PLoS ONE: en dobbeltrolle for KRT81: En miR-SNP associeret med Gentagelse i ikke-småcellet lungekræft og en roman markør for planocellulært Lung Carcinoma

Abstrakt

MikroRNA’er (miRNA) spiller en vigtig rolle i carcinogenese gennem regulering af deres mål gener. miRNA-relaterede enkelt nukleotid polymorfier (miR-SNPs) kan påvirke miRNA Biogenese og målområder og kan ændre microRNA udtryk og funktioner. Vi undersøgte 11 miR-SNPs, herunder fem i microRNA gener, 3 i microRNA bindingssteder og 3 i maskinkomponenter microRNA-behandling, og vurderes tid til tilbagefald (TTR) i henhold til miR-SNP genotyper i 175 kirurgisk resektion ikke-småcellet lungecancer (NSCLC) patienter. Væsentlige forskelle i TTR blev fundet efter

KRT81

rs3660 (median TTR: 20,3 måneder for CC-genotypen versus 86,8 måneder for CG eller GG genotype; P = 0,003) og

XPO5

rs11077 ( median TTR: 24,7 måneder for AA-genotypen versus 73.1 måneder for AC eller CC genotyper; P = 0,029). Desuden, når patienter blev inddelt efter scenen, blev disse forskelle opretholdes for fase I-patienter (P = 0,002 for

KRT81

rs3660, P 0,001 for

XPO5

rs11077). Når patienterne blev inddelt i undergrupper baseret på histologi, effekten af ​​

KRT81

rs3660 genotypen på TTR var signifikant hos patienter med planocellulært karcinom (P = 0,004), men ikke i dem med adenocarcinom. I den multivariate analyser,

KRT81

rs3660 CC genotype (OR = 1,8; P = 0,023) og

XPO5

rs11077 AA-genotypen (OR = 1,77; P = 0,026) dukket op som uafhængige variable påvirke TTR. Immunohistokemisk analyse i 80 lungeprøver viste, at 95% af skælcellecarcinomer var positive for KRT81, sammenlignet med kun 19% af adenocarcinomer (P 0,0001). Afslutningsvis miR-SNP’er er en ny klasse af SNPs, som kan tilføje nyttige prognostiske oplysninger om det kliniske resultat af resektion NSCLC patienter og kan være et potentielt vigtigt redskab til valg højrisiko stadie I-patienter. Desuden har KRT81 opstået som et lovende immunhistokemisk markør til identifikation af pladecelle-lungecarcinom

Henvisning:. Campayo M, Navarro A, Viñolas N, Tejero R, Muñoz C, Diaz T, et al. (2011) en dobbeltrolle for KRT81: En miR-SNP associeret med Gentagelse i ikke-småcellet lungekræft og en roman markør for planocellulært lungecancer. PLoS ONE 6 (7): e22509. doi: 10,1371 /journal.pone.0022509

Redaktør: Sumitra Deb, Virginia Commonwealth University, USA

Modtaget: 19. april, 2011; Accepteret: 22 juni 2011; Udgivet: 25 juli 2011

Copyright: © 2011 Campayo et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra Hospital Clinic de Barcelona (Premi Fi de residencia Emili Letang) og Fondo de Investigaciones Sanitarias de la Seguridad Social FIS-PI09 /00547. Tania Diaz er en FI fyr støttet af AGAUR, Generalitat de Catalunya og Fondo Social Europeo. Rut Tejero er en APIF fyr fra universitetet i Barcelona. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Lungekræft er den første årsag til kræft død på verdensplan [1]. Ca. 85% af patienterne har ikke-småcellet lungecancer (NSCLC) og mindre end 30% er diagnosticeret med tidlig fase sygdom. Den vigtigste behandling for tidlige fase sygdom er kirurgi, men selv når en komplet kirurgisk resektion er muligt, vil 20-75% af NSCLC-patienter tilbagefald [2]. På grund af denne høje sats for tilbagefald, at biomarkører forudsige risikoen for sygdomsprogression der er behov, især i fase I, hvor adjuverende kemoterapi ikke rutinemæssigt administreres, men hvor det kan være effektivt i visse undergrupper af patienter [3].

MikroRNA’er (miRNA) er korte ikke-kodende RNA’er, der regulerer posttranskriptionel genekspression ved binding primært til det 3′-utranslaterede region (UTR) af deres mål-mRNA og undertrykke dets translation. Flere proteiner er aktive i biogenese af miRNA. Kort fortalt miRNA oversat af en RNA-polymerase II til lange primære transkripter (PRI-miRNA) og forarbejdet i kernen af ​​RNase III drosha i pre-miRNA (70-100 nukleotider); præ-miRNA transporteres til cytoplasmaet af XPO5, hvor RNase III Dicer genererer en duplex molekyle af 21-25 nukleotider langt. Gennem foreningen med den komplekse RNA-induceret silencing kompleks (RISC), vil en af ​​disse 2 kæder (det modne miRNA) guide RISC til target mRNA [4], [5]. miRNA spiller en vigtig rolle i reguleringen af ​​sådanne afgørende processer som udvikling, celleproliferation, differentiering og apoptose. Voksende beviser for, at miRNA afvigende udtrykkes i humane kræftformer, herunder NSCLC [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], og de har været forbundet med ætiologien og prognose af mange tumorer [14]. Afhængigt af deres målgener kan miRNA fungere enten som onkogener eller tumorsuppressorgener [15].

Forskellige mekanismer kan forklare dereguleringen af ​​miRNA observeret i kræft, herunder genomiske ændringer (sletninger, amplifikationer, translokationer), epigenetiske ændringer, mutationer /polymorfier, transkriptionel deregulering, og ændringer i miRNA biogenese maskiner [14], [16]. Single nucleotide polymorphisms (SNPs), der kan påvirke miRNA funktioner, kendt som MIR-SNP’er, findes i miRNA gener, i miRNA bindingssteder (i 3’UTR af målgenet) eller i bestanddelene af miRNA biogenese maskiner [17] . miR-SNP’er kan påvirke miRNA ekspressionsniveauerne på forskellige måder, hvilket resulterer i tab eller gevinst på miRNA-funktion [18]. SNPs i miRNA gener kan påvirke pri-miRNA, pre-miRNA eller modne miRNA sekvens og kan potentielt modulere miRNA behandling, ændre modne miRNA niveauer eller ændre miRNA-mRNA interaktioner [19], [20]; SNP’er påvirker ekspressionen af ​​proteiner involveret i miRNA biogenese kan ændre miRNAome i cellen [21]; og endelig, SNPs i miRNA target sites, som er hyppigere og mere specifik i det humane genom, kan forstyrre eller ændre miRNA-medierede repression af et target-gen [22].

Denne ny klasse af SNPs åbner et nyt forskningsområde i cancer biologi og klinisk onkologi, især i studiet af sygdomsprogression, patient prognose og behandlingseffekt. For nylig har forskellige undersøgelser vist, at SNP’er i miRNA netværk kan påvirke både risikoen for at udvikle forskellige kræftformer [20] og også prognosen for mange tumorer [23], [24], [25], [26].

i den foreliggende undersøgelse har vi evalueret 11 SNPs (fem i miRNA gener, tre i miRNA bindingssteder og tre i miRNA-processing gener) i 175 kirurgisk resektion NSCLC patienter og korreleret vores resultater med tid til tilbagefald (TTR) og samlet overlevelse (OS). Hertil kommer, for at undersøge potentielle forskelle i udtryk baseret på histologi, undersøgte vi immunfarvning mønster af KRT81 i 77 lungekræft prøver og tre normale lunge kontroller.

Materialer og metoder

Study befolkning og etiske retningslinjer

Fra marts 1996 og december 2009 175 NSCLC patienter blev komplet kirurgisk resektion i vores institution. Alle patienter havde patologisk bekræftet trin I-III-sygdom. Godkendelse til undersøgelsen blev opnået fra Institutional Review Board i Hospital Clinic, Barcelona, ​​Spanien. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra hver deltager i overensstemmelse med Helsinki-deklarationen

Udvælgelse af miR-SNPs

Vi valgte 11 SNPs i gener involveret i miRNA regulatoriske veje:. SNPs i miRNA gener ; SNPs i miRNA bindingssteder; og SNP’er i miRNA-behandling gener. Ti af de SNPs blev udvalgt efter følgende krav: For det første en beslutsom allel frekvens for den europæiske befolkning og tilgængelighed i National Center for Biotechnology Information (NCBI) SNP-database; for det andet, en mindre genotype frekvens for den europæiske befolkning ≥ 0,05; og endelig, enten et kendt association med en differentieret modtagelighed for udvikling af cancer eller en differential ekspression i faste tumorer. For SNPs i miRNA bindingssteder, valgte vi tre SNPs med en afvigende allel frekvens i humane tumorer. Desuden en SNP – in

MIR194-2

– var specielt valgt, fordi det havde vist sig at være udtrykkes forskelligt i lungekræft [11]. Tabel 1 opsummerer begrundelse for valg SNP.

DNA isolation, primere, prober og SNP-analyse

DNA blev opnået fra paraffinindlejret tumorvæv ved hjælp af den kommercielle DNeasy væv kit ( Qiagen, Valencia, CA) ved at følge fabrikantens protokol. For at måle DNA mængde blev en NanoDrop ND-1000 spektrofotometer (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA), der anvendes. Primere og prober var kommercielt tilgængelige (TaqMan SNP genotypning Analyser, Applied Biosystems, Foster City, CA). SNP-analyse blev udført ved allel diskrimination i et ABI PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems).

Immunhistokemi

Immunhistokemi blev udført på formalinfikserede, paraffinindlejrede vævssnit af 77 lungecarcinomer og 3 normale lunge kontroller fra Patologi Tjeneste Hospital Clinic i Barcelona efter gennemgang af en thorax patolog. Fem-um-tykke tværgående sektioner af formalin-fikseret, paraffinindstøbt væv blev serielt skåret og monteret på Dako Silanized Slides (S · 3003, Dako, Glostrup, Danmark). For antigen hentning blev sektionerne manuelt nedsænket i Target Retrieval Solution, højt pH (Dako) og opvarmet i et vandbad ved 95-99 ° C i 20 minutter. Endogen peroxidaseaktivitet blev standset ved nedsænkning i Dako Fast Peroxidase-blokerende opløsning i 10 minutter. Vævssnittene blev inkuberet med primært antistof mod KRT81 (fortynding 1:50; klon sc-100.929; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) i 30 minutter ved stuetemperatur. Immunoperoxidasefarvning blev udført under anvendelse Advance system /HRP (Dako) og Liquid DAB + (Dako). Endelig blev snit farvet med hematoxylin. Alle objektglas blev blindt scoret af de samme to patologer under anvendelse af en 3-punkts-system. Pointsystemet var som følger: 0, 5% af tumorcellerne farves; 1, 5% til 50% af tumorcellerne farves; 2, 50% af tumorcellerne farvning. Ufortolkelige resultater blev slået ud yderligere overvejelser. Sager scorede 1 eller 2 blev betragtet som positive, og sager scorede 0 blev anset negativ. Kun cytoplasmatiske positivitet blev evalueret. Vævssnit fra normal lunge blev anvendt som positive kontroller, mens negative kontroller blev opnået ved at inkubere afsnittene uden det primære antistof.

Statistisk analyse

Det primære formål med undersøgelsen var TTR. Det sekundære formål var OS. Alle statistiske analyser blev udført ved anvendelse af PAS W Statistik 18 (SPSS Inc., Chicago, IL). TTR blev beregnet fra tidspunktet for kirurgisk behandling til datoen for tilbagefald eller sidste opfølgning. OS blev beregnet fra tidspunktet for kirurgisk behandling til datoen for død eller sidste opfølgning. Efter operationen blev patienterne uden tumorprogression fulgt hver 3. måned i 2 år, så hver 6. måned indtil 5 år efter operationen, og derefter årligt. Log-rank test og Kaplan-Meier-kurver blev anvendt til at evaluere sammenslutning af TTR og OS med hver af SNP’er og kliniske variabler. En Cox multivariat analyse (indtast metode) blev anvendt til at beregne de uafhængige odds ratio for TTR og OS. I de immunhistokemiske analyser blev frekvenser sammenlignes i den Fishers eksakte test. Niveauet af signifikans blev sat til ≤0.05.

Resultater

Patient Kendetegn

Analysen omfattede 175 patienter, 154 (88%) af dem var mænd. Median alder var 65 år (range, 35-85). Fireogtyve (13,7%) patienter havde Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status (PS) 0 og 149 (85,2%) patienter havde PS 1. Ninety-otte (56%) patienter havde stadium I sygdom. Firs (45,7%) patienter havde adenocarcinom og 84 (48%) havde pladecellekarcinom. Et hundrede og halvtreds-otte (90,3%) patienter var aktive eller tidligere rygere. Et hundrede og toogtredive (75,4%) patienter gennemgik en lobectomy eller bilobectomy. Ni (5,1%) patienter havde fået præoperativ kemoterapi eller strålebehandling for resektabel stadie IIIA sygdom. Seksten patienter (9,1%) fik adjuverende kemoterapi (13 i fase II eller III sygdom og 3 for trin I sygdom med T 4 cm). Mean opfølgning blev 35 måneder (interval, 2-160). Efter en opfølgning på 160 måneder, havde sygdomstilbagefald forekom i 75 (42,9%) patienter (tabel 2).

TTR, OS og miR-SNPs

Samlet median TTR var 39.03 måneder (95% CI, 3,9-74,1), og median OS var 90,6 måneder (95% CI, 47,4 til 133,7). I univariate analyser, herunder kun kliniske karakteristika, blev scenen i forbindelse med TTR (P = 0,008) og alder var forbundet med OS (P = 0,014). En ikke-signifikant tendens til en sammenhæng mellem køn og TTR blev også observeret (P = 0,081). Tabel 3 viser genotypiske frekvenser for alle 11 miR-SNPs analyseret, både i nærværende undersøgelse og som rapporteret i NCBI SNP database (dbSNP) for den europæiske befolkning. Væsentlige forskelle i TTR blev fundet efter

KRT81

rs3660 genotype (P = 0,008, figur S1). I betragtning af den tilsvarende fordeling i TTR for patienter med CG og GG genotyper blev disse to grupper kombineres til yderligere analyser. Median TTR i 45 patienter (25,9%) med CC genotypen var 20,3 måneder versus 86,8 måneder for patienter med CG eller GG genotype (P = 0,003; Figur 1A). Blandt 98 patienter med stadium I sygdom, median TTR var 23,9 måneder for 25 patienter (25,5%) med CC genotypen versus 100,2 måneder for patienter med CG eller GG genotype (P = 0,002; Figur 1B). Vi observerede også en ikke-signifikant tendens til en differentieret TTR henhold til

XPO5

rs11077 genotype (P = 0,077, figur S2). I betragtning af den tilsvarende fordeling i TTR for patienter med AC og CC genotyper blev disse to grupper kombineres til yderligere analyser. En væsentlig kortere TTR blev observeret hos patienter med

XPO5

rs11077 AA genotype; median TTR var 24,7 måneder for patienter med AA-genotypen, versus 73.1 måneder for dem med AC eller CC-genotypen (P = 0,029; Figur 2A). Blandt 97 patienter med stadium I sygdom, median TTR var 24.13 måneder for 33 patienter (34%) med AA genotypen, men blev ikke nået til dem med AC eller CC genotype (P 0,001; figur 2B). Ingen andre forskelle i TTR blev observeret ifølge ethvert af de andre genotyper analyserede. Ingen signifikante forskelle i TTR blev observeret i fase II-III patienter ifølge ethvert af de analyserede SNP’er

1A:. I alle patienter analyseret. IB:. Patienter med stadium I sygdom

1A: i alle patienter analyseres. IB: til patienter med stadium I sygdom

Median OS blev ikke nået i 49 patienter med

MIR423

rs6505162 AA genotype, sammenlignet med 61,6 måneder i 42 patienter med. CC genotype og 90,5 måneder for personer med AC-genotypen (P = 0,043; fig S3). Ingen andre forskelle i OS blev observeret ifølge ethvert af de andre genotyper analyserede.

Multivariate analyser

Alle variabler med en univariat TTR log-rank P≤0.1 (køn, stadie, type operation ,

KRT81

rs3660 genotype og

XPO5

rs11077 genotype) blev inkluderet i Cox multivariat analyse for TTR. Mand køn (odds ratio [OR], 3,73; 95% CI, 1,4-9,9; P = 0,008), fase I-sygdom (OR, 0,34; 95% CI, 0,18 til 0,65; P = 0,001),

KRT81

rs3660 CC genotype (OR, 1,8; 95% CI, 1,08-2,99; P = 0,023) og

XPO5

rs11077 AA genotype (OR, 1,77; 95% CI, 1,07-2,91; P = 0,026) opstået som uafhængige variable for TTR (tabel 4). Alle variabler med en univariat OS log-rank P≤0.1 (køn, alder og

MIR423

rs6505162 genotype) og sygdom fase blev inkluderet i Cox multivariat analyse til OS. Alder ≤65 (OR, 0,48; 95% CI, 0,25-0,95; P = 0,036) og fase I-sygdom (OR = 0,31, 95% CI 0,14-0,67; P = 0,003) var uafhængige variabler for OS

yderligere analyser af KRT81

Da betydelige forskelle i TTR blev fundet efter

KRT81

rs3660 genotype, vi yderligere undersøgt effekten af ​​denne genotype på undergrupper af patienter med adenocarcinom og pladecellecarcinom. Blandt de 83 patienter med pladecellecarcinom, TTR var 19,3 måneder for 24 patienter med CC-genotypen og 121 måneder for 59 patienter med CG eller GG genotype (P = 0,004; Fig 3A). I modsætning hertil blev der ikke observeret nogen signifikant forskel i henhold til den

KRT81

rs3660 genotype blandt de 80 patienter med adenocarcinom (P = 0,375, figur 3B). Vi udforskede så muligheden for en lignende differentiel effekt for de øvrige ti genotyper men fandt ingen forskelle i TTR mellem planocellulært karcinom og adenokarcinom i henhold til genotype

A:. TTR efter

KRT81

rs3660 genotype i 83 af 84 pladecellecarcinom patienter; én patient kunne ikke genotype. B: TTR efter

KRT81

rs3660 genotype i 80 adenocarcinom patienter. C: Pladecellekræft tilfælde viser diffus cytoplasmatisk KRT81 farvning. D: Negativ kontrol. E: Negativ farvning for KRT81 i en adenocarcinom tilfælde. F: Immunhistokemi i en normal lungevæv sektion. KRT81 cytoplasmatisk positivitet i bronchiolær epitel blev anvendt som positiv kontrol.

For yderligere at udforske dette markerede prognostiske værdi af

KRT81

rs3660 genotype i pladecellekræft, vi analyserede KRT81 ekspression ved immunhistokemi i 42 pladecellecarcinom, 33 adenocarcinom og 2 adenosquamøst carcinom prøver og i tre normale lunge vævsprøver. Tabel S1 viser resultaterne af hver af de 80 prøver. Bemærkelsesværdige forskelle blev observeret i immunfarvning mønster ifølge histologisk undertype: 38 af 40 pladecellecarcinomer (95%) var positive sammenlignet med 6 af 32 adenocarcinomer (19%) (Fishers eksakte test p 0,0001; tabel 5). Desuden 3 af de 6 positive adenocarcinomer viste kun et samlingspunkt positivitet (score 1). Følsomhed, specificitet, positiv prædiktiv værdi, negativ prædiktiv værdi og nøjagtighed var 0,95, 0,81, 0,86, 0,93 og 0,89, henholdsvis. Figur 3C-F viser eksempler på den immunhistokemiske evaluering i planocellulært karcinom, adenokarcinom og kontrol.

Diskussion

I den foreliggende undersøgelse, har vi analyseret 11 miR-SNPs i en serie af 175 resektion NSCLC patienter og korreleret vores resultater med TTR og OS. Vi fandt, at patienter med

KRT81

rs3660 CC genotype havde en kortere TTR end dem med CG eller GG genotype og at patienter med

XPO5

rs11077 AA genotype havde en kortere TTR end dem med AC eller CC genotype. Disse resultater også afholdt sandt i undergruppen af ​​patienter med stadium I sygdom. Desuden viste de multivariate analyser, at den

KRT81

rs3660 CC genotype og

XPO5

rs11077 AA genotypen var uafhængige prognostiske variabler for TTR. Den univariate analyse til OS viste en sammenhæng mellem overlevelse og

MIR423

rs6505162 genotype; men dette var ikke en uafhængig variabel i den multivariate analyse. Endvidere prognostiske værdi af

KRT81

rs3660 genotype var mere udtalt i pladecellecarcinom, hvilket indikerer, at KRT81 kan være en hidtil ukendt immunhistokemisk markør for carcinom i lungen.

Adskillige miR- SNP’er er kendt for at påvirke lungekræft modtagelighed og overlevelse. En SNP i før-MIR-196a2 rs11614913 blev først forbundet med overlevelse i NSCLC-patienter [23] og blev senere forbundet med en højere risiko for at udvikle lungekræft i Kinesisk [27] og koreanske [28] populationer. En SNP i før-miRNA flankerende region

miR-30c-1

rs928508 er blevet relateret til overlevelse i NSCLC, med en større effekt i fase I og II sygdom [29]. En miRNA målområdet SNP i

KRAS

gen var forbundet med en højere risiko for at udvikle NSCLC blandt moderate rygere [22]. For nylig, en SNP haplotype i miRNA biogenese genet

RNASEN

var forbundet med kortere overlevelse i lungekræft [30], og en SNP i en anden biogenese-relaterede forbindelser,

AGO1

rs636832, var knyttet til en nedsat risiko for lungekræft [31]. Til dato er der imidlertid ingen relation mellem MIR-SNP’er og lungekræft tilbagefald efter operation er blevet rapporteret.

XPO5 er RAN-GTP-afhængigt protein, der transporterer pre-miRNA fra kernen til cytoplasmaet. For nylig blev der ingen sammenhæng fundet mellem

XPO5

rs11077 og risiko for lungekræft i en koreansk befolkning [31]. I modsætning hertil i den foreliggende undersøgelse har vi observeret en positiv sammenhæng mellem denne SNP og TTR i en europæisk population. Vi spekulere i, at en SNP i

XPO5

kunne ændre den normale funktion af proteinet til ekstrudering af pre-miRNA fra kernen og dermed ændre reguleringen af ​​flere miRNA i cellen.

Trin II og III NSCLC patienter rutinemæssigt behandles med adjuverende kemoterapi efter kirurgisk resektion, hvilket har forbedret overlevelse i flere randomiserede kliniske forsøg [3], [32], [33], [34]. Men der er mange højrisiko stadie I-patienter, der også kunne drage fordel af denne behandling, og det er blevet foreslået, at patienter med tumorer ≥4 cm kan udlede overlevelse gavn af adjuverende kemoterapi [35]. Biomarkører til præcist at identificere trin I patienter med en høj risiko for tilbagefald vil være et nyttigt redskab i forvaltningen af ​​disse patienter. Da effekten på recidiv observeret med de genetiske varianter i

KRT81

XPO5

blev opretholdt i undergruppen af ​​patienter med stadium I sygdom, foreslår vi, at disse SNPs er ideelle kandidater til yderligere undersøgelse med henblik på at individualiserende behandling i disse patienter

det er vigtigt, tumor tilbagefald var påvirket af SNP placeret i 3’UTR af

KRT81

, bindingsstedet af flere miRNA:. miR-17, miR-93, miR-20b, miR-519d, miR-520 g, miR-520H, miR-519c-3p, miR-519b-3p, miR-519a og miR-765. Nogle af disse miRNA har tidligere vist sig at ændres i NSCLC [11], og tilstedeværelsen af ​​SNP påvirker seed-sekvensen bindingssted af disse miRNA, som vist i figur S4.The allel hyppigheden af ​​denne SNP er anderledes i human kræftformer end i den normale befolkning [36].

KRT81

koder for KRT81 protein, også kendt som Hb-1, en type hår keratin, der er fysiologisk udtrykkes i hår skakter. Keratiner er proteiner udtrykt i alle typer af epitelceller [37], med forskellige ekspressionsmønstre mellem forskellige carcinomer [38], og de er udbredt anvendt som diagnostiske markører. De udgør de mellemliggende filamenter af epitelceller, der er involveret i vedligeholdelse af cellens integritet og modstandsdygtighed over for mekaniske og ikke-mekaniske stressfaktorer [39]. Keratiner er ikke kun relateret til reguleringen af ​​cellulære funktioner som motilitet og vækst, men også til proteinsyntese, apico-basal polarisering og intracellulær signalering, og de er blevet beskrevet som prognostiske markører i epiteliale tumorer [40]. Brystcarcinomer ektopisk udtrykker KRT81 [41], og i den foreliggende undersøgelse har vi observeret KRT81 ekspression i lunge tumorvæv ved immunhistokemi. Til dato,

KRT81

er ikke valideret som prognostisk markør, og den nuværende undersøgelse er den første til at knytte en

KRT81

variant tumor tilbagefald.

Desuden vi har fundet, at KRT81 vel kan være en ny immunhistokemisk markør af pladecellecarcinom. KRT81 viste en klar positiv farvning i planocellulært karcinom (95% positive), mens 81% af adenokarcinomer var negative. Interessant nok i undergruppen analyser af TTR efter histologisk undertype, effekten af ​​

KRT81

rs3660 genotypen på tilbagefald var mere udtalt hos patienter med planocellulært karcinom. Det faktum, at en række nye målrettede agenter er activespecifically i adenocarcinom og andre bør ikke anvendes i pladecellekræft på grund af potentielle komplikationer understreger behovet for yderligere at klassificere NSCLC som skællede eller ikke-planocellulært karcinom. I denne indstilling, kunne KRT81 være en nyttig roman markør for differentialdiagnose af NSCLC; som sådan, kan det tilføjes til panelet af immunhistokemiske markører i øjeblikket anvendes, såsom TTF1 og P63 [42], [43].

Den voksende beviser på forbindelser mellem miRNA og kræft gør analysen af ​​SNPs i miRNA gener en potentiel central teknik til udvælgelse af patienter til risiko lagdeling. Trods visse begrænsninger – herunder manglen på uafhængige eller funktionel validering og det relativt begrænsede antal SNPs – den nuværende undersøgelse er den første til at observere miR-SNP-relaterede differentielle mønstre af tumor tilbagefald i kirurgisk behandlet NSCLC patienter. Vores resultater viser, at SNPs i

KRT81

XPO5

kunne vise sig at være nyttige biomarkører for individualiserende behandling i NSCLC patienter og at KRT81 kan være en roman immunhistokemisk markør for planocellulært karcinom, hvilket giver en ny diagnostisk værktøj, der skal bruges i terapeutisk beslutningstagning.

Støtte Information

Figur S1.

TTR ifølge

KRT81

rs3660 genotype

doi:. 10,1371 /journal.pone.0022509.s001

(TIF)

Figur S2.

TTR ifølge

XPO5

rs11077 genotype

doi:. 10,1371 /journal.pone.0022509.s002

(TIF)

Figur S3.

OS ifølge

MIR423

rs6505162 genotype

doi:. 10,1371 /journal.pone.0022509.s003

(TIF)

Figur S4.

Predicted bevarede miRNA rettet KRT81. SNP rs3660, som ligger i 3’UTR-regionen i

KRT81

, påvirker bindingen af ​​disse miRNA

doi:. 10,1371 /journal.pone.0022509.s004

(PPTX)

Table S1.

immunfarvning af KRT81 i de 80 analyserede sager

doi:. 10,1371 /journal.pone.0022509.s005

(DOC)

Tak

Vi takker Dolors Fuster ( University of Barcelona) for teknisk hjælp og Renee O’Brate for hendes bistand skriftligt papiret.