PLoS ONE: kliniske betydning af Frizzled Homolog 3 Protein i kolorektal cancer Patients

Abstrakt

Frizzled homolog 3 receptor var opreguleret i flere gastrointestinale kræftformer såsom spiserøret og gastrisk kræft. Desuden har frizzlede homolog 3 nylig rapporteret at blive udtrykt i kolorektale adenom prøver. I den foreliggende undersøgelse, undersøgte vi den kliniske betydning af frizzlede homolog 3 protein i patienter med tarmkræft. Ved hjælp af immuncytokemisk farvning blev frizzlede homolog 3 udtryk undersøgt i 186 kolorektal cancer prøver, 79 kolorektal adenom prøver, 133 kolorektale polypper prøver, 127 kolorektal cancer prøver med lymfeknude og /eller fjernmetastaser, 310 prøver af forskellige ikke-kolorektal cancer metastatiske carcinomer og 40 prøver med samtidig forekomst af kolorektal cancer, kolorektal adenom og kolorektal polyp. Statistisk analyse blev anvendt til at korrelere frizzlede homolog 3 protein udtryk til clinicohistopathological faktorer, gentagelse /metastaser og overlevelse efter opfølgning i 42 måneder i patienter med tarmkræft. Frizzled homolog 3 protein blev udtrykt i 100% kolorektal cancer prøver, 89% tyktarms- adenom prøver, 75% kolorektal polyp prøver og 69% normale kolorektale epitelvæv. Desuden blev frizzlede homolog 3 immuncytokemiske scorer højt korreleret med kolorektal cancer progression. Endvidere blev frizzlede homolog 3 udtrykt i en forholdsvis lavere procentdel af metastatisk hepatocellulært carcinom og metastatisk renal clear cell carcinoma med fokal og meget svag farvning end andre metastatiske tumortyper. På den anden side, de frizzled homolog 3 immuncytokemiske snesevis af kolorektale adenomer med synkrone kolorektale karcinomer var væsentligt højere end de rene kolorektale adenomer. Statistisk analyse viste, at frizzled homolog 3 immuncytokemiske scoringer var forbundet med Dukes stadie og lymfeknude-status. Endelig lagdelte grupper af patienter med tyktarmskræft haft betydelige forskelle i deres gentagelse /metastaser og overlevelse. Afslutningsvis har den nuværende storstilet undersøgelse viste klart, at frizzlede homolog 3 protein kan generere klinisk vigtig information til patienter med tarmkræft.

Henvisning: Wong SCC, han CW, Chan CML, Chan AKC, Wong HT, Cheung MT, et al. (2013) kliniske betydning af Frizzled Homolog 3 Protein i tyktarmskræft patienter. PLoS ONE 8 (11): e79481. doi: 10,1371 /journal.pone.0079481

Redaktør: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan

Modtaget: May 5, 2013; Accepteret: September 23, 2013; Udgivet: November 8, 2013 |

Copyright: © 2013 Wong et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af det direkte tilskud fra den kinesiske University of Hong Kong (Project Code: 2.041.412) og en privat donation. Men der finansierer havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet.

Konkurrerende interesser: Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Kolorektal cancer (CRC) er den tredje hyppigst diagnosticeret kræft på verdensplan, der tegner sig for mere end. 1 million tilfælde og 600.000 dødsfald hvert år [1]. Udviklingen af ​​CRC er en multi-trins proces, og denne sygdom kan håndteres hvis de opdages i sin tidlige fase, når det er for det meste symptomfri [2-4]. Trods betydelige forbedringer inden for påvisning, diagnosticering og behandling af CRC i de sidste par årtier, den langsigtede prognose for metastaserende CRC patienter forbliver fattige [5,6]. Klinisk dokumentation viser, at de nuværende mellemstationer kriterier, som er baseret på kliniske og patologiske fund, selv om nyligt reviderede, ikke afspejler variationen i prognose og overlevelse for metastatisk CRC [7]. Derfor er en præcis prognostisk markør, der 1) bestemmer den biologiske natur og adfærd CRC, og 2) afspejler overlevelse forskelle og kliniske erfaringer, vil være af største betydning for at optimere individuel behandling af CRC patienter.

Wnt faktorer omfatter en stor familie af udskilte glycoproteiner, der deltager i fosterudviklingen ved at regulere væv mønster, organogenese, specifikation af kroppen plan og fremme vævshomeostase i den voksne [8]. På det cellulære niveau, Wnt faktorer styrer proliferation, differentiering, overlevelse, motilitet og polaritet [9]. Stram styring af Wnt-signalering er afgørende for den korrekte orkestrering af udvikling og afvigende konstitutiv aktivering af Wnt signalvejen vil føre til ukontrolleret celleproliferation, vækst og overlevelse, derfor fremme udviklingen af ​​cancer [9]. Frizzled homolog protein (FZD) er en syv-pass transmembrane typen receptor og ti medlemmer (FZD1-FZD10) er blevet identificeret hos mennesker [10]. Wnt er en ligand af FZDs og består af 19 familie gener hos mennesker [11]. Bindingen af ​​Wnt-ligander til deres celleoverfladereceptorer transducerer intracellulære signaler via enten kanoniske eller ikke-kanoniske Wnt-signalvejen. I den kanoniske Wnt signalvejen, Wnts binder til et kompleks af FZD og low-density lipoprotein-relaterede receptorer 5 og 6 [12-14]. De resulterende signaler forhindre β-catenin phosphorylering med en multiproteinkompleks sammensat af adenomatøs polypose coli, glycogensyntasekinase 3β, casin kinase 1 og axins og fremme stabiliseringen af ​​cytosolisk β-catenin som noget af det vil translokere ind i kernen [12- 14]. Den nukleare β-catenin vil associere med T-celle-faktor /lymfocyt enhancer transkriptionsfaktorer til aktivering målgener involveret i celleoverlevelse, proliferation eller invasion [12-14]. Den ikke-kanoniske Wnt signaleringsvej består af Wnt /Ca

2+ pathway og Wnt /c-Jun N-terminal kinase (planar cellepolaritet) pathway og Wnts binder til et kompleks bestående af FZD, receptortyrosinkinase-lignende orphan receptor 2 /receptor relateret til tyrosinkinase til aktivering af downstream signalering [12-14]. I Wnt /Ca

2+ pathway, Wnt aktiverer intracellulære Ca

2+ signalering, samt Ca

2+ – afhængige proteinkinaser, såsom proteinkinase C og calmodulin-afhængig proteinkinase II [12- 14]. I Wnt /JNK-vejen, receptor stimulation aktiverer Dishevelled, som igen aktiverer Rho-familien af ​​GTPaser såsom RhoA og Rac [12-14]. RhoA stimulerer c-Jun udtryk gennem phosphorylering af c-Jun af Rho associeret kinase [12-14]. Sammenfattende FZD spiller en afgørende rolle i både kanoniske og ikke-kanoniske veje.

Menneskelig

FZD3

blev kortlagt til kromosom 8p21 [10,15].

FZD3

mRNA udtrykkes i forskellige normale væv (skeletmuskel, nyre, pancreas, cerebellum og cerebral cortex) [10] det er opreguleret i flere kræftformer (esophageal carcinoma, lunge pladecellecarcinom, primær akut og lymfoblastisk leukæmi, myelom, lymfom og Ewing sarkom) [16-19]. En nylig rapport har vist, at

FZD3

mRNA blev udtrykt i en lille gruppe af sporadisk adenom og familiær adenomatøs polypose adenom væv [20]. Betydningen af ​​det vides ikke endnu, og det vil derfor være interessant at undersøge ekspressionen af ​​FZD3 protein i en stor kohorte af primære og metastatiske CRC prøver og kolorektal adenom (CAD) prøver. De indhentede oplysninger vil være meget nyttigt for os at undersøge den prognostiske potentiale FZD3 protein hos patienter med CRC. Endvidere blev ekspressionen af ​​FZD3 protein i andre typer af metastatiske cancere også undersøgt for at undersøge, om FZD3 protein kan anvendes som et supplement diagnostisk markør for metastatisk CRC.

Materialer og metoder

Etik Statement

Undersøgelsen blev gennemført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter eller pårørende til brug af disse prøver i forskningen. Da patienten samtykke ikke var muligt for arkivering væv som nogle patienter blev afdøde på tidspunktet for undersøgelsen, den etiske komité netop har givet afkald på, at et samtykke fra de patienter. Undersøgelsen blev godkendt af Clinical Research etiske komité af Queen Elizabeth Hospital, Hongkong særlige administrative område (HKSAR).

vævsprøver

Syv kohorter af formalin fikseret, paraffin-indstøbt (FFPE ) prøver blev rekrutteret: 1) CRC med Dukes klassifikationssystem fase A (43), fase B (48), fase C (63), fase D (32), i alt: 186, 2) CAD med mild dysplasi (25), moderat dysplasi (28), svær dysplasi (26), i alt: 79, 3) colorectal polyp, der specifikt defineret som ikke-adenomatøse eller ikke neoplastiske polypper, som består af unge (35), hyperplastiske (40), Peutz-jeghers ( 28) og inflammatoriske polypper (30), i alt: 133, 4) en FFPE blok med lymfeknude metastaser fra hver Dukes C prøve, i alt: 63, 5) en FFPE blok hver med lymfeknude og fjernmetastaser fra hver Dukes D prøve, total: 64, 6) tre hundrede og ti ikke-CRC metastatiske carcinomer som den primære tumor var henholdsvis hepatocellulært carcinom (HCC) (23), renal clear cell carcinoma (RCCC) (25), pladecellecarcinom (SCC1) (30) , lunge adenocarcinom (LAC) (25), lunge ikke-småcellet carcinom (LNSCC) (27), papillær thyroidcarcinom (PTC) (24), brystcarcinom (BC) (28), ovarie clear cell carcinoma (OCCC) ( 30), cervikal ikke-småcellet carcinom (CNSCC) (20), æggeleder serøs adenocarcinom (FTSAC) (22), overgangs- cellecarcinom (TCC) (23), småcellet carcinom (SCC2) (15) og carcinoma med neuroendokrin differentiering (CND) (18), 7) prøver fra fyrre CRC patienter (10 Dukes A, 10 Dukes B, 12 Dukes C, 8 Dukes D) med samtidig forekomst af CRC, adenom og polyp (120), blev hentet fra arkiverne (2005-2008) i Anatomisk Patologi og Cytologi Laboratory, Patologisk Institut, dronning Elizabeth Hospital, Hongkong, for FZD3 immuncytokemisk (ICC) farvning.

De fleste tilfælde af de kolorektale adenokarcinomer i første kohorte var moderat differentieret (78%), mens resten var enten godt differentieret (5%) eller dårligt differentierede (17%). Kønsfordelingen af ​​adenocarcinom patienter var 58% mænd og 42% kvinder. Alderen varierede fra 42 til 89 år. Af de 79 adenom prøver undersøgt i kohorte 2, 59% var rørformet, 35% var tubulovillous, og 6% var villøse adenomer. Procentdelen af ​​mild, moderat og svær dysplasi i adenomer var 32, 35 og 33, henholdsvis. Kønsfordelingen af ​​adenom patienter var 53% mænd og 47% kvinder. Alderen varierede fra 28 til 85 år gammel. Polypperne evalueret i kohorten 3 var juvenile (26%), hyperplastiske (30%), Peutz-jeghers (21%), og inflammatoriske polypper (23%). Af de 133 polypper, køn fordeling var 51% mænd, 49% kvinder og alder varierede fra 23 til 76 år. Den kliniske information af patienterne med samtidig forekomst af CRC, adenomer og polypper i den syvende gruppe var moderat differentieret (75%), godt differentieret (7%) eller dårligt differentierede (18%). Kønsfordelingen af ​​adenocarcinom patienter var 60% mænd og 40% kvinder. Alderen varierede fra 45 til 87 år

Antistof

mus monoklonale anti-humant FZD3 antistof (1: 100 fortynding, klon 169.310, MAB1001, R 1 = svag; 2 = moderat; 3 = stærk; og 4 = meget stærk. ICC score varierede fra 0 til 400. scoring af procent og farvningsintensitet blev målrettet til en) CRC celler, 2) CAD celler og 3) tilstødende normale epitelceller. Membranøs farvning bør være det forventede resultat. vores erfaring viste imidlertid, at ICC farvning hjælp diaminobenzidin som chromogen ville producere en fortykket membranøs farvning, som svarede til cytoplasmatisk farvning. Desuden er antistoffet anvendes i denne undersøgelse havde den bedste ydelse blandt de antistoffer, som var blevet testet.

Statistisk analyse

Forskellen i ICC snesevis af FZD3 protein blandt CRC, CAD og tilstødende normale kolorektal epitelceller blev undersøgt ved hjælp af ikke-parametrisk Kruskal-Wallis test. Endvidere blev ikke-parametrisk Spearman rank korrelation test, der anvendes til at undersøge, om FZD3 ICC scoringer blev korreleret med CRC progression og Dukes klassifikation stadier. Mann Whitney U test blev anvendt til at undersøge, om ICC snesevis af CAD med synkrone colorektale carcinomer havde signifikant forskel fra dem af ren CAD. For korrelation til kliniske parametre blev multivariate regression anvendt til at analysere, om FZD3 ICC scoringer var korreleret med klinisk-histopatologiske faktorer af patienterne og chi-square test blev anvendt til at undersøge associationen mellem FZD3 ICC scores og tilbagevendende eller metastatisk CRC. Den samlede overlevelse blev defineret som at der fra datoen for operationen til datoen for død på grund af kræft. Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til at bestemme sandsynligheden for overlevelse og log-rank test blev anvendt til sammenligning af overlevelse mellem grupperne og Cox proportional hazard model blev anvendt til at bestemme de uafhængige prognostiske faktorer for overlevelse. (Statistisk pakke til Samfundsvidenskab Version 16.0 software til Windows, IBM SPSS statistik, Chicago, IL., USA). En

P

værdi 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant i alle analyser. Alle

P

værdier er tosidede.

Resultater

ICC farvning

Som nævnt i afsnittet ICC farvning og evaluering, en fortykket membranøs farvning, som lignede cytoplasmatisk farvning blev opdaget. Blandt de 955 dias, som vi har undersøgt, blev inter-individuel variation findes kun i 16 slides (1,7%) og konsensus blev nået efter drøftelse ved hjælp af en multi-headed mikroskop.

ICC farvning viste, at FZD3 protein blev udtrykt i 100% (186/186) af CRC prøver, 89% (70/79) af CAD prøver, 75% (100/133) af kolorektale polypper prøver og 69 % (129/186) af normale colorektale epitelvæv støder op til CRC væv. Et repræsentativt mikrofotografi af hver prøvetype i første kohorte blev vist i figur 1. Positiv styring af esophageal carcinoma viste intens positiv cytoplasmatisk farvning hvorimod negativ kontrol ikke havde nogen ICC-farvning (figur 1 E og 1 F). Detaljeret analyse viste, at immunoreaktiviteten af ​​FZD3 protein, som vist med ICC scores, havde signifikant forskel blandt CRC, CAD, kolorektal polyp og normale colorektale epitelvæv (figur 2,

P

0,0001, Kruskal-Wallis test) og den rækkevidde og medianen af ​​ICC scores i forskellige prøvetyper blev vist i tabel 1. FZD3 ICC scoringer var stærkt korreleret med stadierne i progression af CRC (

P

0,0001, Spearman rank korrelation test ). Desuden blev ICC snesevis af FZD3 protein i CRC prøver signifikant korreleret med Dukes stadie (Figur 3,

P

0,0001, Spearman rank korrelation test). Desuden viste vores resultater, at FZD3 protein blev udtrykt i 100% metastatiske CRC-celler i lymfeknuder eller /og fjerntliggende organer fra Dukes 3 og 4 prøver, henholdsvis (figur 4). I overensstemmelse med disse resultater, vi fortsatte med at undersøge, om FZD3 kan anvendes som et supplement diagnostisk markør for metastatisk CRC ved at udføre FZD3 ICC farvning i 310 ikke-CRC metastatisk karcinom prøver. Resultaterne viste, at FZD3 protein blev udtrykt i 17% (4/23) af HCC, 12% (3/25) af RCCC, 80% (24/30) af SCC1, 84% (21/25) af LAC, 82% (22/27) af LNSCC, 88% (21/24) af PTC, 86% (24/28) af BC, 80% (24/30) af OCCC, 85% (17/20) af CNSCC, 82% (18/22) af FTSAC, 74% (17/23) af TCC, 100% (15/15) af SCC2 og 100% (18/18) af CND (figur 5A og 5B). I tilfælde med positive resultater, viste detaljeret undersøgelse, at farvningen var omdrejningspunkt og meget svag i HCC, RCCC i forhold til dem, der ved andre tumorer (figur 5B og 6). Vejviser Tyktarmskræft

kolorektal adenom

Colorectal polyp

Tilstødende normalt epitelvæv

Antal specimens18679133186Range af ICC scores243 til 4000 til 3470 til 3600 til 279Median ICC scores 32724119297.5Table 1. række og medianen af ​​ICC scores i forskellige prøvetyper.

CSV Hent CSV

(A) Procentdel af forskellige ikke-CRC metastatiske karcinomer med FZD3 ICC farvning og (B ) ICC snesevis af FZD3 i forskellige ikke-CRC metastatiske karcinomer. (HCC = hepatocellulært carcinom, RCCC = renal clear cell carcinoma, SCC1 = pladecellecarcinom, LAC = lungeadenocarcinom, LNSCC = lunge ikke-småcellet carcinom, PTC = papillær thyroid carcinoma, BC = brystcarcinom, OCCC = æggestok clear cell carcinoma , CNSCC = livmoderhalskræft ikke-småcellet karcinom, FTSAC = æggeleder serøs adenocarcinom, TCC = overgangsordning celle karcinom, SCC2 = småcellet karcinom og CND = karcinom med neuroendokrine differentiering).

Lignende observationer blev fundet for prøver med samtidig forekomst af kolorektal cancer, CAD og kolorektal polyp. ICC farvning for FZD3 blev observeret i 100% (40/40) af CRC, 93% (37/40) af CAD, 70% (28/40) af kolorektal polyp. Desuden blev FZD3 ICC scorer højt korreleret med de stadier af udviklingen af ​​CRC (

P

0,0001, Spearman rank korrelation test). Af interesse, ICC snesevis af CAD med synkrone kolorektale karcinomer var væsentligt højere end af ren CAD (

P

0,001, Mann Whitney U test, figur 7).

Multivariat regressionsanalyse

blev anvendt Multivariat regressionsanalyse at undersøge, om FZD3 ICC scoringer blev korreleret med de clinicohistopathological faktorer i 186 Dukes A til D CRC patienter. Væsentlige foreninger blev fundet med Dukes stadie (

P

0,001) og lymfeknude status (

P

0,05), men ikke for alder (

P

= 0,547) , køn (

P

= 0,813), tumor fase (

P

= 0,284) og graden af ​​differentiering (

P

= 0,462).

recidiverende eller metastatisk CRC

Den mediane antal FZD3 ICC scorer på 154 Dukes A til C CRC patienter var 321,5. Brug af denne median nummer som cut-off punkt, 27 patienter med FZD3 ICC score 321,5 og 8 patienter med FZD3 ICC score ≤ 321,5 havde recidiverende eller metastatisk CRC efter opfølgning i 42 måneder, og sammenhængen mellem FZD3 ICC scores og tilbagevendende eller metastatisk CRC var stærkt signifikant (Chi-square test: χ

2 = 13,34

P

0,001).

Samlet overlevelse CRC patienter

Alt i alt overlevelseskurver blev afbildet for CRC patienter med FZD3 ICC scores 327 og dem med FZD3 ICC scores ≤ 327, hvor 327 er det mediane antal FZD3 ICC scorer på 1

st kohorte af 186 Dukes A til D CRC patienter. Vores resultater viste, at overlevelsen for disse 2 grupper af patienter var signifikant forskellige (

P

0,0001, log-rank test, figur 8A). For at analysere dataene i en mere specifik måde, blev FZD3 ICC scoringer opdelt i 4 grupper efter tilpasse den i prioriteret rækkefølge: 1) høj FZD3 udtryk: højest 25% (76% til 100%) ICC scoringer, 2) moderat høj FZD3 udtryk: næsthøjeste 25% (51% til 75%) ICC scores, 3) moderat lav FZD3 udtryk: næstlaveste 25% (26% til 50%) ICC scores og 4) lav FZD3 udtryk: laveste 25% (0 % til 25%) ICC scores. Som vist i figur 8B og 8C, overlevelsen mellem gruppe 1 og 4 og gruppe 2 og 3 var signifikant (

P

0,0001 for A vs D og

P

0,05 for B vs C, log-rank test). Endelig blev de uafhængige prognostiske faktorer af samlet overlevelse identificeret af Cox proportionel risiko regressions model fundet at være FZD3 ICC score (

P

= 0,016) og lymfeknude status (

P

= 0,037) .

Diskussion

FZD3 er en receptor for Wnt-signalvejen og FZD3 protein er nødvendig for udviklingen af ​​betydelige fiber skrifter i rostrale centralnervesystemet [22], neurale våbenskjold [23] og hårsækken udvikling [24]. Desuden FZD3 protein har en fremtrædende rolle i Wnt-induceret neuritvækst i Ewing sarkom tumorceller [25], og det er stærkt udtrykt i dårligt differentierede skællede celle esophageal carcinoma væv [16]. Så vidt vi ved, denne undersøgelse er den første til at undersøge den kliniske betydning af FZD3 proteinekspression i en stor kohorte af CRC og dens præmaligne CAD og kolorektal polyp prøver. Selvom om FZD3 protein blev udtrykt i 100% af CRC prøver, 89% af CAD prøver, 75% af colorektale polypper prøver og 69% tilstødende normale colorektale epitelvæv, immunoreaktiviteten af ​​FZD3 havde signifikant forskel blandt de 4 grupper af enheder. Desuden FZD3 proteinekspression i CAD som vist ved os matcher med dem af en tidligere undersøgelse, som FZD3 mRNA udtrykt i 79% (11/14) CAD prøver med en median gange ændring på 6,5 [26]. Imidlertid blev FZD3 mRNA kun fundet at have en signifikant opregulering i 39% (9/23) CRC prøver i samme undersøgelse [26]. Årsagerne udgør kan forklares ved følgende grunde dette modstridende resultat: 1) en lille gruppe (23) af CRC prøver blev rekrutteret sammenlignet med vores, 2) mRNA blev påvist henviser protein blev påvist i vores undersøgelse, 3) tilstødende normale væv blev blandet med CRC væv som ikke mikrodissektion blev udført i deres undersøgelse. Det sidste punkt er især vigtig, fordi variable grader af hosliggende normalt væv sædvanligvis vil blive fundet i kirurgiske prøver og vores resultater viste, at FZD3 protein ikke blev udtrykt kun i 69% af tilstødende normale colorektale epithelvæv, men også i fibroblaster, endotelceller, lymfocytter og histiocytter (data ikke vist). ICC-farvning af et vævssnit tillader os at undersøge den individuelle celle under mikroskop og derfor FZD3 proteinekspression i tumorceller og normale celler kan separat kvantificeres. I virkeligheden ICC farvning af FZD3 protein var ikke kun stærkere i den invasive foran end i tumoren centrum, men også meget intens i alle metastatiske lymfeknuder og fjerntliggende organer. Denne bemærkelsesværdige fund kan vise, at FZD3 protein har en vigtig rolle, ikke kun i begyndelsen af ​​CRC carcinogenese, men også i CRC metastatisk vej til lymfeknuder og fjernere organer. Imidlertid fokal polariseret fordeling af FZD3 som vist ved Pourreyron et al. blev ikke fundet i vores kohorte af prøver [27]. Vi fortsatte med at undersøge potentialet i FZD3 protein som et supplement diagnostisk markør i metastatisk CRC ved at udføre ICC farvning i forskellige typer af ikke-CRC metastatiske karcinomer. Vores resultater er meget interessant, fordi ICC farvning for FZD3 var positiv i forskellig udstrækning i alle metastatiske karcinomer. den positive farvning i kun 17% af HCC og 12% af RCCC viser imidlertid, at FZD3 proteinet muligvis ikke er så afgørende i den metastatiske proces af disse 2 carcinomer (figur 5A og 5B). Sammenfattende kan FZD3 ICC farvning være nyttigt at udelukke disse 2 carcinomer upon patologisk diagnose, fordi farvningen var omdrejningspunkt og meget svag i de FZD3 farvning positive HCC og RCCC sager i forhold til dem, der ved andre tumorer. På den anden side blev FZD3 protein udtrykt i metastatiske carcinomer som omfatter SCC1, LAC, LNSCC, PTC, BC, OCCC, CNSCC, FTSAC, TCC, SCC2 og CND. Disse nye resultater kan vise, at FZD3 protein kan være involveret i den metastatiske proces af disse karcinomer. Faktisk er den stærk farvning af FZD3 protein i alle tilfælde af CND og SCC2 er ikke overraskende, fordi FZD3 protein er velkendt for at være involveret i udvikling af centralnervesystemet [22,23,28]. I overensstemmelse med disse resultater, er vi i øjeblikket undersøger FZD3 proteinekspression i deres respektive primære tumorer for de 11 typer af metastatisk ikke-CRC karcinomer, som har højt niveau af FZD3 proteinekspression for at få en større forståelse af den rolle af FZD3 protein i forskellige carcinogenese pathways.

et andet interessant resultat af denne undersøgelse er, at den mediane ICC score af CAD forbundet med synkrone colorektale carcinomer er meget højere end den for gruppen, der består af ren CAD, hvilket antyder, at en høj FZD3 protein ekspression i CAD kan betyde en højere malignitet potentiale.

Det endelige mål med denne undersøgelse er at undersøge den kliniske betydning af FZD3 protein hos patienter med CRC. Som i øjeblikket er der sparsom patologisk bruges prognostisk markør for CRC og derfor er det uvurderligt at undersøge den prognostiske potentiale FZD3 protein, som er påvist i denne undersøgelse ved signifikant korrelation af FZD3 ICC scoringer til Dukes stadie, lymfeknude status, tilbagefald eller metastaser. Desuden en langsigtet opfølgning af disse CRC patienter viste, at patienten med en høj FZD3 ICC score kan have en mindre chance for at overleve. Faktisk prøverne med FZD3 ICC scores 327 var hovedsageligt af trin III og IV patienter, mens dem med FZD3 ICC scoringer ≤ 327 var for det meste af fase I og II patienter. Dette kan være en forklaring på, hvorfor trin III og IV patienter har en større risiko for tilbagefald, metastaser og kortere overlevelse end fase I og II patienter. En mere detaljeret analyse af dataene ved at klassificere den i 4 grupper baseret på deres niveau af udtryk kan give os flere oplysninger om den prognostiske betydning af FZD3 protein i CRC patienter. Den store forskel i overlevelse mellem høje og lave udtryk grupper forventes mens den marginale signifikant forskel (

P

0,05) i overlevelse mellem moderat høje og moderat lave udtryk grupper giver en solid dokumentation for, at FZD3 protein har vigtig prognostisk magt. Taget alle disse resultater sammen, kan FZD3 ICC farvning potentielt være et værdifuldt redskab til prognosen for CRC. For at validere disse resultater, er en stor multi-center studie med en langsigtet opfølgning på undersøgelsen af ​​sin prognostisk betydning nu under udarbejdelse. Menneskelig Wnt5A, Wnt5B og Wnt11 er repræsentative ikke-kanoniske Wnts transducerende Wnt /plane cellepolaritet signaler gennem FZD3 receptorer [10,29-31]. En nylig undersøgelse har vist, at Wnt respons veje blev omorganiseret i begyndelsen kolorektal carcinogenese som den negative regulator af Wnt signalvejen, blev nøgen neglebånd homolog en induktion ledsaget af opregulering af β-catenin-uafhængig FZD3 receptor i CAD og CRC [26]. Desuden har FZD3 ikke reagerer på stabilisering af β-catenin

in vitro

og krævede en Wnt ligand signal [26]. Derfor kan FZD3 tilvejebringe en indikation af graden af ​​Wnt-ligand-signalering i colorektal tumor. Faktisk blev en lille gruppe af prøver (20) med stærk og svag positiv FZD3 rekrutteret og en direkte sammenligning af FZD3 immunfarvning til de af beta-catenin blev udført, og det blev konstateret, at der ikke var nogen sammenhæng mellem FZD3 og beta-catenin immunfarvning (data ikke vist). Dette resultat kan styrke den rolle, FZD3 i ikke-kanonisk Wnt signalvej. Sammen med resultaterne fra denne undersøgelse, kan ekspressionen af ​​FZD3 protein i forskellige kliniske stadier af CRC viser yderligere den kliniske betydning af FZD3 hos patienter med CRC. Vores næste skridt er at undersøge de underliggende molekylære mekanismer, der regulerer FZD3 udtryk og de direkte transkriptionelle målgener af FZD3 bruger specifikke knockdown af FZD3 af små interfererende RNA i CRC-cellelinjer, fordi målrettet behandling med molekylære markører er et vigtigt mål for forbedring af resultaterne af patienter med CRC. Desuden vil detekteringen af ​​FZD3 protein i patientens serum under anvendelse enzymkoblet immunosorbentassay også undersøges for at vurdere, om serum FZD3 protein kan anvendes som en ikke-invasiv markør. En stor begrænsning af denne undersøgelse er, at vi ikke har den kliniske oplysninger til at vurdere resultaterne af FZD3 protein ved at sammenligne sit udtryk til konventionelle CRC markør såsom serum carcinoembryonisk antigen.

Sammenfattende er FZD3 proteinekspression som vist ved ICC farvning tæt korreleret med kolorektal carcinogenese og progression, og kan potentielt tjene som en ny prognostisk markør. Desuden kan FZD3 ICC farvning være nyttigt at udelukke HCC og RCCC i metastatiske steder.

Tak

Vi er taknemmelige for professor Benjamin Y.M. Yung og Mr. Chiu Ka Yue for deres enestående støtte.