PLoS ONE: Tumor-associerede makrofager Giv Betydelig Prognostisk Information i urothelial blærekræft

Abstrakt

Inflammation er et vigtigt element i carcinogenese. Tumorassocierede makrofager (TAM’er) kan forbindes med enten dårlig eller forbedret prognose, afhængigt af deres egenskaber og polarisering. Aktuel viden om den prognostiske betydning af TAMer i blærekræft er begrænset og blev undersøgt i dette studie. Vi analyserede 184 urotelial blære kræftpatienter i transuretral resektion af en blære tumor eller radikal cystektomi. CD68 (pan-makrofag markør), MAC387 (polariseret mod type 1 makrofager), og CLEVER-1 /Stabilin-1 (type 2 makrofager og lymfe /blodkar) blev påvist immunhistokemisk. Den mediane follow-up tid var 6,0 år. Høje makrofag tæller forbundet med en højere pT kategori og lønklasse. Blandt patienter, der gennemgår transuretral resektion, alle undersøgte markører bortset fra CLEVER-1 /Stabilin-1 var forbundet med øget risiko for progression og fattigere sygdomsspecifikke og samlet overlevelse i univariate analyser. Høje niveauer af to makrofagmarkører (CD68 /MAC387

+ /+ eller CD68 /CLEVER-1

+ /+ grupper) havde en selvstændig prognostisk rolle efter transuretral resektion i multivariate analyser. I cystectomy kohorte, MAC387, alene og i kombination med CD68, var forbundet med dårligere overlevelse i univariate analyser, men ingen af ​​markørerne var uafhængige prædiktorer for udfaldet i multivariate analyser. Afslutningsvis denne undersøgelse viser, at makrofag fænotyper giver betydelig uafhængig prognostisk information, især i blære kræft gennemgår transuretral resektion

Henvisning:. Boström MM, Irjala H, Mirtti T, Taimen P, Kauko T, Ålgars A, et al. (2015) Tumor-associerede makrofager Giv Betydelig Prognostisk Information i urothelial blærekræft. PLoS ONE 10 (7): e0133552. doi: 10,1371 /journal.pone.0133552

Redaktør: Hari K. Koul, Louisiana State University Health Sciences Center, UNITED STATES

Modtaget: Februar 14, 2015; Accepteret: 29 jun 2015; Udgivet: 21 jul 2015

Copyright: © 2015 Boström et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. Peter J. Boström fået støtte fra Juselius Foundation (https://www.sigridjuselius.fi/foundation) og Kræftens Bekæmpelse Finland (http: //www.cancer.fi/en/). Sirpa Jalkanen modtaget støtte fra det finske Medical Foundation (https://www.laaketieteensaatio.fi/fin/in_english/), Kirsti og Tor Johanssons Heart og Cancer Foundation. Minna M. Boström modtaget støtte fra Orion-Farmos (https://www.orion.fi/en/rd/) og Instrumentariumin tiedesäätiö (https://www.instrufoundation.fi). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Sammenhængen mellem carcinogenese og inflammation er almindeligt accepteret, og tumorfremmende inflammation er et af kendetegnene for kræft [1]. Inflammatoriske celler, kemokiner og cytokiner er til stede i tumorer fra de tidligste stadier, og er uundværlige deltagere i neoplastiske proces [2, 3]. Tumor-associerede makrofager (Tams) afledt af perifert blod monocytter og rekrutteret af kemokiner er en vigtig del af leukocyt infiltrat i tumorer. Plasticitet og mangfoldighed er universelle funktioner i mononukleære fagocytter, som kan have enten en beskyttende eller en tumor-fremmende rolle, afhængig microenvironmental signaler [4]. TAM’er er generelt orienteret mod fremme tumorvækst og angiogenese, undertrykke adaptiv immunitet, og de har en vigtig rolle i tumorcellemigration, invasion og metastase. Dog kan makrofager også eliminere tumorceller og er derfor undertiden forbundet med bedre sygdomsprognose [2, 5]. Trods fremskridt i forståelsen af ​​samspillet mellem betændelse og kræft, vigtige spørgsmål forbliver ubesvarede. Kræft-relaterede inflammation forskellig blandt tumortyper og det er vigtigt at definere, hvilke komponenter er specifikke for bestemte væv og tumorer. Det vil være vigtigt at finde de optimale stimuli til at ændre en tumorfremmende mikromiljø til en tumor-inhiberende en, og at forstå de signalerings- mekanismer involveret.

Blærekræft (BC) er en heterogen sygdom. Ikke-invasiv, godt differentierede tumorer har en forholdsvis indolent naturhistorie, men dårligt differentierede tumorer er tilbøjelige til at invadere og metastaserer. I vestlige lande, BC er den fjerde mest almindelige cancer hos mænd [6]. Transuretral resektion af blæren tumor (TUR-BT) anvendes til at diagnosticere og iscenesætte alle tumorer. Mens ikke-muskel-invasiv BCs (NMIBC) ikke kan kræve yderligere behandling, radikal cystektomi (RC) med eller uden perioperativ kemoterapi betragtes som den gyldne standard i behandlingen af ​​invasive BC og i NMIBC svigtende intravesikal terapi.

kun begrænsede data er tilgængelige på den prognostiske værdi af TAM’er eller deres fænotype i BC, og de fleste undersøgelser har koncentreret sig om at undersøge TAM’er som reaktion på Bacillus Calmette-Guerin (BCG) immunterapi. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge forholdet mellem TAM’er og klinisk-patologiske variabler i hele spektret af BC og undersøge den prognostiske rolle TAM’er i BC efter TUR-BT og RC hjælp immunohistokemiske metoder. Salg

Materialer og metoder

Patienter

undersøgelsen protokollen blev godkendt af Research Ethics bestyrelse Hospital District of Southwest Finland (1.8.2006 /301). Skriftligt samtykke blev opnået fra deltagerne. Konsekutive BC patienter, der gennemgår TUR-BT (i 2000-2004) eller RC (i 1985-2005) på Turku Universitetshospital blev inkluderet i undersøgelsen. Efter udelukkelse blev 184 patienter inkluderet i undersøgelsen. Udelukkelseskriterierne var følgende: 1) ikke-urotelial BC, 2) eventuelle intravesikale instillationer (BCG eller kemoterapi) eller systemisk kemoterapi før studere inklusion, og 3) utilstrækkelig væv materiale til rådighed for histologisk fornyet gennemgang og immunhistokemi

.

TUR-BT blev udført ved anvendelse af standardteknikker, og øjeblikkelig enkelt kemoterapi, blev indpodet i 22% (20/92) af patienterne. BCG eller intravesikale kemoterapi instillationer blev administreret til T1 tumorer og tumorer med hyppige tilbagefald. Specifikt blev intravesikal terapi administreres til 39% af patienterne (36/92). RC blev udført for T1 tumorer ikke reagerer på BCG og alle ≥T2 tumorer hvis fit for kirurgi. RC inkluderet fjernelse af blæren, prostata, og sædblære i mænd og livmoderen, æggestokke, og forreste vaginale væg hos kvinder. Lymphadenectomy blev ikke ensartet udført, men makroskopisk mistænkelige lymfeknuder blev fjernet i hele undersøgelsesperioden og begrænsede bækken lymfeknude dissektion blev gennemført fra 1995 og frem. Adjuverende behandling blev ikke administreret efter RC og systemisk kemoterapi blev tilbudt kun på tidspunktet for metastatisk progression under opfølgning. Efter RC, blev patienterne fulgt hver 3. måned for det første år og halvårligt derefter.

En detaljeret klinisk-patologisk database blev samlet med tilbagevirkende kraft, herunder oplysninger om egenskaber patient og tumor, samt oplysninger om behandling og opfølgning op. Histologiske prøver blev igen revideret for histologi, differentiering klasse, og scene af en ekspert uropathologist. De tumorer blev gradueret efter både World Health Organization (WHO) 1973 og WHO /International Society of Urinary patolog (ISUP) 2004 klassifikationer og iscenesat efter 2010 TNM staging [7, 8].

Immunhistokemi og scorer

for hver sag, den mest repræsentative formalin-fikseret, paraffinindstøbt væv blok blev udvalgt til analyse. Sektioner (5 um tykke) blev afparaffiniseret med xylen og hydreret med en gradueret alkohol serie. De primære anvendte antistoffer var monoklonalt muse-IgG

1 anti-CD68 (KP1) (koncentration 1: 5; ab845, Abcam, UK) og monoklonalt muse-IgG

1 anti-MAC387 (koncentration 1: 500; ab22506, Abcam , UK), der registrerer myelomonocytiske L1-molekylet calprotectin. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ (fælles lymfe endotel og vaskulær endotel receptor-1, også kendt som STAB1 og føl-1) type 2 makrofager og fartøjer blev påvist med rotte-IgG 2-7 antistof (koncentration 1: 5) [9, 10]. Antistofferne 3G6 (muse IgG

1 antistof mod chicken T-celler) [11] og Mel-14 [rotte IgG

2a antistof mod muse L-selectin (CD62L)] (Exbio, Tjekkiet) blev anvendt som negativ kontroller. Den primære immunreaktion blev udført med anvendelse af mus /rotte Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories). Profiler til anti-CD68-og MAC387 farvninger blev varme forbehandlet i citrat syre (0,01 M, pH 6,0) i en 97 ° C vandbad i 20 min. Antigen-genvinding for Clever-1 /Stabilin-1-farvede snit blev udført med proteinase K (DAKO) (10min ved 37 ° C) og objektglassene blev vasket tre gange med PBS efter forbehandlingen. Endogen peroxidase blev blokeret med 0,1% H

2O

2 i 30 min. Ikke-specifikke steder blev blokeret med hest (CD68 og MAC387) eller kanin (Clever-1 /Stabilin-1) normalt serum ved stuetemperatur i 20 minutter. Snit blev inkuberet med primære antistoffer natten over ved 4 ° C og derefter behandlet med biotinyleret sekundært antistof opløsning ifølge producentens anvisninger. Efter vask med PBS blev Vectastain Elite ABC reagens tilsat (30 min ved stuetemperatur), blev glassene vasket og immunreaktioner blev påvist under anvendelse 3,3′-diaminobenzidin som substrat. Slides blev modfarvet med hæmatoxylin, dehydreret, re-fikseret i xylen, monteret med distyrene blødgører xylen (DPX).

Hele tumor og omkringliggende peritumoral område blev screenet ved lysmikroskopi. Antallet af CD68

+ makrofager, MAC387

+ makrofager, og CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofager og skibe blev scoret fra tre hotspots (områder med flest makrofager ved øjet) intratumoralt og peritumoralt med en 0,0625 mm

2 gitter ved hjælp 40 × forstørrelse når udføre makrofager og 20 × når scorer lymfe /blodkar. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ er normalt ikke til stede på flade vægge venuler, men det er aberrerende induceres på tumorvaskulatur [12]. Den scoring blev udført uafhængigt af to observatører (MB og HI) blindede til den kliniske information. Tilfælde med mangelfuld kvalitet immunhistokemisk farvning eller tumor morfologi blev udelukket fra yderligere statistiske analyser. De gennemsnitlige antal makrofager og skibe i tre hotspots blev beregnet inden for en high-powered felt. I tilfælde af uoverensstemmelse blev sektionerne fællesskab revideret for at opnå konsensus. MAC387

+ tumorceller blev gradueret semi-kvantitativt i fire kategorier, fra-(negativ) til +++ (rigelige). Antallet af positive makrofager for hvert antistof blev også kåret semi-kvantitativt i fire kategorier, fra-til +++. Som den semikvantitative scoring og den kvantitative samlet optælling analyse er forbundet betydeligt i alle immunoanalyses (p 0,001), detaljerede statistiske analyser, herunder sammenhænge mellem immunosignals og overlevelse, blev udført ved hjælp af de værdier, der opnås fra den kvantitative pointsystem. Patient undergrupper blev skabt ved at kombinere to makrofagmarkører. De testede makrofagmarkører blev inddelt i enten lav (-) eller høje (+) grupper efter middelværdien af ​​befolkningen. De følgende undergrupper blev dannet: 1) lave niveauer af begge makrofag undertyper (

– /-), 2) højt enten makrofag subtype, lavt niveau af det andet makrofag subtype (

+/-), og 3 ) høje niveauer af både makrofag undertyper (

+ /+).

statistiske analyser

De associationer mellem CD68, MAC387 og CLEVER-1 /Stabilin-1-ekspression og klinisk-patologiske variabler var evalueres med Mann-Whitney U-test og Kruskal-Wallis test. Patient karakteristika og resultaterne af test af normalitet for kontinuerlige variabler i den samlede undersøgelse kohorten er vist i S1 tabel. Kaplan-Meier-metoden, log-rank test, og Cox proportionel risiko regressions modeller blev anvendt til at analysere sammenhængen mellem immunosignals og resultat. For Kaplan-Meier-analyser blev den gennemsnitlige makrofag og fartøjets tællinger dikotomiseret på middelværdien nummer. I Cox proportional hazards regressionsmodeller, blev markørerne evalueret som kontinuerlige variabler. Resultatmål omfattede sygdomsspecifikke og samlet overlevelse (DSS og OS) i RC befolkning og DSS, OS, gentagelse, og progressionsfri overlevelse (PFS) i TUR-BT befolkning. Overlevelsestiden blev beregnet fra datoen for kirurgi til datoen for den sidste opfølgning eller død. Enhver død på grund af BC eller med metastatisk BC blev defineret som kræft dødelighed. Gentagelse blev defineret i TUR-BT befolkningen som histologisk bekræftet ny tumor efter en tumor-fri periode, og progression blev defineret som når en gentagelse havde en højere lønklasse eller en mere avanceret pT kategori end den primære tumor, eller hvis patienten undergik RC for tilbagefald. Alle statistiske tests var tosidede og p-værdier ≤0.05 blev anset for at være statistisk signifikant. Statistiske analyser blev udført med SPSS 20 (IBM) og SAS til Windows, version, 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA).

Resultater

klinisk-patologisk karakteristika af undersøgelsen befolkning

baseline klinisk-patologiske patientens karakteristika kohorten er vist i tabel 1. de fleste af patienterne havde NMIBC (pTA, pTcis eller PT1) (88% af TUR-BT befolkning og 36% af RC befolkning). Antallet af tumorer blev registreret i TUR-BT befolkning og af de patienter, 63% havde en enkelt tumor. Ved slutningen af ​​opfølgningsperioden, 36% af patienterne i TUR-BT befolkning og 28% af patienterne i RC befolkning var i live. Den mediane follow-up tid var 6,9 og 4,2 år i TUR-BT og RC befolkninger, henholdsvis.

TUR-BT tumorer har lavere TAM tæller end tumorer fra RC

Tabel 2a viser TUR-BT og RC patienter dikotomiseret på middelværdien antal makrofager og fartøjer og repræsentative eksempler på farvningsmønstrene med forskellige markører er vist i fig 1. Salg

TUR-BT prøver farvet med en negativ kontrol antistof (a); intratumoral CD68

+ makrofager (b), MAC387

+ makrofager (c), og CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofager og skibe (D). Fyldte pile angiver positivt farvede makrofager, og ubesatte pile angiver CLEVER-1 /Stabilin-1

+ fartøjer. Forstørrelse 40 ×, skala bar 100 um.

Data repræsenterer det gennemsnitlige antal positive celler fra tre hotspots (en high-powered felt pr hotspot). Tæller er repræsenteret som grupper dikotomiseret på middelværdien makrofag tæller. a, makrofag og fartøjet tæller. b, celle tæller ifølge ekspressionen af ​​to markører. Her CLEVER-1 farvning refererer til udtryk i makrofager, ikke fartøjer.

Det gennemsnitlige antal intratumorale CD68

+ makrofager var 18 pr felt i TUR-BT befolkning [standardafvigelse (SD ) ± 16] og 30 i RC populationen (SD ± 26). For MAC387, de gennemsnitlige makrofag tællinger var 19 (SD ± 24) og 34 (SD ± 38) i TUR-BT og RC befolkninger, hhv. Den højeste CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofag optælling var 73 i TUR-BT-gruppe og 41 i RC-gruppen, og de gennemsnitlige tal var 26 (SD ± 13) og 11 (SD ± 10), henholdsvis . CLEVER-1 /Stabilin

+ lymfe /blodkar densitet varierede fra 0 til 22 positive celler pr felt med en middelværdi på 8 i TUR-BT population (SD ± 5) og 1 i RC population (SD ± 1 ). Markør tællingerne i de TUR-BT og RC kohorter er vist i S1 Fig celletællinger efter ekspressionen af ​​to makrofagmarkører er vist i tabel 2b.

High CD68

+, høj MAC387

+, og lav CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofag optællinger er forbundet med konventionelle funktioner i høj risiko i BC

Foreninger mellem tumor kvalitet og pT kategori og udtryk for CD68, MAC387 og CLEVER -1 /Stabilin-1 er vist i figur 2 (alle p-værdier 0,05). Høje antal CD68

+ makrofager og MAC387

+ makrofager blev forbundet med en højere pT kategori og tumor lønklasse. I modsætning hertil var lavere CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofag /fartøj tæller forbundet med en højere pT kategori og lønklasse. Hunnerne havde højere antal CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofager (p = 0,003, Mann-Whitney U test, ikke vist). Der var ingen signifikante sammenhænge mellem celletal og rygning status eller alder.

Mann-Whitney U test blev anvendt til parvise sammenligninger i analyser af tumor kvalitet og Kruskal-Wallis rank-sum test (KW) var bruges til sammenligning på tværs af de fire pT kategorier. De nederste og øverste kanter af kassen angiver intra-kvartil interval (IQR), linjen inde i kassen angiver medianværdien de knurhår der strækker sig fra hver boks angiver række værdier, der er uden for det intra-kvartil rækkevidde, men tættere end eller lig med 1,5 gange den IQR, samt punkter, der er i en afstand af mere end 1,5 gange den IQR fra boksen betragtes som outliers [cirkler angiver de milde outliers (mere end 1,5 gange den IQR) og asterisk ekstreme outliers (mere end 3 gange den IQR)].

TAM tæller forudsige risikoen for progression efter TUR-BT

TUR-BT befolkning.

Kaplan -Meier skøn evaluere relationerne mellem forskellige makrofag populationer og PFS i TUR-BT befolkning er vist i figur 3. Høje numre af CD68

+ makrofager og MAC387

+ makrofager var signifikant forbundet med risiko for progression (fig 3a og 3b) (p-værdier 0,007 og 0,008, henholdsvis). Den CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofag tæller påvirkede ikke PFS (p = 0,69) (fig 3c). En tendens (p = 0,056) mod højere progression risiko blev observeret med en lavere CLEVER-1 /Stabilin-1

+ fartøj count (figur 3d). Foreningerne mellem kombinationer af makrofag markører og PFS i TUR-BT befolkning er vist i figur 3e og 3g. Alle patientgrupper med høje makrofag tal defineret ved to forskellige makrofagmarkører (dvs. dobbelt høje; CD68 /MAC387

+ /+, CD68 /CLEVER-1

+ /+, og MAC387 /CLEVER-1

+ /+) havde en kortere PFS sammenlignet med de andre grupper. Når CD68 og MAC387 blev analyseret sammen, patienter med lave niveauer af makrofager havde de længste PFS. Når CLEVER-1 /Stabilin-1 positivitet blev analyseret sammen med CD68 eller MAC387, var der ingen forskel i PFS mellem patienter, hvis tumorer var lav for begge mærker sammenlignet med patienter, hvor den ene af markørerne var høj. Kaplan-Meier-estimater for DSS og OS i TUR-BT population viste lignende resultater som for PFS bortset CLEVER-1, hvor en højere tælle beholderen blev forbundet med ringere overlevelse (S2 og S3 Fig). Derimod var der ingen observeret mellem gentagelse risiko og de testede markører alene, eller i kombination (S4 Fig) foreninger.

Effekten af ​​CD68

+ makrofager, MAC387

+ makrofager, og CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofager /fartøjer på progression i TUR-BT population (ad). Patienterne blev inddelt i grupper efter ekspression af to makrofagmarkører og foreninger med progression blev bestemt (ef).

Univariate og multivariat Cox proportionel risiko regressions modeller af faktorer, der påvirker OS i TUR-BT befolkning er præsenteret i tabel 3. i univariat analyse, etablerede risikofaktorer (høj tumor kvalitet, avanceret pT kategori, højere alder, og et stort antal af tumorer) signifikant associeret med kortere OS. Antallet af CD68

+ makrofager [hazard ratio (HR) 1,031 og 95% konfidensinterval (CI) 1,016-1,046; p 0,001], og MAC387

+ makrofager (HR 1,016 og 95% CI 1,006-1,027; p = 0,002) signifikant forbundet med OS i en univariate Cox regressionsmodel; men disse foreninger ikke forblive betydningsfulde i multivariate analyser. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofag /fartøj tæller ikke forudsige overlevelse. Når data fra to makrofagmarkører blev kombineret, alle patienter, der havde høj ekspression af begge mærker havde højere dødelighed i univariat analyse end andre grupper. Den CD68 /MAC387

+ /+ og CD68 /CLEVER-1

+ /+ grupper forblev få væsentlig foreninger med overlevelse i multivariate analyser (CD68 /MAC387

+ /+: HR 3,5 og 95% CI 1,1-11; p = 0,036, og CD68 /CLEVER-1

+ /+: HR 3,8 og 95% CI 1,4 til 10, p = 0,008)

univariate og multivariate Cox proportional. farer regressionsmodeller af faktorer, der påvirker DSS, PFS, og tilbagefald i TUR-BT er gengivet i S2-S4 Tables. Antallet af CD68

+ og MAC387

+ makrofager og CLEVER-1 /Stabilin-1

+ fartøjer forbundet med DSS i univariate analyser, men undlod at forblive signifikant i multivariate analyser. Den dobbelt-høje gruppe og CD68 /MAC387

+/- gruppe også signifikant associeret med DSS i univariate analyser, men ikke i multivariate analyser (S2 tabel). Individuelle markører og grupper af to markører associeret tilsvarende med PFS (S4 tabel).

RC befolkning.

Kaplan-Meier estimater for OS i RC er gengivet i figur 4. En høj MAC387

+ makrofag tæller forbundet med en større risiko for død (p = 0,021). Andre markører ikke forbinder med OS. Når markørdata blev kombineret, tumorer, der havde høje niveauer af CD68

+ makrofager og MAC387

+ eller CLEVER-1

+ makrofager havde en kortere OS (CD68 /MAC387

+ /+ p = 0,032 og CD68 /SMART-1

+ /p = 0,049). Da DSS blev analyseret, grupperne kombinerer to makrofagmarkører forudsagt overlevelse, som med OS (S5 Fig).

Effekten af ​​CD68

+ makrofager, MAC387

+ makrofager, og CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofager /fartøjer på OS i den radikale cystektomi befolkning (ad). Sammenhængen mellem OS og udtryk for to makrofagmarkører (ef).

univariate og multivariate Cox proportionel risiko regressions analyser af faktorer, der påvirker OS i RC befolkning og den kombinerede ekspression af to makrofagmarkører vises i tabel 4. Tumor kvalitet og pT kategori forbundet betydeligt med OS. Ingen af ​​makrofag markører associeret signifikant med OS i uni- eller multivariate analyser. Den CD68 /MAC387

+ /+ dobbelt-høje gruppe med tilknytning betydeligt med OS i univariat analyse (HR 2,9 og 95% CI 1,2-7,2; p = 0,020). Cox proportional hazards regressionsanalyser af faktorer, der påvirker DSS er vist i S4 tabel. MAC387 udtryk (HR 1,008 og 95% CI 1,001-1,016; p = 0,032) og CD68 /MAC387

+ /+ dual udtryk (HR 3,5 og 95% CI 1,1 til 11; p = 0,029) i forbindelse væsentligt med DSS i univariat analyse, men ingen af ​​de markører, alene eller i kombination, betydeligt forudsagt resultat i multivariate analyser.

diskussion

i den foreliggende undersøgelse, vi vise, at intratumoral makrofag densitet (CD68

+ og MAC387

+ makrofager) er signifikant associeret med konventionelle højrisiko-funktioner, herunder høj kvalitet og avanceret T kategori i BC. Desuden blev en høj makrofag optælling signifikant associeret med risikoen for progression i TUR-BT kohorte og overlevelse i cystektomi kohorten ved univariate analyser. Selvom enkelte makrofagmarkører var ikke signifikante prædiktorer i multivariate analyser, kombinationer af to markører (CD68 med MAC387 eller CLEVER-1) forudsat uafhængig prognostisk information i multivariate modeller i TUR-BT-kohorten, når faktorer, der påvirker overlevelse blev analyseret. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofager blev ikke forbundet med BC dødelighed, men en høj CLEVER-1 /Stabilin-1

+ fartøj tæller derimod var forbundet med forbedret overlevelse i univariate modeller i TUR -BT kohorte.

En høj TAM tæthed er blevet rapporteret at være associeret med dårlig prognose i forskellige maligniteter, såsom brystcancer, melanoma, colorektal cancer, og prostatacancer [13]. Hanada og medarbejdere demonstreret i en mindre undersøgelse (23 MIBC og 40 NMIBC tilfælde), at invasive tumorer, der havde højere CD68

+ makrofag tæller og højere TAM tællinger var forbundet med højere cystektomi, fjernmetastaser, vaskulær invasion, og dårligere overlevelse [14]. For nylig Sjödahl og medarbejdere studerede TAM tæller i MIBC hjælp væv microarray (TMA) snit farvet med anti-CD3 for T-celler, anti-CD8 for cytotoksiske T-celler, anti-Foxp3 for regulatoriske T-celler (tregs), og to makrofag -specifikke markører, CD68 og CD163. De bemærkede, at kliniske fase kombineret med tumoren CD68 /CD3-forholdet kunne være et potentielt værktøj til prognosticering [15]. Imidlertid har vi bemærket, at makrofager vises i klynger inden tumorer, og dermed bruge hele sektioner i stedet for TMA’er vil sandsynligvis være mere præcis, da TMA kerner udgør kun små portioner af hele prøven. Endvidere er nogle af patienterne i studiet havde modtaget BCG instillationer eller neoadjuverende kemoterapi, som kan have påvirket resultaterne.

NMIBC tumorer med høj TAM tællinger har også vist sig at have dårligere resultat og at være mindre reagerer på BCG behandling [16-18]. Inflammatoriske processer i blæren som reaktion på BCG-bakterier bliver brugt til at tilintetgøre tumorvæv. Celler af urothelium reagerer på behandlingen med en inflammatorisk kaskade og frigivelse cytokiner, fx interleukin (IL) -8 og tumornekrosefaktor (TNF), og rekruttere neutrofiler til at ødelægge maligne celler [19]. I vores undersøgelse, patienter, der modtog intravesikale installationer (BCG eller kemoterapi) blev udelukket på grund af det faktum, at disse behandlinger ændrer den inflammatoriske mikromiljø af tumorerne og dermed kunne ændre resultaterne.

Der er flere udfordringer i BC pleje . Den gentagelse på NMIBC er høj, og hyppige procedurer og intens opfølgning resultater i BC bliver et af de dyreste kræftformer at behandle [20]. Behandlingsmuligheder for avancerede sygdomme er begrænset, og der er behov for nye behandlingsformer, herunder nye biomarkører at diagnosticere aggressive sager, der kræver mere intensiv behandling. CD68, MAC387 og CLEVER-1 /Stabilin-1, især når de anvendes i kombination, potentielt kan anvendes til at identificere aggressive tilfælde blandt BC patienter. Disse makrofager kunne også være mål for nye behandlinger af fremskreden BC. Der er behov for nylig har PD-L1-hæmmere demonstreret potentiel effekt i metastatisk f.Kr., og mere forskning i BC immunologi [21].

Antistoffet anvendt oftest til påvisning af TAM’er er den pan-makrofag markør CD68 og det har vist sig at associere med ringe overlevelse i BC [14]. I denne undersøgelse har vi også anvendt MAC387 at detektere forskellige makrofag populationer. En forening mellem en høj MAC387

+ makrofag tælle og dårligt resultat er blevet rapporteret i forskellige tumorer, såsom brystkræft og cholangiocarcinom [22-24]. Til vores bedste viden, er MAC387 blevet undersøgt som en markør for pladedifferentiering i BC [25, 26], og vores arbejde er den første til at opdage en sammenhæng mellem MAC387

+ makrofag tæthed og dårligt resultat i BC patienter. Både MAC387

+ makrofager og tumorceller blev evalueret, men antallet af MAC387-positive tumorceller ikke forbinder med overlevelse (data ikke vist). MAC387 genkender myelo-relateret protein (MRP) 14 og, i mindre grad, den MRP8 /MRP14 heterokompleks (calprotectin). MRP14 er en pro-inflammatorisk molekyle udtrykt under akut inflammation på nylig infiltrerende monocytter /makrofager, hvorimod MRP8 udtrykkes på makrofager under kronisk inflammation. Vævsmakrofager er blevet vist at udtrykke et MRP8 /MRP14 kompleks under visse omstændigheder: fx på steder med kronisk inflammation i rheumatoid arthritis, sarcoidosis, og tuberkulose, men ikke i normalt væv uden inflammation [27, 28]. Soulas og medarbejdere har overvejet MAC387

+ celler til at være pro-inflammatoriske og anti-tumor M1-polariserede makrofager [27]. Men det er ikke sikkert, og der er stadig mangel på en endelig overflade markør for pro-inflammatoriske type 1 makrofager.

Udover CD68 og MAC387, vi brugte CLEVER-1 /Stabilin-1 til at detektere type 2 aktiverede makrofager. CLEVER-1 /Stabilin-1 er et stort scavenger receptor på en delmængde af immunosuppressive og protumoral type 2 makrofager med flere funktioner [29, 30]. CLEVER-1 /Stabilin-1 udtrykkes også i afferent og efferente lymfe og sinusformede endotelceller [10]. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofag tal var ikke associeret med patientens overlevelse i BC, i modsætning til vores tidligere studier i kolorektal cancer [12]. Interessant, var der en klar sammenhæng mellem lav CLEVER-1 /Stabilin-1

+ fartøj tæller og stigende tumor scenen og højere lønklasse. Endvidere kan en høj SMART-1 /Stabilin-1

+ fartøj count var forbundet med bedre overlevelse efter RC i BC patienter. Årsagen til CLEVER-1 /Stabilin-1

+ fartøjer, der handler i en beskyttende mode er uklar og yderligere undersøgelser er berettiget. Til vores bedste viden, MAC387

+ makrofager og CLEVER-1 /Stabilin-1 er ikke blevet undersøgt i BC før.

Ud over den mulige prognostiske rolle makrofagmarkører alene, vi studerede makrofag populationer yderligere ved at kombinere to markører. Den CD68 /MAC387

+ /+, CD68 /CLEVER-1

+ /+ og MAC387 /CLEVER-1

+ /+ grupper havde bedre OS i TUR-BT befolkning, og CD68 /MAC387

+ /+ og CD68 /CLEVER-1

+ /+ grupper var uafhængige prognostiske faktorer. Som markørerne opdage forskellige populationer af TAM’er (CD68 registrerer makrofager i almindelighed, mens MAC387 registrerer typen 1 polariserede makrofager og CLEVER-1 /Stabilin-1 detekterer type 2 makrofager), ved hjælp af disse markører i kombination kan bedre identificere tumorer, der blev skæv enten mod M1 fænotype (CD68

+ /MAC387

+ og MAC387

+ /CLEVER-1

-) eller M2 type (CD68

+ /CLEVER-1

+ og MAC387

– /CLEVER-1

+). Men i vores undersøgelse, den samlede makrofag optælling havde den mest afgørende rolle i prognosen for BC, og overraskende, dette var tilfældet, uanset om de makrofager overvejende var type 1 eller type 2.

Den foreliggende undersøgelse har de kendte begrænsninger af retrospektive kohortestudier. Der var en lang opfølgningstid i RC befolkning, og nogle kliniske praksis kan være ændret i løbet af denne tid. I denne periode blev klassificeringssystem for BC ændret og /ISUP klassificering 2004 WHO blev defineret efter 1973 WHO klassifikationen.