PLoS ONE: Skift i FOXA1 status Associates med endometriecancer Progression

Abstrakt

Baggrund

transskription faktor Forkhead box A1 (FOXA1) foreslås at være vigtig i hormonafhængige kræftformer, selv med få data for endometriecancer. Vi undersøgte ekspressionsniveauer for FOXA1 i primær og metastatisk endometriecancer i relation til klinisk fænotype, og transkriptionelle ændringer relateret til FOXA1 status.

Metoder

Protein udtryk for FOXA1 blev udforsket ved immunhistokemi i 529 primære og 199 metastatiske endometriske carcinoma læsioner. mRNA niveauer fra tilsvarende 158 friske frosne primær og 42 metastatiske læsioner blev analyseret ved hjælp af Agilent Microarrays (44k) parallelt.

Resultater

Lav FOXA1 proteinekspression i primære tumorer signifikant korreleret med lav FOXA1 mRNA, høj alder, ikke-endometrioide histologi, høj kvalitet, tab af ERa og PR og dårlig overlevelse (alle p-værdier 0,05). Gennem en Connectivity Kort søgning blev HDAC-hæmmere foreslået som potentiel behandling af patienter med lav FOXA1 udtryk. En stigning i FOXA1 ekspression blev observeret fra primær til metastatiske læsioner og det korreleret med CDKN2A udtryk i metastaser.

Konklusion

Lav FOXA1 er forbundet med dårlig overlevelse og foreslår et potentiale for HDAC-hæmmere i endometrie carcinom. En kontakt i FOXA1 udtryk fra primær til metastatiske læsioner observeres og genekspression indikerer en sammenhæng mellem FOXA1 og CDKN2A i metastatiske læsioner

Henvisning:. Tangen IL, Kråkstad C, Halle MK, Werner HMJ, Øyan AM, Kusonmano K, et al. (2014) Skift i FOXA1 status Associates med endometriecancer Progression. PLoS ONE 9 (5): e98069. doi: 10,1371 /journal.pone.0098069

Redaktør: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, USA

Modtaget: Januar 28, 2014 Accepteret: April 18, 2014; Udgivet: 21. maj 2014

Copyright: © 2014 Tangen et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af Helse Vest, universitetet i Bergen, Norges Kræftens Bekæmpelse og Norges Forskningsråd. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

i den vestlige verden endometriecancer er den mest almindelige gynækologiske malignitet, og forekomsten stiger [1]. Livmoderkræft er groft inddeles i to grupper. Type I endometriecancer er mest almindelige og er kendetegnet ved positivt resultat, endometrioide histologi, lav scene og kvalitet og ofte intakt udtryk for hormonreceptorer. Type II endometriecancer er forbundet med dårligt resultat, ikke-endometrioide histologi, høj scene og kvalitet, og har sædvanligvis tabt ekspression af hormonreceptorer [2]. Patienterne er som standard kirurgisk behandlet med hysterektomi med bilateral salpingoophorectomy med eller uden lymphadenectomy. Effekten af ​​adjuverende systemisk behandling er mindre undersøgt for endometrie forhold til kræft i æggestokkene, selv om det ligner platinbaseret kemoterapi i kombination med paclitaxel ofte anvendes i adjuverende og systemisk sygdom.

Østrogen afhængige livmoderkræft menes at opstå ved længerevarende enstemmigt udsættelse for østrogener. Østrogen afhængig aktivering af østrogenreceptoren α (ERa) er blevet rapporteret at føre til spredning gennem opregulering af vækstfaktorer, såsom epidermal vækstfaktor (EGF) [3], dens receptor EGFR [4], insulin-lignende vækstfaktor (IGF-1) [5] og vækstfremmende proto-onkogener såsom c-myc [6]. Regulering af ERa aktivitet er også kendt for at involvere flere cofaktorer herunder både coaktivatorer og corepressorer. Desuden pioneer faktor Forkhead box A1 (FOXA1) har vist sig at være en vigtig regulator af ERa aktivitet ved at lette binding af ERa [7].

FOXA1 er medlem af Forkhead Box transkriptionsfaktoren familie, tidligere kendt som hepatocyt Nuclear Factor (HNF) familie. FOXA1 proteiner binder DNA og fremkalde nukleosomal omlejring, der ofte resulterer i en åben kromatinstruktur [8], [9]. Dette letter bindingen af ​​yderligere transkriptionsfaktorer, herunder ERa [7]. er fundet FOXA1 at blive ansat til næsten halvdelen af ​​alle ER bindende regioner [7].

Sammenhængen mellem hormonreceptorer og kendte prognostiske variabler som FIGO stadie, histologiske kvalitet og overlevelse er veldokumenteret i endometrie karcinom [10] – [12]. Mere viden om molekylære mekanismer involveret i østrogen signalering og østrogen-relaterede cofaktorer i hormon relaterede kræftformer er nødvendig for at udvikle nye terapeutiske strategier. Adskillige undersøgelser har antydet en rolle for FOXA1 i forskellige hormonafhængige cancere [13]. Høj FOXA1 ekspression er korreleret med god prognose i ER positiv brystkræft, men i prostatacancer FOXA1 niveau er blevet forbundet med enten gode eller dårlige prognose afhængigt af patientens gruppe, og er blevet foreslået som en kontekst afhængig markør for overlevelse i hormonafhængige cancere [ ,,,0],14] – [17]

Desuden sammenhængen mellem FOXA1 og eR i brystkræft og FOXA1 og androgen receptor (AR) i prostatakræft tyder på, at ekspressionsniveauer af FOXA1 kan påvirke lydhørhed over for antihormonale behandling i hormon afhængige. cancere. På denne baggrund undersøgte vi ekspressionsniveauet af FOXA1 i endometriecancer i forhold til fænotype og etablerede biomarkører herunder hormonreceptor status; og efterfølgende undersøge transkriptionelle ændringer relateret til FOXA1 protein niveauer i primære og metastatiske endometrialcarcinom læsioner.

Materialer og metoder

Etik erklæring

Alle dele af undersøgelsen er blevet godkendt i henhold til norsk lovgivning. Undersøgelsen blev godkendt af det norske Datatilsynet, norske Samfundsvidenskab Data Services og regionalkontoret for Medical Research Ethics, REC West (NSD15501; REK 052.01). Alle deltagere gav skriftligt informeret samtykke.

Patient serie

En befolkning baseret patient serier, herunder 529 patienter diagnosticeret med endometriecancer i Hordaland County (Norge) i perioden 2001-2011 blev undersøgt . Væv fra primære tumorer blev inkluderet fremadrettet fra samtykke patienter kirurgisk iscenesat ifølge International Federation of Gynækologi og Obstetrik (FIGO) 2009 kriterier. De klinisk-patologiske variabler, alder ved diagnose, FIGO stadie, histologisk subtype og lønklasse, behandling og opfølgning blev indsamlet ved gennemgang af medicinske journaler som rapporteret tidligere [18]. For 91 patienter med fremskreden eller recidiverende sygdom, biopsier var tilgængelige fra metastatisk væv (i alt 199 FFPE læsioner). Frisk frosset væv (158 primær og 42 metastatiske læsioner) blev indsamlet og udarbejdet parallelt med formalin-fikserede paraffin indstøbt væv (FFPE) når de foreligger.

væv microarrays

Tissue microarrays (TMA’er) blev fremstillet ud fra FFPE væv fra primære tumorer og metastaser. Arealet af højeste tumorklassificering blev identificeret på hæmatoxylin og eosin farvede objektglas. Tre vævscylinderne fra primære tumorer og én væv cylinder fra metastaser (0,6 mm) blev udstanset fra udvalgte områder, og monteret i en recipient paraffinblok anvendelse af et skræddersyet præcisionsinstrument (Beecher instrumenter, Silver Spring, MD, USA). Denne fremgangsmåde til fremstilling TMA’erne er tidligere blevet beskrevet og valideret [19].

Immunhistokemi

Fem um tykke TMA snit blev afvokset med xylen og rehydratiseret i graduerede ethanol-serien. For FOXA1 påvisning, blev antigen-genvinding udføres ved mikrobølge kogning i 20 minutter i citratbuffer (pH 6). Endogen peroxidase og uspecifik binding af primært antistof blev blokeret med peroxidase blok (S2023, Dako, Danmark) og serum frit protein blok (X0909, Dako, Danmark). Objektglas blev inkuberet med anti-FOXA1 primære antistof (ab23738, Abcam, UK), fortyndet 1:800, i 30 minutter ved stuetemperatur. Sekundært antistof, kombineret anti-muse og anti-kanin (K5007, Dako, Danmark), blev påført i 30 minutter, efterfulgt af 8 minutter med diaminobenzidin (DAB +, K4007, Dako, Danmark), før modfarvning med hematoxylin. Immunhistokemisk farvning af ERa er tidligere blevet beskrevet for 477 primære tumorer og 78 metastaser. Yderligere 92 primære tumorer blev farvet ifølge fremgangsmåden tidligere rapporteret [12].

Evaluering af farvning

IHC-farvning blev evalueret under anvendelse af en semikvantitativ system, hvor både intensiteten af ​​farvning, og tumorområdet celler med positiv farvning blev overvejet. Farvningsintensitet blev gradueret fra 0 (ingen farvning) til 3 (stærk farvning). Andel af farvede tumorceller blev gradueret som 0, 1 ( 10%), 2 (10% til 50%) og 3 ( 50%). En farvning indeks blev beregnet som produktet af intensitet og farvning område. I den statistiske analyse blev farvning indekser for FOXA1 kategoriseret i tertiles overvejer frekvensfordelingen for markøren, størrelse undergrupper og antallet af hændelser i hver kategori. De to nederste tertiles, viser lignende overlevelse skøn, blev efterfølgende fusioneret. Cut-off værdi for ERa blev påført som tidligere defineret [12]. For at vurdere reproducerbarheden, to uafhængige observatører (ILT og CK) scorede tilfældige TMA lysbilleder, der giver κ-værdi på 0,80 for FOXA1 og 0,82 for ERa [12]. Ved vurdering heterogene flere metastatiske læsioner danner den samme patient, blev FOXA1 defineret som lav, hvis nogen af ​​de metastatiske læsioner demonstrerede lav udtryk.

microarray analyse

Frisk frosset væv fra 158 primære tumorer og 42 metastaser blev indsamlet parallelt med FFPE væv. Ekstraktion af RNA blev udført under anvendelse af RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland). RNA blev hybridiseret til Agilent Whole humane genom Microarrays 44k (kat. Nr. G4112F) i henhold til producentens anvisninger, og arrays blev scannet ved hjælp af Agilent Microarray Scanner Bundle. J-express software (Molmine, Bergen, Norge) blev anvendt til analyse af dataene. Median spot signal blev anvendt som intensitet foranstaltning og udtryk data blev normaliseret ved hjælp fraktil normalisering. Microarray data er blevet deponeret i ArrayExpress Archive databasen https://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/med tiltrædelse Number E-mtab-2532. Gener udtrykkes differentielt mellem grupperne blev identificeret ved SAM (Betydning Analyse af Microarray) analyse og blev betragtet som signifikante, hvis Falsk Discovery Rate (FDR) 0,01. Hvis antallet af prøver ikke tillade brug af SAM, FSS (Feature Subset Selection) blev anvendt analyse og P 0,01 blev betragtet som signifikant

Forbindelse Kort

Sammenhæng mellem genekspression og potentiale. terapi blev undersøgt ved hjælp af narkotika signatur database Connectivity kort [20]. Det stof signaturer i denne database genereres af gener udtrykkes differentielt i cellelinier behandles med lægemidler sammenlignet med ubehandlede cellelinier, og afspejler generne formodes at blive ændret af lægemidlet. Gener differentielt udtrykt ifølge FOXA1 status, både inden for hele patientpopulationen og inden for ERa negative gruppe blev grundlaget for analysen i Connectivity Kort.

Statistisk analyse

softwarepakke SPSS 19.0 (SPSS Inc, Chicago, IL) blev anvendt til statistiske analyser. Statistisk signifikans blev defineret som sandsynligheden 0,05. Association mellem grupperne blev evalueret ved hjælp af Pearson χ

2 test for kategoriske variable. Univariate overlevelse analyse blev udført ved hjælp af Kaplan-Meier (produkt-grænse) metoden med dato for primær kirurgi som indrejse dato og tid til dødsfald på grund af endometrie karcinom som endpoint (sygdomsspecifikke overlevelse). Patienter, der døde af andre årsager blev censureret på datoen for dødsfaldet. Log-rank test (Mantel-Cox), blev anvendt til at sammenligne overlevelse mellem grupperne. Cox proportional hazard regression model blev anvendt til at evaluere den prognostiske virkning af FOXA1 justeret for andre prognostiske markører i endometriecancer. På grund af et samspil mellem FIGO stadie og histologiske type, blev Cox analyse udført i endometrioide undertype.

Resultater

Lav FOXA1 udtryk er forbundet med dårlig prognose i endometriecancer

FOXA1 er tidligere blevet vist at være en pioner faktor for eR i brystcancer (fig S1). Vi undersøgte en stor og unik samling af endometriecancer prøver at belyse en mulig lignende rolle for FOXA1 i disse sygdomme. Protein udtryk for FOXA1 var primært nukleare. Proteinet ekspression blev set både i stromale og glandulær væv, men kun farvning i kerner af kirtelvæv blev scoret. Når man sammenligner FOXA1 status med tilgængelige klinisk-patologiske variabler, lav FOXA1 udtryk (score indeks fra 0-4) var signifikant korreleret med høj alder (P = 0,04), ikke-endometrioide histologi (P = 0,002), høj histologisk bedømmelse (P = 0,003) , tab af PR (P = 0,02) og ERa (P = 0,003) (tabel 1). Lav FOXA1 proteinekspression var signifikant forbundet med reduceret sygdomsspecifikke overlevelse (P = 0,004) (figur 1A) og lav FOXA1 mRNA-ekspression (P = 0,001) (figur 1B). For patienter med ERa- positive tumorer, fandt vi ingen effekt af FOXA1 (figur 2A) i modsætning til ERa negative gruppe, hvor lav FOXA1 udtryk var signifikant associeret med dårligere resultat (figur 2B). I en multivariat analyse, i endometrioide undergruppe, ved hjælp af Cox proportional hazard model med alderen, FIGO stadie, histologiske kvalitet, FOXA1 og ERa udtryk som variabler, blev FOXA1 udtryk sig at have prognostisk effekt svarende til lønklasse og ERa status, selv uden uafhængig prognostisk betydning (tabel S1).

(A) Kaplan-Meier kurve, der viser sygdomsspecifikke overlevelse efter FOXA1 proteinniveau. Lav FOXA1 ekspression er signifikant korreleret med reduceret overlevelse for patienter med endometrisk carcinoma. Venstre og højre indsats viser lav og høj nukleare udtryk for FOXA1 henholdsvis. (B) Lav protein udtryk for FOXA1 er signifikant korreleret med lav FOXA1 mRNA-ekspression.

(A) Lav FOXA1 udtryk blandt ERa- positive patienter ikke signifikant indflydelse overlevelse. (B) Blandt ERa negative patienter FOXA1 udtryk væsentligt påvirket overlevelse med værste prognose for patienter med lav FOXA1.

Genekspression relateret til FOXA1 og ERa udtryk ikke overlapper

som for brystcancer, har ERa tab fast forbundet med dårlig overlevelse hos patienter med endometriecancer [2], [11], [12]. Som FOXA1 er vist at være vigtigt for ERa-kromatin interaktioner i brystcancer, vi yderligere undersøgt, om FOXA1 relateret genekspression ligner ERa reguleret genekspression i endometriecancer. SAM-analyse identificeret 468 gener udtrykkes differentielt i tumorer med intakt ERa ekspression sammenlignet med tab, mens 506 gener differentielt blev udtrykt i tumorer med høj FOXA1 ekspression sammenlignet med lav. Kun tre overlappende gener blev identificeret i ERa og FOXA1 relaterede gen lister (Tabel S2 og S3).

HDAC-hæmmere er foreslået som potentielle lægemidler til behandling af livmoderkræft med lav FOXA1

Genes forskelligt udtrykt i relation til FOXA1 status blev brugt til at forespørge Connectivity Kort for forbindelser med potentiale til at vende tilbage genet undertegnelse af patienter med lav FOXA1 status. To HDAC-hæmmere kom op blandt de øverste fem klassificeret forbindelser (tabel 2). Disse to HDAC-hæmmere var også de to højest rangerede anticorrelated forbindelser til lav FOXA1 udtryk i ERa negative patient undergruppe (tabel 2) (tabel S4).

metastatisk spredning er forbundet med et skift i FOXA1 udtryk

metastaselæsioner fra 91 patienter blev farvet for FOXA1 udtryk for at undersøge FOXA1 status i metastatiske læsioner. Når man definerer FOXA1 så lav, hvis nogen af ​​de metastatiske læsioner viste lav udtryk, blev ingen signifikant ændring i udtrykket set mellem hele befolkningen af ​​primære tumorer og metastatiske læsioner (figur 3A). Overraskende, når man sammenligner FOXA1 niveauer for primære tumorer fra patienter med systemisk sygdom med deres metastatiske læsioner modstykker, ekspression af FOXA1 viste sig at være signifikant højere i de metastatiske læsioner sammenlignet med det tilsvarende primære læsion. Dette var også tilfældet, når alle metastatiske læsioner, uafhængigt af antallet af metastaser per patient, blev undersøgt (figur 3B). Vi har tidligere fundet, at der er et betydeligt tab af ekspressionen af ​​ERa fra primær til metastatiske læsioner [12]. Når man sammenligner FOXA1 og ERa udtryk i metastatisk læsion ingen sammenhæng mellem ekspressionsniveauerne blev fundet (r

2 = 0,012) (figur 3C). Det samme blev observeret, når man sammenligner FOXA1 niveauer i metastaser fra kun ERa positive primære endometrie tumorer (r

2 = 0,11) (Figur 3D).

(A) FOXA1 udtryk bevares fra primære tumorer til metastaser, mens ekspressionen forøges væsentligt fra parrede primære tumorer til deres tilsvarende metastaser. FOXA1 defineres som lav, hvis nogen af ​​de metastatiske læsioner fra de enkelte sager udforskede (n = 78) viste lav udtryk. (B) Ser man på alle metastaser (n = 199) er der en betydelig stigning i udtryk fra primære til metastatiske læsioner. Numre angiver antallet af undersøgte med antallet af sager med høj ekspression i parentes tilfælde. (C) Der er ingen sammenhæng mellem FOXA1 og ERa udtryk i metastaser og sammenhængen mellem FOXA1 og ERa udtryk i metastaser kun fra ERa- positive primære tumorer er lav (D).

FOXA1 og CDKN2A niveauer er forbundet i metastatiske læsioner

for at undersøge forskelle i transkriptionelle virkninger relateret til FOXA1 niveauer i primære og metastatiske læsioner vi yderligere udforskes gener udtrykkes forskelligt i henhold til FOXA1 status i primære tumorer i forhold til metastaser (tabel S3 og S5). Overlappet mellem generne differentielt udtrykte var lav (kun 26 gener). Interessant, en af ​​de højest rangerede gener udtrykkes forskelligt i henhold til FOXA1 proteinekspression i metastatiske læsioner var CDKN2A. FOXA1 blev for nylig vist at styre CDKN2A ekspression [21]. For at undersøge om denne forening var begrænset til det metastatiske indstilling, undersøgte vi en potentiel sammenhæng mellem FOXA1 og CDKN2A også i primære tumorer (figur 4). En signifikant sammenhæng mellem FOXA1 og CDKN2A blev kun observeret i metastatiske læsioner.

Protein udtryk for FOXA1 er signifikant associeret med CDKN2A mRNA-ekspression i metastaser, men ikke i primære tumorer.

Diskussion

FOXA1 er blevet anerkendt som en vigtig transkriptionsfaktor, som modulerer funktionen af ​​steroid receptorer, såsom østrogenreceptor i brystkræft og AR i prostatacancer. FOXA1 som prognostisk markør i brystcancer er blevet grundigt undersøgt [14], [22], og høj ekspression af FOXA1 er korreleret med bedre sygdomsspecifikke overlevelse, ERa positivitet og den luminale subtype A. I prostatacancer høj ekspression af FOXA1 forudsiger dårlig prognose og korrelerer med AR positivitet [15]. Også den nylige offentliggørelse af The Cancer Genome Atlas (TCGA) Research Network viste lav ER /FOXA1 signalering at være forbundet med dårlig overlevelse i endometriecancer [23]. Vores resultater at lave FOXA1 udtryk er signifikant associeret med markører for dårligere resultat samt dårlig overlevelse synes at være i overensstemmelse med de TCGA data og resultater i brystkræft, men i modsætning til prostatakræft og en tidligere lille, og potentielt underdimensioneret undersøgelse af 109 endometrialcarcinom sager viser ingen signifikant prognostisk effekt af FOXA1 udtryk [24].

i brystkræftceller FOXA1 har vist sig at være nødvendigt for østrogen respons [7]. Svarende til brystcancer, endometriecancer er en østrogen afhængig cancer og type 1 endometriecancer er associeret med ekspression af ERa. ERa- positive patienter har en signifikant bedre overlevelse end patienter med ERa tab og ERa er en stærk prognostisk markør i endometriecancer [2]. Studier i brystkræft har vist, at ERa- positive patienter med høj ekspression af FOXA1 har en væsentlig bedre overlevelse end patienter med lav udtryk for FOXA1 [14], [25]. Vi kunne ikke finde en lignende stærk overlevelse effekt for FOXA1 i ERa positive gruppe, men kun inden for ERa negative gruppe patienter. Hvis den reducerede overlevelse observeret for FOXA1 negative gruppe kun var på grund af tab af ERa ville ikke have forventet en signifikant sammenhæng mellem FOXA1 og overlevelse i ERa negative gruppe. Dette kunne indikere, at FOXA1 i endometriecancer kan have en funktion, som ikke er knyttet til ERa, og effekten af ​​FOXA1 kunne være organ specifikke. FOXA1 er tidligere blevet vist at regulere særskilte transkriptionelle programmer i celler fra forskellige linages [26], og den kliniske erfaring med forøget endometriecancer risiko blandt kvinder med ERa- positive brystcancere behandlet med Tamoxifen understøtter også organspecifikke forskelle i hormon regulering. Endvidere støtter dette, har genekspression relateret til FOXA1 niveauer ikke overlappe udtryk mønster relateret til ERa. Hvis FOXA1 er vigtig for regulering ERa aktivitet i endometriecancer, som det ses i brystcancer, ville en overlapning mellem de differentielt udtrykte gener forventes. Derudover vores data tyder HDAC-hæmmere som potentiel behandling af patienter med lav FOXA1 udtryk, både inden for hele patientpopulationen og inden for ERa negative gruppe. Dette er interessant, da PI3K og mTOR inhibitorer for nylig blevet foreslået som lovende lægemidler til patienter med ERa- negative tumorer især [11]. Den foreliggende fund tyder på, FOXA1 involvering i ERa regulering kan være anderledes i endometriecancer forhold til hvad der er fundet i brystcancer. Dette synes at være i overensstemmelse med en endometriecancer cellelinje undersøgelse viser, at indførelsen af ​​FOXA1 undertrykker både proliferation og migration [24] i modsætning til ERa som fører til spredning. har også vist sig rollen som FOXA1 som en pioneer faktor for ERa at afvige i forskellige cancer celletyper. Rekruttering til kromatin blev vist at være afhængig af FOXA1 i brystcancerceller, men i en osteoblast cellelinie (U2OS-ERa) FOXA1 udtrykkes ikke, og ERa binding er uafhængig af FOXA1 [27]. I endometriecancer, FOXA1 er vigtig for inhibering af celleproliferation og migration [24], og i prostatacancer-cellelinier FOXA1 blev for nylig vist at inhibere cellemotilitet og epitelial til mesenkymale overgang (EMT) gennem regulering af transkriptionsfaktoren SLUG [17] . Der vides kun lidt om bindingpartners for FOXA1 i endometriecancer, og mere arbejde er nødvendigt for at belyse dette.

Vores konstateringen af, at FOXA1 proteinekspression stigning fra primære tumorer til metastaser, kan fremstå som selvmodsigende at vores fund, at høj FOXA1 associerede med godt resultat hos patienter med endometriecancer. ERa udtryk tab er blevet rapporteret at stige fra primær til metastatiske endometrialcarcinom læsioner [12]. Den lave korrelation mellem ERa og FOXA1 ekspression i metastatiske læsioner, tyder på, at FOXA1 er mindre kritisk for ERa funktion i endometriecancer sammenlignet med hvad der er blevet observeret for brystcancer [28]. I begge prostata- og brystcancere blev fundet høj ekspression af FOXA1 i metastatiske læsioner, men med bibeholdt ekspression af AR og ERa henholdsvis [28], [29]. Tilsammen har dette tyder på, at den rolle, som pioner faktorer i regulering af nukleare receptorer i hormonafhængige kræftformer er væv relateret. I brystkræft synes vigtigt for ER medieret transskription FOXA1, og lyddæmpning af FOXA1 fører til hæmning af ER bindende og transkriptionel aktivitet [30]. I prostata er fundet kræft FOXA1 at være en pioner faktor for AR for nogle bindende begivenheder, men også en repressor. Ændring i FOXA1 udtryk i prostatakræft synes derfor at føre til omprogrammering af AR bindende hændelser [15].

Den højere udtryk for FOXA1 i metastaser i forhold til deres primære tumor modparter, og sammenhængen mellem protein udtryk for FOXA1 og CDKN2A mRNA kun i metastatiske læsioner, kan indikere en ændring i rollen som FOXA1 under endometriecancer progression. Metastaser med høj ekspression af FOXA1 har også høj ekspression af CDKN2A. CDKN2A er kendt for at indkode flere forskellige proteiner, herunder p16

INK4a, p15

INK4B og P14

ARF. Interessant FOXA1 blev for nylig vist, at kontrollere p16

INK4a udtryk under cellulær aldring [21]. Hvilket protein kodet af CDKN2A der udtrykkes i metastaser er dog ukendt og skal undersøges nærmere.

FOXA1 synes at have væv specifikke roller, der også kan ændre sig i løbet af endometriecancer progression. Desuden er det sandsynligt, at andre ukendte faktorer end FOXA1 er påkrævet for regulering af ERa funktion i endometriecancer. Identificering flere af disse vil forbedre vores forståelse af vævsspecifik hormon receptor signalering og vil være relevant, når der udvikles målrettede lægemidler i ERa relaterede ondartet sygdom, herunder endometriecancer. Således kan FOXA1 tilføje klinisk relevante oplysninger som biomarkør i livmoderkræft og peger på en rolle for HDAC-hæmmere til behandling.

Støtte Information

Figur S1.

Skematisk illustration af faktorer involveret i reguleringen af ​​ER medieret transskription (E2: estradiol).

doi: 10,1371 /journal.pone.0098069.s001

(TIF)

tabel S1.

Cox analyse af indikatorer for endometriecancer specifik overlevelse:. effekter af FIGO stadie, alder, histologiske klasse, FOXA1 og ERa udtryk i endometrioide undergruppe

doi: 10,1371 /journal.pone.0098069.s002

( DOCX)

tabel S2.

SAM analyse af ER positive versus ER negative sager (FDR 0,01)

doi:. 10,1371 /journal.pone.0098069.s003

(XLSX)

tabel S3.

SAM-analyse af FOXA1 høj versus FOXA1 lave sager (FDR 0,01)

doi: 10,1371 /journal.pone.0098069.s004

(XLSX)

Tabel S4..

FSS analyse af FOXA1 høj versus FOXA1 lave sager i ER negative prøver (p-værdi 0,01)

doi:. 10,1371 /journal.pone.0098069.s005

(XLSX)

tabel S5.

FSS analyse af FOXA1 høj versus FOXA1 lave sager i metastaser (p-value 0.01).

doi:10.1371/journal.pone.0098069.s006

(XLSX)

Acknowledgments

We tak Ellen Valen, Britt Edvardsen, Kadri Madissoo, Tormund S Njølstad, Gerd Lillian Hallseth, Bendik Nordanger og Hua Min Hoang til teknisk bistand.