PLoS ONE: Tab af PLZF Expression i prostatakræft ved immunhistokemi korrelerer med Tumor Aggressivitet og Metastasis

Abstrakt

PLZF er en transskription repressor, som spiller en afgørende rolle i udviklingen, spermatogenesen og onkogenese. Nedregulering af PLZF er blevet fundet i forskellige tumorcellelinjer. Der har været stort set ingen væv undersøgelse af ekspressionen af ​​PLZF i prostatakræft (PCA). PCa er en heterogen sygdom, hvoraf de fleste er indolent og ikke-dødbringende. I øjeblikket er der ingen biomarkører, der adskiller indolent fra aggressiv PCa; Derfor er der et presserende behov for sådanne markører til at yde klinisk beslutningsstøtte. Denne undersøgelse havde til formål at undersøge ekspressionen af ​​PLZF ved immunhistokemi i forskellige klasse samt metastatisk PCa og at korrelere ændring af PLZF udtryk med PCa aggressivitet. Vi studerede i alt 83 primære PCa fra biopsier, 43 metastatisk PCa og 8 parrede primær og metastatisk PCa fra radikale prostatektomi med lymfeknude dissektion. Vores resultater viste, at PLZF var stærkt udtrykt i næsten alle (~ 100%) benigne luminale celler (n = 77) og lav kvalitet (Gleason mønster 3) PCa (n = 70) og svage eller fraværende (100%) i basale celler ( n = 70). Nedsat eller mistet udtryk for PLZF blev dokumenteret i 26% af høj kvalitet (Gleason 4 og 5) primær PCa (n = 70) og 84% metastatisk PCa (n = 43). Den primære høj kvalitet PCa i prostatektomi delte lignende PLZF tab /fald og histomorphology som i parrede parallel lymfeknudemetastaser. Disse data viste, at nedregulering af PLZF er en vigtig molekylær proces for tumor progression og tab af PLZF udtryk påvist ved rutine- immunhistokemi er en lovende og værdifuld biomarkør for PCa aggressivitet og metastase i personlig pleje af PSA.

Henvisning: Xiao GQ, Unger P, Yang Q, Kinoshita Y, Singh K, McMahon L, et al. (2015) Tab af PLZF Expression i prostatakræft ved immunhistokemi korrelerer med Tumor Aggressivitet og metastase. PLoS ONE 10 (3): e0121318. doi: 10,1371 /journal.pone.0121318

Academic Redaktør: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, UNITED STATES

Modtaget: December 2, 2014 Accepteret: 30 januar 2015; Udgivet: 25 Mar 2015

Copyright: © 2015 Xiao et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

finansiering:.. Disse forfattere har ingen støtte eller finansiering til at rapportere

konkurrerende interesser:. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Prostatakræft (PCA) er den mest almindelige kræftform blandt mænd i USA [1]. Med den stigende offentlige bevidsthed om PCa, den udbredte brug af prostata-specifikt antigen (PSA) serumniveauer som screening modalitet, og trans-rektal ultralyd til at målrette specifikke læsioner, har prostata nål core biopsier resulteret i øget klinisk påvisning af kræft. PCa er en heterogen sygdom, hvoraf størstedelen har en indolent opførsel [2,3]. Trods forbedringer i tidlig påvisning, der er i øjeblikket ingen pålidelige biomarkører til effektivt skelne mænd med høj risiko for sygdom fra indolente flertal og det er blevet fremført i årtier, at et stort antal PCa kunne have været overbehandlet [2,4,5]. Derfor er der et presserende behov for et sådant biomarkør, som kan anvendes til at identificere aggressiv PCa og starte tidligt helbredende behandling.

promyelocytleukæmi zinkfingerproteinet (PLZF), også kendt som Zbtb16 eller Zfp145, først identificeret i en patient med akut promyelocytisk leukæmi, er et zinkfinger transkriptionsfaktor tilhører POZ-Krüppel (POK) -familien, der binder til specifikke DNA-sekvenser med sine carboxyterminale zinkfingre og undertrykker transkription ved at rekruttere co-repressorer med sin aminoterminalt POZ domæne [ ,,,0],6,7]. Funktion i kernen, PLZF påvirker forskelligartet signalering herunder cellecyklus, differentiering og programmeret celledød i hæmatopoietiske celler [7] samt, mere nylig, solide tumorer [8-10], og det har vist sig at være involveret i større udviklingsmæssige og biologiske processer, såsom spermatogenesen og stamcelle vedligeholdelse, hind dannelse lemmer, hæmatopoiese, immune regulering, og onkogenese [6,7,11,12]. Tabet af PLZF er blevet relateret til forøget proliferation, invasionsevne og motilitet, og modstand mod apoptose i forskellige cancercellelinier [8]. For nylig PLZF har vist sig at være nedreguleret i ikke-småcellet lungecarcinom [13], malignt mesotheliom [9] og malignt melanom [8,10]. Overekspression af PLZF i humane cervikale cellelinier og mesothelial cellelinier inhiberer cellevækst ved at inducere apoptose [14]. Så vidt vi ved ekspression af PLZF er stort set ikke blevet undersøgt i prostatacancer væv. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge ekspressionen af ​​PLZF i primære såvel som metastatisk PCa ved immunhistokemi og at korrelere ændring af PLZF udtryk med PCa kvalitet, aggressivitet samt metastase.

Materialer og metoder

1. Vævsprøver

Denne undersøgelse blev udført efter godkendelse fra den institutionelle Review Board og i overensstemmelse med en forsikring indgives til og godkendes af den etiske komité /institutionel gennemgang bestyrelsen for University of Rochester og Mount Sinai School of Medicine. Dette er en fritagne immunhistokemisk undersøgelse af arkiverede prøver og indeholder ingen identificerbare patientinformation og behovet for skriftligt informeret samtykke blev frafaldes. Prostata er en solid fibromuskulær orgel med indvækst af glandulær epitel, som det ikke er let permeabel for formalin fiksativ. For at undgå den mulige virkning af ujævn og suboptimal vævsfiksering af antigenet bevaring og fremfinding samt om de efterfølgende immunhistokemiske resultater blev biopsi materiale af primære såvel som metastatisk prostatacancer valgt til denne undersøgelse, bortset fra otte tilfælde af radikale prostatektomi med bækken lymfeknude dissektion. Alle prostata biopsi prøver og prostatektomi og flertallet af metastatisk prostata Ca væv blev indsamlet og studeret på University of Rochester Medical Center, NY. Tyve procent af de metastatiske PCA sager fra Mount Sinai Medical Center, New York. Alle tilfældene var fra forskellige patienter. Prøverne blev rutinemæssigt fikseret i 10% neutral bufferet formalin og paraffin indlejret.

Der var i alt 83 prostata biopsier, hver med en tumor volumen fra 10 til 100%, hvoraf 13 tilfælde havde en total Gleason s score 6, 57 sager havde en score 7, 7 tilfælde har en score 8, og 6 sager havde en score 9/10. Godartede glandulær epitel var til stede i 77 af de 83 prostata biopsier og var fraværende i de resterende 6 biopsier. Fyrre tre tilfælde var metastatisk prostatacancer med en tumor volumen i intervallet fra 5% til 95%, hvoraf 22 var knoglemetastaser, 11 lymfeknuder metastaser, 7 levermetastaser og 3 lungemetastaser. Otte parrede PCa fra prostatektomi prøver og deres parallelle lymfeknuder blev også inkluderet i undersøgelsen. De otte primære prostata carcinomer i radikale prostatektomi havde i alt Gleason score spænder den 7.-9 med en tumor stadie pT3a eller pT3b. De lymfeknudemetastaser varierede fra 1 mm til 3 mm i største dimension. Sagen fordeling er opsummeret i tabel 1.

2. Immunhistokemi

Efter afparaffinering og rehydrering, ladet objektglassene med 5 um tykke snit af væv blev behandlet med 3% hydrogenperoxid (H

2O

2) for at udelukke endogen peroxidaseaktivitet, derefter bearbejdet for antigen hentning med 10-mM citratbuffer pH 6,0 under anvendelse af en trykkoger (Pascal, Dako Cytomation, Glostrup, Danmark) i 1 minut ved 125 ° C efterfulgt af langsom afkøling. Resten af ​​proceduren blev udført i et DAKO automatiseret instrument. Alle snit blev skyllet med phosphatpufret saltvand (137 mM NaCl, 2,7 mM kaliumchlorid, 4,2 mM natriumphosphat og 1,5 mM kaliumphosphat) og omsat med muse-anti-PLZF antistof (D-9; sc-28.319, Santa Cruz Biotechnology , Santa Cruz, CA) i 1,5 timer ved 1: 500 fortynding i phosphatbufret saltvand indeholdende 1% bovint serumalbumin (BSA) og 5% normalt gedeserum ved stuetemperatur. Snittene blev derefter inkuberet i 20 minutter med EnVision + System peberrodsperoxidase-mærket polymer konjugeret med biotinyleret anti-muse-sekundært antistof og 3,3′-diaminobenzidin-substrat. Alle objektglas blev modfarvet med hæmatoxylin, dehydreret, og dække gled.

3. Analyse af immunhistokemisk farvning

Prostate adenocarcinom, stroma samt luminale celler og basale celler i godartede prostata kirtler blev analyseret for PLZF immunreaktivitet i en semikvantitativ måde. Kun nukleare farvning af PLZF blev betragtet positivt. Baseret på omfanget og intensiteten af ​​immunreaktivitet blev farvningen gradueret som- (negativ /fraværende), en (svag), 2 (moderat), eller 3 (kraftig /intens). Hver enkelt Gleason mønster blev separat evalueret for deres nukleare mærkning med PLZF for tumor i prostata, og for nemheds skyld blev Gleason mønster 4 (G4) og Gleason mønster 5 (G5) kombineres ved analyse. Gleason score blev ikke brugt til metastatisk PCa. Den stærke lunimal cellefarvning og svage eller ikke-reaktive basale celler (se resultater sektion for detaljer) blev anvendt som positiv og negativ kontrol, henholdsvis.

4. Statistisk analyse

Jockheere-Terpstra-test [15] blev anvendt til at vurdere udviklingen mellem proteinekspression score og cancer type. Testen bestemmes, hvis de forventede rækker for protein udtryk scorer og cancertyper ændret monotont. Efter test af trend blev parvise sammenligninger kigget på kollapse proteinekspression i Negativ /Svag (negativ og en) og Moderate /Stærk (2 og 3), og at knytte dette med par af cancertyper bruger 2-tailed Fisher eksakte test . Alle analyser blev udført ved hjælp af SAS /STAT software, version 9.3 af SAS System (Copyright © juli 2011, SAS Institute Inc.) på en Windows 7 platform.

Resultater

1. Ekspression af PLZF i godartet prostata glandulær epitel

Blandt de 83 prostata biopsier, syvoghalvfjerds indeholdt godartet prostata glandulær epitel. PLZF var moderat eller stærkt udtrykt i kernerne i de luminale celler af godartet prostata kirtler blev der imidlertid svag eller ingen ekspression detekteres i enten kerner eller cytoplasma af de basale celler eller stromaceller i alle 77 tilfælde (fig. 1a).

A. Benign prostata kirtler med stærke kernekraft imunoreactivity i luminale celler (pil) og svag eller negativ mærkning i basale celler (pilespids). B. Stærk plet i Gleason mønster 3 + 3 PCA kirtler. C. Stærk plet i G3 PCA kirtler (pil), men svag eller negativ plet i G4 PCA kirtler (pilespids). D. Tab af PLZF i G4 kirtler i Gleason mønster 4 + 4 PCa (pil). Godartede kirtler med stærke plet i luminale celler (pilespids). E. Stærk plet i G3 PCa kirtler (pil) og fraværende plet i G5 PCA kirtler (pilespids) af Gleason mønster 3 + 5 PSA. F. Negativ plet i Comedo typen PCa (G5). G. Negativ plet i et repræsentativt tilfælde af knoglemetastaser af PSA. H. Negativ plet i et repræsentativt tilfælde af lymfeknudemetastase af PSA. I. Negativ plet i et repræsentativt tilfælde af levermetastaser. Benign leveren viser også nuklear PLZF pletten. J. Negativ plet i et repræsentativt tilfælde af lunge metastase. K. PLZF udtrykt i G3 men ikke G4 kirtler primære PCa fra en prostatektomi. L. Den parallelle lymfeknude metastaser viser lignende morfologi og negative PLZF pletten til G4 PCA kirtler i de primære G4 PCA kirtler i K.

2. Ekspression af PLZF i primær prostatacancer af prostata biopsi

Blandt de primære PCa i prostata biopsier, der var i alt 70 individuelle Gleason mønster 3 og 70 individuelle Gleason mønster 4/5. Gleason mønstre 4 og 5 blev analyseret sammen primært på grund af deres lignende biologiske adfærd samt fraværet af åbenbar immunfarvning forskel mellem disse to mønstre. PLZF blev udtrykt differentielt i intensitet i den primære prostataadenocarcinom af Gleason s mønstre 3 og 4/5. Svarende til de luminale celler af godartet prostata kirtler, PLZF var moderat eller stærkt udtrykt i alle tumor kirtler i Gleason mønster 3 (fig 1B.): 45 viste +3 immunreaktivitet og 25 viste +2 positivitet. I 3 tilfælde, kirtler størstedelen af ​​G3 PCa præsenteret med stærke PLZF pletten, men mindretallet med fokal svag eller negativ PLZF reaktivitet. I modsætning hertil blandt de 70 primære PCa Gleason mønster 4/5, 24 (34%) viste +3, 28 (40%) med 2 og 12 (17%) med svag (+1) immunoreaktivitet. Fuldstændigt tab af PLZF ekspression blev set i 6 (9%) af disse tilfælde (fig. 1D-F). Der var 5 sager, hvor størstedelen af ​​G4 /5 PCA kirtler præsenteret med svag eller negativ PLZF pletten, men et mindretal havde omdrejningspunkt moderat til stærk PLZF reaktivitet. Disse PCa med svag eller mistet udtryk for PLZF udgjorde 18/83 (22%) af alle de primære PCA tilfælde og 18/70 (26%) af høj kvalitet (Gleason 7-10) primær PCa.

3. Ekspression af PLZF i metastatisk prostatacancer

langt størstedelen af ​​metastatisk PCa ikke eller havde kun svagt PLZF ekspression (fig. 1G-J). Af de 43 metastatisk PCa, 29 manglede PLZF udtryk (15 ben, 8 lymfeknude, 5 levende og en lunge), 7 viste svag PLZF udtryk (5 ben, en lever og en lunge), moderat til stærk immunoreaktiviteten af ​​PLZF blev set i 7 tilfælde (2 ben, 3 lymfeknude, en lever, en lunge). Samlet set tab eller faldt betydeligt udtryk for PLZF blev set i 84% af metastatisk prostata adenocarcinom uanset metastatisk site.

4. Resultater af statistisk analyse

Jockheere-Terpstra Testen viste en negativ udvikling (Z = -9,1568, s 0,0001), hvilket indikerer, at mere aggressiv metastatisk kræft havde de laveste protein udtryk scoringer, mens Gleason score på 3 eller 4 /5 havde højere proteinekspressionssystemer scores. Ligeledes meget væsentlige negative associationer blev fundet, når den kollapsede protein score blev sammenlignet mellem G3 og G4 /5, G3 og metastatisk kræft, og G4 /5 og metastatisk cancer. (Alle p. 0,0001, tabel 2, figur 2)

5. Ekspression af PLZF i metastatisk PCa af lymfeknude og dens parallel primære PCa

For at undersøge en sammenhæng mellem PLZF ekspression i primær PCa og metastatisk PCa, otte parret primær PCa i prostatektomi prøver og dens tilsvarende metastatisk PCa i lymfeknuder knudepunkter blev undersøgt for den immunhistokemiske ekspression af PLZF. Resultaterne viste, at ekspressionen af ​​PLZF i prostata varierede i forskellige kvaliteter med moderat til højeste ekspression i lav kvalitet (G3) PCa og nedsat eller mistet ekspression i fokus /foci af høj kvalitet (G4 /5) PCa (fig. 1K) fokus /foci af primær PCa med nedsat eller mistet udtryk for PLZF svarede til den parrede metastatisk PCa i lymfeknude ved at dele lignende PLZF tab /falde samt lignende morfologiske mønstre (fig. 1L). De immunhistokemiske resultater og patologiske data fra den primære og metastatisk PCa fra de otte radikale prostatektomi med bækken lymfeknude dissektion er sammenfattet i tabel 3.

Diskussion

Selv om der er afsat enorm indsats på jagt efter effektive prognostiske biomarkører, der er i stand til at forudsige aggressivitet af prostatakræft, er der gjort store fremskridt i retning af praktisk brug. Langt den mest undersøgte biomarkør til dette formål er PTEN, en velkendt tumorsuppressor [16-23]. Genomiske deletioner af PTEN locus ved 10q23, mest almindeligt konstateret ved FISH, forekommer i 10% til 70% af prostatacancere afhængigt af undersøgelsespopulationen undersøgte [16-23]. Nogle undersøgelser har vist den genomiske tab af PTEN at være forbundet med en mere aggressiv adfærd, tumorprogression og tidlig metastase, men andre ikke fandt en sådan forening [23-25]. Da FISH test er besværlig og ikke registrerer epigenetiske samt post-transkriptionel ændring relateret genekspression, har immunhistokemiske tests for nylig blevet anvendt til at vurdere ekspressionen af ​​PTEN i prostatacancer og dens relation til tumor aggressivitet. Inkonsistente resultater dog er blevet rapporteret [21, 23, 26-33]. Mangel på pålidelige antistoffer mod PTEN er blevet betragtet som en af ​​de tillægger faktorer. PTEN immunreaktivitet er blevet vist i kerner og cytoplasma af epitelceller samt i stroma celler prostata væv [28], og der har ikke været nogen enighed om immunfarvning scoring samt om fortolkningen af ​​de PTEN immunhistokemiske resultater; når korrelation til clinicopathologic parametre udføres, cytoplasmatisk PTEN farvning bruges af nogle forfattere [27, 34], mens nuklear reaktivitet bruges af andre [23]. Derudover kan promiskuøs immunfarvning i kernen og cytoplasmaet af epitelceller samt stromaceller også har gjort det vanskeligt at skelne specifik fra ikke-specifikke reaktioner. Desuden er kvaliteten af ​​vævskonservering, en ofte overset faktor, været kendt for at påvirke immunhistokemiske resultater [35, 36]. For at korrelere resultaterne af PTEN ekspression til tumor stadium, de fleste af de tidligere undersøgelser anvendes prostatektomi prøver, herunder prostatektomi væv afledt TMA (tissue microarray). Som nævnt ovenfor prostata er hovedsagelig en solid fibromuskulær orgel med en lav gennemtrængelighed for fiksativ; derfor, medmindre særlig opmærksomhed, suboptimal vævsfiksering er et fælles problem for prostatektomi eksemplar, som efterfølgende kunne påvirke vævet antigen bevaring og måske i det mindste delvis forklare inkonsistente resultater i nogle af de immunhistokemiske undersøgelser af PTEN i PSA. Som et resultat, den kliniske værdi af immunhistokemisk PTEN i vurderingen af ​​prostatacancer aggressivitet er stadig under evaluering.

PLZF, et gen modulator ligner PTEN, fungerer som en transskription repressor. Tidligere undersøgelser af PLZF er hovedsageligt fokuseret på sin rolle i spermatogenesen, stamceller vedligeholdelse og promyelocytleukæmi [6,7,11,12]. Vores undersøgelse i prostata viste i sammenligning med den moderat til stærk immunhistokemisk ekspression i benigne luminale celler af prostata kirtler og lav kvalitet (Gleason mønster 3) prostatacancer, blev ekspression af PLZF faldt betydeligt eller gå tabt i langt de fleste (84%) af metastatisk prostatacancer og i 26% af høj kvalitet primære PCa. Disse resultater viste, at tab af PLZF var et vigtigt skridt i tumorprogression og metastase. En fraktion (26%) af primære højkvalitets (G4 /5) prostatacancer præsenteret med signifikant tab af PLZF ekspression syntes også at passe i den virkelige klinisk scenarie, hvor kun en del af høj Gleason PCa fremskridt og udvikle metastase langs deres kurser . De 26% af disse primære højkvalitets PCa med signifikant fald eller tab af PLZF udtryk i vores undersøgelse kunne derfor faktisk repræsenterer den del af aggressiv PCa at udvikle metastaser på senere tidspunkt. Der var lejlighedsvis tilfælde med variabel PLZF udtryk i de samme Gleason ‘score PCA kirtler i samme biopsi, hvilket er i overensstemmelse med intratumor heterogenitet PCa.

For yderligere at belyse, om nedsættelse eller tab af PLZF udtryk i primær PCa korreleret med den metastatiske PCa, vi studerede den immunhistokemiske udtryk mønster af PLZF i både primær PCa i prostata og den parrede metastatisk PCa i dissekerede bækken lymfeknuder af den samme patient. Vores resultater viste ændringerne i PLZF ekspression samt morfologien i fokus /foci af primær højkvalitets PCa i prostata blev korreleret med den for bækken lymfeknude metastatisk PSA. Dette fund styrket sammenslutningen af ​​PLZF tab med PCa progression og impliceret en prognostisk værdi PLZF tab i primær PCa i forudsigelse sit metastatiske potentiale. I de parrede prostatektomi og lymfeknude dissektion, den variable PLZF ekspression (- /+ 1 /+ 2 /+ 3) i det primære G4 /5 PCA kirtler kan afspejle variabiliteten af ​​antigenpræsentation grund suboptimal fiksering af prostatektomi prøver, ikke desto mindre , forholdsmæssigt, den PLZF i foci af G4 /5 PCa er mindre udtrykt end foci af G3 PCa.

Som påvist i denne undersøgelse blev PLZF næsten udelukkende udtrykt i kerner af luminale celler og svag eller fraværende i de basale celler og stromale celler i prostata. Denne rene baggrund ikke kun gjort det let at fortolke Immunofarvningen resultater, men også fungerede som gode positive og negative kontroller. Disse var de åbenlyse fordele ved PLZF forhold PTEN. I forhold til tabet af PTEN i 10-70% af PCa [16-23], følsomhed PLZF tab for metastatisk PCa var 84% i vores undersøgelse, mens specificiteten af ​​PLZF tab forudsige nogen metastase fra lav kvalitet (Gleason 3) var 70/70 (100%) eller på et minimum, 67/70 (94%), når der tages hensyn mindre omdrejningspunkt tab. Præcist hvor mange af den høje kvalitet (G4 /5) PCa vil undlade at udvikle metastaser er næsten umuligt at fastslå i menneskelige tilfælde; alligevel, hvis man antager, at hele gruppen af ​​52 (74%) primære G4 /5 PCA sager, der ikke vise PLZF tab mangler metastatisk potentiale, ville specificitet PLZF i forudsigelse metastaser være meget højere end den rapporterede 50% for PTEN [ ,,,0],37].

Vi har undersøgt ekspression af PLZF hjælp Oncomine (Life Technologies), samt de underliggende GEO data i fem prostatakræft datasæt stratificeret af Gleason score. Ingen tilsyneladende forening er tydeligt, hverken når undersøger stratificerede udtryk box plots (S1 Fig.), Eller den underliggende data, når klædt som vandfald plots (S2 Fig.). Ligeledes ved undersøgelsen fem offentligt tilgængelige datasæt på cBioPortal [38, 39], ingen stærk sammenhæng mellem Gleason score (S3 Fig., Top tre sæt) eller T-stadie (S3 Fig., Nederste to sæt) og homozygot sletning, forstærkning, eller mutation af genet, der koder PLZF (ZBTB16) kunne skelnes. Desuden blev ingen tilsyneladende sammenhæng ses mellem formodede kopital ændringer og PLZF mRNA-ekspression i disse datasæt adgang til via cBioportal (data ikke vist). Forskellen mellem de genomiske og udtryk data og vores immunhistokemiske farvningsresultater antyder en involvering af epigenetisk og /eller posttranskriptionel ændringer i aggressiv prostatakræft og understøtter en mere oplysende rolle til immunhistokemisk proteomisk analyse af slutproduktet af et gen i at belyse dens funktion /biologiske konsekvens i forståelsen og forudsigelse af tumor adfærd.

Selv om den nøjagtige rolle PLZF i prostata epitel er ukendt, The konstitutiv ekspression af PLZF i luminale celler og fraværende i basale celler i godartede prostata kirtler minder om androgen receptor, og stærkt udleder en sammenslutning af PLZF med androgen receptor. Faktisk i en

in vitro

undersøgelse af PCA cellelinjer, PLZF viser sig at være en prostatisk androgen-responsive gen [40]. PLZF opreguleres ved androgen i androgen-responsive LNCaP, men ikke i androgen receptor negative cellelinie DU145 [41]. Overekspression af PLZF i LNCaP-cellelinien inhiberer celleproliferation i både fravær og nærvær af androgener [40]. Endogen PLZF ekspression er fraværende i androgen-uafhængige PCa cellelinie DU145 og dets ekspression kan genoprettes ved ektopisk ekspression af androgenreceptoren, men dette er ikke tilfældet i androgen- afhængige LNCaP [41, 42]. Resultaterne af disse in vitro cellelinie undersøgelser understøtter en sammenhæng mellem PLZF og androgen receptor aktivitet, og viser, at balancen mellem pro-proliferative androgen receptor og hæmmende virkning af PLZF kan spille en afgørende rolle i vedligeholdelsen af ​​homeostase af benign prostata epitel. Tab af PLZF aktivitet i PCa kan resultere i ukontrolleret androgen receptor aktivitet, hvilket ville føre til proliferativ vækst. Mens de underliggende mekanismer PLZF tab og relateret tumor progression samt dets rolle i PCa androgen uafhængighed er endnu ikke undersøgt disse data motiveret os til at undersøge PLZF udtryk i prostatakræft med forskellige kvaliteter (Gleason s scores) samt metastatisk prostata kræftformer.

sammenfattende vores undersøgelse viser, at den immunhistokemiske tabet af PLZF er en følsom og specifik biomarkør at opdage aggressiv og metastatisk PCa. Ikke desto mindre vil vi også gerne understrege, at omfanget af denne undersøgelse er begrænset, og der er behov for en større skala undersøgelse for at validere resultaterne. Hvis yderligere valideret, på grund af den enkelhed og omkostningseffektivitet, vil immunhistokemisk test af PLZF udtryk i PCa have en betydelig indvirkning og være af klinisk anvendelighed i forvaltningen og personlig pleje af PCA patienter i daglig praksis. PLZF immunhistokemi kan også kombineres med PTEN at give øget forudsigelseskraft for progressiv PSA. Fremadrettet genoprette PLZF i disse aggressive PCa kan også have potentielle terapeutiske værdier ved at vende deres kurser.

Støtte Information

S1 Fig. Ingen ændringer i PLZF mRNA i prostatakræft.

PLZF (ZBTB16) ekspression blev undersøgt i fem prostatakræft datasæt stratificeret af Gleason score, fås i Oncomine. Kun datasæt med 10 eller flere tilfælde af Gleason score 8 og 9 blev analyseret. Box plots skildre betyde udtryk, stratificeret efter Gleason score. Stratificering i kolonner af Gleason score angives i forklaringen nedenfor (med antallet af sager angivet i parentes). Bemærk, at den passende sammenligning mellem Gleason score 7 og lavere versus Gleason score 8 og eller 9, og ikke den første kolonne for sæt 1-4, som viser prøver, for hvilke en score ikke var tilgængelig

doi:. 10,1371 /tidsskrift .pone.0121318.s001

(TIFF)

S2 fig. Ingen øget frekvens af tilfælde af reduceret PLZF mRNA-ekspression i høj kvalitet prostatakræft.

PLZF (ZBTB16) ekspression blev undersøgt i fem prostatakræft datasæt stratificeret af Gleason score, fås i Oncomine. Kun datasæt med 10 eller flere tilfælde af Gleason score 8 og 9 blev analyseret. Vandfald plots skildre de underliggende individuelle data analyseres i S1 Fig. og skildrer gennemsnitlige udtryk, stratificeret efter Gleason score. Stratificering i kolonner af Gleason score angives i forklaringen nedenfor (med antallet af sager angivet i parentes). Bemærk, at den passende sammenligning mellem Gleason score 7 og lavere versus Gleason score 8 og eller 9, og ikke den første kolonne for sæt 1-4, som viser prøver, for hvilke en score ikke var tilgængelig

doi:. 10,1371 /tidsskrift .pone.0121318.s002

(TIFF)

S3 fig. Ingen PLZF genmutationer eller ændringer i prostatakræft.

Afbrydelser af genet, der koder PLZF (ZBTB16) blev undersøgt i de angivne fem datasæt til rådighed på cBioportal. Ændringer er angivet i parceller under studiet navn: homozyogous sletning (blå søjler); forstærkning (røde søjler); mutation (grønne søjler). Summen af ​​alle registrerede ændringer var 0%, 4%, 1%, 2% og 4% (top til bund) i undersøgelserne afbildet

doi:. 10,1371 /journal.pone.0121318.s003

(TIFF )

tak

Vi takker Mr. Xing Qiu i Biostatistik Program-University of Rochester for hans assistance i statistisk analyse.