PLoS ONE: Sammenslutningen af ​​RAS Association Domain Family Protein1A (RASSF1A) Methylering stater og blærekræft Risiko: en systematisk gennemgang og Meta-Analysis

Abstrakt

RAS forening domænenavn familie protein 1a (RASSF1A) er en formodet tumorsuppressorgen beliggende på 3p21, er blevet betragtet spille vigtige roller i reguleringen af ​​forskellige typer humane tumorer. Tidligere rapporter viste, at hyppigheden af ​​RASSF1A methylering var signifikant højere hos patienter sammenlignet med kontroller, men forholdet mellem RASSF1A promotor methylering og patologiske funktioner eller tumor kvalitet af blærekræft er stadig kontroversiel. Derfor En metaanalyse af publicerede studier, der undersøger effekten af ​​RASSF1A methylering status i blærekræft forekomst og association med både pTNM (p, patologisk fase; T, tumorstørrelse, N, node status M, metastatisk status) og tumor klasse i blærecancer blev udført i undersøgelsen. I alt 10 berettigede undersøgelser med 543 tilfælde og 217 kontroller blev indbefattet i de samlede analyser. Under den faste effekter model, OR af RASSF1A methylering patienter blærekræft, sammenlignet med kontrolgruppen ikke-kræft, var 8. 40 med 95% CI = 4. 96-14. 23. Den samlede ELLER med tilfældige effekter model af pTNM og tumor klasse i RASSF1A denatureret patienter, sammenlignet med umethylerede patienter, var 0. 75 (95% CI = 0. 28-1. 99) og 0. 39 (95% CI = 0. 14-1. 09). Denne undersøgelse viste, at RASSF1A methylering synes at være en uafhængig prognostisk faktor for blærecancer. De foreliggende resultater kræver også bekræftelse gennem tilstrækkeligt designede prospektive undersøgelser

Henvisning:. Gao T, Wang S, han B, Pan Y, Song G, Gu L, et al. (2012) Sammenslutningen af ​​RAS Association Domain Family Protein1A (RASSF1A) Methylering stater og blærekræft Risiko: en systematisk gennemgang og meta-analyse. PLoS ONE 7 (11): e48300. doi: 10,1371 /journal.pone.0048300

Redaktør: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, USA

Modtaget: Juli 24, 2012; Accepteret: September 20, 2012; Udgivet: November 6, 2012 |

Copyright: © 2012 Gao et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Undersøgelsen blev støttet af National natur science Foundation of China (81172141 /H1611; https://isisn.nsfc.gov.cn/egrantweb/). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Blærekræft er den mest almindelige malignitet i urinvejene, og den 9. mest almindelige kræftdiagnose hele verden, med mere end 330, 000 nye tilfælde hvert år, og mere end 130, 000 dødsfald om året. Det er generelt anslået, at mandlige: kvinde forekomst forholdet er 3. 08:01. 0 [1]. Den histologiske og patologiske type blærekræft er hovedsageligt urotelial karcinom, også kaldet overgangsordning celle karcinom, der tegner sig for ca. 90% [2]. Andre typer herunder pladecellekræft og adenocarcinom, tegner sig for 3-7% og 2% [3]

DNA methylering af promotorregionerne fremstår som den vigtigste mekanisme inaktivering af GTS (tumor suppressor. gen). DNA methyleres kun på cytosiner placeret 5 ’til guanosiner i CpG-dinukleotider og DNA-methylering er en hyppig epigenetisk begivenhed i mange humane cancere [4]. Denne ændring har vigtige regule-stillende effekt på genekspression, især når der involverer CpG-rige områder kendt som CpG øer, der ligger i de promotorområder af mange gener. I mange tilfælde har afvigende methylering af CpG island gener blevet korreleret med tab af genekspression, og det foreslås, at DNA-methylering giver en alternativ vej til gendeletion eller mutation for tabet af GTS funktion. Markører for afvigende methylering kan repræsentere en lovende fremgangsmåde til overvågning af forekomsten og progression af cancer. Den RASSF1 (Ras-association domæne familie 1) familie af proteiner repræsenterer en klasse af Ras-effektorer, som besidder tumor undertrykkende egenskaber. RASSF1A, en af ​​de syv forskellige isoformer af RASSF1, er et formodet tumorsuppressorgen beliggende på 3p21, en region af fælles heterozygote og homozygote deletioner i forskellige typer af humane tumorer [5] – [6]. Den deler høj sekvenshomologi med en kendt museprotein (Nore1) og kan tjene som en effektor, der medierer de apoptotiske virkninger ved binding Ras i en guanosintriphosphat-afhængig måde [6]. Efterfølgende rapporter viser, at hypermethylering af CpG øer i RASSF1A promotor-regionen, snarere end klassiske mutation /sletning begivenheder, er den væsentligste årsag til tab af udtryk [6]. Celler behandlet med demethylering midler re-express RASSF1A bekræfter rollen af ​​DNA-methylering i inaktivering af RASSF1A i tumorcellelinjer [7]. I mange humane faste orgel tumorer, har methylering af RASSF1 blevet identificeret [Genebank tiltrædelse # AC002481, nukleotider 17730-18370], og dens frekvens varierer mellem 30% og 50% [8], [9]. Endvidere blev RASSF1A methylering rapporteret som en prognostisk indikator i renalcellecarcinom, ikke-småcellet lungecancer, neuroblastom, melanom, endometriecancer og brystcancer [10] – [17]. Alle disse resultater viste, at det kunne spille en central rolle i udviklingen af ​​kræft hos mennesker.

På trods af en række individuelle undersøgelser udført hos patienter blærekræft, den prognostiske værdi af RASSF1A methylering status i blærekræft patientens diagnose og forholdet mellem RASSF1A methylering og patologiske funktioner eller tumor kvalitet af blærekræft er stadig kontroversiel. Derfor er en systematisk gennemgang blev udført af litteraturen med meta-analyse for at få en mere præcis vurdering af dens prognostisk værdi i blærekræft.

Materialer og metoder

Offentliggørelse Valg

Der blev identificeret via en elektronisk søgning af PubMed og EMBASE med følgende nøgleord: blærekræft, UBC, RAS forening domænenavn familie protein1A, RASSF1A, methylering, prognostiske, prognose, patologiske funktioner og tumor kvalitet. Vi har også manuelt søgte referencerne for disse publikationer for at hente yderligere undersøgelser. Kun de, offentliggjort som fuldtekstartikler og engelsk blev inkluderet som kandidater. Søgningen opdateret den 28. juli 2012.

Hvert punkt repræsenterede en separat undersøgelse for den angivne forening. Logor naturlige logaritme OR, vandret linje betyder effekt størrelse. Fig. 1: Begg s tragt plot for offentliggørelse partiskhed test

inklusion og eksklusion kriterier

Der blev udvalgt til analyse, hvis de opfyldte følgende kriterier:. 1) de var oprindelig epidemiologiske undersøgelser om sammenhængen mellem RASSF1A promotor methylering og prognosen for blæren kræftpatienter, patologiske funktioner eller tumor kvalitet af blærekræft; 2) RASSF1A methylering status blev undersøgt ved hjælp af methylering-specifik PCR (MSP) eller kvantitativ MSP (QMSP); 3) de emner i hver patienter undersøgelse omfattede og ikke-kræft kontroller; 3) undersøgelser skal være med ikke kun fuld tekst abstracts til relevante oplysninger udvinding 4) når den samme patientpopulation rapporteret i flere publikationer, kun den seneste rapport eller den mest komplette en blev inkluderet i denne analyse at undgå overlapning mellem kohorter; 5) antallet af patienter og kontroller i hver undersøgelse bør være mere end tre hhv.

Dataindsamling

For hvert støtteberettiget undersøgelse vi samlet information om forfattere, år og kilde til offentliggørelse, land oprindelsesland, inklusionskriterier, udelukkelseskriterier, patologiske træk, tumor kvalitet, RASSF1A methylering frekvenser i ikke-cancer kontroller og patienter med blærekræft, og metoden til påvisning methylering. Alle inkluderede studier anvendte ikke-cancer folk som kontrolgruppe, selvom nogle af dem ikke gav definitionen af ​​noncancer. I undersøgelser definerer ikke-kræft mennesker, er der to definitioner: (1) normal sund person; (2) personer med urologisk sygdom, men ingen forudgående historie uro-genital malignitet. Da det er umuligt at omdefinere ikke-kræft mennesker på en fælles standard, vi kombineret non-cancer mennesker i vores meta-analyse i henhold til deres oprindelige gruppe i hver enkelt undersøgelse. Af disse studier blev tumorklassificering ≤1 defineret som lav kvalitet, og tumorklassificering ≥2 blev defineret som høj kvalitet, der blev defineret af cellulær differentiering. De endelige støtteberettigede artikler udvalgt til yderligere metaanalyse blev evalueret uafhængigt af to anmeldere. Mindre uoverensstemmelser blev løst af forfatterne diskussion.

Meta-analyser og statistisk analyse

Den forreste analyse undersøgte forskellene i frekvensen af ​​RASSF1A methylering mellem patienter blærekræft og ikke-kræft folk ved odds ratio (OR) med den tilsvarende 95% CI. Desuden styrken af ​​sammenhængen mellem RASSF1A methylering og patienternes pTNM (p, patologisk fase; T, tumorstørrelse, N, node status M, metastatisk status) blev og tumor klasse også vurderet af eller med tilsvarende 95% CI. For at vurdere heterogenitet på tværs af undersøgelserne blev en statistisk test for heterogenitet udført baseret på de statistikker [18]. Hvis undersøgelserne blev vist at være homogent med P 0. 05 til Q-statistikken blev resuméet af OR beregnes efter en fast-effekter model (Mantel-Haenszel-metoden), når mellem-studie heterogenitet var fraværende [19]. Ellers blev en random-effects model (DerSimonian og Laird metoden) valgt [20]. Desuden blev stratificerede analyser også udført efter materiale og metode. endvidere var en følsomhedsanalyse, hvorved en enkelt undersøgelse i meta-analyse blev slettet hver gang for at bestemme indflydelsen af ​​de individuelle datasæt til den samlede puljet OR, udført for at vurdere stabiliteten af ​​resultaterne. Potentialet publikationsbias undersøgt visuelt i et tragt grund på log [ELLER] mod standardfejlen (SE) og graden af ​​asymmetri testet af Egger test [21]. Denne meta-analyse blev udført ved hjælp af softwaren STATA udgave 12. 0. Alle P-værdier var baseret på to-sidet test og en P-værdi på mindre end 0. 05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

Undersøgelse Karakteristik

Ifølge vores inklusionskriterier, i alt 10 støtteberettigede undersøgelser [22] – [31], der involverer 543 tilfælde og 217 kontroller blev inkluderet i de samlede analyser. Kendetegnene for disse undersøgelser er opsummeret i tabel 1. Af disse studier blev seks undersøgelser gennemført i Asien, to var i Europa, og resten var i USA, Brasilien. Den methylerede RASSF1A niveauer blev detekteret under anvendelse af enten methylering specifikke PCR (MSP) [22], [24], [25], [28] – [31] eller kvantitativ methylering specifik PCR (QMSP) [23], [26], [ ,,,0],27]. DNA status methylering af RASSF1A promotor blev vurderet i urin eller tumorvæv. Blære kræftformer blev bekræftet histologisk eller patologisk i alle undersøgelser.

metaanalyse

Generelt frekvenser RASSF1A methylering blev testet i ti pålidelige undersøgelser. De vigtigste resultater blev sammenfattet i tabel 2. I henhold til den faste effekter model, den poolede OR af RASSF1A methylering patienter blærekræft, sammenlignet med kontrolgruppen ikke-kræft, var 8. 40 med 95% CI = 4. 96-14. 23. I den stratificerede analyse af materiale, var signifikant øget risiko fundet i urinprøver i detction RASSF1A methylering i blærekræft (OR = 7. 29, 95% CI = 4. 20-12. 65) og i væv (OR = 28 . 76, 95% CI = 3. 73-221. 59). Som stratificeret analyse ved metode, blev også fundet signifikant øget risiko i MSP (OR 14. 76, 95% CI = 6. 89-31. 61) og QMSP (OR = 3. 68, 95% CI = 1. 69-8 . 03). I den evaluerende RASSF1A methylering og pTNM /klasse i blærekræft blev hver udført i seks undersøgelser. De vigtigste resultater blev sammenfattet i tabel 3. Under tilfældige effekter model, den poolede OR for pTNM og tumor klasse i RASSF1A denatureret patienter, sammenlignet med umethylerede patienter var 0. 75 (95% CI = 0. 28-1. 99) og 0. 39 (95% CI = 0. september 14-01.)

Følsomhed analyser

Følsomhedsanalyse afslørede, at fire uafhængige undersøgelser var den vigtigste kilde til heterogenitet [22] -. [ ,,,0],25]. Så heterogenitet RASSF1A methylering patienter blærekræft, sammenlignet med kontrolgruppen ikke-kræft blev nedsat, når disse fire studier blev fjernet (P = 0,49). Desuden blev ingen anden enkelt undersøgelse viste at påvirke den poolede OR som angivet ved følsomhedsanalyser.

publikationsbias

Som vist i figur 1, formen af ​​tragten plots syntes asymmetrisk i methylering sammenligning mellem patienter blærekræft og ikke-kræft kontroller, hvilket tyder på tilstedeværelsen af ​​publikationsbias. Derefter Egger test giver statistiske beviser for tragt plot asymmetri (t = 5. 14, P = 0. 001). For at justere denne skævhed, en trim-and-fill-metoden udviklet af Duval og Tweedie [32] blev gennemført (figur 2). Meta-analyse med eller uden trim-and-fill-metoden ikke drage forskellige konklusioner, hvilket indikerer, at vores resultater var statistisk robust. Tragt plot og Egger test blev udført for at vurdere publikationsbias i studier af sammenhæng mellem RASSF1A methylering og pTNM /stilling, har Formen af ​​tragten plot indikerer ikke nogen tegn på åbenlys asymmetri (figur ikke vist) og Egger test foreslog fravær for offentliggørelse bias (P . 0 05).

diskussion

resultatet af vores systematiske gennemgang viste, at RASSF1A methylering i blærekræft var forbundet med tumor risiko som enten påvist i urin eller væv ved MSP eller QMSP. Imidlertid blev RASSF1A methylering ikke forbundet med øget risiko for at udvikle patologiske funktioner eller tumor kvalitet af blærekræft i sammenligning btween RASSF1A methylerede blære cnacer patienter og umethylerede patienter.

Akkumuleret data dokumenteret, at blære kræftpatienter viser altid RASSF1A methylering [31]. Tidligere rapporter viste også, at genetiske variationer af RASSF1A påvirker blærekræft modtagelighed [28] og hyppigheden af ​​RASSF1A methylering viste sig at være signifikant højere hos patienter sammenlignet med kontroller [27], [28]. For yderligere at bekræfte status RASSF1A promotor methylering i blærekræft patientens diagnose, vi foretaget en meta-analyse af 10 undersøgelser med 543 tilfælde og 217 kontroller til at udlede en mere præcis vurdering af foreningen. Vores resultater antydede, at RASSF1A methylering er en potentiel risikofaktor for blærekræft som påvist i både urin og tumorvæv. Hyppigheden af ​​RASSF1A methylering i blære kræftpatienter var 8. 40 gange højere end i ikke-cancer mennesker. Men MSP er en nonquantitative nonfluorometric PCR-metode til at undersøge promotor methylering. Denne fremgangsmåde kan ikke detektere lave koncentrationer af methylerede alleler i modsætning QMSP som kan registrere op til 1/1000 methylerede alleler [27]. I denne metaanalyse, både af dem præsentere en positiv effekt i detektering i RASSF1A methylering. Endvidere blev hyppig methylering påvist i RASSF1A med betydelige foreninger med tumor stadie, grad og muskel invasiv [30], [38], som ikke blev fundet i andre undersøgelser [27], [31]. For at løse de modstridende resultater, vi også foretaget en meta-analyse, som viste, at frekvensen af ​​RASSF1A methylering ikke korrelerer med pTNM eller tumor kvalitet af patienter blærekræft. Disse resultater antydede, at inaktivering af RASSF1A kan være en tidlig begivenhed i blæren carcinogenese.

Epigenetisk ændringer er kendetegnende for human cancer. Især DNA methylering er en almindelig mekanisme til inaktivering tumor-suppressor og andre kræft gener i tumorceller [33]. De afvigende mønstre for methylering er blevet anvendt som mål for påvisning af tumorceller i kliniske prøver såsom vævsbiopsier eller kropsvæsker [34]. RAS forening domænenavn familie protein 1A (RASSF1A) er en formodet tumorsuppressorgen placeret på 3p21, er blevet betragtet spille vigtige roller i reguleringen af ​​forskellige typer af humane tumorer [5], [6]. Det er blevet veldokumenteret, at Ras-proteiner binde en bred vifte af effektormolekyler og mediere tumor undertrykkende virkninger såsom terminal differentiering og apoptose samt onkogene virkninger [35], [36]. Endvidere aktivering af Ras-signalvejen er en vigtig begivenhed i kræftudviklingsproces. Mutationer i Ras protoonkogen almindeligvis forekommer i cancer, hvilket fører til dens hyperaktivering, uregelmæssig vækst signalering, og ukontrolleret celleproliferation. Det blev foreslået, at RASSF1 kunne mediere Ras-aktiverede vækstinhibering gennem sin proapoptotiske funktion og RASSF1A inaktivering kan være en tumorigen mekanisme, der er forskellig fra den onkogene aktivering af Ras-signalering i tumorer [37]. Tidligere undersøgelser har også vist, at arsen forureningen er forbundet med DAPK og RASSF1A methylering i blærekræft [39], [40]. Det kan også være en af ​​de faktorer, der bidrager til denne særskilte methylering epigenotype.

Efter alt, metaanalyse findes stadig nogle begrænsninger. Først den kontrol, der indgår i analysen var ikke ensartet. De fleste af kontrollerne var sund bestand, mens nogle af dem var patienter. På denne måde, nogle af kontrollerne, især dem, der har benign sygdom bør have forskellige risici, der lider af blærekræft. For det andet var der kun to undersøgelser til påvisning i væv i undergruppen analyse. Prøven størrelse var for lille til at have en betydelig magt til at udforske den virkelige forening. For det tredje var der kun seks litteratur indskrevet i meta-analyse af sammenhæng mellem methylering og pTNM /kvalitet, og den mellem-studiet heterogenitet blev observeret. Derfor blev de samlede periferi beregnet af tilfældig model. For det fjerde kunne de detaljerede oplysninger (såsom alder, køn og livsstil) ikke spores så vores ujusterede estimater bør bekræftes ved yderligere undersøgelser.

Konklusion

Vores metaanalyse foreslog, at detektion af RASSF1A methylering i udtømt urin er en potentiel ikke-invasiv diagnostisk værktøj i blærekræft. Det er nødvendigt at foretage store prøve størrelse studier af sammenhængen mellem RASSF1A methylering og blærekræft risiko, i sidste ende fører til vores bedre forståelse.