PLoS ONE: Overekspression af MTA3 korrelerer med Tumor Progression i ikke-småcellet Cancer

Abstrakt

Formålet med den aktuelle undersøgelse var at undersøge udtrykket mønster og klinisk-patologisk betydning MTA3 hos patienter med non-small celle lungecancer (NSCLC). Udtrykket profil MTA3 i NSCLC væv og tilstødende noncancerous lungevæv blev påvist ved immunhistokemi. MTA3 blev overudtrykt i 62 af 108 (57,4%) menneskelig lungekræft prøver og korreleret med p-TNM stadie (p 0,0001), nodal metastaser (p = 0,0009) og dårlig prognose (p 0,05). Desuden udtømningen af ​​MTA3 udtryk med små interfererende RNA’er inhiberet cellevækst og kolonidannelse i A549 og H157 lung cancercellelinjer. Endvidere MTA3 udtømning fremkaldt standsning af cellecyklus ved G1 /S grænsen. Western blotting-analyse viste, at knockdown af MTA3 reducerede proteinniveauer af cyclin A, cyclin D1 og p-Rb. Disse resultater indikerer, at MTA3 spiller en vigtig rolle i NSCLC progression

Henvisning:. Li H, Sun L, Xu Y, Li Z, Luo W, Tang Z, et al. (2013) Overekspression af MTA3 korrelerer med Tumor Progression i ikke-småcellet lungekræft. PLoS ONE 8 (6): e66679. doi: 10,1371 /journal.pone.0066679

Redaktør: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesu ‘, Italien

Modtaget: November 24, 2012; Accepteret: 9 maj 2013; Udgivet: 19 juni, 2013 |

Copyright: © 2013 Li et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (nr 30.972.967) og Specialized forskningsfonden for ph.d.-programmet for videregående uddannelse (nr 20092104110018) og Program for Liaoning Fremragende Talenter i University. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Lungekræft er en af ​​de førende årsager til alle cancerrelaterede dødsfald på verdensplan og dens forekomst er stigende [1], [2]. Størstedelen af ​​diagnosticerede tilfælde lungekræft er ikke-småcellet kræft (NSCLCs). Selvom tre terapeutiske modaliteter (kirurgisk resektion, kemoterapi, og strålebehandling) er blevet etableret, overlevelsen af ​​patienter med lungecancer langsigtet er stadig generelt dårlig [3]. En række komplekse genetiske, epigenetiske og microenvironmental faktorer spiller en vigtig rolle i overlevelsen og kolonisering af tumorceller på nye placeringer [4], [5]. Forbedringer i forståelsen molekylære processer involveret i pulmonal carcinogenese har ført til nye behandlingsmuligheder med små molekyler terapi og vacciner demonstrerer opmuntrende potentiale. Den bedre definition af lungekræft patogenese, nyttige biomarkører, og nye terapeutiske mål er krævende opgaver.

MTA3 blev oprindeligt fundet som medlem af en lille protein familie (herunder MTA1, MTA2 og MTA3), at alle tjener som underenheder af Mi-2 /NuRD chromatin-remodeling kompleks [6] – [13]. Rapporter om MTA3 i humane kræftformer blev ret begrænset i første omgang. MTA3 blev rapporteret at deltage i B-lymfocyt udvikling, i plasmacytom cellelinier, overekspression af BCL6 og MTA3 nedregulerede plasma celledifferentieringsfaktorer gener [14]. Siden da har ekspressionen af ​​MTA3 har fundet at blive reduceret i brystcancer, endometriecancer og ovariecancer [15] – [17]. MTA3 opregulering forhindrer EMT ved direkte at undertrykke

Snail

udtryk, derved at opjustere E-cadherin protein niveauer i brystkræft [13]. MTA3 undertrykker også Wnt4 transkription og sekretion, inhibering Wnt-målgener i mammaepitelceller [18]. En nylig undersøgelse viste, at MTA3 letter G2 /M progression i prolifererende mus granulosaceller [19]. Desuden MTA3 blev rapporteret som en uafhængig og ugunstig prognostisk markør i uterin ikke-endometriod carcinom [20]. Disse undersøgelser har antydet forskellige roller MTA3 i forskellige typer af humane cancere. Imidlertid har det protein udtryk for MTA3 i primær lungekræft og dets forhold til klinisk-patologiske faktorer, der ikke er blevet undersøgt. Derfor er de biologiske roller MTA3 i lungekræft celler er stadig uklart. For at løse de ovenstående spørgsmål, vi undersøgte MTA3 protein-ekspression i ikke-små-cellet lungekræft væv ved immunhistokemi. Desuden har vi udforsket sammenslutningen af ​​MTA3 med celledeling i flere lungekræft-cellelinjer.

Materialer og metoder

Patienter og Prøver

Denne undersøgelse blev foretaget med godkendelse af den lokale institutionelle gennemgang bord på Kina Medical University. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter, og alle kliniske undersøgelser blev udført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen. 108 tilfælde af NSCLC prøver blev opnået fra First Affiliated Hospital i Kina Medical University i perioden 2005 til 2008. Den histologiske diagnose og kvalitet af tumor differentiering blev defineret gennem evaluering af hæmatoxylin og eosin-farvede vævssnit, efter retningslinjer klassificering af World Health Organization. Alle 108 prøver blev revurderet med hensyn til deres histologiske undertyper, differentiering status, og tumor etaper. For NSCLC prøver blev pladecellecarcinom og adenocarcinom identificeret i 44 og 64 af de 108 sager, hhv. Lymfeknudemetastaser blev observeret hos 43 patienter. Den p-TNM af Den Internationale Union Against Cancer (7. udgave) blev anvendt til at klassificere prøver i trin I (n = 47), II (n = 36), III (n = 25).

cellelinier

A549 og H157 cellelinjer blev opnået fra American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). Cellerne blev dyrket i RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) indeholdende 10% føtalt kalveserum (Invitrogen), 100 IU /ml penicillin (Sigma, St. Louis, MO, USA), og 100 pg /ml streptomycin ( Sigma). Celler blev dyrket på sterile vævsdyrkningsskåle og passeret hver 2 dage under anvendelse af 0,25% trypsin (Invitrogen).

Immunhistokemi

Kirurgisk udskårne tumorprøver blev fikseret med 10% neutral formalin, indlejret i paraffin og 4 um tykke snit blev fremstillet. Immunfarvning blev udført under anvendelse af avidin-biotin-peroxidase-kompleks-metoden (Ultra Sensitive TM, Maixin, Fuzhou, Kina). Snittene blev afparaffiniseret i xylen, rehydreret i gradueret alkoholserie og kogt i 0,01 M citratpuffer (pH 6,0) i 2 minutter i en autoklave. Endogen peroxidaseaktivitet blev blokeret ved anvendelse af hydrogenperoxid (0,3%), som blev efterfulgt af inkubation med normalt gedeserum for at reducere ikke-specifik binding. Vævssnit blev inkuberet med en MTA3 kanin polyklonalt antistof (1:150 fortynding) (Proteintech, Chicago, IL, USA). Muse-immunoglobulin anvendtes som en negativ kontrol. Farvning med alle primære antistoffer blev udført ved stuetemperatur i 2 timer. Biotinyleret gede-anti-muse-serum-IgG, eller biotinyleret gede-anti-kanin-serum-IgG (klar-til-brug) (Maixin, Fuzhou, Kina) blev anvendt som sekundære antistoffer. Efter vask blev sektionerne inkuberet med peberrodsperoxidase-konjugeret streptavidin-biotin, efterfulgt af 3,3′-diaminobenzidintetrahydrochlorid at udvikle peroxidase reaktionen. Kontrastfarvning af sektionerne blev gjort med hæmatoxylin, og derefter ethanol dehydrering blev udført før montering.

To uafhængige efterforskere undersøgt alle tumor glider tilfældigt. Fem synspunkter blev undersøgt per dias, og 100 celler observeret per view på 400 × forstørrelse. Immunfarvning af MTA3 blev scoret på en semikvantitativ skala ved at evaluere i repræsentative tumorområder med en højere intensitet og celle procentdel af immunfarvning end kontrolcellerne. Nuklear farvning af tumorcellerne blev betragtet positiv immunfarvning. Intensiteten af ​​MTA3 nuklear farvning blev også bedømt som 0 (ingen farvning), 1 (svag), eller 2 (markeret). Procent scoringer blev tildelt som en (1-25% positive), 2 (26-50%), 3 (51-75%), og 4 (76-100%). Pointene for hver tumor prøve blev multipliceres for at give en endelig score fra 0 til 8 og den samlede ekspression af MTA3 blev bestemt som enten negativ eller lav ekspression (-) med en score 4 eller overekspression (+) med en score ≥4 .

kvantitativ real-time PCR (SYBR Green Method)

Kvantitativ realtids-PCR blev udført under anvendelse SYBR Green PCR Master mix (Applied Biosystems) i et totalt volumen på 20 pi på 7900HT Hurtig real-Time PCR System (Applied Biosystems) som følger: 95 ° C i 30 s, 40 cykler ved 95 ° C i 5 s, og 60 ° C i 30 s. En dissociation trin blev udført for at fremskaffe en smeltekurve for at bekræfte specificiteten af ​​amplifikationen. β-actin blev anvendt som reference-genet. De relative niveauer af genekspression var repræsenteret ACt = Ct-gen -Ct reference, og folden ændring af genekspression blev beregnet af 2

-ΔΔCt metode. Forsøg blev gentaget tre gange. Primersekvenserne anvendte var: MTA3 fremad, 5′-CCCACCCAGTCAGAAGAAGA-3 ‘, MTA3 omvendt, 5′-TTGGACTCCCAGTGTTTCG-3′; β-actin fremad, 5’-ATAGCACAGCCTGGATAGCAACGTAC-3 ‘, β-actin omvendt, 5′-CACCTTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3′; Sneglen fremad, 5’-CCTCAAGATGCACATCCGAAGCCA-3 ‘, snail revers, 5′-AGGAGAAGGGCTTCTCGCCAGTGT-3′; Slug fremad, 5’-AGATGCATATTCGGACCCAC-3 ‘, Slug revers, 5′-CCTCATGTTTGTGCAGGAGA-3’.

Western blot-analyse

Total proteiner fra cellelinier blev ekstraheret i lysepuffer (Thermo Fisher videnskabelige, Rockford, IL) og kvantificeret under anvendelse af Bradford-metoden. Halvtreds mikrogram protein blev separeret ved SDS-PAGE (12%). Efter overførsel blev polyvinylidenfluorid (PVDF) membraner (Millipore, Billerica, MA, USA) inkuberet natten over ved 4 ° C med de følgende antistoffer: MTA3 (1:1000; Proteintech, Chicago, IL, USA), beta-actin ( 1:500; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), cyklin A (1:1000), cyklin B (1:1000), cyclin D1 (1:1000), CDK2 (1:1000), CDK4 (1:1000 ), CDK6 (1:1000), og p-Rb (1:2000) (Cell Signaling Technology, Boston, MA, USA). Efter inkubation med peroxidase-koblet anti-muse-IgG og anti-kanin IgG (Santa Cruz Biotechnology) ved 37 ° C i 2 timer, blev bundne proteiner visualiseret under anvendelse af ECL (Thermo Fisher Scientific) og påvist under anvendelse Bioimaging Systems (UVP Inc., Upland , CA, USA). De relative protein niveauer blev beregnet på grundlag af β-actin som lastning kontrol.

Små interfererende RNA Behandling

siRNA’er til MTA3 (siRNAa, 5′-CAGUGUAGAUUAUGUGCAATT-3 ‘og siRNAb, 5 ‘-AGAUAAGCAUGCUAAAGAATT-3′) og negative kontrol siRNA’er (5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 ‘) blev købt fra Genepharma (Genepharma, Shanghai, Kina). For transfektioner blev celler podet i en 24-brønds plade 24 timer før forsøget. Cellerne blev transficeret med siRNA’er vha DharmaFECT 1 (0,20 pl /brønd; ThermoFisher Scientific) ifølge fabrikantens protokol. MRNA og proteinniveauer blev bedømt 48 timer efter transfektion.

Cell Proliferation Test og kolonidannelse Assay

celleproliferationsassay blev udført under anvendelse Cell Counting Kit-8-opløsning (Dojindo, Gaithersburg, MD ) ifølge fabrikantens protokol. Kort fortalt blev cellerne podet ved en koncentration på 5 × 10

3 celler /100 pl /brønd i 96-brønds dyrkningsplader og behandlet med 10 pl /brønd af Cell Counting Kit-8 løsning under de sidste 4 timer af kultur. Den optiske densitet af brønden blev målt ved 450 nm under anvendelse af en mikropladelæser. For kolonidannelse assayet blev celler plantes i tre 6-cm celle dyrkningsskåle (1000 pr skål for A549 og H157 cellelinier) og inkuberet i 12 dage. Pladerne blev vasket med PBS og farvet med Giemsa. Kolonier med mere end 50 celler blev talt.

Cell Cycle Analysis

Celler (500.000) blev podet i 6-cm vævskulturskåle. Tolv timer senere, blev celler transficeret med de angivne mængder af siRNA’er. Celler blev synkroniseret efter serum sult i 20 timer og tidspunkter taget ved 24 timer efter inkubation i 10% serum media for at bestemme virkningerne på cellecyklussen. Celler blev høstet, fikseret i 1% paraformaldehyd, vasket med phosphatbufret saltvand (PBS) og farvet med 5 mg /ml propidiumiodid i PBS suppleret med RNase A (Roche, Indianapolis, IN) i 30 minutter ved stuetemperatur. Data blev indsamlet ved hjælp af BD Calibur flowcytometer.

Statistisk analyse

SPSS-version 16.0 til Windows blev brugt til alle analyser. Chi-squared test blev anvendt til at undersøge mulige sammenhænge mellem MTA3 udtryk og klinisk-patologiske faktorer. Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til at estimere sandsynligheden for patientens overlevelse, og forskelle i overlevelse patientundergrupper blev sammenlignet under anvendelse Mantel log-rank test. Den t-test blev anvendt til at sammenligne andre data. Den p-værdi var baseret på to-sidet statistisk analyse, og p 0,05 blev anset for at statistisk signifikant

Resultater

1.. Overekspression af MTA3 Protein i ikke-småcellet lungekræft Væv

Vi analyserede protein udtryk for MTA3 i 108 NSCLC prøver og deres tilsvarende normale væv ved immunhistokemi. MTA3 protein ekspression blev observeret i de nukleare rum i tumorceller, mens den normale bronchial epitel udviste negativ eller lav farvning (figur 1A-F). Vi undersøgte forholdet mellem den samlede MTA3 ekspression og kliniske parametre. Som vist i tabel 1 blev ingen statistisk forskel mellem MTA3 overekspression og karakteristika ældning (p = 0,1404), køn (p = 0,8683), tumor status (p = 0,1556), differentiering (p = 0,1985) og tumortype (p = 0,0604). Men patienter med forhøjet MTA3 udtryk viste øget nodal metastaser (p = 0,0009) og havde et fremskredent NSCLC (p 0,0001). Vi analyserede yderligere forholdet mellem MTA3 proteinekspression og prognosen for patienter med lungecancer og fandt, at MTA3 overekspression korreleret med en reduktion i samlet overlevelse (p 0,05) (figur 2A). MTA3 overekspression korreleret med de fattige overlevelse fase I patienter (p 0,05), men ikke af patienter med stadie II-III NSCLC (p = 0,17) (Figur 2 B, C)

A.. Negativ farvning i normal bronkieepitel i ikke-kræft lungevæv. B. Negativ kontrol under anvendelse af kanin-immunglobulin. C. Svag MTA3 farvning i lunge adenocarcinom. D. Svag MTA3 farvning i et tilfælde af pladecellekræft. E. Positiv MTA3 farvning i et tilfælde af lunge adenocarcinom. F. Positiv MTA3 farvning i et tilfælde af pladecellekræft.

A. Den samlede overlevelsesrate var signifikant lavere hos patienter med positive MTA3 udtryk end hos patienter uden. B. overlevelse hos patienter med stadie I NSCLC. C. overlevelse hos patienter med stadie II-III NSCLC.

2. MTA3 Nedbrydning Forhindrer spredning i Lung Cancer Cell Lines

udtryk for MTA3 blev analyseret gennem Western blotting og realtime PCR i et panel af lungekræft-cellelinjer (Figur 3 A, B). Vi fandt, at niveauet af MTA3 udtryk i H157 og A549 celler var højere end andre celler lines.To udforske den biologiske funktion af MTA3 i lungekræft celler, vi ansat siRNA til knockdown

MTA3

udtryk i både H157 og A549 cellelinier. To MTA3 siRNA’er (a og b), rettet mod forskellige

MTA3

sekvenser, blev evalueret. Den siRNAa var mere effektiv til at reducere

MTA3

udtryk; derfor vi brugte den til yderligere undersøgelser (Figur 3 C, D). For at bekræfte evne siRNAa at nedregulere MTA3 (og dermed dens transkriptionelle undertrykkelse funktioner) vi undersøgte også udtryk for den MTA3 nedstrøms målgener

Snail

Slug

. Som forventet, behandling med MTA3 siRNAa opreguleres mRNA ekspressionen af ​​

Snail Hotel (figur 3E). CCK-8 assay viste, at MTA3 depletering reduceret celle proliferaion i begge cellelinier. Kolonidannelse analyse viste, at udtømning af MTA3 i H157 og A549 celler ført til en betydelig reduktion i antallet og størrelsen af ​​foci (A549 kontrol vs MTA3si: 275 ± 7 vs 81 ± 10; H157 kontrol vs MTA3si: 476 ± 10 vs 276 ± 32), hvilket antyder, at MTA3 modulerer proliferationen af ​​lungecancerceller (figur 4).

a og B. Ekspressionsniveauer af MTA3 blev analyseret ved western blot og realtime PCR i et panel af lungekræft cellelinier. C. Western blot-analyse af to MTA3 siRNA effektivitet i cancerceller. D. Real-time PCR-analyse af to MTA3 siRNA effektivitet i kræftceller. E. MTA3 siRNA behandling opreguleret snegl mRNA-ekspression.

A. CCK-8 assay blev udført efter MTA3 siRNA behandling. En reduktion af absorbansen blev iagttaget (p 0,05 på dag 5 for både A549 og H157). B. Vurdering af klonogene potentialer i MTA3-udtømte cancerceller. Antal kolonier blev talt. Antallet af kolonier dannet af celler behandlet med MTA3 siRNA var langt mindre end af kontrolceller (p 0,05). Kolonner, betyder; barer, SD. * P. 0,05

3. Udtømning af MTA3 nedreguleret Cyclina og cyclin D1 Ekspression i lungecancerceller

Celle cyklus analyser blev udført i A549 og H157 celler med eller uden MTA3 knockdown, og fandt, at den procentdel af celler i G1-fasen blev forøget i celler med MTA3 knockdown, mens procentdelen af ​​celler i S-fasen faldt i disse celler sammenlignet med kontrol-celler (A549 kontrol vs MTA3si: G1 fase: 62,59% ± 0,9 vs. 79,71% ± 1,5; S-fasen: 31,27% ± 0,52 vs 15,21% ± 0,88; H157 kontrol vs MTA3si: G1 fase: 53,83% ± 1,4 vs. 64,61% ± 1,8; S-fasen: 32,64% ± 0,8 vs. 18,59% ± 0,48). Disse resultater indikerer, at udtømningen af ​​MTA3 inducerer standsning af cellecyklus ved G1 /S grænsen. Der var ingen signifikant ændring i andelen af ​​G2-fase celler (Figur 5). For at undersøge den mekanisme underliggende cellecyklusstandsningen undersøgte vi niveauet for cyklus-relaterede proteiner ved anvendelse af celler, der er høstet på samme tidspunkt som celler, der anvendes i cellecyklus-analyse. Vi testede effekten af ​​MTA3 knockdown på niveauerne af cyclin A, cyklin D1, cyklin B, CDK2, CDK4, CDK6 og p-Rb. Western blotting-analyse viste, at knockdown af MTA3 nedsætter proteinniveauer af cyclin A, cyclin D1 og p-Rb ekspression (figur 6). Tilsammen tyder disse resultater på, at inhibering MTA3 ekspression inducerer standsning af cellecyklus ved G1-S overgang, undertrykke lungekræft cellevækst.

Procentdelen af ​​G1-fasen blev forøget i celler med MTA3 knockdown (H157 og A549, p lt 0,05), mens procentdele af S-fasen (H157 og A549, s. 0,05) blev reduceret i disse celler sammenlignet med kontrol celler

Western blot analyse af en række cellecyklus relaterede faktorer viste protein niveauer af cyclin A, D1 og p-Rb blev nedsat efter lyddæmpende MTA3 i H157 og A549 celler, mens der ikke var nogen signifikant ændring af cyclin B, CDK2, CDK4 og CDK6 udtryk.

diskussion

nedregulering af MTA3 blev rapporteret i brystcancer, endometriecancer og ovariecancer [15] – [17], mens opregulering af MTA3 ekspression er blevet impliceret i human chorion cancer [21]. MTA3 overekspression tjener som en prognostisk markør for at dømme overlevelse uterine patienter ikke-endometriod kræft [20]. Imidlertid ekspressionsmønsteret for MTA3 samt dens korrelation med kliniske og patologiske faktorer var endnu ikke blevet defineret, i human lungecancer. I denne undersøgelse har vi vist, at MTA3 proteinekspression i humane lungevæv er højere end tilsvarende normale lungevæv. Der var en tæt sammenhæng mellem MTA3 opregulering pTNM scenen og nodal metastaser. Vigtigt er det, vi var i stand til at vise, at MTA3 korrelerer med de fattige overlevelse af patienter med lungecancer. Dette var i overensstemmelse med tidligere data, der antydede, at MTA3 spiller en vigtig rolle i lungekræft progression. For at validere potentielle rolle MTA3 i udviklingen lungekræft, vi først kontrolleres sit udtryk niveau i flere cellelinjer og brugt A549 og H157 celler (med relativt høje MTA3 niveauer) for yderligere undersøgelser. Vi ansat siRNA til Knockdown MTA3 udtryk i disse to cellelinjer. Vi fandt en forringet spredning kapacitet og kolonidannelse evne i begge cellelinier efter MTA3 knockdown. Således er vores undersøgelse tyder på, at

MTA3

fungerer som et onkogen i udvikling lungekræft.

En rencent undersøgelse rapporterede, at t udtømning af endogene MTA3 i muse primære granulosaceller signifikant nedsætter cyclin B1 og cyklin B2 ekspression, forsinker celleproliferation og increaseds procentdelen af ​​celler i G2 /M, som kunne vendes ved co-ekspression af exogent MTA3 [19]. De fleste proliferative faktorer påvirker cellevækst ved at påvirke cellecyklusprogression. anvendes således vi cellecyklusanalyse og fundet en stigning i MTA3-deficiente celler i G1-fasen og et fald i S-fasen i forhold til kontrolceller. Hæmningen af ​​G1 til S overgang i cellecyklusprogression kunne forklare mekanismerne bag MTA3 virkninger på lungekræft celleproliferation.

For at finde de potentielle mekanismer MTA3 på cellecyklusregulering undersøgte vi effekten af ​​MTA3 knockdown på en række celle-cyklus-relaterede molekyler. Vi kontrollerede ekspressionen af ​​cycliner (A, B, og D1), CDK2, CDK4, CDK6 og p-Rb. Vi fandt, at niveauerne af cyclinA, D1 og p-Rb faldt efter MTA3 knockdown. Cyclin D1 interagerer med Cdk4 /6 for at danne et kompleks, som phosphorylerer Rb og regulerer celleproliferation ved at styre progression gennem begrænsningen punkt inden for G1-fasen af ​​cellecyklussen [22]. Cyclin D1 overudtrykkes i en række forskellige cancertyper og er forbundet med cancer celleproliferation [23] – [25]. Cyclin A er påkrævet for cellen at fremskridt gennem S-fase [26]. Cyclin B er et mitotisk cyclin og ophobning kun findes ved G2-M overgang [27]. Således er vores resultater viser nedsatte niveauer af cyclin A, D1, og p-Rb korrelerer med en nedsat mængde celler i S og G2 fase og de øgede niveauer af celler i G1-fasen efter MTA3 knockdown, hvilket tyder MTA3 spiller en vigtig rolle i cellecyklus kontrol over lunge kræftceller.

som konklusion nærværende undersøgelse showes at MTA3 er overudtrykt i NSCLC og korrelerer med sin fremskredent stadium og dårlig prognose. Vores undersøgelse viser også, at overekspression af MTA3 kunne fremme celledeling gennem cellecyklus regulering.

Tak

Forfatterne vil gerne takke Dr. Qingchang Li for hans fremragende teknisk bistand.