PLoS ONE: Impacts microRNA Gene Polymorphisms på følsomhed over miljøfaktorer Førende til Carcinogenese i Oral Cancer

Abstrakt

Baggrund

MikroRNA’er (miRNA) er blevet betragtet som en kritisk faktor i at målrette onkogener eller tumorsuppressorgener i tumorigenese. Den genetiske disposition af miRNA-signalveje i forbindelse med udviklingen af ​​oral pladecellekræft (OSCC) forbliver uløst. Denne undersøgelse undersøgte sammenslutninger af polymorfier med fire miRNA med modtagelighed og klinisk-patologiske karakteristika OSCC.

Metodologi /vigtigste resultater

I alt 895 mandlige forsøgspersoner, herunder 425 kontroller og 470 mandlige kræft i mundhulen patienter, blev udvalgt. Polymerase kædereaktion-restriktion polymorfisme (PCR-RFLP) og real-time PCR blev brugt til at analysere miRNA146a, miRNA196, miRNA499 og miRNA149 genetiske polymorfier mellem kontrolgruppen og behandlingsgruppen. Denne undersøgelse fastslået, at en betydelig sammenslutning af miRNA499 med CC genotype, i forhold til de patienter med TT genotype, havde en højere risiko (AOR = 4,52, 95% CI = 1,24-16,48) i OSCC. Desuden blev en indvirkning af disse fire miRNA genpolymorfisme på modtagelighed betelnød og tobaksforbrug, der fører til kræft i mundhulen også afsløret. Vi fandt en beskyttende virkning mellem udvikling klinisk fase (AOR = 0,58, 95% CI = 0,36-0,94) og væksten tumorstørrelse (AOR = 0,47, 95% CI = 0,28 til 0,79) hos yngre patienter (alder 60).

konklusioner

Vores resultater tyder på, at genetisk polymorfi af miRNA499 er forbundet med oral carcinogenese, og interaktionen af ​​miRNA genetisk polymorfi og miljømæssige carcinogener er også relateret til en øget risiko for oral cancer hos taiwanske.

Henvisning: Chu YH, Tzeng SL, Lin CW, Chien MH, Chen MK, Yang SF (2012) Virkninger af miRNA Gene Polymorphisms på følsomhed over miljøfaktorer Førende til Carcinogenese i Oral Cancer. PLoS ONE 7 (6): e39777. doi: 10,1371 /journal.pone.0039777

Redaktør: Brock C. Christensen, Geisel School of Medicine ved Dartmouth, USA

Modtaget: Januar 7, 2012; Accepteret: 25. maj 2012; Udgivet: 28 juni 2012

Copyright: © 2012 Chu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering til at rapportere

konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

MircoRNAs (miRNA) er små fragment RNA’er, som indeholder ca. 20-22 nukleotider, kan målrette specifikke mRNA og negativt regulere deres translationel effektivitet og stabilitet [1]. Tidligere resultater har vist, at en miRNA kunne påvirke ekspressionen af ​​flere målgener. Ifølge regulere forskellige mål-RNA’er, kan miRNA deltage i cellulære processer, herunder proliferation, differentiering og overlevelse [2]. Altered miRNA udtryk er blevet observeret i flere sygdomme, især i kræft [3].

I Taiwan, oral cancer er den fjerde mest almindelige kræftform blandt mænd. En hurtig stigning i forekomsten af ​​kræft i mundhulen fandt sted i de sidste par år, og rå dødelighed på oral cancer var 10,1 pr 100.000 i 2007 og rangeret som den sjette årsag til kræft død [4]. I de sidste par år, forekomsten af ​​oral cancer var særlig høj i Sydasien. Dette fænomen forekommer især i populationer vant til at tygge arecanødder (betelnødder) møtrik [5]. Epidemiologiske undersøgelser har også foreslået, at modtagelighed for oral cancer er medieret af både miljømæssige kræftfremkaldende stoffer (herunder alkohol indtag, tobaksforbrug, og betelnød tygge) og genetiske faktorer [6]. Stadig flere beviser for, at miRNA er forbundet med hoved og hals /oral cancer [7], og flere miRNA har vist sig at være ureguleret i hoved- og halscancer [8]. Dette forhold er også blevet bestemt i laboratorieundersøgelser [9].

enkelt-nukleotid polymorfisme (SNP) er en variation i DNA-sekvensen, der opstår, når nukleotider (A, T, C eller G) ændring i mindst 1 % af en bestemt befolkningsgruppe. Nogle epidemiologiske beviser for, at miRNA genetiske variationer er associeret med progression til oral cancer [10], [11]. Mens miRNA har fået betydelig opmærksomhed i de senere år har SNP’er i miRNA og pre-miRNA-sekvenser blevet opdaget at blive forbundet med deres kandidatgener [12]. I dbSNP database har over 400 miRNA SNP’er blevet dokumenteret. For at opnå tilstrækkelig magt til vurdering af potentialet forening, vi undersøgte miRNA146a (rs2910164), miRNA149 (rs2292832), miRNA196 (rs11614913), og miRNA499 (rs3746444), dem med mindre allelfrekvenserne ≥5% og også placeret på de pre-miRNA regioner i de kinesiske befolkningsgrupper [13], [14]. I et andet aspekt er disse fire miRNA SNP’er blevet rapporteret som vigtigt for tumorigenese grundet deres målretning på flere vigtige gener [15]. Derfor blev disse fire miRNA SNPs valgt i denne undersøgelse. Vi overvejede også en enestående fænomen i Sydasien, hvor de fleste orale kræft individer har en betelnød tygge vane. Vi kombinerede kliniske resultater status og laboratorium at bestemme forholdet mellem disse SNPs og modtagelighed oral cancer.

Resultater

Den statistiske analyse af demografiske karakteristika er vist i tabel 1. Der var signifikante forskelle i fordelingen af ​​betel-quid tygge (

s

0,001), alkoholforbrug (

s

0,001), og tobak (

s

0,001 ) mellem raske kontrolpersoner og OSCC patienter. Fordi disse forskelle mellem de to grupper kan være confoundere, vi justeret disse egenskaber i yderligere statistiske analyser.

Fordelingen af ​​miRNA SNP genotyper er beskrevet i tabel 2. I vores raske kontrolpersoner, miRNA polymorfier (rs2910164 , rs11614913, og rs3746444) var i overensstemmelse med Hardy-Weinberg ligevægt, bortset rs2292832 (

s

0,001). Vi brugte logistisk regressionsmodel til at estimere de justerede odds ratio (AORs). Efter justering alder, rygning status, alkoholindtag og betelnød tygge vaner, fandt vi, at miRNA499 CC genotyper udviser signifikant (

s

0,05) højere risiko for 4.52- (95% CI = 1,24-16,48) af der OSCC sammenlignet med det tilsvarende vildtype (WT) homozygoter. Men der var ingen signifikant højere oral cancer risiko for personer med den miRNA146a, miRNA149 og miRNA196 polymorfe gen sammenlignet med dem med WT-genet.

I betragtning af, at risikofaktorer såsom betelnød tygge kan ændre genetisk disposition for oral cancer, og de interaktive virkninger mellem risikofaktorer miljømæssige og genetiske polymorfier af miRNA er vist i tabel 3, tabel S1 og tabel S2. Motiver med mindst én C allel af miRNA499 og en møtrik-tygge vane havde respektive højere risiko for 17.33- (95% CI = 9.63-31.17) for at have kræft i mundhulen (tabel 3). Motiver med mindst et G allel af miRNA146a, C allel af miRNA149, eller C-allelen af ​​miRNA196, og en møtrik-tygge vane havde respektive højere risiko for 9.93- (95% CI = 6,01-16,41), 8.67- ( 95% CI = 5,06-14,89), og 10.98- (95% CI = 6,21-19,39) for at have kræft i mundhulen (tabel S1). Ligeledes tobaksforbrug signifikant forhøjede den mundtlige kræftrisiko i fag polymorfe for miRNA146a, miRNA149, miRNA196 og miRNA499 forhold til personer med WT-genet, men uden at ryge (tabel 3 og tabel S2). Vi evaluerede yderligere genet-miljø statistisk interaktion mellem miRNA polymorfier, rygning og betel quid på kræft i mundhulen (tabel 3, tabel S1 og tabel S2). Statistisk signifikans blev fundet for samspillet mellem alle miRNA polymorfier, rygning og betel quid på oral cancer udvikling (p 0,05). Ovenstående resultater tyder på, at miRNA gen polymorfier har en stærk indvirkning på oral cancer modtagelighed i betel nødder og /eller rygning forbrugerne.

At udforske virkningerne af polymorfe genotyper af miRNA på den kliniske status OSCC, vi yderligere klassificeret OSCC patienter i to undergrupper: en undergruppe med mindst en polymorf allel, og den anden undergruppe med homozygote WT alleler. Data for den statistiske analyse viste, at der har polymorfe miRNA499 gen havde en beskyttende virkning af tumorstørrelsen vækst (AOR = 0,46, 95% CI = 0,29-0,72) sammenlignet med de patienter med vildtype (tabel 4). Der blev dog ikke signifikant sammenhæng mellem miRNA416a, miRNA149 og miRNA196 gen polymorfier og clinicopathologic kovarianter observeret (data ikke vist). Endvidere sammenlignet med WT genotype (T /T), patienter med mindst én polymorf C allel af miRNA499 viste en beskyttende virkning mellem udvikling klinisk fase (AOR = 0,58, 95% CI = 0,36-0,94), og væksten tumorstørrelse ( AOR = 0,47, 95% CI = 0,28-0,79), hos yngre patienter (age≤60), som vist i tabel S3. Der blev dog ikke signifikant sammenhæng mellem miRNA499 gen polymorfier og de clinicopathologic kovariater observeret hos ældre patienter (alder 60). (Tabel S4)

Diskussion

I denne undersøgelse har vi forudsat roman information af SNP’er af miRNA499 om associering af oral cancer modtagelighed. Efter at kombinere stor risikofaktor for kræft i mundhulen, disse genetiske påvirker kan også øge modtageligheden for oral cancer. I betragtning af tidligere resultater har miRNA499 blevet bestemt til at udvise høj ekspression i hjerte og skeletmuskulatur væv [16]. Især i hjertet, har tidligere undersøgelser også fundet, at høj ekspression af miRNA499 øger risikoen for cardiomyocythypertrofi og kardiomyopati. Desuden nogle beviser antyder, at miRNA499 kan regulere mitokondrie dynamik igennem ved at målrette specifikke proteiner såsom p53 [17]. Tidligere undersøgelser har også vist, at miRNA499 er stærkt forbundet med hjertesygdomme ved at regulere cellulær differentiering og proliferation [18], [19]. Disse resultater viser, at miRNA499 muligvis er forbundet med hjertesygdomme og også carcinogenese.

På baggrund af den kliniske status, har tidligere undersøgelser vist, at miRNA-486, miRNA-30d, miRNA-1, og miRNA-499 udstillede høj ekspression i serum og blev også forbundet med overlevelse i ikke-småcellet lungecancer [20]. Andre undersøgelser har vist, at den genetiske variant i pre-miRNA kan bidrage til processen med carcinogenese i brystcancer [14], [21], gastrisk cancer [22], livmoderhalskræft [23], [24], og hoved og hals kræft [15]. I denne undersøgelse har vi først påvist, at polymorfi af miRNA499 er forbundet med oral cancer.

Tidligere undersøgelser har fundet, at miRNA146a kan bidrage til tumorudvikling, metastase, prognose og overlevelse i gastrisk cancer og cancer oral [25 ], [26]. En anden konklusion viste også, at miRNA146a polymorfisme kan regulere miRNA146a ekspression [27]. Adskillige laboratorieundersøgelser har også opdaget, at miRNA146a kunne inhibere celledifferentiering og overlevelse i det hæmatopoietiske system [28]. Desuden er forbundet til kræft, kunne miRNA146a undertrykke celleinvasion i bugspytkirtelkræft [29]. I detaljer nogle beviser forbinder miRNA146a med transkriptionsfaktorer, såsom NF-KB [30]. Disse resultater giver en ny vision, der miRNA146a kunne påvirke kræft progression ved at regulere celledifferentiering, men kan ikke påvirke apoptose. Selvom vi fundet nogen sammenhæng mellem miRNA146a og flere kliniske statusser i vores undersøgelse, baseret på disse resultater, kan fremtidige undersøgelser overveje fælles prognose status eller endog overlevelsesrate.

Nylige undersøgelser har identificeret, at miRNA196 kan interagere med flere transkriptionsfaktorer og inddrage i udviklingen af ​​kræft og progression [31], [32]. Nogle resultater antyder, at overekspression af miRNA196 fører til bedre prognose og overlevelse i leukæmi [33]. Desuden er miRNA196 associeret med inflammation i specifikke cancere [34]. Desuden Christensen et al., Rapporterer en polymorfi i den modne sekvens af miRNA196a2 i en case-kontrol undersøgelse (n = 1039) af hoved og hals pladecellekræft (HNSCC) [35]. Da forfatterne stratificeret på tumorstedet de ikke observere en signifikant sammenhæng mellem oral cancer og miRNA196a2, selvom effekten estimat var beskyttende, ligner de resultater, der præsenteres i denne undersøgelse. Selvom årsagen til disse uoverensstemmelser er ikke kendt, kan de forskellige resultater fra rapporten og den foreliggende undersøgelse vedrører race /etnisk forskel.

I betragtning af, at årsagerne til carcinomer er komplekse, vi analyserede flere risiko faktorer, såsom rygning status og betelnød tygge vaner, i denne undersøgelse. Vi forventer, at disse gen-polymorfier kan påvirke modtageligheden af ​​oral cancer. Baseret på resultaterne, observerede vi, at disse polymorfier signifikant forøgede odds ratio i hver gruppe, muligvis fordi funktionerne af disse miRNA regulere opdelinger og proliferationer i tumorprogression. Vi fandt også, at genetisk polymorfi af miRNA499 er forbundet med den distale metastase af OSCC. En tidligere undersøgelse for tarmkræft har fundet, at overekspression af miRNA499 kan lette migration og invasion af cancerceller in vitro, samt metastaser til lunge og lever in vivo [36]. Desuden er denne undersøgelse identificerede også forkhead box O4 (FOXO4) og programmeret celledød 4 (PDCD4) som direkte og funktionelle mål for miRNA499 [36]. Desuden Reis et al., Rapporterer også, at PDCD4 som suppressor af migration og invasion og kan være en klinisk relevant biomarkør med prognostisk værdi i OSCC [37]. Disse ovennævnte resultater kan give en foreløbig forklaring med vores fund for foreningen mellem miRNA499 og distale metastaser af OSCC. Detaljerede relevante mekanismer kan berettige yderligere undersøgelser.

En af begrænsningerne i vores undersøgelse er, at oplysninger om alkohol, betelnød, og tobaksrygning er dikotomiseret ind “stadigt bruger” versus “aldrig-bruger.” Som resultat, mere detaljeret analyse baseret på beløb, længde, og historik med betelnød, alkohol og tobaksforbrug var ikke i stand til at blive udført. Dataindsamlingen har påberåbt sig selvstændige rapporter, hvor der nogle individer kan være tilbageholdende med at indberette deres sædvanlige anvendelse af sådanne stoffer. Derfor kan der være rester confounding fra betelnød, alkohol og tobak misklassifikation. Desuden den funktionelle rolle miRNA i vækst eller metastase af oral cancer er værd for yderligere undersøgelse, som vil indgå i vores fremtidige arbejde. Kloner indeholdende forskellige genotyper af miRNA499 SNP’er vil være konstrueret til at belyse de mulige funktioner miRNA499 (spredning, celle cyklus regulering, migration og invasion) i orale cancer cellelinjer, samt de underliggende mekanismer. Desuden er denne undersøgelse afslørede manglende overensstemmelse for miRNA 149 (rs2292832) genotyper til Hardy-Weinberg ligevægt i kontrolgruppen. En tidligere undersøgelse med 107000 genotyper genereret fra 443 SNPs har fundet, at genotype distributioner til 36 ud af 313 assays (11,5%) blev fraveget HWE (P 0,05) [38]. Ved at søge efter de mulige årsager, assays for SNPs viste sig uspecifikke eller genotyping fejl er blevet identificeret. Men de fandt også afvigelsen fra HWE for de resterende 10 SNPs var uforklarlige. Selvom årsagen til manglende overensstemmelse for miRNA 149 genotyper at Hwe i vores kontrolgruppe er ikke udforsket endnu, kan resultaterne fra ovennævnte undersøgelse giver nogle retning for vores fremtidige studie.

Som konklusion, opdagede vi en signifikant sammenhæng mellem miRNA499 gen polymorfier og modtagelighed oral cancer. Der er imidlertid ingen forbindelser mellem SNP’er og kliniske status. Efter at have overvejet betelnød tygge, som er den mest indflydelsesrige faktor af oral cancer, fandt vi, at disse fire miRNA som bærer mutationen genotype kan øge tilbøjeligheden af ​​oral cancer. Disse genmutationer kan påvirke miRNA target effektivitet og stabilitet og øge forekomsten af ​​oral cancer, men de detaljerede mekanismer fra gen niveauer til protein niveauer, der i sidste ende påvirker tumor udvikling skal klassificeres, måske kortlægning en ny retning for target terapi.

Materialer og metoder

emner og Prøvetagning

Vi rekrutterede 470 mandlige patienter på Chung Shan Medical University Hospital i Taichung og Changhua Christian Hospital og Show Chwan Memorial Hospital i Changhua, Taiwan som en sag gruppe mellem 2007 og 2011. i mellemtiden blev kontroller indskrevet fra fysisk undersøgelse i løbet af disse tre hospitaler, som også de faciliteter, sager blev indsamlet fra. Ved afslutningen af ​​rekruttering, rapporterede i alt 425 mandlige deltagere, der hverken havde self historie af kræft af nogen steder blev inkluderet. Desuden blev individer med oral præcancerøse sygdom såsom oral submukøs fibrose, leukoplakia, erythroplakia, verrucous hyperplasi osv udelukket fra kontrolgruppen. Erhvervsfrekvensen var ca. 91% for tilfælde og 76% for kontrol. Eftersom alle tilfælde og kontroller fortløbende blev indsamlet uden udvælgelse, og på grundlag af oplysninger om spørgeskemaer, blev ingen signifikant genetisk forhold eller familie historie fundet.

Som for sager og kontroller, information eksponering, herunder betelnødder quid tygge ( stadigt vs. aldrig-bruger), tobak (ryger vs. ikke-ryger) og alkoholforbrug (nuværende storforbruger af alkohol, defineret af CDC indtagelse et gennemsnit på mere end 2 genstande om dagen vs. ikke aktuelle tung drinker), var alle stammer fra spørgeskemaer. Mens medicinske oplysninger om sager, herunder TMN klinisk iscenesættelse, primær tumor størrelse, lymfeknude engagement og histologisk klasse, blev indhentet fra medicinske journaler. Oral cancer patienter blev iscenesat klinisk på tidspunktet for diagnosen i henhold til TNM af amerikanske Blandede Cancer (AJCC) [39]. Tumor differentiering undersøgt af patolog ifølge AJCC klassificering. Denne undersøgelse er blevet gennemgået og godkendt af Institutional Review Board og informeret skriftligt samtykke blev opnået fra den enkelte.

DNA Extraction

Hele blodprøver, der er indsamlet fra raske kontroller og mundtlige kræftpatienter, var anbringes i rør indeholdende EDTA, efter centrifugeret og opbevaret ved -80 ° C. Venøst ​​blod fra hvert individ blev trukket ind vakuumrør indeholdende EDTA og opbevaret ved 4 ° C. Genomisk DNA blev ekstraheret ved QIAamp DNA blod mini kits (Qiagen, Valencia, USA) ifølge producentens instruktioner. DNA blev opløst i TE-buffer [10 mM Tris (pH 7,8), 1 mM EDTA] og derefter kvantificeret ved en måling af OD260. Endelige præparat blev opbevaret ved -20 ° C og anvendt som skabeloner til polymerasekædereaktion.

polymerasekædereaktion-restriktionsfragmentlængde-polymorfisme (PCR-RFLP)

miRNA gen rs2910164, rs11614913, og rs3746444 polymorfier blev bestemt ved PCR-RFLP-assayet [15]. De primere sekvenser og restriktionsenzym til analyse af disse miRNA gen polymorfier blev beskrevet i tabel S5. PCR blev udført i alt 10 pi volumen indeholdende 100 ng DNA-skabelon, 1,0 pi 10 x PCR-buffer (Invitrogen, Carslbad, CA, USA), 0,25 U Taq DNA-polymerase (Invitrogen), 0,2 mM dNTP’er (Promega, Madison, WI , USA) og 200 nM af hver primer (MDBio Inc. Taipei, Taiwan). PCR cyklusbetingelser var 5 minutter ved 94 ° C efterfulgt af 35 cykler af 1 min ved 94 ° C, 1 minat 58 ° C i miRNA146a, 1 min ved 63 ° C i miRNA196a2, og 1 min ved 67 ° C i miRNA499, og 2 min ved 72 ° C, med et endeligt trin ved 72 ° C i 20 minutter for at tillade en fuldstændig udvidelse af alle PCR-fragmenter. Resultaterne er vist i figur 1. For hver assay blev passende kontroller (nontemplate og kendt genotype) inkluderet i hver typning løb til at overvåge kontaminering reagens. For at validere resultater fra PCR-RFLP og til kvalitetskontrol, blev omkring 10% af analyser gentages fra forskellige partier og flere tilfælde af hver genotype blev bekræftet af DNA-sekvensanalyse.

(A) For miRNA146a rs2910164 genpolymorfisme vildtype homozygote alleler (C /C) gav en 25 og 122 bp produkter, de heterozygote alleler (C /G) gav 25-, 122- og 147-bp produkter, mens de muterede typen homozygote alleler (G /G ) gav et 147 bp produkt. (B) For miRNA196 (rs11614913) genpolymorfisme vildtype homozygote alleler (T /T) gav en 149-bp produkt, de heterozygote alleler (C /T) gav 24-, 125- og 149-bp produkter, mens muteret typen homozygote alleler (C /C) gav et 24- og 125-bp produkter (c) for miRNA499 (rs3746444) genpolymorfisme, vildtype (T /T) gav 26- og 120-bp produkter; de heterozygote alleler (C /T) gav 26-, 120- og 146-bp produkter, mens de muterede typen homozygote alleler (C /C) gav et 146 bp produkt.

Real-tid PCR

diskrimination af miRNA149 rs2292832 gen polymorfier allel blev vurderet med ABI StepOne ™ Real-Time PCR System (Applied Biosystems) og analyseret ved hjælp af SDS v3.0 software (Applied Biosystems), ved hjælp af TaqMan assay. Det endelige volumen for hver reaktion var 5 pi, indeholdende 2,5 pi TaqMan Genotypebestemmelse Master Mix, 0,125 pi TaqMan prober mix, og 10 ng genomisk DNA. Real-time PCR-reaktion indeholdt et indledende denatureringstrin ved 95 ° C i 10 minutter, efterfulgt af 40 cykler, hver bestående af 95 ° C i 15 sek og 60 ° C i 1 min.

Statistisk analyse

de fordelinger af demografiske karakteristika og genotypefrekvenser mellem cases og kontroller samt klinisk-patologiske funktioner i forskellige genotyper blev analyseret ved Fishers eksakte test, da den lille stikprøvestørrelse var til stede i nogle kategorier af variabler. De odds ratio (OR) med deres konfidensintervaller 95% (CIS) af sammenhængen mellem genotypefrekvenser og kræft i mundhulen blev estimeret ved flere logistiske regressionsmodeller, efter kontrol for kovariater. Parametrisk metode blev anvendt på grund af ikke normal fordeling af nogle estimerede variabler. Vi monteret en logistisk regressionsmodel med de vigtigste virkninger (miRNA genetisk polymorfi, rygning status og betelnødder quid tygge status), samt et samspil sigt mellem dem (miRNA genotyper * demografisk karakteristiske), der sammenligner model mod en model med kun de vigtigste virkninger . Interaktion effekt blev defineret som forskellen mellem deres afvigelse, og yderligere vurderet ved hjælp af likelihood ratio test for at beregne χ

2 og

p

værdier [40]. En

s

værdi på mindre end 0,05 blev betragtet som signifikant. Data blev analyseret på R statistisk software.

Støtte Information

Tabel S1.

Foreningen af ​​miRNA genotype og betelnød tygge status.

doi: 10,1371 /journal.pone.0039777.s001

(DOC)

tabel S2.

Foreningen af ​​miRNA genotype og rygning status.

doi: 10,1371 /journal.pone.0039777.s002

(DOC)

tabel S3.

Forholdet klinisk status og miRNA499 genotyper i orale kræftpatienter (≤60 kun, N = 332).

doi: 10,1371 /journal.pone.0039777.s003

(DOC)

Tabel S4.

Forholdet klinisk status og miRNA499 genotyper i orale kræftpatienter ( kun 60, N = 138).

doi: 10,1371 /journal.pone.0039777.s004

(DOC)

tabel S5.

Primer sekvenser og PCR betingelser for opformering af miRNA SNPs.

doi: 10,1371 /journal.pone.0039777.s005

(DOC)