PLoS ONE: høj ekspression af HUR i Cytoplasma, men ikke Nuclei, er forbundet med malignt Aggressivitet og Prognose i Blære Cancer

Abstrakt

Introduktion

Menneskelig antigen R (HUR) regulerer stabilitet af mRNA og er forbundet med celleproliferation, angiogenese, og lymfangiogenese. Men den kliniske betydning og patologisk rolle HUR i blærekræft er fortsat uklart. Hovedformålet med denne undersøgelse var at klarlægge forholdet mellem HUR udtryk og kliniske betydning og kræft celleproliferation, angiogenese, lymfangiogenese, og udtryk for cyclooxygenase (COX) -2 og vaskulær endotel vækstfaktor (VEGF) -A, -C, og -D.

Metoder

Alle udtryk blev undersøgt ved immunohistokemiske teknikker i 122 formalinfikserede eksemplarer af patienter blærekræft. HUR udtryk blev evalueret separat med cytoplasmatisk og nuklear farvning. Celleproliferation blev angiogenese og lymfangiogenese målt som procentdelen af ​​Ki-67-positive celle (proliferationsindeks, PI), CD34-farvede skibe (mikrokardensitet densitet, MVD), og D2-40-farvede skibe (lymfekar densitet, LVD) . Forhold mellem hver Hur ekspression og klinisk-patologiske træk, prognose, og udtryk for COX-2 og VEGF’erne blev analyseret ved multi-variate analyser. Hur ekspression blev også undersøgt i 10 mus af N-butyl-N- [4-hydroxybutil] nitrosamin (BBN) inducerede blærekræft model.

Resultater Salg

I humane væv, høj cytoplasmatisk ekspression var set i 5% og 25,4% af normale celler og cancerceller, hhv. Nuclear HUR udtryk ikke havde nogen signifikant sammenhæng til eventuelle patologiske funktioner. Men syntes cytoplasmatisk HUR udtryk positivt associeret med pT scene og bedømmelse (

P

0,001). I mus væv, blev lignende tendenser bekræftet. Cytoplasmisk ekspression korrelerede med PI, MVD, og ​​LVD, samt ekspression af VEGF-A og -C, men ikke VEGF-D. Høj cytoplasmatisk udtryk for HUR var en signifikant prædiktor for metastaser og forårsage-specifikke overlevelse, og blev identificeret som en prognostisk korrelativ faktor for metastaser (hazard ratio, 4.75; P = 0,028). I en multivariat analyse model, der omfattede patologiske træk

konklusioner

Cytoplasmatisk HUR synes at spille en vigtig rolle i celleproliferation, progression og overlevelse af patienter blærekræft. Dets ekspression var forbundet med angiogenese, lymfangiogenese, og udtryk for VEGF-A og -C

Henvisning:. Miyata Y, Watanabe S-i, Sagara Y, Mitsunari K, Matsuo T, Ohba K, et al. (2013) høj ekspression af HUR i Cytoplasma, men ikke Nuclei, er forbundet med malignt Aggressivitet og Prognose i blærekræft. PLoS ONE 8 (3): e59095. doi: 10,1371 /journal.pone.0059095

Redaktør: Kaustubh Datta, University of Nebraska Medical Center, USA

Modtaget: 11. juli, 2012; Accepteret: 11 Feb 2013; Udgivet: 13 marts, 2013 |

Copyright: © 2013 Miyata et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne forskning blev delvist understøttet af en Grant-in-Aid fra Japan Society for fremme af Science (nr 22.591.771). Men der finansierer havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet. Ingen yderligere ekstern finansiering blev modtaget til denne undersøgelse

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Regulering af mRNA henfald er en vigtig mekanisme. til styring af genekspression. Styringen af ​​mRNA-stabilitet afhænger sekvenser i selve transkriptet og RNA-bindende proteiner, der dynamisk binder til disse sekvenser. Humane antigen R (Hur) er et medlem af det embryoniske-dødbringende, unormalt syn (ELAV) -lignende protein familie af RNA-bindende proteiner, og er rapporteret at være et multifunktionelt protein, der har været impliceret i reguleringen af ​​forskellige aspekter af RNA metabolisme. Det er, Hur er involveret i post-transkriptionel regulering af omsætningen og stabiliteten af ​​RNA [1].

Hur er også rapporteret at regulere celleproliferation og tumorassocieret inflammation [2], [3]. Desuden har Hur vist sig at være involveret i reguleringen af ​​angiogenese ved at interagere med transkripter af talrige angiogenese-fremmende faktorer, og er også kendt at korrelere med lymfangiogenese i en række forskellige patologiske tilstande, herunder cancer [3], [4 ]. Baseret på disse kendsgerninger er det blevet foreslået, at HUR spiller en vigtig rolle i carcinogenese, tumorvækst, metastase, og prognose i maligniteter. Faktisk har flere rapporter beskrevet HUR udtryk viser positive associationer med malignt aggressivitet og tjener som en prognostisk faktor for dårlig klinisk resultat i forskellige kræftformer [5] – [7]. På den anden side, har markant forskellige resultater er rapporteret hos patienter med brystkræft [8]. De patologiske roller og prognostisk værdi HUR udtryk hos kræftpatienter således fortsat omstridt, og den kliniske betydning og prædiktiv værdi for prognosen hos patienter med blærekræft er endnu ikke afklaret.

Som mekanismer for disse patologiske aktiviteter, vaskulær endotelvækstfaktorer (VEGF’erne) og cyclooxygenase (COX) -2 er de mest kendte HUR-associerede faktorer [5], [7], [9] – [11]. Disse proteiner er også blevet rapporteret at være associeret med malign aggressivitet og prognosen hos patienter med blærecancer [12], [13]. Imidlertid blevet akkumuleret lidt information om forholdet mellem Hur ekspression, VEGF-A, -C, og -D, og ​​COX-2 i humane blærekræft væv.

Den intracellulære placering af Hur er blevet rapporteret at være overvejende nukleare i mange typer af cancerceller [14], [15]. Men HUR pendulfart fra kernen til cytoplasmaet som reaktion på forskellige stimuli, forlænger mRNA halveringstid og lette effektiv oversættelse af proteiner [15]. I betragtning af disse kendsgerninger, er undersøgelsen af, de kliniske, patologiske, og prognostiske roller nukleare og cytoplasmatisk udtryk for HUR berettiget.

Det vigtigste formål med denne undersøgelse var at afklare patologisk betydning og prognostisk værdi af nuklear og cytoplasmatisk Hur ekspression i patienter med blærecancer. For at bekræfte den patologiske betydning af HUR under en given væv mikromiljø, blev kemisk induceret blærekræft musemodel anvendes til yderligere eksperimenter. Desuden relationer mellem disse Hur udtryk, angiogenese og lymfangiogenese, og VEGF-A, -C, -D, og ​​COX-2 udtryk blev også undersøgt i patienter med blærecancer.

Materialer og metoder

Etik Godkendelse

undersøgelsen blev udført i overensstemmelse med Helsinki II-erklæringen, og det blev godkendt af den etiske Review Committee for Nagasaki Universitetshospital, Nagasaki, Japan.

skriftligt informeret samtykke var opnået fra de involverede i vores undersøgelse før deres indskrivning patienter. Dyr i denne undersøgelse blev håndteret i overensstemmelse med retningslinjerne for dyreforsøg i Nagasaki University, og forordningerne for Animal Care og brug Udvalg godkendte forsøgsprotokollen.

Patienter

Alle lysbilleder af 122 blærekræft prøver taget fra transuretral resektion (TUR) på vores hospital mellem 1993 og 2004 blev gennemgået. Alle patienter havde været klinisk diagnosticeret med non-muskel invasiv blærekræft (NMIBC) uden metastaser. Vi ekskluderede patienter, som havde fået neoadjuverende terapi. Desuden prøver at kræftcellen nummer var under 500 blev også udelukket fra denne undersøgelse. På den anden side, blandt de 122 patienter, blev adjuverende behandling herunder systematisk kemoterapi, intravesikal kemoterapi og intravesikal bacillus-Calmette-Guérin udført i 14 (11,5%), 67 (54,9%), og 19 patienter (15,6%), henholdsvis . Alle patienter blev vurderet ved brystet radiografi, ultrasonografi, og computertomografi (CT) i urinblæren og maven, og cystoskopi. Hertil kommer, CT af lungerne eller hjernen, magnetisk resonans imaging (MRI), drop-infusion pyelografi og knogleskanninger blev udført som skønnes nødvendigt. Tumorer blev iscenesat i henhold til den amerikanske Blandede kræft og karakter efter Verdenssundhedsorganisationen og International Society for Urologiske Patologi klassifikationssystem. I nærværende undersøgelse blev tumorer grupperet til statistisk analyse i følgende grupper: lav (PTA + 1) og høj-stadie (≥T2); eller lavt indhold (grad 1 og 2) og high-grade (grad 3). Vi undersøgte også 20 vævsprøver af normal urinblære opnået fra tilsyneladende normale områder i blæren af ​​patienter med overgangs- cellecarcinom i de øvre urinveje. Alle kontrol patienter viste G1 og ikke-muskel invasiv sygdom, og de viste tilbagefald inden for et follow-up periode på 10-17 år. Median opfølgning var 51 måneder (interval, 2-182 måneder).

Animal

HUR ekspression blev undersøgt i 10 prøver af normale urothelial celler (uden BBN), 5 af NMIBC (BBN løsning til 14 uger), og fem af muskel invasiv blærekræft (MIBC) (i 24 uger) kemisk induceret blærekræft musemodel. Denne model blev anvendt i en tidligere rapport [16].

Immunhistokemi

Immunohistokemiske undersøgelser blev udført ved hjælp af formalin-fikseret, paraffinindlejrede sektioner. Vi anvendte anti-Hur antistof (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) som det primære antistof (polyklonalt kanin, reaktiv for både mennesker og mus Hur). Fem-um-tykke snit blev afparaffiniseret i xylen og rehydreret i graduerede opløsninger af ethanol. Antigen genfinding blev udført ved 100 ° C i 15 min. i 0,01 M natriumcitratbuffer (pH 6,0). Alle snit blev derefter nedsænket i 3% hydrogenperoxid i 30 min for at blokere endogen peroxidaseaktivitet. Snit blev inkuberet natten over med det primære antistof ved 4 ° C, derefter vasket i 0,05% Tween 20 i phosphatbufret saltvand (PBS). Dernæst blev snit inkuberet med peroxidase under anvendelse af mærkede polymer-metoden med Dako EnVision + ™ Peroxidase, (Dako, Carpinteria, CA) i 60 minutter. Den peroxidase reaktionen blev visualiseret med væsken 3,3′-diaminobenzidintetrahydrochlorid (DAB) substrat (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA). Sektioner blev modfarvet ved anvendelse af hæmatoxylin. Andre metoder blev udført som tidligere beskrevet [13], [17], [18]. Kort fortalt, vi også vurderet VEGF-A, -C, og -D og COX-2 udtryk i lignende prøver vha immunohistokemiske teknikker. Desuden blev mikrokar densitet (MVD) og lymfeknuder fartøj densitet (LVD) estimeres ved hjælp af CD34-positive lumina og D2-40-positive lumina hhv. Nærmere oplysninger om metoder til bestemmelse MVD og LVD var som tidligere [13] beskrevet. Vi udførte al evaluering ny for denne undersøgelse. En række kræft prøver, der var blevet bekræftet i indledende undersøgelser som immunoreaktive for de undersøgte antigener blev anvendt som positive kontroller for HUR (lever), VEGF’erne (renalcellecarcinom), COX-2 (colon), D2-40 (mandler), og CD34 (nyre). De særlige forhold i disse prøver som positive kontroller blev bekræftet i vores tidligere rapporter [13], [17], [18]. En fortløbende sektion fra hver prøve behandlet uden det primære antistof blev anvendt som en negativ kontrol. Positive og negative kontroller blev sat op for hver batch af eksperimenter. Desuden at bekræfte specificiteten af ​​Hur immunreaktivitet, udførte vi lignende undersøgelse ved anvendelse af gede-polyklonalt antistof (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) i prøver af human (n = 40) og musevæv (n = 20), og de blev også inkuberet med blokerende peptid for denne anti-Hur antistof (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA).

Evaluering

Hur ekspression blev bedømt ved immunoreaktivt score som tidligere rapporteret [19]. Kort fortalt blev cytoplasmatiske og nukleare farvningsmønstre scoret med følgende skalaer: 0, ingen farvning; 1, svag og /eller fokal farvning ( 10% af cellerne); 2, moderat eller stærk farvning (10-50% af celler); og 3, moderat eller stærk farvning ( 50% af cellerne). Scores 0 og 1 blev bedømt som lav ekspression, og scorer 2 og 3 blev bedømt som høj ekspression. Denne evaluering blev anvendt til musevæv. Med hensyn til andre udtryk, blev resultaterne betragtet som positive, hvis farvningsintensitet var stærk, og procentdelen af ​​positivt farvede cancerceller blev bestemt ved anvendelse af en kontinuerlig skala ifølge tidligere rapporter [13], [17]. Kort fortalt blev ekspressionsniveauer vurderet semikvantitativt fra procentdelen af ​​udtrykkende carcinomceller (fra ≥ 500 carcinomceller). Disse celler blev undersøgt ved anvendelse af en E-400 mikroskop (Nikon, Tokyo, Japan) og digitale billeder blev indfanget (DU100, Nikon). Derudover brugte vi en computerstøttet billedanalyse-system (Win TAG-version 5,0; Mitani, Fukui, Japan) for at beregne statistiske variabler. To efterforskere (S.W. og Y.M.), blindede kliniske funktioner og overlevelse data, uafhængigt udført semi-kvantitative analyser og immunfarvning fortolkninger. Hastigheden af ​​uenighed i analyser mellem disse to efterforskere var. 10%, og den gennemsnitlige tæthed blev brugt til statistiske analyser

Statistisk analyse

Data er udtrykt som middel (standardafvigelse [SD] ). T-test blev anvendt til analyse af kontinuerlige variabler. Chi-square test og Fishers eksakte test blev anvendt til sammenligninger af kategoriske data. Spearmans korrelationskoefficient blev anvendt til bestemmelse associationer mellem to kontinuerlige variabler. Rå og justerede effekter blev estimeret ved logistisk regressionsanalyse og beskrevet som odds ratio (OR) med 95% konfidensintervaller (95% CIS), sammen med

P

-værdier. Overlevelse analyse blev evalueret ved brug Kaplan-Meier analyse og log-rank test, og variabler, der opnåede statistisk signifikans (

P

0,050) i univariate analyser blev efterfølgende indgået en multivariat analyse ved hjælp Cox proportionel risiko analyse ( beskrevet som hazard ratio [HR] med 95% CI, sammen med

P

-værdier) (model A). Hertil kommer, at undersøge den prædiktive værdi af HUR udtryk nærmere analysen omfattede en multivariat model herunder alle risikofaktorer (Model B). Alle statistiske tests var to-sidet og betydning blev defineret som

P

0,050. Alle statistiske analyser blev udført på en personlig computer med StatView til Windows-version 5.0 software (Abacus Concepts, Berkeley, CA).

Resultater

Lokalisering og ekspression af Hur

I normale urothelial celler, svage til moderate nukleare Hur ekspression blev detekteret, sammen med fraværende til svag cytoplasmatisk ekspression (fig. 1A). Endelig blev 90% (18/20) vurderet som viser høj nuklear ekspression i normale urothelial celler. I modsætning hertil blev høj cytoplasmatisk ekspression set i kun 5% (1/20) af normale væv. Med hensyn til nuklear Hur ekspression i cancerceller, ekspressionen var høj i 88 prøver (72,1%; score 2, n = 64; score 3, n = 24) og lav i 34 (27,9%; score 0, n = 1; score 1, n = 33). På den anden side, med hensyn til cytoplasmisk ekspression i cancerceller, ekspressionen var høj i 31 prøver (25,4%; score 2, n = 24; score 3, n = 7) og lav i 91 (74,6%, selv 0. n = 37; score 1, n = 54). Repræsentative eksempler på lav og høj Hur ekspression i kræftvæv er vist i figur 1 B og C, henholdsvis.

Hur blev hovedsageligt påvist i kerner på både normale celler og cancerceller i blære væv. Moderat eller stærk cytoplasmatisk udtryk var tydelig i kræftceller (C), men var sjældent i normale urothelial celler (A). Nogle cancerceller også viste svag cytoplasmatisk ekspression selvom nuklear ekspression blev detekteret (B). Desuden viste vi repræsentative tal for HUR udtryk (C) og faktorer i forbindelse hermed; (D) cyclooxygenase-2, (E) vaskulær endotel vækstfaktor-A, (F) vaskulær endotel vækstfaktor-C i samme område. (Al forstørrelse, x400).

I dyreforsøg blev højt nukleart udtryk fundet i 80% (8/10) og 70% (7/10) af normale urothelial og cancerceller, hhv. På den anden side blev høj cytoplasmatisk ekspression i normale celler detekteret i 10% (1/10). I kræftceller, blev høj ekspression i NMIBC og MIBC påvist i 40% (2/5) og 80% (4/5), hhv. Repræsentative eksempler på Hur ekspression i mus væv blev viste i figur 2A og B. Det er vigtigt, lignende resultater blev opnået ved anvendelse et andet anti-Hur antistof og dets farvning blev reduceret ved konkurrence med blokerende peptid.

(Forstørrelse, x400) . Farvning mønster var tæt på humane væv.

klinisk og patologisk Betydningen af ​​HUR Expression

Forholdet mellem patologiske funktioner og Hur udtryk i kernen og cytoplasmaet er vist i tabel 1. Nuclear Hur udtryk viste ingen signifikant sammenhæng til pT stadium eller bedømmelse (

P

= 0,471 og

P

= 0,773, henholdsvis). Omvendt blev cytoplasmatisk HUR udtryk positivt associeret med pT etape (

P

0,001) og kvalitet (

P

0,001).

Som det fremgår af tabel 2, blev cytoplasmatisk HUR udtryk positivt associeret med udtryk for COX-2 (

P

= 0,011), VEGF-A (

P

= 0,021) og VEGF-C (

P

= 0,004), men ikke med VEGF-D-ekspression (

P

= 0,134). Desuden cytoplasmatisk HUR udtryk vises også positive korrelationer med MVD (

P

= 0,010) og LVD (

P

= 0,023). På den anden side, nuklear ekspression af Hur udviste ingen signifikant korrelation med nogen af ​​disse udtryk eller variable (tabel 2). Således er repræsentative eksempler for disse væsentlige molekyler vist i den høje HUR udtryk prøve (Figur 1D-F).

Forholdet mellem HUR-relaterede molekyler og angiogenese eller lymphangiogenese

I vores studiepopulation, MVD blev tæt forbundet med VEGF-A (r = 0,40,

P

0,001), VEGF-C (r = 0,41,

P

0,001), og COX -2 udtryk (r = 0,31,

P

0,001), men ikke med VEGF-D (r = 0,17, P = 0,652). Tilsvarende LVD var også forbundet med VEGF-A (r = 0,39,

P

0,001), VEGF-C (r = 0,58,

P

0,001), og VEGF D (r = 0,53, P 0,001), men ikke med COX-2-ekspression (r = 0,15,

P

= 0,103). Skemaet af sådanne sammenhænge var showen i Figur 3.

MVD, mikrokar tæthed; LVD, lymphvessel tæthed; VEGF, vaskulær endotelvækstfaktor; COX, cyclooxygenase.

For at klarlægge betydningen af ​​udtryk for VEGF-A, VEGF-C, og COX-2 for MVD og LVD nærmere, multivariat analyse blev udført med modeller, herunder disse faktorer, pT stadium, og lønklasse. Med hensyn til MVD, skønt VEGF-C og COX-2 blev forbundet med MVD (OR = 1,05, 95% CI = 1,02-1,08,

P

= 0,002 og OR = 1,05, 95% CI = 1,00- 1.11,

P

= 0,043, henholdsvis), viste VEGF-A udtryk den stærkeste association (OR = 1,05, 95% CI = 1,03-1,11,

P

0,001). Lignende analyse viste, at VEGF-C var mest tæt forbundet med LVD (OR = 1,05, 95% CI = 1,01-1,08,

P

= 0,001), mens VEGF-A udtryk var også forbundet (OR = 1,05, 95% CI = 1,01-1,08,

P

= 0,011).

Overlevelse Analyser

Nuclear HUR-ekspression ikke er identificeret som en væsentlig indikator for tilbagefald i urinvejene, metastase eller forårsage-specifikke overlevelse (log-rank

P

= 0,156,

P

= 0,058, og

P

= 0,940, henholdsvis). Omvendt høj cytoplasmatisk Hur ekspression var en signifikant prædiktor for hver af disse parametre (fig. 4 A-C). For at vise mere detaljerede værdier af prædiktive faktorer, blev lignende analyser også udført for patologiske funktioner og adjuverende behandling. Desuden viste vi multivariate analyse modeller, herunder alle disse faktorer (Model A) og cytoplasmatisk HUR udtryk og patologiske funktioner (Model B) er vist i tabel 3. I begge modeller blev HUR udtryk identificeret som en prognostisk faktor for metastase, men ikke for tilbagefald til urinvejene (HR = 2,00, 95% CI = 0,98-4,11,

P

= 0,057 i model A og HR = 1,82, 95% CI = 0,90-3,72,

P

= 0,094 i model B) og forårsage-specifikke overlevelse (HR = 5,42, 95% CI = 0,29-6,71,

P

= 0,688 i model A og HR = 1,26, 95% CI = 0,42-3,75,

P

= 0,683 i model B).

diskussion

Den foreliggende undersøgelse viste, at cytoplasmatisk HUR ekspression blev tæt forbundet med maligne potentiale, tumor progression og resultat for patienterne blærekræft. Omvendt blev der ikke en sådan betydning fundet for nuklear udtryk for HUR. Tidligere undersøgelser har påvist cytoplasmatisk akkumulering i flere kræftformer, viser, at nucleocytoplasmic translokation af HUR var afgørende for RNA stabilitet [20], [21]. Vores resultater understøtter en lignende rolle i humane blærekræft væv.

Dette er den første rapport om forholdet mellem HUR udtryk og patologiske træk, tilbagefald og overlevelse hos patienter med urothelial karcinom i urinblæren kræft. Med hensyn til patologisk betydning og prognostiske roller Hur, har flere tidligere undersøgelser rapporteret, at over-ekspression er forbundet med høj kvalitet malignitet, fremskredent stadium, og ringe overlevelse hos patienter med coloncancer [6], brystcancer [5], og renalcellecarcinom [7]. Imidlertid Hur ekspression ikke synes at være forbundet med patologisk status i patienter med brystkræft, med høj ekspression af Hur forudsige en bedre prognose [8]. Vores resultater støtter tidligere situation i patienter med blærecancer. Som en mekanisme der ligger bag sådanne patologiske aktiviteter HUR, har regulering af angiogenese blevet foreslået i forskellige kræftformer [3], [4]. Særlig opmærksomhed blev udbetalt til forholdet mellem HUR udtryk, maligne potentiale og patologiske træk, fordi stimulation af angiogenese er blevet forbundet med tumorvækst og progression hos patienter med flere maligniteter, herunder blærekræft [13], [22]. Endelig viste Vores resultater muligheden for, at cytoplasmatisk ekspression af Hur var positivt associeret med ondartet adfærd og resultater i blærecancerpatienter. Desuden er der en mulighed for, at en sådan malign aggressivitet er forbundet med Hur-relateret angiogenese.

Et af de mest interessante resultater i denne undersøgelse var, at cytoplasmatisk Hur ekspression korrelerede positivt med lymfangiogenese i blærekræft væv. Så vidt vi ved, denne undersøgelse er den første til at anmelde et forhold mellem HUR udtryk og lymfangiogenese hos patienter med blærekræft, selv om der er påvist lignende resultater i lungekræft i tidligere rapporter [4]. Desuden interessant, både at rapportere og den foreliggende undersøgelse viste, at cytoplasmatisk Hur ekspression korrelerede med både angiogenese og lymfangiogenese. På baggrund af disse resultater, vi hypotese, at co-faktorer, der kan påvirke både angiogenese og lymfangiogenese kan associere med sådanne fund i kræft væv.

Detaljerede reguleringsmekanismer af angiogenese og lymfangiogenese af HUR i humane cancer væv er stadig ikke helt forstået . foreligger der adskillige molekyler, der skal Hur-relaterede, såsom VEGF-A [10], VEGF-C, og COX-2 [7], [9]. Disse faktorer er kendt for at være forbundet med MVD og LVD i blærekræft. Men forholdet mellem HUR udtryk og disse angiogenese- og lymfangiogenese-relaterede molekyler i humane blærekræft væv er stadig uklart. Vores resultater viste, at cytoplasmatisk Hur ekspression korrelerede positivt med udtryk for VEGF-A og -C, men ikke VEGF-D. Vi har tidligere rapporteret, at VEGF-A og -C signifikant var forbundet med MVD og LVD i humane blærecancer væv [13]. Desuden blev sådanne væsentlige relationer ikke detekteret for nuklear HUR udtryk. På baggrund af disse resultater, vi spekuleret på, at translokation fra kerne til cytoplasma er en vigtig proces at stimulere angiogenese og lymfangiogenese. Endvidere opregulering af VEGF-A og -C udtryk kan være forbundet med en sådan fænomen i blærekræft.

En yderligere vigtigt resultat i den foreliggende undersøgelse var, at cytoplasmatisk Hur ekspression var en nyttig prædiktor for prognose i blærekræft patienter, som gennemgik TUR. Især blev udtryk tæt forbundet med postoperativ metastaser. Mange forskere har identificeret øget MVD og LVD som stærke prædiktorer for udfaldet hos patienter blærekræft [13], [23], [24]. Baseret på disse resultater, vi troede, at sådanne prognostiske roller MVD og LVD var rimelige. På den anden side blev cytoplasmatisk ekspression af Hur identificeret som en væsentlig prædiktor for årsag-specifik overlevelse i univariat analyse, men ikke som en uafhængig markør i multivariat analyse. Vi er ikke sikker på, hvorfor sådanne forskelle opstod i denne undersøgelse. Imidlertid blev postoperativ overlevelse påvirket af en lang række faktorer. Vi spekulerede derfor at cytoplasmatisk HUR kan spille forskellige roller i patientens overlevelse, mens forskellige andre faktorer og molekyler kan have stærkere virkninger i fastlæggelsen resultater for patienter med blærekræft.

I denne undersøgelse viste vi, at cytoplasmatiske HUR udtryk i blære cancerceller var højere end i normale epitelceller. Biologiske funktioner i HUR i mennesker og mus er blevet rapporteret at være den samme i tidligere rapport [25]. Men validering af specificitet Hur mål er ikke endnu helt klar. Endvidere er nyligt og detaljerede patologiske funktion af Hur i cancerceller bliver mere tydeligt i de senere år [26]. Således er nødvendige for at forstå mere detaljerede patologiske roller HUR i blærekræft yderligere undersøgelser vedrørende molekylære mekanisme og cellebiologiske forsøg.

Som konklusion viste vores resultater, at cytoplasmatisk HUR ekspression blev signifikant associeret med ondartet aggressivitet og blærekræft patientresultater, hvorimod nuklear HUR udtryk var ikke. Desuden er cytoplasmatisk Hur ekspression forbundet med angiogenese, lymfangiogenese, og disse beslægtede molekyler, herunder VEGF-A, VEGF-C, og COX-2. Vores resultater antyder, at cytoplasmatisk Hur ekspression var nyttigt som en prædiktiv markør for metastase efter TUR hos patienter med blærecancer. For at opnå yderligere mekanistisk indsigt, yderligere

in vivo

In vitro

studier i blærekræft er nødvendige.

Tak

Vi er taknemmelige for Mr. Takumi Shimogama og Mrs. Miho M. Kuninaka for deres enestående støtte.