enzym assay

Spørgsmål

————————-

opfølgning til

Spørgsmål –

hvad er de metoder til analyse SGOT, SGPT og alkalisk fosfatase

svar –

hvad mener du med principper som indikation, metoder, sammensætning eller noget andet angiv at svare korrekt dit spørgsmål

tak

svar

Der er to almindelige metoder til bestemmelse af aktiviteten af ​​et enzym. Et stop tid

assay og en real-time analyse. Et stop tid assay er bare, at starte reaktionen og stoppe eller læs

resultater på et givet tidspunkt. Dette er den nemmeste måde at gøre mange analyser på én gang, men der er to

ting, der skal overvejes, før du gør denne form for analysen. Første er assayet lineært. I

andre ord, i den tid, jeg kører analysen, er det produkt, der produceres (eller substrat

konverterede) ved en lineær hastighed. Hvis betingelserne i analysen røret er således, at reaktanter

(substrat) er udtømte, eller produkterne hæmme enzymet, så kan du ikke bruge denne analyse.

Andet, er forbindelsen du måler stabil nok til at vente med at læse og er de anvendte betingelser

at stoppe enzymet, dvs. syre eller base for barsk at bevare strukturen af ​​udlæsningen? Vi vil

gøre realtid analyser. Betydning ændringen i absorbans (også kendt som optisk tæthed? OD) vs. tid.

Fra denne graf (gøres på spektrofotometer) vil du vælge en region, der er rimeligt lineære og

bestemme DOD /min og derefter konvertere den til enheder enzymaktivitet pr ml. Vejviser alkaliske fosfataser er en gruppe af isoenzymer med en fælles evne til at hydrolysere organiske fosfatase esterbindinger i et alkalisk medium, generering af et organisk radikal og en uorganisk phosphat. Deres biologiske funktion er ukendt. Alkalisk phosphatase i serum kommer normalt fra leveren og knogle og, under graviditet, fra placenta. Det er også til stede i nogle tumorer (f.eks bronkogent carcinom). Knoglevækst hos børn forårsager en aldersafhængig stigning i normale værdier, især hos spædbørn af 2 yr. Derefter alkalisk fosfatase aktivitet falder, når normale voksne niveau efter en slutspurt under adolescent vækst. Den er let øget hos ældre mennesker. Under graviditet, serum stiger to til fire gange den 9. mo og derefter vende tilbage til normal ved 21 dage efter fødslen.

Alkaline phosphatase stiger markant i sygdomme, der forringer galde dannelse (kolestase) og i mindre grad i hepatocellulær sygdom. Værdier i kolestase, uanset om intrahepatiske årsager (primær biliær cirrhose, lægemiddel-induceret leversygdom, lever transplantation afvisning) eller graft-versus-host (GVH) sygdom, blive tilsvarende forhøjet, og mindre skelnes fra ekstrahepatiske årsager (kanal obstruktion fra striktur , sten, eller tumor), alle stiger nogle firedoblet. I hepatocellulær sygdom (fx forskellige former for hepatitis, skrumpelever, infiltrative lidelser), niveauer tendens til at være lavere med en vis overlapning. Isolerede forhøjelser (andre levertal er normale) forekommer i granulomatøs eller fokal leversygdom (f.eks byld, neoplastisk infiltration, eller delvis galdegang obstruktion). I nogle ekstrahepatiske maligniteter uden levermetastaser, årsagen er uklar: bronchogent karcinom kan producere sin egen alkalisk fosfatase; hypernephroma i 15% af tilfældene inducerer en ikke-specifik hepatitis som formodede oprindelse af enzymet elevation. For Hodgkins lymfom, årsagen til den isolerede alkalisk phosphatase elevation er ukendt. Generelt en isoleret alkalisk fosfatase elevation fundet i en ellers asymptomatisk voksen, især hvis ældre, er ikke værd at undersøge.

fotos Teknikker hjælp varmeinaktivering eller elektroforese kan skelne knogle vs. lever oprindelsesbetegnelser for alkalisk fosfatase, men ved hjælp af en anden serum enzym giver en enklere diskrimination: 5′-nukleotidase er en gruppe af fosfataser, der adskiller sig biokemisk fra alkalisk fosfatase; de katalyserer hydrolysen af ​​nukleotider (fx adenosin-5′-phosphat) for at frigøre det uorganiske phosphat fra “position 5 og er begrænset til plasmamembranerne i leveren celle. Dette enzym øges i hepatobiliære, men ikke knogle, sygdomme. I praksis er det nyttigt at vurdere anicteric patient. Værdier er lave i barndommen, stiger gradvist i løbet af ungdomsårene, og plateau efter alder 50 år. 5′-nukleotidase normalt forhøjet i nogle kvinder i det sidste trimester af graviditeten. På grund af sin specificitet for leversygdom, 5′-nukleotidase tilbyder nogle fordele i forhold alkalisk phosphatase, men hverken kan differentiere obstruktiv fra hepatocellulær sygdom. De kan eller ikke kan stige og falde i parallel.

gamma-glutamyltransferase (eller gamma-glutamyltransferase –GGT) er et enzym (til stede i leveren, bugspytkirtlen og nyre), der overfører gamma-glutamyl-gruppen fra ét peptid til et andet peptid eller til en L-aminosyre. Niveauer af GGT er forhøjede i hepatobiliære og pancreas sygdomme, der hindrer den fælles kanal, men er normale i graviditet og knoglesygdom. GGT niveauer parallelt dem af alkalisk fosfatase og 5′-nukleotidase i cholestatisk forhold. Fordi det ikke er fysiologisk forhøjet i graviditet eller barndom, GGT har en rolle her i forbindelse med afsløring hepatobiliære sygdom. Narkotika og alkohol indtagelse, som inducerer mikrosomale enzymer, også ophøje GGT; alene, det er en dårlig markør for alkoholisk leversygdom. Kombineret med transaminaser, påvisning af alkoholmisbrug bliver mere sikker. Den ekstreme følsomhed (større end alkalisk phosphatase) af dette enzym begrænser dets anvendelighed, men testen erstatter 5′-nukleotidase til påvisning hepatobiliære sygdom som årsag til en isoleret stigning i alkalisk phosphatase.

transaminaser: aspartattransaminase (AST –formerly SGOT) er til stede i hjertet, skeletmuskulatur, hjerne, og nyre samt leveren. AST niveauer også stige i MI, hjertesvigt, muskelskader, CNS sygdom, og andre nonhepatic lidelser. Trods en vis nonspecificity, høje niveauer indikerer levercellebeskadigelse. Værdier på 500 IU /L ( 400 u./mL) tyder akut viral eller toksisk hepatitis. Sådanne høje værdier forekommer også i markant hjertesvigt (iskæmisk leverbetændelse) og endda med fælles kanal sten. Størrelsen af ​​højden har nogen prognostisk værdi og ikke korrelerer med graden af ​​leverskade. AST er pålidelig og en del af rutinemæssig screening for leversygdom. Seriel test giver god overvågning: Et fald til normal indikerer inddrivelse i forbindelse med de endelige stadier af massiv hepatisk nekrose.

alaninaminotransferase (ALT –formerly SGPT) findes primært i leverceller og har derfor større specificitet for leversygdom, men det giver lidt andre fordele. I de fleste leversygdomme, AST stigning er mindre end den af ​​ALAT (AST /ALT-forhold 1), undtagen i alkoholrelaterede leverskade hvor forholdet ofte er 2. (Grundlaget for dette er større behov for pyridoxal 5′-phosphat som en cofaktor for ALT, denne cofaktor er mangelfuld i alkoholikeren, begrænse stigningen af ​​ALT.) Mange undtagelser begrænser den praktiske gennemførlighed af forholdet. Men et forhold 3 med en uforholdsmæssig stigning i GGT ( 2 gange den alkaliske fosfatase) er meget tankevækkende.

Mælkesyre dehydrogenase: LDH, almindeligvis indgår i automatiseret analyse, er ufølsom som en indikator for hepatocellulær skade, men er bedre som en markør for hæmolyse eller MI. Det kan være ganske høj med malign sygdom og leveren.

Målingen af ​​fosfataseaktivitet er baseret på arbejdet i Brandenberger og Hanson (1953) og Hofstee (1954). Den katalytiske effekt af enzymet på den oprindelige sats for hydrolyse af o-carboxyphenyl phosphat bestemmes. Salicylsyre, i modsætning phosphatesteren, absorberer lys maksimalt ved ca. 300 nm; dermed hydrolysehastigheden kan bestemmes ved forøgelsen i absorbans. En enhed hydrolyserer et mikromol af o-carboxyphenyl fosfat pr minut ved 25 癈 og pH 8,8 under de specificerede betingelser.

Reagenser

0,1 M Tris⋅HCl, pH 8,5

0,2 M Glycine , pH 8,8

0,05 M Magnesiumchlorid

3,65 mM o-carboxyphenyl phosphat (OCPP)

Enzyme

opløses på en mg /ml i 0,1 M Tris-HCI, pH 8,5 (stamopløsning ). Der kan kræves en yderligere fortynding efter aktivering.

Procedure

Aktiver enzymet ved inkubation af mg /ml opløsning i 20-30 minutter i et 25 癈 vandbad.

Juster spektrofotometer til 300 nm og 25 癈

Tilsæt til hvert kuvette som følger:.

0,2 M glycin, pH 8,8 2,0 ml

3,65 mM OCPP 1,0 ml

0,05 M MgCl2 0,5 ml

Inkubér i spektrofotometer ved 25 癈 til 3-4 minutter at nå temperatur ligevægt og etablere blank sats, hvis nogen. Tilføj 0,1 ml stamopløsning og rekordstigning A300 /minut fra indledende lineære del af kurven.

Beregning

Vejviser

Danil Hammoudi.MD

https://sinoemedicalassociation.com

medicinske oplysninger for alle

Dette er til uddannelsesmæssige formål. Det er ikke beregnet til at erstatte konsultation og undersøgelse af din

læge eller andet sundhedspersonale udbyder