede overlevelse CRC patienter.

Metoder

Syv enkelt nukleotid polymorfier (SNP) i fire vigtige VEGF-uafhængig angiogene gener (

ANGPT1

,

AMOT

,

DLL4

ENG

) blev genotype i en kinesisk befolkning med 408 CRC patienter.

Resultater

En SNP, rs1954727 i

ANGPT1

, var signifikant associeret med CRC samlet overlevelse. I forhold til patienter med homozygot vildtype genotype rs1954727, dem med heterozygote og homozygote variant genotyper udstillet en gunstig samlet overlevelse med en hazard ratio (HR) på 0,89 (95% konfidensinterval [CI] 0,55-1,43,

P

= 0,623), og 0,32 (95% CI 0,15 til 0,71,

P

= 0,005) henholdsvis (

P

trend = 0,008). I stratificeret analyse, denne forening var betydelig hos patienter i kemoterapi (

P

trend = 0,012), men ikke i dem uden kemoterapi. Vi evalueres yderligere effekten af ​​kemoterapi på CRC overlevelse, der blev stratificeret ved rs1954727 genotyper. Vi fandt, at kemoterapi resulterede i en væsentligt bedre samlet overlevelse i CRC patienter (HR = 0,44, 95% CI 0,26 til 0,75,

P

= 0,002), hvilket var især fremtrædende i de patienter med den heterozygote genotype rs1954727 (HR = 0,45, 95% CI 0,22-0,92,

P

= 0,028).

Konklusion

Vores data tyder på, at rs1954727 i

ANGPT1

gen kan være en prognostisk biomarkør for den samlede overlevelse CRC patienter, især i dem, der modtager kemoterapi, en konstatering af, at warrants validering i større uafhængige populationer

Henvisning:. Dai J, Wan S, Zhou F, Myers RE, Guo X, Li B, et al. (2012) genetisk polymorfi i en VEGF-uafhængig angiogenese Gene ANGPT1 og samlet overlevelse af tarmkræft Patienter efter kirurgisk resektion. PLoS ONE 7 (4): e34758. doi: 10,1371 /journal.pone.0034758

Redaktør: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan

Modtaget: 7. oktober, 2011; Accepteret: 5 Mar 2012; Udgivet: April 4, 2012 |

Copyright: © 2012 Dai et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Arbejdet rapporteret her understøttes af en start-up bevilling fra Thomas Jefferson University indrømme 2009CB521704 fra The National Basic Research Program i Kina, og giver 30.872.927 fra National Natural Science Foundation of China. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Worldwide, kolorektal cancer (CRC) er den tredje mest almindelige malignitet og den fjerde hyppigste årsag til kræft død med en anslået 1,234,000 nye tilfælde og 608.000 dødsfald i 2008 [1]. CRC er en sygdom, der er i vid udstrækning påvirket af livsstil og kostfaktorer [2], men de seneste undersøgelser har antydet, at inter-individuelle genetiske variationer væsentligt kan påvirke risikoen for CRC [3], [4], [5]. Desuden, akkumulering beviser, herunder dem fra vores egne undersøgelser har også vist, at single-polymorfier (SNP) kan anvendes som surrogat biomarkører for den genetiske baggrund af CRC patienter til at forudsige terapeutisk respons og prognose [6], [7], [8], [9].

tumorangiogenese, genereringen af ​​nye blodkar, er en afgørende cellulær proces, der påvirker tumorcellevækst, invasion, lokal-regional tilbagefald, og metastatisk spredning af CRC, hvilket gør det et attraktivt mål for udvikling anticancer narkotika [10] .Den tumorcellevækst, invasion, og metastaser er stærkt påvirket af balance af funktioner af endogene angiogene og antiangiogene faktorer [10]. De vaskulære endotheliale vækstfaktorer (VEGF’er) og dens receptorer (VEGFRs) spiller en central rolle i angiogenese pathway [11]. De funktionelle inhibitorer af VEGF og VEGFRs, såsom anti-VEGF neutraliserende antistof og små molekyler, der blokerer tyrosinkinaseaktiviteten af ​​VEGFRs, er blevet godkendt som anti-angiogenese-terapier for mange cancertyper, herunder CRC [12]. Men den brede modstand mod antiangiogene terapier rettet mod VEGF vej stimulerede søgningen efter behandlinger rettet mod VEGF-uafhængige angiogenese vej [12], [13], såsom pro-angiogene veje medieret af angiopoietiner /TIE-2 og Delta /Notch [14], [15], samt antiangiogen veje medieret af angiomotin og endoglin proteiner [16], [17].

Genetiske variationer i

VEGF

gen har blevet rapporteret at modulere VEGF-genekspression [18], [19], [20]. De har også været forbundet med ætiologien og kliniske resultater af CRC [21], [22], [23]. Men selv om grundlæggende undersøgelser har afsløret en væsentlig rolle for VEGF-uafhængig pathway gener i ætiologien og kliniske resultat af CRC er ingen undersøgelse rapporteret, på sammenhængen mellem de genetiske variationer af disse gener og CRC prognose. Formålet med den aktuelle pilotundersøgelse var at evaluere associationen mellem SNP’er i flere større VEGF-uafhængig angiogen pathwaygener med overordnet overlevelse på CRC patienter.

Materialer og metoder Salg

Ethics

Denne undersøgelse blev godkendt af de institutionelle anmeldelse bestyrelser den fjerde Military Medical University. Et skriftligt informeret samtykke med en signatur blev opnået for hver patient.

Patient befolkning og klinisk dataindsamling

Denne undersøgelse blev fokuseret på VEGF-uafhængig angiogenese gen SNPs som potentielle indikatorer for CRC prognose. Derfor havde alle fag indgår i denne undersøgelse histopatologisk bekræftet CRC. Oprindeligt blev 496 CRC patienter rekrutteret i perioden mellem februar 2006 og april 2010 Fra departementerne General Surgery i Xijing Hospital og Tangdu Hospital, som er tilknyttet den fjerde Military Medical University i Xi’an, Kina. Der var ingen rekruttering restriktioner på alder, køn og kræft scene. Alle CRC patienter havde ingen tidligere andre kræftformer, kemoterapi eller strålebehandling. Alle CRC patienter blev nyligt diagnosticeret og histopatologisk bekræftet som havende adenocarcinom. Med henblik på denne undersøgelse blev 88 patienter ekskluderet, af følgende grunde: ikke opereres eller kun modtaget palliativ operation (26 patienter), havde ufuldstændige kliniske oplysninger eller manglede opfølgning (48 patienter), døde inden for en måned kirurgi (6 patienter) og havde dårlig kvalitet og /eller mængden af ​​DNA-prøven (8 patienter). Endelig blev 408 kirurgisk resektion patienter med komplet klinisk og opfølgning data samt høj kvalitet DNA-prøver indgår i nærværende undersøgelse. Alle patienter var han-kinesere.

Demografiske og kliniske data

Detaljeret demografiske og kliniske oplysninger blev indsamlet via in-person interview, medicinsk diagram revision, eller konsultation med behandling af læger. De demografiske data indsamlet omfatter alder, køn, etnicitet, rygning status, drikke status og body mass index (BMI). De kliniske data indsamlet omfatter tidspunktet for diagnosen, tidspunktet for kirurgi og /eller kemoterapi, dødstidspunktet, tumor fase, differentiering, placering site, lymfeknude invasiv, behandling protokol, og serum-CEA (carcinoembryonisk antigen). En standard opfølgning blev udført af en uddannet klinisk specialist gennem on-site interview, direkte kald, eller medicinsk diagram revision. De seneste opfølgning data i denne analyse blev opnået i februar 2011. patient indskrevet efter august 2008 5-ml blod var til rådighed for genomisk DNA-ekstraktion ved hjælp af E.Z.N.A. Blood DNA Midi Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA). For patienter indskrevet inden august 2008 blev genomisk DNA ekstraheret fra ca. 100 mg af hosliggende normale væv opnået ved en patolog efter operationen ved hjælp af E.Z.N.A. væv DNA Kit (Omega Bio-Tek).

SNP udvælgelse og genotyping

Fire store gener i VEGF-uafhængige angiogene vej blev undersøgt, herunder

AGNPT1

som koder for en TIE2 agonist, som stimulerer PI3K-Akt signaleringsvej som en overlevelse signal og stabiliserer blodkar,

DLL4

(Delta-like 4 ligand), der koder for et protein, der udskilles fra endotelceller og fremmer angiogenese ved at undertrykke ikke Funktionelle spiring af vaskulære endotelceller,

AMOT

(Angiomotin), som koder for et angiostatin hæmmer, der medierer rør dannelse og migration af endotelceller mod vækstfaktorer under dannelsen af ​​nye blodkar, og

ENG

(Endoglin), som koder en bestanddel af transformerende vækstfaktor beta receptorkompleks involveret i angiogenese, kardiovaskulær udvikling og vaskulær homeostase. Potentielt funktionelle SNP’er, i funktionelle regioner, herunder promotorer, exons og uoversatte regioner (UTR’er) blev udvalgt ved hjælp af et sæt af web-baserede SNP markeringsværktøjer (frit tilgængelig på https://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) , hvorved man kan vælge SNPs baseret på koblingsuligevægt (LD) og forudsagte funktionelle egenskaber både kodende og ikke-kodende SNP’er. 5′- og 3′-flankerende områder blev arbitrært sat ved 1000 bp for alle gener. Kun validerede SNP’er blev udvalgt og SNPs med mindre allel frekvens (MAF) 5% i asiatiske befolkning blev udelukket. I tilfælde af flere potentielt funktionelle SNP’er inden for samme haplotype blok (defineret ved binding koefficient r

2 0,8), blev kun én SNP inkluderet. Endelig blev identificeret i alt syv SNPs for de fire gener, herunder to SNPs i

ANGPT1

(rs1954727 og rs9297395), tre SNPs i

AMOT

(rs2286064, rs2286063, rs640009), en SNP i

DLL4

(rs12439845) og en SNP i

ENG

(rs7865146). Genotypebestemmelse blev udført ved hjælp af Sequenom IPLEX genotype-system (Sequenom Inc, CA). Laboratorie personale, der giver genotypning blev blindet for patienternes oplysninger. Den gennemsnitlige takst for genotypebestemmelse var 99,4%. kontrolforanstaltninger streng kvalitetskontrol blev gennemført i løbet af genotype med over 99% overensstemmelse mellem prøverne genotypede i to eksemplarer.

Statistisk analyse

endepunkt evalueret i denne undersøgelse var samlet overlevelse, defineret som tiden fra indledende kirurgi til døden eller sidste opfølgning. Hazard ratio (HR) og 95% konfidensinterval (95% CI) blev estimeret ved hjælp af en multivariat Cox proportionel risiko model, korrigeret for alder, køn, rygning status, drikke status, BMI, tumor position, tumor differentiering, tumor stadie, og kemoterapi , Hvor det er passende. Haplotype /diplotype blev bestemt under anvendelse af HelixTree software (Golden Helix, Inc.), og HR blev anslået multivariat Cox proportional hazard model ved hjælp af haplotypen /diplotype indeholder alle vildtype alleler som reference. Prøverne for interaktioner mellem SNPs og DNA kilde blev udført ved at inkludere en cross-produkt sigt i Cox proportional hazards model. Log-rank test blev anvendt til at vurdere forskellene i samlet overlevelse mellem forskellige patientgrupper. SAS statistisk pakke (SAS softwareversion 9.2, Cary, NC) blev anvendt til analyserne. Alle

P

værdier i denne undersøgelse var tosidet.

P

≤0.05 blev betragtet tærsklen til statistisk signifikans.

Resultater

Patienter Kendetegn

I alt 408 kirurgisk resektion CRC patienter blev inkluderet i denne studere, med en gennemsnitsalder på 59,4 år (interval, 22 til 90 år) og betyder BMI på 22,7 (interval, 15,8-32,9). Blandt patienterne, 56,4% (n = 230) var mænd og 46,6% (n = 178) var kvinder. Størstedelen af ​​patienterne var aldrig rygere (70,8%) og aldrig drikker (89,5%). Procentdelen af ​​patienter med coloncancer (47,1%) var lidt lavere end rectum cancerpatienter (52,9%). Omkring 47,1% af patienterne havde stadie II tumor, mens fase 0, I, III og IV tumorer var til stede i 2,0%, 14,2%, 27,2% og 9,6% af patienterne. Ca. 66,4% af patienterne havde moderat differentieret tumorer og 78,2% patienter blev behandlet med kemoterapi efter kirurgi. I en median follow-up tid på 22,9 måneder, cirka 23,0% (n = 94) af patienterne blev afdøde som af den sidste opfølgning (februar 2011) (tabel 1).

associering mellem individuelle SNP’er og overlevelsen i CRC patienter

de sammenslutninger af de syv udvalgte SNPs med CRC overlevelse blev analyseret ved hjælp af univariate og multivariate analyser korrigeret for alder, køn, rygning status, drikke status, BMI, tumor position, tumor differentiering , tumor stadium, og kemoterapi. Resultaterne blev opsummeret i tabel 2. Blandt dem, en SNP, rs1954727 placeret i 3’UTR region af

ANGPT1

gen, var signifikant forbundet med overlevelsen i CRC patienter i både univariate og multivariate analyser. I multivariat analyse, sammenlignet med den homozygote vildtype genotype (WW) blev heterozygote (WV) og homozygote variant genotype (VV) af rs1954727 forbundet med en HR på 0,89 (95% CI 0,55-1,43,

P

= 0,623) og 0,32 (95% CI 0,15-0,71,

P

= 0,005) henholdsvis med en signifikant dosis-respons effekt observeret (

P

trend = 0,008, tabel 2 ). Log rank test viste en signifikant forskel i den samlede overlevelse mellem vildtype og homozygote variant genotyper af rs1954727 (Log rank

P

= 0,019, figur 1). Disse resultater indikerede, at rs1954727 var en uafhængig forudsiger af CRC overlevelse i vores undersøgelse population. Derudover valgte vi tilfældigt 50 patienter inkluderet i dette studie med både blod og normale væv til rådighed, og genotype alle syv SNPs i både blod og væv DNA for disse patienter. Genotypebestemmelse Resultaterne var 100% overensstemmende mellem blod og væv DNA-prøver. Desuden er der for hver af de syv SNPs, gennemførte vi en test for interaktion (heterogenitet) mellem SNP og DNA kilde og ikke identificere nogen signifikant interaktion (

P

for interaktion for samlet overlevelse spænder fra 0,143 til rs1954727 til 0,651 for rs2286063, data ikke vist). Alle disse linjer af beviser viste, at de forskellige DNA kilder ikke påvirkede resultaterne identificeret i denne undersøgelse.

Foreningen af ​​rs1954727 med samlet overlevelse af CRC patienter stratificeret efter værtens egenskaber

Vi analyseret yderligere effekten af ​​rs1954727 på samlet overlevelse i CRC patienter stratificeret af demografiske og kliniske karakteristika. Som vist i tabel S1, blev signifikant bedre samlet overlevelse tillagt ved rs1954727 observeret hos ældre patienter (HR = 0,12, 95% CI, 0,03-0,60,

P

= 0,010), mandlige patienter (HR = 0,20, 95% CI, 0,05-0,75,

P

= 0,017), aldrig rygere (HR = 0,28, 95% CI, 0,11-0,73,

P

= 0,009), aldrig drikker (HR = 0,35, 95% CI, 0,15-0,84,

P

= 0,018), og patienter med lavere uddannelsesniveau (HR = 0,28, 95% CI, 0,08-0,94,

P

= 0,040 ), med kemoterapi (HR = 0,33, 95% CI, 0,14-0,79,

P

= 0,012), med tyktarmskræft (HR = 0,09, 95% CI, 0,02-0,40,

P

= 0,002), med dårlig og moderat tumor differentiering (HR = 0,32, 95% CI, 0,13-0,78,

P

= 0,012), med stadie 3 eller 4 tumorer (HR = 0,16, 95% CI, 0,04-0,65,

P

= 0,011), og med både lavere eller højere BMI (HR = 0,20, 95% CI, 0,04-0,97,

P

= 0,045, eller HR = 0,32, 95% CI, 0,11-0,92,

P

= 0,035, henholdsvis). Den betydelige dosisafhængig effekt tillagt ved rs1954727 var tydelig i patienter, der var ældre (

P

trend = 0,006), mænd (

P

trend = 0,012), aldrig ryger (

P

trend = 0,021), aldrig drikker (

P

trend = 0,025), og patienter med højere BMI (

P

trend = 0,025), med kemoterapi (

P

trend = 0,012), med tumor position for tyktarmskræft (

P

trend = 0,012), med dårlig og moderat tumor differentiering (

P

trend = 0,016), og med avanceret tumor fase af 3-4 (

P

trend = 0,003). Blandt de 319 patienter i kemoterapi, 308 (96,6%) modtog FOLFOX regimen, herunder folinsyre (FOL), fluoruracil (F) og Oxaliplatin (OX). En begrænsning af analysen til de patienter, der fik FOLFOX gav tilsvarende resultater til dem i den aktuelle analyse (data ikke vist).

Modulerende virkninger af kemoterapi på CRC overlevelse på rs1954727

Fordi størstedelen af CRC patienter i dette studie blev behandlet med kemoterapi, vi yderligere vurderet de modulerende virkninger på sammenhængen mellem kemoterapi og overordnede patient overlevelse, stratificeret efter rs1954727. Som vist i tabel 3, patienter i kemoterapi havde en signifikant bedre samlet overlevelse med en HR på 0,44 (95% CI, 0,26-0,75,

P

= 0,002) sammenlignet med patienter uden kemoterapi. Denne signifikant effekt på patientens overlevelse tillagt ved kemoterapi blev kun observeret hos patienter med den heterozygote genotype rs1954727 i lagdelte analyse (HR = 0,45, 95% CI 0,22-0,92,

P

= 0,028), men ikke i dem, der udfører den homozygot vildtype eller variant genotype.

haplotype og diplotype af

ANGPT1

gen og CRC samlet overlevelse

haplotype og diplotype analyser de blev udført for at evaluere den samlede virkning af de to SNPs i

ANGPT1

gen på CRC samlet overlevelse. Som det fremgår af tabel 4, var der fire haplotyper i størrelsesordenen rs9297395 og rs1954727 (W_W: 52,5%, W_V: 42,2%, V_W: 4,3%, og V_V: 1,0%) og tre diplotypes (W_W-W_W: 28,8%, W_W-W_V: 44,3%, og W_V-W_V: 19,7%) med en frekvens 1% i undersøgelsespopulationen. Sammenlignet med haplotypen indeholder vildtype-allelen for de to SNP’er (W_W), patienter med haplotypen af ​​W_V udviste en signifikant bedre samlet overlevelse (HR = 0,59, 95% CI 0,42-0,83,

P

= 0,002), hvilket var i overensstemmelse med de vigtigste virkning analyse af rs1954727 SNP. For diplotype analyse, sammenlignet med diplotype indeholder den homozygot vildtype genotype for både SNP’er (W_W-W_W), diplotype indeholder en kopi af det W_V haplotypen (W_W-W_V) og to kopier af W_V haplotype (W_V-W_V) udstillet en gradvis forbedret samlet overlevelse med en HR på 0,74 (95% CI 0,44-1,24, P = 0,247) og 0,30 (95% CI 0,13-0,67,

P

= 0,004), hhv. Vi udførte også haplotypen og diplotype analyser for de tre SNPs i

AMOT

gen blev dog ingen signifikante fund observeret (data ikke vist).

Diskussion

i denne undersøgelse, rapporterede vi en signifikant association af den samlede overlevelse i en kohorte af 408 kirurgisk behandlet CRC patienter med en genetisk variant, rs1954727, i

ANGPT1

, en central gen i VEGF-uafhængige angiogene signalering pathway. Derudover har vi identificeret en plausibel samspil mellem denne SNP og kemoterapi på modulerende CRC patient overlevelse.

Angiogeneseinhibitorer rettet mod VEGF signalvejen, såsom bevacizumab, sunitinib, og sorafenib, har vist betydelig terapeutisk effekt i forskellige kræftformer og blevet godkendt af den amerikanske Food and Drug Administration i kræftbehandlingen [24]. Men disse VEGF-targeting anti-angiogenese behandlinger ofte resultere i kun forbigående reaktioner i kræftpatienter, primært på grund af de to former for modstand mod angiogenese hæmning, adaptive modstand og iboende ikke-lydhørhed [13]. Begge former for resistens kan tilskrives den iboende heterogenitet af genetisk ustabile tumorceller, tilstedeværelsen af ​​redundante angiogene faktorer, og rekruttering af hæmatopoietiske celler og inflammatoriske celler ind i tumormassen [13]. Det er tænkeligt, at terapeutiske fremgangsmåder samtidig rettet mod flere angiogene faktorer, inflammatoriske veje og metastase processer kunne fremkalde mere klinisk meningsfulde svar [25]. Den ANGPT-TIE vej præsenterer en attraktiv mulighed for en sådan terapeutisk indgreb, da det er ikke kun afgørende for angiogenese og vaskulær homøostase i en VEGF-uafhængig måde, men det giver også en vigtig forbindelse mellem angiogenese og inflammation veje [25].

Menneskelig ANGPT-TIE protein familie består af tre ligander, ANGPT1, ANGPT2 og ANGPT4 samt to receptorer, TIE1 og TIE2. ANGPT1 er den vigtigste mediator af VEGF-uafhængig pro-angiogen signalvej, som aktiverer nedstrøms PI3K /AKT pathway gennem interaktion med TIE2 protein [26], [27]. ANGPT2 inhiberer ANGPT1 binding til TIE2-receptoren og forhindrer dens aktivering [28]. kræves dynamisk balance og sekventiel ekspression af ANGPTs og VEGF til opretholdelse angiogenese [29], [30]. Opreguleringen af ​​ANGPT1 er blevet undersøgt i mange cancere, hvilket antyder, at ANGPT1 stærkt korreleret med tumor malignitet [25]. Imidlertid har flere undersøgelser rapporteret en inhiberende virkning af ANGPT1 på den patologiske vaskulære ekspansion, hvilket indikerer, at ANGPT1 også kan fungere som en tumorsuppressor i flere kræftformer, herunder CRC [31], [32], [33], [34]. Disse resultater var i overensstemmelse med rapporterne fra flere uafhængige undersøgelser, der viser, at større andel af ANGPT2 /ANGTP1 var forbundet med dårlig prognose af flere maligniteter, herunder CRC [25]. Disse paradoksale resultater antyder virkningerne af ANGPT1 på tumor egenskaber og prognose kan være kræftspecifikke og også afhængig af andre angiogenese-relaterede gener.

Genetiske variationer i ANGPT gener kan føre til ændrede gen produktion og resultere i aktivering /inaktivering af genet. SNPs i

ANGPT1

gen har været forbundet med risiko for sygdomme som autoimmune sygdomme, juvenil idiopatisk artritis, og portopulmonary hypertension [35], [36]. Men til dato, der har været nogen undersøgelse rapporterer en sammenslutning af

ANGPT1

SNPs med risiko og kliniske resultat af kræft. I denne undersøgelse identificerede vi en

ANGPT1

SNP, rs1954727, som kan forudsige den samlede overlevelse CRC patienter efter operation. Denne SNP er placeret i 3’UTR af

ANGPT1

gen. Funktionelle SNPs i denne region kan påvirke messenger-RNA stabilitet eller microRNA bindende. En bioinformatik søgning i PolymiRTS databasen ikke identificere potentielle miRNA bindingssted i umiddelbar omkringliggende region af denne SNP [37]. Men en yderligere søgning, førte til identifikationen af ​​fire SNPs i 3’UTR af

ANGPT1

gen, der er placeret inden for formodede miRNA bindende regioner (data ikke vist). Den nærmeste SNP er omkring 600 nukleotider væk fra rs1954727. vil være behov for Funktionelle karakteriseringer såsom real-time PCR efterfulgt af luciferaseanalyse at afgøre, om rs1954727 har nogen direkte fysiologisk effekt på messenger RNA udtryk for

ANGPT1

.

I stratificeret analyse, fandt vi beskyttende virkning tillagt ved rs1954727 var mere fremtrædende i patienter, der får kemoterapi (tabel S1). Tidligere undersøgelser har rapporteret en signifikant øget anti-tumor aktivitet på det fælles anvendelse af ANGPT1 antistof og kemoterapi til behandling af solide tumorer, herunder CRC [38]. Disse linjer af beviser førte os til yderligere at evaluere modulerende effekt af kemoterapi på patientens overlevelse stratificeret af genotyper af rs1954727. I overensstemmelse med konstateringen af, at de variant genotyper af rs1954727 tillagt bedre samlet overlevelse i kemoterapi-behandlede patienter, fandt vi den forbedrede overlevelse tillagt ved kemoterapi forblev tydelig i patienter med den heterozygote genotype af rs1954727 (tabel 4). Vi bemærkede også, at patienter med den homozygote variant genotype rs1954727, ikke

P Drømmeholdet værdi var signifikant (P = 0,297), selv om den forbedrede samlet overlevelse tillagt ved kemoterapi var meget mere fremtrædende (HR = 0,19). Dette kan skyldes en ustabil skøn som følge af det lille antal patienter i denne gruppe (kun 1 død hos patienter uden kemoterapi, tabel 3) .Future studier med større stikprøve er nødvendige for at give tilstrækkelig statistisk styrke til analyse af samspillet mellem rs1954727 og kemoterapi på patientens overlevelse.

Der er flere styrker i denne undersøgelse. Patienterne blev inkluderet fra Xian og tilstødende område, en region, der er særdeles attraktivt for udførelse populationsbaseret forskning på grund af den geografiske stabilitet med lav mobilitet sats. Også patienterne analyseret i denne undersøgelse var meget homogene, idet alle patienter havde adenocarcinom og blev kirurgisk behandlet for at fjerne de primære tumorer. Derudover blev alle kemoterapi behandlinger påbegyndt senest 2 måneder efter kirurgi og næsten 80% af patienterne fik kemoterapi. De meget homogene patientkarakteristika og behandlinger, samt lave patientens tab til opfølgning, i høj grad reduceret forstyrrende virkninger af de heterogene terapeutiske modaliteter i mange andre lignende biomarkør undersøgelser af CRC prognose. Begrænsningerne af vores undersøgelse omfatter generaliserbarhed problem, fordi vores undersøgelse var begrænset til han-kinesere. Yderligere evaluering er nødvendig for at afgøre, om disse resultater kan generaliseres til andre etniske grupper. Desuden begrænsede den moderate stikprøvestørrelse gyldigheden af ​​nogle stratificerede analyser med lille stikprøve. Vi analyserede undersøgelsen strøm til den vigtigste effekt analyse samt kemoterapi-stratificeret analyse. Under forudsætning af et additiv genetisk model (bruges i analysen af ​​dette studie) med monoton effekt, en MAF på 43,5% for rs1954727, den eneste væsentlige SNP identificeret i denne undersøgelse, 23,0% af dødeligheden blandt den samlede undersøgelsespopulation, en median tid til døden på 15,2 måneder i afdøde patienter og en median tid på opfølgning på 23,9 måneder i censurerede patienter, vi har ca. 82% magt til at opdage en HR på 0,6 (heterozygot genotype vs. homozygot vildtype genotype) og 0,4 (homozygot variant genotype vs. vildtype genotype). Strømmen er lidt højere, hvis der anvendes en trend test. Når analysen er begrænset til de patienter, der fik kemoterapi, vores magt er ca 70% til at opdage de førnævnte effekt størrelser. Men vores magt er begrænset, når analysen er begrænset til de 89 patienter uden kemoterapi eller nogle andre ikke-signifikante SNPs i denne undersøgelse, der har en lav MAF, og resultaterne af disse under-drevne analyser er sonderende og bør tolkes med forsigtighed . Ikke desto mindre, indskrivning af denne population er stadig i gang med en lav forekomst af patientens tab, hvilket vil gøre det muligt for os at opnå højere statistisk styrke til dybdegående analyser i fremtiden.

Som konklusion, vores fund tyder på, at en genetisk polymorfi i

ANGPT1

gen er associeret med en signifikant bedre overlevelse hos CRC patienter efter operation. Fremtidige studier med større befolkningsgrupper er nødvendige for at validere dette fund.

Støtte oplysninger

tabel S1.

Foreningen af ​​rs1954727 i ANGPT1with samlet overlevelse i CRC patienter stratificeret efter værtens karakteristika.

doi: 10,1371 /journal.pone.0034758.s001

(DOC)

Tak

Vi takker Dr. Marie Dennis og Ms. Heidi Swan (Division of Population Science, Institut for Medicinsk Onkologi, Thomas Jefferson University) for den videnskabelige redigering.