PLoS ONE: Inddragelse af CXCR4 kemokinreceptor i metastatisk HER2-positiv Esophageal Cancer

Abstrakt

En funktionel sammenkædning af de strukturelt ubeslægtede receptorerne HER2 og CXCR4 er blevet foreslået for brystkræft, men er ikke blevet evalueret for esophageal carcinoma . Inhiberingen af ​​HER2 fører til en reduktion af primær tumorvækst og metastaser i et ortotopisk model af esophageal carcinoma. Kemokinreceptoren CXCR4 har været impliceret i metastatisk spredning af forskellige tumorer og korrelerer med ringe overlevelse i esophageal carcinoma. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge en korrelation mellem ekspressionsniveauerne af HER2 og CXCR4 og vurdere involvemnent af CXCR4-ekspression i HER2-positive esophageal carcinoma. Virkningerne af HER2-hæmning med trastuzumab og CXCR4-hæmning med AMD3100 på primær tumor vækst, metastatisk målsøgende, og receptor udtryk blev evalueret

in vitro

i en ortotopisk model af metastatisk esophageal carcinoma med MRI til billeddannelse. Den kliniske relevans af HER2- og CXCR4-ekspression blev undersøgt i esophageal carcinoma patienter. En signifikant korrelation af HER2- og CXCR4-udtryk i den primære tumor og metastaser findes i ortotopisk model. Trastuzumab og AMD3100 behandling førte til en betydelig reduktion af primær tumor vækst, metastaser og mikrometastaser. HER2-ekspression signifikant forhøjet under AMD3100 behandling i den primære tumor og især i metastaser. Den positive korrelation mellem HER2- og CXCR4-ekspression blev valideret i esophageal kræftpatienter. Korrelationen af ​​CXCR4- og HER2-udtryk og elevation af HER2-udtryk og reduktion af metastaser gennem CXCR4-hæmning tyder på en mulig funktionel lift og en rolle i formidlingen tumor i HER2-positive esophageal carcinoma

Henvisning.: Gros SJ, KURSCHAT N, Drenckhan A, Dohrmann T, Forberich E, Effenberger K, et al. (2012) Inddragelse af CXCR4 kemokinreceptor i metastatisk HER2-positiv Esophageal Cancer. PLoS ONE 7 (10): e47287. doi: 10,1371 /journal.pone.0047287

Redaktør: Ming Tan, University of South Alabama, USA

Modtaget: August 10, 2012; Accepteret: 14. september 2012; Udgivet: 17 oktober, 2012 |

Copyright: © Gros et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Arbejdet er blevet støttet af tilskud GR 3484 /1-1 af Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har følgende interesse: Robert M. Hoffman er forbundet med AntiCancer, Inc . Dr. Pantel er en Honorarer med Roche og en ekspertvidner med Genentech. Der er ingen patenter, produkter i udvikling eller markedsførte produkter til at erklære. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer, som beskrevet online i vejledningen for forfattere.

Introduktion

Den menneskelige epitelial vækstfaktor receptor familie ( HER, ErbB) af receptorkinaser spiller en vigtig rolle i tumorvækst og progression [1]. Blandt disse receptorer, HER2 er den stærkeste onkogen og viser sig at blive forstærket og overudtrykkes i ca. 20% af brystcancere [2] I brystkræft HER2 er kendt for at være associeret med dårlig prognose og metastaser [3], [4]. HER2-overekspression og forstærkning er rapporteret i kræft i spiserøret med en tendens til højere positivitet i adenocarcinom [5] – [10] sammenlignet med planocellulært karcinom [6], [7], [11] – [13]

En stærk konkordans af HER2 status i primær og metastatisk esophageal adenocarcinom med højt niveau af HER2 genamplifikation som er blevet observeret, hvilket tyder på esophageal cancer patienter med HER2-positiv primære tumorer som kandidater til trastuzumab terapi [14]. HER2 er kendt for at øge metastatisk potentiale i murine og humane cancercellelinier [15] – [18]

Med trastuzumab (Herceptin) eksisterer et antistof-baseret terapi, som med succes anvendes klinisk til målretning HER2 i. metastatisk HER2-positiv brystkræft [3], [19] – [21]. Trastuzumab ansøgning har også en dramatisk effekt i HER2-positive brystkræftpatienter som adjuverende behandling [22]. Der er endda evidens for en mulig reaktion af HER2-positive ikke-brystcancere (f.eks mavekræft) for trastuzumab [23], [24].

En signifikant reduktion af primær tumorvækst og af metastatisk spredning har tidligere blevet rapporteret i en ortotopisk model af HER2-positive esophageal adenocarcinom under behandling med trastuzumab [25]. Det er blevet vist, at HER2- signalering i brystkræft øger ekspressionen af ​​CXCR4, som er nødvendig for HER2-medieret invasion [26]. Chemokin CXCR4 er blevet foreslået at spille en væsentlig rolle i tumorcelle homing til lymfeknuder og knoglemarv i esophageal carcinoma [27]. Ekspression af CXCR4 korrelerer signifikant med overordnede og tumorspecifikt overlevelse i esophageal carcinoma og er forbundet med dårlig prognose [27]. En korrelation af CXCR4 og HER2 og mulig funktionel rolle i interaktionen mellem deres veje har imidlertid ikke blevet undersøgt for adenocarcinom i spiserøret.

Kemokiner er en superfamilie af små cytokin-lignende peptider [28], [ ,,,0],29]. Gennem interaktion med kemokinreceptorer, kemokiner inducerer cytoskeletal omlægning af hæmatopoietiske celler, øger deres vedhæftning, og direkte migrering til hjem-specifikke organer. Kemokinreceptorer er G-protein-koblede receptorer og CXCR4 er en af ​​de bedst karakteriserede receptorer. CXCR4 og dens ligand SDF-1α spiller en vigtig rolle i målretning brystkræft metastaser [30], [31]. Chemokine SDF-1α frigives i store mængder ved organer såsom lunge, knogle og lever. Tiltrækning af SDF-1α og CXCR4 forårsager brystcancerceller at migrere ind i disse organer, hvor de prolifererer og danne metastastes [30], [31].

Som metastase er stadig den hyppigste årsag til tumor-relaterede dødsfald og sygelighed er det vigtigt yderligere at forstå de komplekse patofysiologiske veje og processer, der fører til metastatisk spredning. Metastatiske veje for ondartet svulst sygdom er komplekse og stadig dårligt forstået [32] – [36]

Formålet med denne undersøgelse var at undersøge virkningerne af enkelt og kombineret inhibering af HER2 og CXCR4 receptor veje, og til. undersøge HER2- og CXCR4-ekspressionsniveauerne under hæmning for at bestemme en mulig inddragelse af CXCR4-ekspression i HER2-positive esophageal carcinoma. Endvidere var målet for yderligere at undersøge den rolle, CXCR4 og HER2 i primær tumorvækst og i homing af metastaser. Udover at bestemme betydningen af ​​tilstedeværelsen af ​​HER2 og CXCR4 i en repræsentativ patient kollektiv blev en stærkt metastatisk model af esophageal carcinoma anvendes til evaluering.

Materialer og metoder Salg

Cell Line, celleproliferation, og celle migration

in vitro

humane cellelinie OE19 (European Collection of cell Cultures (ECACC), Sundhedsstyrelsen, Wiltshire, UK) blev dyrket i RPMI1560 medium (Biochrome KG, Berlin , Tyskland) som tidligere beskrevet [25].

Celleproliferation blev målt ved anvendelse af LDH cytotoksicitet Kit (PromoKine, Heidelberg, Tyskland). 50000 OE19 celler blev podet i en 24-brønds plade og dyrket natten over. AMD3100 (Sigma-Aldrich, München, Tyskland) blev suppleret til dyrkningsmediet og celle vitalitet blev analyseret efter 48 timer.

Tumor celle migration gennem en mikroporøs membran blev vurderet på grundlag af kammer princippet Boyden. Celler blev inkuberet med dyrkningsmedium i 90 minutter, og derefter udpladet på den øverste kammer. Dyrkningsmedium indeholdende 500 ng /ml rekombinant human SDF-1α (R koronale T2-vægtet TSE med fedt mætning: TR = korteste; TE = 90 ms, flip vinkel = 90 °, antal skiver = 20, skivetykkelse = 1 mm, matrix = 448 × 448 px, FOV = 100 mm, antal excitationer = 3 og rekonstruerede voxel = 0,22 /0,22 /1 mm

3. Derefter blev en sagittal T2 TSE sekvens under anvendelse fedtmætning erhvervet efter følgende parametre: TR = korteste; TE = 90 ms, flip vinkel = 90, antal skiver = 22, skivetykkelse = 1 mm, matrix = 448 × 448 px, FOV = 100 mm, NEX = 3 og rekonstruerede voxel = 0,22 /0,22 /1 mm

3. Undersøgelse tid var ~17 min.

Billedanalyse og volumetrisk måling

DICOM-billeder blev behandlet ved hjælp af den gratis tilgængelig software Osirix®. Den største tumordiameter blev målt i de sekvenser, der bedst visualiseres tumoren. Målinger blev udført separat af to forskere for hver mus før og efter behandlingen. Endvidere blev tumorvolumen opnået ved manuel cirkelbevægelser af tumoren fælg på hver skive, efterfulgt af automatisk konstruktion af en 3D-tumor kort.

Patient kollektiv, immunfarvning af humane væv og dataanalyse

En patient kollektiv af 202 patienter, der blev opereret i helbredende hensigt ved Institut for kirurgi ved University Medical center Hamburg-Eppendorf, blev undersøgt for både HER2- og CXCR4-udtryk ved immunfarvning. Denne undersøgelse blev godkendt af den etiske komité i kammeret af læger i Hamburg, Tyskland og skriftligt samtykke blev opnået fra alle patienter til at bruge de resektion prøver. Ved histopatologisk undersøgelse resektionsrandene var tumor gratis. Tumor scenen og kvalitet blev klassificeret i henhold til tumoren-node metastaser klassificering af Den Internationale Union Against Cancer [40]. Tumor vævsprøver der var blevet lynfrosset i flydende nitrogen blev indlejret i Optimal Cutting Temperatur forbindelse (Tissue-Tek) og sektioneret ved 5 mm. For HER2 farvning af HercepTest (DAKO, Glostrup, Danmark) blev anvendt i overensstemmelse med protokollen fra fabrikanten ved hjælp af en 1:300 fortynding af det primære antistof. Immunfarvning blev scoret af patologen (U.R.), efter en fire-trins skala (0,1þ, 2Þ, 3th) i overensstemmelse med producentens anvisninger. Snit blev farvet med anti-humant CXCR4 monoklonalt antistof (IgG2a, clone12G5; R SPSS Inc., Chicago, IL).. Korrelationer blev beregnet med cross-borde og statistisk signifikans blev bestemt ved Fishers test med en p-værdi fra tosidede test af. 0,05

Statistisk dataanalyse

Statistisk data analyse af

in vivo

data blev udført ved hjælp af PASW Statistics 18 (SPSS Inc., Chicago, USA) på en standard pC med en quadcore processor. Til bestemmelse af signifikans for forskelle i tumorvækst og receptorekspression blev den ikke-parametriske Mann-Whitney-Wilcoxon-test anvendt. Fisher’s-Exact-Test for Count-Data blev anvendt til bestemmelse af betydningen af ​​metastaser. For korrelation af MRI tumor volumen og tumor vægt Pearson-koefficient og korrelation af HER2- og CXCR4-udtryk for Spearman’s-rank-korrelation-koefficient blev anvendt.

Resultater

Formålet med denne undersøgelse var at undersøge en mulig interaktion af HER2- og CXCR4-receptorer og deres ekspressionsniveauer under behandling med deres respektive inhibitorer for at bestemme en effekt af CXCR4-ekspression i HER2-positive esophageal carcinoma.

In vitro

proliferation og migration af esophageal OE19 celler

for at undersøge virkningerne af CXCR4- og HER2-receptorer på celledeling

in vitro

OE19 celler blev behandlet med AMD3100 og trastuzumab , henholdsvis. Mens det var forventet, at trastuzumab behandling fører til en reduktion cellevækst, havde effekten af ​​behandling med AMD3100 ikke defineret. Cell migration af CXCR4-positive celler bør dog påvirket af chemoattractant SDF-1α.

in vitro

celleproliferationsassays reproducerbar viste en signifikant reduktion af celleproliferation under HER2- og CXCR4 receptor inhibering efter behandling med trastuzumab (p = 0,005) samt med AMD3100 (p = 0,02) (figur 1A). Som forventet, behandling med trastuzumab ført til en stærkere reduktion af spredning end behandling med AMD3100. I migration assay kunne observeres en dosisafhængig effekt på cellemigration efter behandling med SDF-1α (figur 1B). Kemotaxi af CXCR4-positive OE19 celler kan således induceres af SDF-1α (figur 1C). Resultaterne blev gengivet med flere koncentrationer (data ikke vist).

En Effekt af trastuzumab og ADM3100 behandling på proliferation (%) af OE19 celler sammenlignet med kontrol i laktat-dehydrogenase assay. Receptor inhibering fører til reduceret proliferation af celler. Det viser en signifikant reduktion af celleproliferation under HER2- og CXCR4-receptor-inhibering efter behandling med trastuzumab (p = 0,005) samt med AMD3100 (p = 0,02) sammenlignet med den ubehandlede kontrol. B Mikroskopisk evaluering viser dosisafhængig effekt af SDF-1α-stimuleret celle migration på OE19 celler. observeres CA relevant effekt af SDF-1α på celle migration på 250 ng /ml sammenlignet med ikke-stimulerede celler (kontrol).

In vivo

spredning af primær tumor i ortotopisk model

for yderligere at undersøge opførslen af ​​lokale og metastatisk esophageal tumorvækst i

vivo

OE19 celler blev implanteret orthotopisk i NMRI /nu mus. Alle mus udviklede primære tumorer på implantationsstedet som vist ved MRI to uger efter implantation. Den kropsvægt af musene varierede fra 18,5 til 26,3 g i begyndelsen og 22,5-32,7 g ved afslutning af forsøget. Midlerne til kropsvægt i hver terapeutisk gruppe i begyndelsen og afslutning af forsøget er opsummeret i tabel 1. Der blev ikke observeret signifikant variation. Mus blev randomiseret to uger efter implantation i terapeutiske grupper. Vi har tidligere vist, at tumor størrelser to uger efter implantation var sammenlignelige mellem grupperne [37]. På tidspunktet for afslutning af forsøget, blev en MR-scanning udføres umiddelbart før dissekere dyrene. Alle dyr nåede endepunktet af studiet uden alvorligt vægttab eller andre tegn på tumorsygdom. Tumorvægte blev registreret og gav værdier mellem 0,01 til 3,9 g. Tumor volumetri blev udført og bekræftede tumorvægten resultater (tabel 1). Mens vægtværdier i kontrolområdet, trastuzumab-behandlede gruppe, og trastuzumab /AMD3100-behandlede gruppe var mere homogen, værdier varierede stærkere i AMD3100-behandlede gruppe. Tumorvægte i kontrolgruppen var signifikant højere end i trastuzumab-behandlede (p 0,0001) og trastuzumab /AMD3100-behandlede (p 0,0001) grupper. Tumorvægte i AMD3100-behandlede gruppe var signifikant højere end i de grupper trastuzumab-behandlede (p = 0,04) og trastuzumab /AMD3100-behandlede (p = 0,02) (figur 2A). Selv om effekten af ​​AMD3100 på den primære tumor vægt ikke var så stor som effekten af ​​trastuzumab blev en potent virkning opnås ved AMD3100 behandling alene sammenlignet med den ubehandlede gruppe. Tumoren vægte på tidspunktet for obduktion korrelerede signifikant med mængden målt med MRI (korrelationskoefficient: 0,837, p 0,01). Repræsentative eksempler på magnetisk resonans billeder for tumor evaluering med og uden behandling er vist i figur 2B

En væsentlig forskel i tumorvægte mellem kontrol og trastuzumab-behandlede grupper (p 0,00)., Kontrol og kombinationen trastuzumab /AMD3100 -behandlede grupper (p 0,00), trastuzumab og AMD3100-behandlede grupper (p = 0,04), og AMD og kombination trastuzumab /AMD3100-behandlede grupper (p = 0,02). Selv om effekten af ​​AMD3100 på den primære tumorvægt ikke var så relevant som effekten af ​​trastuzumab blev en potent virkning opnås ved AMD3100 behandling alene, sammenlignet med den ubehandlede gruppe. B MR-baserede tumor volumetrisk bekræftede resultaterne af tumor vægt. Tumoren vægte på tidspunktet for obduktion korreleret signifikant med den volumetriske foranstaltning MRI (korrelationskoefficient: 0,837, p 0,01). C micrometastases i lever og lunge efter behandling med AMD3100 og trastuzumab, blev analyseret ved realtids-PCR i henhold til niveauet af menneskelig

GAPDH

. AMD3100 og trastuzumab-behandlede mus viste med en gennemsnitlig delta-ct-værdi på -2 og -3 stærke reduktioner i lunge metastase af 75 til næsten 100%. Derudover trastuzumab-behandlede mus havde en stærk reduktion i levermetastaser repræsenteret ved en gennemsnitlig delta-ct-værdi på -3. Den AMD3100 /trastuzumab kombinationen gruppe havde en nedsat lunge (delta-ct -2), og lever (delta-ct -3) metastaser. D dissemineret tumorceller blev opdaget af cytokeratin og HER2 immunhistochemical farvning. Figur 3B viser en knoglemarvstransplantation prøve. Human celle med en stærk positivitet for HER2 er påviseligt (rød).

* På grund af pladsbegrænsninger, AMD3100 blev forkortet til AMD i

2a og c

. Vejviser

metastatisk potentiale esophageal tumorceller

in vivo

Ved afslutningen af ​​

in vivo

forsøg blev potentielt metastatiske væv (lunge, lever og lymfeknuder) samplet og histologisk undersøgt for at vurdere den metastatiske spredning af esophageal tumor for hver behandlingsgruppe. Derudover blev mikrometastaser i lever og lunge påvist ved mRNA-ekspression af det humane

GAPDH

genet ved real-time PCR-analyse fra totalt RNA.

I kontrolgruppen omfattende metastatisk spredning blev observeret til lunge , lever- og lymfeknuder. 20% af dyrene havde aggressiv metastatisk spredning til alle rum, herunder lunge, lever og multiple lymfeknuder. I modsætning hertil viste AMD3100-behandlede gruppe færre metastaser og kun et dyr udtrykt særdeles aggressiv metastatisk spredning til tre rum (lunge, lever, og lymfeknuder). Mens metastatisk spredning i kombinationen-terapi gruppe ikke var signifikant lavere end i trastuzumab-behandlede gruppe, metastase præsenteret solitarily.

Ved behandlingen samlet metastatisk spredning i H.E. og immunohistologisk farvning var signifikant mindre metastatisk spredning fundet i trastuzumab-behandlede gruppe sammenlignet med kontrolgruppen (p = 0,002). Navnlig kunne en signifikant reduktion af lungemetastaser iagttages sammenlignet med kontrolgruppen efter AMD3100, trastuzumab og kombineret behandling samt til leveren efter trastuzumab og kombineret behandling (figur 2C). Mikrometastatiske værdier præsenteres som delta ct-valør af kontrol og behandlede grupper.

Dissemineret tumorceller i knoglemarv

For at bestemme tilstedeværelsen af ​​disseminerede tumorceller i knoglemarven, disseminerede tumorceller (DTC) blev isoleret fra knoglemarv fra mus ved densitetsgradient og visualiseret ved chromagen immunfarvning. Fundet af cytokeratin-positive DTC i knoglemarven angivet omfanget af tumor sygdom (figur 2D).

CXCR4 og HER2 udtryk profil OE19 celler

in vivo

først blev OE19-celler undersøgt for deres ekspression af CXCR4 og HER2. Ikke kun HER2-overekspression, men også forstærkningen af ​​dets gen er af klinisk relevans, og dermed

Her2

-amplification status blev verificeret. OE19 celler viste et stærkt udtryk for CXCR4- og HER2-receptorer i immunfarvning (figur 3A) samt en forstærkning af

Her2

-gen i FISH (figur 3B). Semiquantitive mRNA analyse viste udtryk for

CXCR4

Her2

sammenligning med MDA-MB-231 og SKBR-3 cellelinier (figur 3C).

En CXCR4-ekspressionen af OE19 celler bestemmes ved fluorescens immunfarvning (IgG1-kontrol) B Bekræftelse af

Her2

-amplification bestemt af fluorescens in situ hybridisering (rød:

Her2

-genet loci, grøn henvisning

cent- 17

-loci) C

CXCR4

HER-2

mRNA-ekspression analyse af kræft i spiserøret cellelinje OE19 forhold til MDA-MB-231 og SKBR-3-cellelinjer og null kontrol (NC). D CXCR4 og HER2 ekspressionsniveauet analyse bestemt ved immunfarvning i primær tumor, lever, lunge og lymfeknude. Repræsentative billeder vises fra væv af et ubehandlet dyr (forstørrelse x 100). E Intensitet af HER2- og CXCR4-ekspression blev scoret i den primære tumor og metastaser. Positivitet-scoringer af primær tumor og respektive metastaser blev matchet til evaluere forekomsten af ​​og korrelation af primær tumor ekspression og dets respektive metastaser mellem de terapeutiske grupper. Trastuzumab behandling førte til et fravær af metastaser og derfor ikke kunne medtages.

* På grund af pladsbegrænsninger, AMD3100 blev forkortet til AMD i

Figur 3e

.

Korrelation af CXCR4- og HER2-udtryk i ortotopisk

in vivo

model

for det andet, primær tumor og metastatiske væv fra ortotopisk model blev undersøgt for CXCR4- og HER2-udtryk. CXCR4- og HER2-ekspression blev observeret i alle tumorbærende-væv, herunder primær tumor, lever, lunge og lymfeknudemetastaser (figur 3D). HER2-udtryk korrelerede signifikant med CXCR4-udtryk (korrelation effektiv 0.490, s 0,01).

Højere intensitet af HER2-ekspression i metastaser i forhold til primær tumor

For yderligere at evaluere relevansen af ​​HER2 – og CXCR4-korrelation, en punkt-for-punkt diagram designet (figur 3E), hvori hver metastatisk tilfælde blev markeret, hvilket indikerer både intensiteten af ​​ekspression af metastase (y-aksen) og intensiteten af ​​ekspression af dens respektive primær tumor (x-aksen). Ifølge behandlingsgruppen blev anvendt forskellige symboler. Det første diagram viser HER2-intensitet, det andet CXCR4-intensitet.

Interessant kunne en højere ekspression af HER2 og CXCR4 ses i metastaser af alle terapeutiske grupper i forhold til deres respektive primære tumorer. Intensiteten af ​​HER2- udtryk (score 1-3) af primære tumorer og deres respektive metastaser blev anvendt i den første diagram i figur 3E. Grafen viser, at intensiteten af ​​HER2-positivitet ved immunfarvning varierer mellem væv af behandlingsgrupperne. Mens HER2-positivitet af primær tumor i kontrolgruppen var begrænset til lavere intensitet (score 1), metastaser udtrykt HER2 på alle intensiteter. Under AMD3100 behandling, dog HER2 blev kun til udtryk på stærkere intensiteter (scores 2 + 3) i den primære tumor. Metastaser i AMD3100-behandlede gruppe udtrykker HER2 næsten udelukkende på højeste intensitet (score 3).

Ved anvendelse af intensitet snesevis af CXCR4-positivitet (scores 1-3) af de primære tumorer og deres respektive metastaser til det andet diagram i figur 3E, scores i kontrolgruppen varierede mellem lysere og mellemstore intensiteter (scores 1 + 2). Selv intensiteten af ​​CXCR4-ekspressionsniveauer for de primære tumorer i AMD3100 behandlede gruppe nåede højere ekspressionsniveauer (score 3), intensiteten af ​​metastatisk CXCR4-udtryk gjorde kun omfang mellemstore niveauer (score 2).

i begge diagrammer kunne trastuzumab-behandlede gruppe ikke evalueres på denne måde, da der ikke var nogen metastaser. For den kombinerede terapi gruppen, var der kun to metastatiske sager gør evaluering statistisk ikke pålidelige.

opregulering af HER2-udtryk under AMD3100 behandling

Hypothesising, at ekspressionen af ​​CXCR4 og /eller HER2, deres respektive veje og deres interaktion er involveret i at mediere tumor progression og metastatisk homing blev hver terapeutisk gruppe evalueret separat som til intensiteten af ​​HER2- og CXCR4-ekspressionsniveauerne. Ved anvendelse af samme diagram (figur 3E) intensiteten af ​​HER2- og CXCR4-ekspression blev sammenlignet mellem behandlingsgrupperne. Sammenlignet med kontrolgruppen, er HER2-intensiteterne af metastaser og primære tumorer i AMD3100-behandlede gruppe repræsenteret ved højere score overalt.

Når statistisk sammenligning af HER2 ekspression af primær tumor og metastaser mellem terapeutiske grupper, en signifikant højere HER2-ekspression blev observeret i trastuzumab-behandlede gruppe (p = 0,003) og AMD3100-behandlede gruppe (p = 0,003) sammenlignet med kontrolgruppen. Ved undersøgelse af CXCR4-ekspression, blev et signifikant højere ekspression observeret i trastuzumab-behandlede gruppe (p = 0,003) og en højere ekspression i AMD3100-behandlede gruppe (p = 0,065) sammenlignet med kontrolgruppen. Den kombinerede terapi gruppe (trastuzumab /AMD3100) hverken viste signifikante HER2-ekspression eller CXCR4-ekspression forskelle sammenlignet med kontrolgruppen.

Validering af CXCR4- og HER2-coekspression i human esophageal carcinoma

for yderligere at validere korrelationen af ​​HER2 og CXCR4, der blev fundet i

in vivo

studier blev primære tumorvæv af 202 patienter undersøgt for både HER2- og CXCR4-udtryk ved immunfarvning.