PLoS ONE: Sammenligning af Expression Profiler i æggestokkene epitel in vivo og kræft i æggestokkene Identificerer Novel kandidatgener involveret i sygdom Patogenese

Abstrakt

Molekylære begivenheder, der førte til epitelial kræft i æggestokkene er dårligt forstået, men ovulatoriske hormoner og et stort antal af livet tid ægløsninger med samtidig spredning, apoptose, og inflammation, øger risikoen. Vi identificerede gener, der reguleres under østrale cyklus i murine æggestokkene overflade epitel og analyseret disse profiler at identificere gener dysreguleret i human ovariecancer, ved hjælp af offentligt tilgængelige datasæt. Vi identificerede 338 gener, der reguleres i murine æggestokkene overfladeepitelet under østrale cyklus og dysreguleret i kræft i æggestokkene. Seks af syv udvalgte ansøgere til immunhistokemisk validering blev udtrykt i serøs ovariecancer, inklusion cyster, æggestokkene overflade epitel og i æggelederen epitel. De fleste blev overudtrykt i kræft i æggestokkene i forhold til æggestokkene overflade epitel og /eller integration cyster (EpCAM, EZH2, BIRC5), selv om BIRC5 og EZH2 blev udtrykt som meget i æggelederen epitel som i kræft i æggestokkene. Vi prioriteret de 338 gener for dem, sandsynligvis vil være vigtigt for æggestokkene udvikling kræft ved

i silico

analyser af kopi nummer aberration og mutation hjælp offentligt tilgængelige datasæt og identificerede gener med etablerede roller i kræft i æggestokkene samt nye gener for som vi har beviser for involvering i kræft i æggestokkene. Kromosom adskillelse dukket op som en vigtig proces, hvor gener fra vores liste over 338 blev overrepræsenteret herunder to (

BUB1

,

NCAPD2

), for hvilke der er tegn på forstærkning og mutation. NUAK2, opreguleret i æggestokkene overflade epitel i proestrus og forventes at have en chauffør mutation i kræft i æggestokkene, blev undersøgt i en større kohorte af serøs ovariecancer, hvor patienter med lavere NUAK2 udtryk havde kortere samlet overlevelse. Afslutningsvis har definerer gener, der aktiveres ved normal epitel i løbet af ægløsningen, der også dysreguleret i cancer identificeret en række veje og nye kandidatgener, der kan bidrage til udviklingen af ​​kræft i æggestokkene

Henvisning.: emmanuel C, Gava N, Kennedy C, Balleine RL, Sharma R, Wain G, et al. (2011) Sammenligning af Expression Profiler i æggestokkene epitel

In Vivo

og kræft i æggestokkene Identificerer Novel kandidatgener involveret i Disease Patogenese. PLoS ONE 6 (3): e17617. doi: 10,1371 /journal.pone.0017617

Redaktør: Thomas Preiss, Victor Chang Cardiac Research Institute (VCCRI), Australien

Modtaget: November 8, 2010; Accepteret: 2 feb 2011; Udgivet: 15. marts 2011

Copyright: © 2011 Emmanuel et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev finansieret af en National Health og Medical Research Council (NHMRC) projekttilskud 389.867 (nhmrc.gov.au) og ved en Marsha Rivkin Center for kræft i æggestokkene Pilot Award (marsharivkin.org). RLB er en Cancer Institute NSW Fellow. Den australske Kræft i æggestokkene Study er støttet af den amerikanske hær Medical Research og Materiel Kommando under DAMD17-01-1-0729, The Cancer Råd Victoria, Queensland Cancer Fund, The Cancer Råd New South Wales, The Cancer Råd South Australia, The Cancer Foundation af Western Australia, The Cancer Råd Tasmanien og NHMRC. Australasian Biospecimens netværk – Onkologi er finansieret af NHMRC. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

epitelovariecancer er den femte mest almindelige årsag til kræft død hos kvinder i den vestlige verden, og den hyppigste dødsårsag fra gynækologiske maligniteter. Trods omfanget af denne kliniske problem, er lidt om mekanismen for neoplastisk transformation. I øjeblikket indsigt i patogenesen af ​​ovariecancer kommer fra kendte faktorer, der øger risikoen. Disse omfatter arvet mutationer i

BRCA1 /2

gener i et mindre antal tilfælde, og en række hormon og /eller reproduktion faktorer mere generelt [1], [2]. I sidstnævnte tilfælde har hormonbehandling og en høj kumulativ antal liv tid ægløsninger med få episoder af anovulation grund af graviditet, oral prævention eller ammer været forbundet med øget risiko. Omvendt er kræft i æggestokkene risiko reduceret med flere live-fødsler, langsigtet amning og oral svangerskabsforebyggende brug [3].

Det biologiske grundlag for ændret risiko forbundet med hormonelle og reproduktive faktorer er væsentlige ukendt, selv om flere der er foreslået hypoteser. Den første, den “uophørlige ægløsning hypotese«, nævner, at ægløsning og dens følgesygdomme øger sandsynligheden for malignitet [1], at graviditeter og orale præventionsmidler er beskyttende, fordi de undertrykker ægløsning [4]. Den anden hypotese er, at cirkulerende niveauer af gonadotropiner øger risikoen for malignitet og at graviditet og oral prævention beskytter ved at undertrykke udskillelsen af ​​disse hormoner [5]. Overdreven niveauer af gonadotropiner, LH og FSH, relateret til den kraftige stigning opstår under ægløsning, foreslås at bidrage til æggestokkene udvikling af kræft. Tabet af gonadal negativ feedback i overgangsalderen, hvilket resulterer i peak koncentrationer af FSH og LH i en alder, hvor forekomsten af ​​kræft i æggestokkene klatrer dramatisk, giver støtte for gonadotropin hypotese er blevet rapporteret [6], og LH niveauer at være forhøjet i BRCA1 mutation bærere i den follikulære fase sammenlignet med ikke-bærere, hvilket antyder, at høje niveauer af LH kan bidrage til BRCA-associeret øget risiko for ovariecancer [7]. Beskyttelse, som flere graviditeter og langvarig oral prævention giver en vis støtte for gonadotropiner teori som begge faktorer er forbundet med lave niveauer af gonadotropiner samt hæmning af uophørlige ægløsning. Men niveauet for beskyttelse, som graviditet og oral prævention, er blevet foreslået, at være større end fra hæmning af ægløsning alene [2] og en tredje potentiel forklaring baseret på epidemiologiske data er, at æggestokkene overflade epitel er beskyttet mod malign transformation ved udsættelse for progesteron eller progesteron-analoger under graviditet eller i orale præventionsmidler [2], [8].

Selv om det er almindeligt menes, at serøse ovariecancer skyldes den æggestokkene overflade epitel og integration cyster dannes når æggestokkene overflade epitel blive fanget inde i æggestokkene [9], en nyere hypotese om indledning af kræft i æggestokkene antyder at der findes precursor læsioner i frynsede ende af æggelederen epitel [10]. Det er muligt, at æggelederen epitel bliver fanget i æggestokkene stroma under heling af ovulatoriske sår hvor den høje hormonale miljø kan forårsage malign transformation på en måde beslægtet med hypotesen om optagelse cyster [9]. Støtte til indledningen af ​​kræft i æggestokkene i æggelederen epitel kan findes undersøgelser, der viser, at der er ligheder i genekspression profiler af serøs ovariecancer og æggeleder epitel, men disse afviger af de observerede æggestokkene overflade epitel [11] profiler. Det er imidlertid uklart, om dette er tegn på indvielse i æggelederen epitel eller differentiering af ovariecancer i retning af en æggeleder-lignende fænotype, der er afgørende morfologisk karakteristik af serøs kræft i æggestokkene.

Tone et al . [11] fundet, at genekspression profiler af æggelederen epitel fra

BRCA

mutation luftfartsselskaber i lutealfasen var mere ligner udtryk profiler af serøs ovariecancer end æggeleder epitel fra luftfartsselskaber i den follikulære fase. Ligeledes har xenografundersøgelser vist, at xenografter af ovariecancer er mere tilbøjelige til at blive etableret, hvis de er implanteret under proøstrus fase af den murine østrale cyklus, når hormon niveauer peak [12]. Disse data tyder på, at modtagelighed af æggestokkene overflade epitel og /eller æggeleder epitel til malign transformation kan ændre sig i løbet af østrale cyklus formentlig som reaktion på svingende hormoner, og er yderligere bevis på en rolle for menstruationscyklus på æggestokkene udvikling af kræft.

Vi har for nylig identificerede gen signaturer knyttet til æggestokkene overflade epitel under forskellige stadier af den murine østrale cyklus [13]. Vi ræsonnerede, at disse gener, som udtrykkes differentielt i æggestokkene overfladeepitelet gennem østrale cyklus forventes at være hormon reguleret og potentielt involveret i processer relateret til ægløsning, herunder celleproliferation, apoptose og inflammation. Dysregulering af veje, der understøtter hver af disse processer er blevet impliceret i neoplastisk transformation af forskellige vævstyper. Vi hypotese, at en delmængde af gener involveret i normale ovarieepitelceller cellefunktioner er også konsekvent afvigende udtrykt i kræft og identifikation af denne delmængde ville hjælpe med at prioritere menneskelige kandidatgener og veje impliceret i progression til kræft i æggestokkene i æggestokkene.

Formålet med denne undersøgelse var at bestemme, om generne reguleres under østrale cyklus og involveret i normal ovariefunktion spiller en rolle i progressionen af ​​normale epitelceller til ovariecancer. For at gøre dette, listen over gener, der differentielt blev udtrykt i æggestokkene overfladeepitelet over østrale cyklus, var cross-matchet mod gener med rapporterede afvigende udtryk i kræft i æggestokkene. For almindelige gener, blev udtryk for en antal kandidater bestemmes af immunhistokemi i normale æggestokkene overflade epitelceller, inklusion cyster, æggeleder og kræft i æggestokkene prøver. Desuden blev et forhold mellem genekspression og kopital, og tilstedeværelsen af ​​mutationer i ovariecancer undersøgt under anvendelse af eksisterende datasæt. Denne fremgangsmåde identificeret en række individuelle kandidatgener og veje, der kan være involveret i patogenesen af ​​kræft i æggestokkene.

Materialer og metoder

Etik erklæring

Denne undersøgelse blev godkendt af Human Research etiske udvalg af Sydney West Area Health service og University of Sydney; protokol referencenummer: HREC2006 /2 /4,21 (2293). Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle deltagere i denne undersøgelse.

Expression microarray analyse af murine ovarieepitelet

Udtrykket array analyse af murine æggestokkene overfladeepitelet er tidligere blevet beskrevet detaljeret [13]. Kort fortalt, total RNA (Stratagene Absolut RNA® Nanoprep eller Microprep Kit, Stratagene, La Jolla, CA), blev ekstraheret fra laser mikrodissekeres ovarie overflade epitel (PALM Robot-Microbeam systemet, microLaser Technologies) fra BALB /c-mus efter 27 dages alderen (umodne, n = 4) og 10-13 ugers alderen under østrale cyklus, ved proestrus (n = 4) og østrus (n = 4) [13]. Microarray dias omfatter ~15,000 udtrykte sekvens tags fra National Institute of Ageing 15 K mus klon bibliotek (Australian Genome Research Facility, Melbourne, Australien) blev hybridiseret med Cy3- og Cy5-mærket cDNA genereret ud fra dobbelt-forstærket RNA. Østrus-fase-specifik genekspression profiler blev opnået ved direkte sammenligning af ovarie overfladeepitelet fra umodne mus og mus aflivet på proøstrus aften (2200 h) og østrus morgen (1000 h) [13].

Ovariecancer genekspression array-profiler

for at identificere gener reguleres under den østrale cyklus, der er udtrykt i human ovariecancer vi sammenlignet vores ægløsning-relateret gen signatur [13] med vores egne offentliggjorte genekspression profiler af ovariecancer [14] – [ ,,,0],16] samt dem fra andre udvalgte offentliggjorte undersøgelser [17], [18]. Vi undersøgte offentliggjort undersøgelser af storstilet genekspression profilering af kræft i æggestokkene prøver offentliggjort op til august 2009 med PubMed (https://www.pubmed.com), og valgte en delmængde af undersøgelser baseret på antallet og histologisk undertype af kræft i æggestokkene tilfælde (serøs kræft var foretrukket), lighed i microarray platform, der anvendes, og ligheden mellem den normale reference (æggestokkene overflade epitel blev foretrukket frem hele æggestok eller cellelinjer). Undersøgelser, som ikke har udgivet entydige gen identifikatorer eller som analyserede cellelinier blev udelukket.

Alle de valgte datasæt indberettede gener udtrykkes differentielt i forhold til en normal henvisning bortset Tothill et al. [16]. Vi bestemt generne udtrykkes forskelligt i de æggestokkene kræfttilfælde undersøgt i Tothill et al. [16] ved at sammenligne ekspressionsprofiler til data fra æggestokkene overfladeepitelet tandbørstningerne poolet fra ti patienter genereret på samme array platform [14]. Array data fra begge kohorter blev RMA normaliseret sammen ved hjælp af R-pakken “affy”. Gener, der var differentielt udtrykte mellem kræft i æggestokkene og normale blev bestemt ved hjælp af betydning analyse af microarrays [19], hvor alle sonder med q-værdi 5% og fold forandring 2 blev udvalgt som differentielt udtrykte gener. Gener blev klassificeret som ‘fejlreguleret’ i kræft i æggestokkene, hvis de opfyldte ovennævnte kriterier.

Sammenligning af murine æggestokkene overfladeepitelet og human kræft i æggestokkene genekspression profiler

Menneskelige ortologer af de 905 murine gener fundet der skal udtrykkes forskelligt i æggestokkene overfladeepitelet under østrale cyklus [13] blev identificeret under anvendelse af listen over muse-humane ortologe gener tilgængelige fra musegenomet Informatics database (https://www.informatics.jax.org; tilgås Sept 2009) . Gener reguleres under den østrale cyklus, som også blev dysreguleret i kræft i æggestokkene blev derefter identificeret ved at matche Entrez Gene id’er og alle gen symboler konverteret til HUGO gen nomenklatur symboler. Vores endelige liste omfattede gener, der blev reguleret under østrale cyklus og vist at blive dysreguleret i kræft i æggestokkene i forhold til det normale i mindst én kræft i æggestokkene datasæt.

Pathway og gen ontologi analyse

MetaCore software (St. Joseph, MI, USA) blev anvendt til at identificere de cellulære veje impliceret af gener reguleres i østrale cyklus og dysreguleret i kræft i æggestokkene og undersøge, om gen ontologier var statistisk overrepræsenteret i disse gen-sæt.

patient vævsprøver

Nærmere oplysninger om patientens kohorte kan findes i tabel 1. Cohort 1 bestod af formalinfikserede paraffinindlejrede vævsprøver af i) serøs ovariecancer fra tidligere ubehandlede patienter (n = 20), ii) normal ovarie (n = 10) og matchende æggeledere (n = 9) fra patienter, der havde gennemgået en profylaktisk salpingo-ooforektomi baseret på en stærk familie historie (n = 6), eller som blev opereret for andre ikke-maligne gynækologiske sygdomme (n = 4), herunder kontralaterale godartede tumorer i æggestokkene i to tilfælde. Kohorte 2 omfattede 96 tilfælde af serøs ovariecancer med serøs æggestokkene tumorvæv repræsenteret i et væv microarray som omfattede fem tilfælde fra Kohorte 1. histopatologi repræsentative sektioner fra alle tilfælde blev gennemgået af erfarne patologer (RS og RB) for at bekræfte diagnosen, histologisk undertype og til lønklasse de carcinom sager ved hjælp af standardiserede kriterier [20] samt at identificere tumor områder til byggeri af vævet array. Core biopsier (1 mm) af paraffinindlejrede tumor- områder blev inkorporeret i et væv microarray med 1,5 mm mellem kerne der anvender en manuel arrayer (MTA-II, Beecher Instruments, WI, USA). Hvert tilfælde var repræsenteret én gang på vævet microarray. Et afsnit fra vævet microarray blev farvet med hæmatoxylin og eosin for at bekræfte inddragelse af tumorvæv i hver kerne og kerner uden tumor blev udelukket fra analysen.

Kliniske definitioner.

Kirurgisk iscenesættelse blev vurderet i overensstemmelse med International Federation of Gynækologiske onkologer klassificering. Progressionsfri overlevelse blev defineret som tidsintervallet mellem datoen for histologisk diagnose og den første bekræftede tegn på sygdom recidiv eller progression baseret på definitioner udviklet af Gynækologisk Cancer Intergroup som tidligere beskrevet [21]. I de fleste tilfælde datoen for progression fik hjælp CA125 kriterier. I tilfælde, hvor CA125 ikke var en markør, eller progression forud en stigning i CA125, var tilbagefald baseret på imaging (fremkomsten af ​​nye læsion), eller i et mindre antal tilfælde, global forringelse af sundhedstilstanden tilskrives sygdommen. Samlet overlevelse blev beregnet fra datoen for histologisk diagnose til datoen for død og censureret på sidste kontakt dato, hvis patienten var i live.

Immunhistokemi

formalinfikseret paraffin indlejrede snit (3 um) blev monteret på Superfrost Plus mikroskopobjektglas (Lomb Scientific, NSW, Australien) og tørret ved 37 ° C i 1 time. Snittene blev afvokset i histolene og rehydreret gennem graduerede af ethanol, før de skylles i vand. Objektglas blev derefter farvet med det passende antistof ved hjælp af EnVision + HRP dual link kit (DAKO, Glostrup, Danmark) ifølge producentens instruktioner. Kort beskrevet blev snit underkastet antigen-genvinding under anvendelse Target Retrieval Solution (DAKO, Glostrup, Danmark) før behandling med 3% H

2O

2 i 10 min. Efter hinanden følgende skylninger med vand og PBS blev snit inkuberet med primært antistof fortyndet i PBS /0,1% Tween-20 ved anvendelse af de fortyndinger og inkubationsbetingelser er angivet i tabel 2. Efter skylning i PBS /0,1% Tween-20 og PBS, snit blev inkuberet i 30 minutter ved stuetemperatur med det mærkede polymer-HRP-opløsning og derefter skyllet som tidligere. Bundet antistof blev visualiseret under anvendelse diamino-benzidin (DAKO, Glostrup, Danmark) fremstillet ifølge producentens anvisninger. Sektioner blev udsat for diamino-benzidin i 1-2 minutter, og reaktionen blev standset i vand. Sektioner blev modfarvet med Harris ‘hæmatoxylin (Amber Scientific, WA, Australien), før dehydrering gennem graduerede ethanoler. Sektioner blev lufttørret før clearing med histolene og montering med normount (Fronine, NSW, Australien). For at kontrollere for uspecifik farvning blev tilstødende sektioner farvet som ovenfor, uden det primære antistof.

Billedanalyse

Farvede sektioner blev analyseret med TissueMap (Definiens, München, Tyskland) . Kort fortalt blev ovarie overfladeepitelet og inklusion cyster i hver sektion af normalt ovarie identificeret til analyse. Et brugerdefineret TissueMap algoritme blev anvendt til at identificere regioner af æggeleder epitel og tumorvæv baseret på celledensitet. Identificerede områder af æggestokkene overfladeepitelet, inklusion cyster, æggeleder epitel og tumorvæv blev derefter analyseret for intensiteten og omfanget af farvning og en histoscore beregnet som følger: (% stærkt farvede celler × 3) + (% moderat farvede celler × 2) + (% svagt farvede celler x 1) /100, således at score mellem 0 og 1 anførte svag farvning; 1 og 2 angivne moderat farvning; og 2 og 3 angivne stærk farvning.

Analyser af kopi nummer aberration og mutation

Vi sammenlignede gener reguleres i østrale cyklus og dysreguleret i kræft til gener i områder af kopi nummer aberration (CNA ) ved hjælp af data fra The Cancer Genome Atlas (TCGA) (https://cancergenome.nih.gov) og en meta-analyse af SNP-baserede CNA analyse i 398 primære epitelial kræft i æggestokkene prøver [22]. Gener inden regioner gevinst (log

2 kopiantals forholdet 0,3) eller tab (log

2 kopiantals forholdet -0,3) i mere end 30% af prøverne i de overordnede datasættet blev hentet fra TCGA data browser (https://tcga-portal.nci.nih.gov/tcga-portal/AnomalySearch.html). Gorringe et al. [22] rapporterede gener i ‘peak’ regioner i kopi nummer forandring, som bestemt ved ‘Genomisk Identifikation af væsentlige mål i kræft “[23] i en delmængde af 240 prøver. ‘Peaks «repræsenterer statistisk signifikante regioner af minimal gevinst eller tab, overvejer både frekvens og amplitude af kopi nummer forandring, i forhold til en beregnet baggrund aberration sats. Gener inden regioner gevinst (log

2 kopiantals forholdet 0,3) eller tab (log

2 kopiantals forholdet -0,3). Mere end 30% af prøverne blev også rapporteret

Vi sammenlignede også gener reguleres i østrale cyklus og dysreguleret i kræft til gener almindeligvis muteret i kræft ved hjælp af to tidligere offentliggjorte datasæt [24], [25] samt COSMIC database (https://www.sanger.ac.uk /genetik /CGP /kosmisk). Futreal et al. [24] udarbejdet en konsensus liste af gener, hvori mutationer bidrager til tumorigenese, mens Greenman et al. [25] screenet 518 proteinkinasegenerne og identificerede en anslået 119 gener med “førerens mutationer.

Statistisk analyse

Alle data blev analyseret ved hjælp af SPSS (version 16, SPSS, Inc.) og en 5% signifikansniveauet blev anvendt overalt. En Chi-square test blev anvendt til at bestemme i) hvis der var en væsentlig overlapning i gener udtrykkes differentielt i murine æggestokkene overfladeepitelet under østrale cyklus og gener udtrykkes differentielt i epitelovariecancer sammenlignet med den normale, og ii) hvis der var en korrelation mellem genkopitallet aberration og retningen af ​​differentiel ekspression. Parret to-halet t-tests anvendtes til sammenligning histoscores på ovariel overfladeepitelet, inklusion cyster og æggeleder epitel, mens en envejs variansanalyse med mindste kvadraters forskel post hoc-analyse blev anvendt til sammenligninger med ovariecancer histoscores. Foreninger mellem histoscores og progressionsfri eller samlet overlevelse blev bestemt ved hjælp af Kaplan-Meier kurver med log-rank test.

Resultater

Ovariecancer genekspression profiler

Vi brugte fem offentligt tilgængelige ovariecancer genekspression datasæt i vores analyse. De valgte undersøgelser var af enten overvejende eller udelukkende serøs undertype, med relativt store antal sager, alle analyseret på en Affymetrix platform og de fleste udnytter æggestokkene overflade epitel børstninger til udtryk sammenligning. Nærmere oplysninger om de offentliggjorte undersøgelser er tilvejebragt i tabel 3. De analyserede tilfælde var for det meste høj kvalitet, sene stadie tumorer og om muligt vi udelukkede data fra grænsetilfælde og ikke-serøse carcinomer (tabel 3). Vi medtaget resultater fra Heinzelmann-Schwarz et al. [17] i vores analyse, på trods af, at de i forhold æggestokkræft væv til normale hele æggestokke, da de integreret deres resultater med 13 andre offentliggjorte ovariecancer udtryk undersøgelser, og disse resultater vil sandsynligvis repræsentere gener konsekvent højt udtrykt i kræft i æggestokkene. Vigtigere, Lu et al. [18] og Heinzelmann-Schwarz et al. [17] kun rapporteret gener, der var opreguleret i æggestokkræft, som indførte en bias i vores analyser.

Det samlede antal gener udtrykkes forskelligt i kræft i æggestokkene i mindst én af de fem datasæt var 7285. trods lignende kohorter og array-platforme der var meget lidt overlap mellem datasæt – kun to gener blev overudtrykt forhold til den normale i alle fem studier (

CD24

,

MAL2

) og kun 14 var opreguleret i fire af de fem studier (tabel 4). Der var 133 gener, der blev konsekvent nedreguleret i de tre undersøgelser, der er rapporteret nedregulering. De 15 gener med udtryk, der var lavest i kræft i æggestokkene i forhold til normal er vist i tabel 4.

Estrale cyklus regulerede gener med afvigende udtryk i æggestokkene adenocarcinom

Tidligere vi rapporteret global gen udtryk ændringer i rene populationer af normal mus æggestokkene overflade epitel fra umodne mus (lav hormon niveauer), cykling mus på proøstrus aften (høj hormon niveauer lige før ægløsning) og ved brunst morgen (lav hormon niveauer lige efter ægløsning) [13] . Vi fandt 905 gener reguleret, de fleste (n = 502; 55%) reguleres på proøstrus aften, lige før ægløsning, co-hændelse med den kraftige stigning i ovulatoriske hormoner [13]. Vi sammenlignet denne liste over 905 gener til de 7285 humane kandidat Ovariecancer gener udvalgt blandt de fem offentliggjorte datasæt. Samlet set blev 338 gener, der reguleres under østrale cyklus dysreguleret i humane ovariecancerprøver som er en signifikant større overlapning end man ville forvente ved et tilfælde alene (p 0,0001, Chi square test). To brunst regulerede gener,

EPCAM

KIAA0101

, blev identificeret i fire af de fem offentliggjorte kræft i æggestokkene datasæt og 25 gener blev identificeret i tre ud af fem humane undersøgelser (tabel 5), den størstedelen bliver opreguleret i cancer. Næsten halvdelen af ​​de overlappende gener (11/27, 41%) har et betydeligt antal ( 5 publikationer) af tidligere rapporter i litteraturen der implicerer en rolle i kræft i æggestokkene, herunder

NME1

, mens 13/27 , 48% repræsenterer nye kandidater (tabel 5).

immunhistokemisk validering af udtryk i kræft i æggestokkene og normale væv

Otte kandidatgener blev udvalgt fra listen over 338 gener reguleres under