PLoS ONE: Etablering af patient-Afledt endometriecancer Xenografter i NOD SCID Gamma Mus for Studiet af Invasion og Metastasis

Abstrakt

Målsætning

De fleste livmoderkræft opdages tidligt og har en god prognose, mens nogle endometriecancere er meget invasiv, metastaserer tidligt og svare suboptimalt på behandlingen. Øjeblikket, at passende modelsystemer studere aggressive natur af disse tumorer mangler. Formålet med denne undersøgelse var at etablere en mus xenograft model for endometriske tumorer afledt fra patienter med henblik på at studere de biologiske aggressive egenskaber, der ligger til grund invasion og metastase.

Metoder Salg

Endometrie tumorvævsfragmenter ( 1,5 mm x 1,5 mm) fra patienter, der gennemgår kirurgi, blev transplanteret under nyrekapslen af ​​NOD

scid

gamma-mus. Efter 6-8 uger blev tumorer udskåret og serielt transplanteret ind ekstra mus til formering. Immunhistokemisk analyse af tumorerne blev gjort for forskellige tumormarkører.

Resultater

Fire tilfælde af forskellige undertyper af endometriecancer blev dyrket og opformeret i mus. Tre af de fire tumortilfælde invaderet i nyrerne og til tilstødende organer. Mens alle tumorer udviste minimal til ingen farvning for østrogen receptor α, blev progesteronreceptor farvning observeret for tumor transplantater. Derudover niveauer og lokalisering af E-cadherin, cytokeratin og vimentin varieres afhængigt subtype. Endelig har alle tumorxenotransplantater farves positivt for urokinaseplasminogenaktivator mens 3 tumorxenografter, som viste invasive egenskaber, farves positivt for urokinaseplasminogenaktivatorreceptorfunktion.

Konklusion

Endometriale tumorer transplanteret under nyrekapslen exhibit vækst, invasion og lokal spredning. Disse tumorer kan opformeres og anvendes til at undersøge aggressiv endometriecancer

Henvisning:. Umærkeligt K, Ono M, Winder AD, Maniar KP, Paintal AS, Yu Y, et al. (2014) Etablering af patient-Afledt endometriecancer Xenografter i NOD

scid

Gamma Mus for Studiet af invasion og metastase. PLoS ONE 9 (12): e116064. doi: 10,1371 /journal.pone.0116064

Redaktør: Eric Asselin, University of Quebec på Trois-Rivieres, Canada

Modtaget: 10. juli 2014 Accepteret: December 1, 2014; Udgivet: 26 December, 2014

Copyright: © 2014 umærkeligt et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer

Finansiering:. National Cancer Institute RO1CA155513. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Endometriecancer er den fjerde mest almindelige ondartet svulst blandt kvinder i USA, med omkring 49.500 nye tilfælde og 8.200 dødsfald i 2013 [1]. Der er to typer af livmoderkræft kategoriseret som type I og type II, afhængigt af histologiske og kliniske resultater. Type I som forekommer hos ca. 75% -85% af tilfældene af endometriecancer er forbundet med opponeret østrogen handling med risikofaktorer herunder fedme, anovulation, og polycystisk ovariesyndrom. Type 1 tumorer er adenocarcinomer, også betegnet endometrioide endometriecancer (EØF) [2]. EØF er kendetegnet ved en række genetiske ændringer, herunder PTEN, β-catenin, PIK3CA, ARID1A, KRAS og ARID5B mutationer [3]. Type II cancere indbefatter serøs carcinoma, clear cell carcinoma, dårligt differentieret, grad 3 endometrioide carcinom og carcinosarcoma eller malign blandet mullerian tumor (MMMT). Disse kræftformer har dårligere prognoser og tegner sig for 40% af dødsfald som følge af endometriecancer [4], [5]. Uterin serøs carcinom (USC) er en særdeles aggressiv læsion, hvor epithelmorfologi ligner æggestokkene serøs carcinom [6]. USC tendens til at sprede i udstrakt grad i vaskulære rum og gennem myometrium [4]. Disse tumorer almindeligvis spredes til maven og lymfeknuder [7]. Det mest bemærkelsesværdige genetisk ændring af USC er p53 mutation, som forekommer hos ca. 90% af tilfældene [3]. P53 mutation fører til protein-overekspression anses for at være en tidlig begivenhed USC carcinogenese, og MSI eller mutation af PTEN er ikke så udbredt [3].

Hidtil xenografundersøgelser på endometriecancer er begrænset til subkutane og ortotopisk (uterus) injektioner af udødeliggjorte cellelinier [8] – [12]. Henviser let kan overvåges vækst af subkutane xenotransplantater på en ikke-invasiv måde, xenotransplantater i ortotopisk eller andre ektopiske steder inden i kropshulrummet give en anden mikromiljø for tumorer at vokse, hvilket ofte sætter bedre vækst, overlevelse og vaskularisering. Nyrerne af NOD

SCID

gamma er et websted, der har været meget anvendt til væv podning fordi dette organ giver højt niveau af blod og lymfe flow, og en positiv interstitiel væske pres [13]. Celler og væv fra både benigne og maligne væv er blevet vellykket podede under nyrekapslen i disse mus. Disse omfatter menneskelige endometrie og leiomyom væv [14] – [16]., Prostatakræft, bryst væv [17], [18], æggestokkene tumorvæv [19], [20]

Derfor målene for denne undersøgelse var at etablere og formere tumorer fra primær avanceret endometriecancer under nyrekapslen af ​​NOD

scid

gamma mus og at karakterisere tumorer ved hjælp af forskellige markører for tumor undertype, EMT, steroid receptorer, og invasion.

Materialer og metoder

Tissue samling

Endometriale tumorer blev opnået fra kvinder, der gennemgår hysterectomies på Northwestern Memorial Hospital. Patienterne forudsat skriftligt samtykke før operation. Denne undersøgelse blev godkendt af menneskelige Emne udvalg af Northwestern University i henhold til US Department of Health Regulations.

subrenal podning af humane primære endometriecancer væv

Alle procedurer, der involverer dyr blev godkendt af Northwestern University Animal Care og brug Udvalg (protokol # 2012-2867). Alle kirurgiske procedurer blev udført under bedøvelse ved intraperitoneal injektion af ketamin /xylazin (90/8 mg /kg) og blev gjort alle bestræbelser på at minimere lidelse. Voksen kvindelig NOD

SCID

gamma (NSG) mus (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME), var ovarieektomiserede (OVX) og suppleret med eller uden 0,36 mg E2 i form af 90-dages release pellets (Innovative Research of America Inc., Sarasota, Fl), som blev implanteret subkutant. Endometriske tumorvævsfragmenter opnåedes fra patienter efter operation. Tumorer blev skåret i små fragmenter (1,5 mm x 1,5 mm) og podet under nyrekapslen fra voksne kvindelige NSG mus (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) som tidligere beskrevet [14]. To fragmenter pr nyre blev podet på den forreste og kaudale sider og begge nyrer blev anvendt. Efter 6-8 ugers podning blev tumorer fjernet, skåret i mindre fragmenter (1,5 mm x 1,5 mm) og derefter transplanteres under nyrekapslen af ​​NSG mus til seriel formering. Xenotransplanterede væv blev mærket som passage 0 (P0), P1, P2, osv afhængigt af antallet af passager fra den oprindelige tumor. Tumorvæv blev fikseret i 10% neutral bufret formalin indeholdende 3,8% formaldehyd (VWR International, West Chester, PA) og efterfølgende paraffinindstøbte til histologisk analyse. Dele af tumoren blev også lynfrosset i flydende nitrogen eller kryopræserveret og opbevaret ved -80 ° C for yderligere analyse.

Mus blev huset i en barriere facilitet, der er patogen fri, i bure med miljøberigelse, og fodret bestrålet gnaver Teklad kost. Mus blev huset i 14 timers lys og 10 timers mørke cyklus. Mus fik analgetika (meloxicam) til smertebehandling i to dage efter kirurgi og observeres dagligt for tegn på lidelse såsom bremset respiration, svigt af grooming og pels ruffling og manglende reaktion på bur aflytning. Ved udgangen af ​​6-8 uger, blev mus aflivet ved CO

2 efterfulgt af cervikal dislokation.

Immunhistokemi

Paraffinindstøbte sektioner blev deparaffineret og farves ved hjælp af Envision DAB HRP-kit (Dako) eller hematoxylin og eosin (H kanin polyklonalt anti-progesteronreceptor 1:1000 (Dako, Cat # A0098), kanin-monoklonalt anti-estrogen receptor α 1:5000 (Abgent, Cat # AJ1268a), rotte monoklonalt anti-Ki67 1:31250 (Dako, Cat # M7249) , ged polyklonale anti-CD31 1:1000 (Santa Cruz, Cat # Sc-1506), monoklonalt muse-anti-E-cadherin 1:50 (BD Transduction Laboratories, Cat # 610.181), monoklonalt muse-anti-Pan-cytokeratin (genkender cytokeratiner 4, 5, 6, 8, 10, 13 og 18) 1:500 (Cell Signaling, Cat # 4545), kanin-monoklonalt anti-vimentin 1:2500 (Abcam, ab92547), kanin monoklonalt anti-p53 1:160 (Cell signalering, Cat # 2527), kanin-monoklonalt anti-PTEN 1:125 (Cell Signaling, Cat # 9188), monoklonalt muse-anti-uPA 01:50 (American Diagnostic GmbH, Cat # ADG3689). For PTEN antistof, SignalStain Antibody Diluent til primær antistof fortynding og SignalStain Boost (HRP, Rabbit) til påvisning af cellesignalering blev brugt. UPAR (ATN-617 mus) antistof 1:300 blev venligst stillet til rådighed af Dr. Andrew Mazar (Northwestern University). Efter inkubation af primære antistoffer blev objektglassene skyllet i TBS-T og artsspecifik (anti-kanin, anti-muse og anti-gede) sekundært antistof konjugeret til en dextran mærket polymer og peberrodsperoxidase blev påført og farves med DAB-opløsning. Billeder blev indfanget på et Leica DM5000B mikroskop.

Kryopræservering af xenotransplanterede væv

Tissue fragmenter på 1,5 mm x 1,5 mm størrelse (ca. 10 styk pr rør) blev anbragt i en opløsning af 10% DMSO og 90% FBS og opbevaret ved -80 ° C. Tumorfragmenter til EØF4 blev optøet ved stuetemperatur, vasket to gange med PBS og straks podet under nyrekapslen af ​​to OVX mus. Syv uger efter transplantation blev mus dissekeret og tumorvækst blev analyseret.

Resultater

Etablering af xenografter under den renale kapsel

Endometriale tumorer blev opnået fra i alt 11 patienter . Fire tilfælde af type II uterin serøs carcinoma (USC), 1 tilfælde af type II uterin clear cell carcinoma (UCCC), 1 tilfælde af malign blandet mullerian tumor (MMMT), og 5 tilfælde af endometrioide endometrisk carcinoma (EØF) blev transplanteret under renal kapsel NSG mus. Blandt disse tumorer, USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4, etableret og voksede under den renale kapsel (tabel 1). Engraftment take blev beregnet som procentdelen af ​​antallet af grafer, der voksede fra det samlede antal transplanterede væv fragmenter. USC1 og EØF4 tage satser adskilte sig ikke om estradiol var til stede eller ej i de ovariektomiserede mus. Den engraftment tage sats for MMMT1 var højere i fravær af estradiol, mens EØF2 havde højere take satser med estradiol, demonstrerer forskellen afhængighed af østrogen for vækst. Grafisk repræsentation af xenotransplantater fra de 4 tilfælde og tilsvarende H K, Nyre. Scale bar; 200 um.

A) primære væv fra malignt blandet mullerian tumor (MMMT1), blev transplanteret under nyrekapslen af ​​NSG mus, som blev OVX med eller uden E2. Ved 6 til 8 uger efter transplantation, blev tumoren høstet og re-transplanteret ind andre mus (1-2 stykker /nyre). Ved P2, invasion af MMMT1 væv til bugspytkirtlen vist. B) primære væv fra endometrioide adenocarcinom (EØF 2), blev transplanteret under nyrekapslen af ​​OVX mus med E2. Ved 6 til 8 uger efter transplantation, blev tumoren høstet og re-transplanteret ind andre mus (1-2 stykker /nyre). Hos P4, blev væv transplanteret i OVX mus uden E2 pellet. På P1 er invasion af EØF2 væv til livmoderen vist. C) primære væv fra endometrioide adenocarcinom (EØF4), blev transplanteret under nyrekapslen af ​​OVX mus med eller uden E2. Ved 6 til 8 uger efter transplantation, blev tumoren høstet og re-transplanteret ind andre mus (1-2 stykker /nyre). Hos P3, er invasion af EØF4 væv til livmoderen vist. Venstre paneler viser H E farvninger af primære væv. Middle paneler viser passerede vævstransplantater og H E farvninger. Højre paneler viser invasion af vævstransplantater og dets H K, Nyre; S, milt; P, pancreas; Peri, bughinden U, Uterus; V, vagina. Scale bar; 200 um.

USC1 blev opnået fra en patient med en endelig patologi diagnose af fase IA grad 3 USC, med lymphovascular plads invasion (LVSI). Engraftment take var høj for dette væv med vækst i de fleste transplantater (tabel 2). Histologisk undersøgelse af tumoren på nyrerne afslørede ingen signifikant invasion ind i nyren med en tydelig grænse mellem nyrerne og tumor (fig. 1). Uanset om estradiol var til stede eller ej, USC1 tumorer voksede på lignende måde (fig. 1, tabel 2).

MMMT1 fra en patient diagnosticeret med malign blandet mullerian tumor med LVSI resulterede i en engraftment tage 42% i nærvær af estradiol og 79% uden estradiol i mus (tabel 2). Desuden tumorer var mindre hos mus behandlet med estradiol sammenlignet med ingen estradiol (fig. 2A). Synlig vækst fandt sted uden for nyre og også infiltreret i nyrerne. Bemærkelsesværdigt, tumorer ved anden passage viste infiltration i hele nyren, med lokale spreading og invasion i bugspytkirtlen, som i musen er inden for tæt på nyren (fig. 2A, tabel 3). Formering af P2 tumorer hos mus med estradiol resulterede i suboptimal vækst, hvilket indikerer en negativ effekt af E2 på vækst af MMMT1.

EØF2 stammer fra en patient med stadie IA grad 2 endometrioide adenocarcinom uden LVSI. EØF2 tumorer blev opformeret i OVX mus med E2 implantater. For at bestemme E2 afhængighed blev vævene ved passagen 4 transplanteret i OVX mus uden E2. Som et resultat, kun 1 væv fra 16 voksede (tabel 2). H K, Nyre. Scale bar; 200 um.

Angivelse af cytokeratin, vimentin og E-cadherin

invasion og metastase af kræftceller er associeret med epitelial-mesenkymale overgang (EMT), hvor epitelceller kan forvandle motile mesenchymal-celler [21]. Tumorxenografter blev farvet for markører af EMT herunder cytokeratin, vimentin og E-cadherin og sammenlignet med normal endometrium, hyperplastisk endometrium, og grad 1 endometriecancer (fig. 4). Kirtelepitel farvedes stærkt positive for cytokeratin i normal endometrium, hyperplasi og grad 1 cancer (fig. 4). Interessant USC1 xenotransplantater farvedes positive for cytokeratin i kernen, mens MMMT1 og EØF2 udviste cytoplasmatisk farvning og EØF4 havde meget svag til ingen farvning. Både primære og xenotransplanterede væv viste lignende mønstre af farvning med undtagelse af USC1 hvor xenotransplantater farves hovedsagelig i kernen i cytokeratin (Fig. 4, S1 Fig.).

Immunhistokemisk farvning blev udført for cytokeratin, vimentin og E -cadherin i xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um.

vimentin var stærkt positiv i både xenotransplanterede og primære væv til USC1, EØF2 og EØF4 væv samt stromale celler i normal endometrium (fig. 4, S2 Fig.). Grad 1 endometriecancer og hyperplasi væv var svagt positive for vimentin i både epitel og stromale celler (S2 Fig.). Den kirtel komponent i MMMT1, viste ingen farvning for vimentin i både xenotransplanterede og primære væv mens stroma var positiv (fig. 4, S2 Fig.).

E-cadherin farvning i det normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 tumorer lokaliseret hovedsageligt i glandulære rum og syntes cytoplasmiske (fig. 4, S3 fig.). I modsætning hertil blev nukleare farvning af E-cadherin observeret i xenotransplantaterne og primære tumorer i USC1, EØF2 og EØF4 mens MMMT1 udstillet mørkt cytoplasmatisk farvning. Manglen på E-cadherin på overfladen af ​​celler ville ændre adhæsionsegenskaber celler fremmer en mere motile fænotype.

Ekspression af p53 og PTEN

Den mest udbredte genetisk ændring i USC forekommer i p53-genet i ca. 90% af tilfældene [3]. Mutationen i p53 ofte manifesterer sig som en stigning i p53 proteinniveauer [22]. Niveauer af p53-protein kunne ikke påvises i kirtler og stroma af normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 endometriecancer (S4 Fig.). Ligeledes p53 farvning var minimal at fraværende i MMMT1, EØF2 og EØF4 i både den xenotransplanterede og primære tumorer (fig. 5, S4 Fig.). I modsætning hertil p53 farvning var stærkt positiv i USC1 xenotransplanteret og primære tumorer. Type I EØF er kendetegnet ved en række genetiske ændringer med de mest fremherskende mutationer i PTEN genet [3]. Alle xenotransplanterede og primære tumorer farvet for PTEN med undtagelse af EØF2 som udviste minimal til ingen farvning i tumorcellerne (fig. 5, S5 Fig.). Forholdsvis, kirtelsystemet rum hyperplasi og grad 1 endometriecancer viste ingen farvning af PTEN mens normale endometrium farvet for PTEN i kirtler og stroma (S5 Fig.).

immunhistokemisk farvning blev gjort for p53, PTEN, uPA og uPAR i xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um.

Angivelse af urokinaseplasminogenaktivator (UPA) systemet

UPA og dets receptor uPAR fremmer proteolyse, der forbedrer tumorvækst og invasion. Både UPA og uPAR er blevet vist at blive udtrykt i fremskredne cancere [23]. Alle tumorxenoplantater og primære tumorer farvet positivt for UPA (fig. 5, S6 Fig.). Ligeledes normal og hyperplastisk endometrium og grad 1 endometriecancer, farvet for UPA i både glandulær og stromale rum (S6 Fig.). I modsætning hertil farvning for uPAR var tydelig i de invasive tumorer, MMMT1, EØF2 og EØF4 med lidt farvning blev observeret i USC1 (fig. 5). UPAR niveauer var fraværende i lønklasse 1 endometriecancer og normal endometrium (S7 Fig.). Disse resultater antyder, at ekspression af uPAR kan bidrage til invasive karakter af de endometriske tumorer i vores system.

Discussion

Formålet med denne undersøgelse var at fastslå patientens afledt tumorxenoplantater af primær endometrisk cancer væv til fortsat formering at tilvejebringe en model til at studere invasion og metastase. Vi rapporterer her etablering af tumorer fra fire patienter med forskellige endometrie typer og kvaliteter kræft, der viser forskellen invasive og metastatiske kapacitet. De implanteret bevarer karakteristika for de oprindelige tumor og vise funktioner, der er unikke for type 1 eller type II endometriecancer.

Som endometrie tumorer bliver mere aggressive og dårligt differentieret, udtryk for hormonreceptorer, ER og PR formindskes, og deres hormon lydhørhed skifter. Afhængigheden af ​​tumor transplantater til E2 blev påvist her. USC1, MMMT1, og EØF4 krævede ikke E2 for podninger til at vokse. Dette kan skyldes det lave niveau af ER i tumorerne. I modsætning hertil EØF2 fastholdt E2 afhængighed på trods af de lave niveauer af ER opdaget. E2 kunne være en ligand til G-protein koblet receptor 30 (GPR30), der er overudtrykt i højkvalitets endometriecancer [24]. Desuden er det muligt, at GPR30 medierer ikke-transkriptionelle virkninger af østrogen på aktiveringen af ​​PI3K /Akt pathway i denne tumor, og fremme vækst [25]. Interessant, mens alle fire xenotransplanterede væv var ERa lav til negativ, alle transplanterede tumorer udtrykte varierende niveauer af PR. PR udtrykkende celler af EØF2 blev lokaliseret omkring invaderende foran nyren. Årsagen til udtryk PR på dette område og dets rolle i invasionen er fortsat uklart. Faktisk er virkningsmekanismen af ​​progesteron gennem dets receptor i avancerede, invasive endometriekarcinom er ukendt. Gener, som reguleres af PR i den normale endometrium er anderledes end i endometriecancer [26]. I betragtning af den pleiotrope aktivitet af PR som er afhængig af den cellulære miljø [15], er det muligt, at PR kunne have både vækst-, invasion- og metastasis- fremme eller inhibering handlinger på tumorcellen. Vores patient xenograftmodel ville være et nyttigt redskab til at dechifrere rolle progesteron på disse tumorer.

For at kræftceller til at invadere, skal celle-celle adhæsion være tabt for at opnå celle motilitet og bryde væk fra tumoren væv. EMT er involveret i formidlingen af ​​individuelle carcinomceller fra primære carcinoma væv, enten midlertidigt eller stabilt [27], [28]. Tab af E-cadherin er det første skridt i EMT, tillader invasion og metastase i mange karcinomer. I USC1, EØF2 og EØF4 blev E-cadherin lokaliseret til kernen mens MMMT1, grad 1 endometriecancer, hyperplasi, og normal endometrium udstillet mørkt cytoplasmatisk farvning. Undersøgelser har vist kernelokalisering af E-cadherin i både godartede og ondartede tumorer [29], [30]. Spaltede fragmenter af E-cadherin er blevet rapporteret til at translokere til kernen [31]. Tab af intakt transmembrane E-cadherin uundgåeligt falde celle til celle adhæsion.

urokinase plasminogen aktivator (UPA) systemet kan medføre nedbrydning af ekstracellulær matrix, forbedre angiogenese og føre til invasion og metastase [32]. Der er lidt kendt om UPA-systemet i endometriecancer. Tidligere Vi identificerede forøget UPA mRNA-ekspression i en uterin serøs carcinom cellelinje (SPEC2) sammenlignet med lav kvalitet endometrioide carcinom cellelinje (Ishikawa) [33]. Receptoren uPAR er vist at være til stede ved højere niveauer i patienter med aggressive og sene stadie livmoderkræft [32], [34]. I vores undersøgelse blev UPA farvning observeret i alle de testede mens uPAR blev udtrykt i de tumorer, der invaderede gennem nyrerne og lokale organer tyder på, at uPAR kunne målrettes til at hæmme invasion i avanceret endometriecancer tumorer.

Sammenfattende har vi med succes etableret og opformeret patient afledt endometriske tumorer fra 4 tilfælde ved hjælp nyrekapslen xenograft system. Denne model kan anvendes til at teste hidtil ukendte forbindelser såvel som kombinationsterapier og er overlegen i forhold til de konventionelle cellelinie xenograftmodeller. Desuden kan biologi tumoren let vurderes at identificere prædiktive markører for respons til behandlingsregimer, som i dag mangler for avancerede og tilbagevendende endometriecancer. Trods den god prognose, der er forbundet med lav kvalitet endometriecancer, især når de opdages tidligt, de avancerede tilfælde er dødelige med meget lidt eller ingen effektive behandlinger for denne sygdom. Studere patientens tumorer som xenografter vil give den meget nødvendige oplysninger til at forbedre behandlinger af aggressiv endometriecancer.

Støtte Information

S1 Fig.

Cytokeratin i primære og xenotransplanterede væv. Immunohistokemisk farvning blev gjort for vimentin i primære og xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Farvning blev gjort for normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 endometrie cancer væv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s001

(TIFF)

S2 Fig.

vimentin i primære og xenotransplanterede væv. Immunohistokemisk farvning blev gjort for vimentin i primære og xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Farvning blev gjort for normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 endometrie cancer væv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s002

(TIFF)

S3 Fig.

E-cadherin i primære og xenotransplanterede væv. Immunohistokemisk farvning blev gjort for E-cadherin i primær og xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Farvning blev gjort for normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 endometrie cancer væv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s003

(TIFF)

S4 Fig.

p53 i primære og xenotransplanterede væv. Immunohistokemisk farvning blev gjort for p53 i primære og xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Farvning blev gjort for normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 endometrie cancer væv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s004

(TIFF)

S5 Fig.

PTEN i primære og xenotransplanterede væv. Immunohistokemisk farvning blev gjort for PTEN i primær og xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Farvning blev gjort for normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 endometrie cancer væv. Pile viser PTEN positive celler i EØF2. K, Nyre; Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s005

(TIFF)

S6 Fig.

UPA i primære og xenotransplanterede væv. Immunohistokemisk farvning blev gjort for UPA i primær og xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 3, 1, 1 og 0, hhv. Farvning blev gjort for normale og hyperplastiske endometrium og grad 1 endometrie cancer væv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s006

(TIFF)

S7 Fig.

uPAR niveauer i primære og xenotransplanterede væv. Immunohistokemisk farvning blev gjort for uPAR i primær og xenotransplanteret USC1, MMMT1, EØF2 og EØF4 tumorer ved passage 5, 1, 1 og 0, hhv. Farvning blev gjort for normal endometrium og klasse 1 endometriecancer væv. Brun farve betyder positiv farvning. Scale bar; 200 um

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s007

(TIFF)

S8 Fig.

ankommer tjekliste

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s008

(PDF)

Tak

Vi er taknemmelige for den Gynækologisk onkologi Team, Doreine Carson , Cary Passaglia, Racher Bers, Dr. Mario J. Pineda og Dr. Kristina M. Mori for samtykkende patienter og opnå væv, Dr. Andrew P. Mazar for at give uPAR (ATN-617) antistof, Vanida A. Serna og Lindsey M. Butler for teknisk hjælp, og de mus Histologi og fænotype Core faciliteter på Robert Lurie Cancer center på Northwestern University.