PLoS ONE: Ekspression af miR-29c, miR-93, og miR-429 som potentielle biomarkører til detektering af Early Stage Non-Small Lung Cancer

Abstrakt

Baggrund

Ændret udtryk for miRNA ekspression bidrager til human carcinogenese. Denne undersøgelse blev designet til at detektere afvigende miRNA udtryk som en potentiel biomarkør for tidlig påvisning og prognose forudsigelse af ikke-småcellet lungekræft (NSCLC).

Metoder

miRNA vifte blev brugt til at profilere forskelligt udtrykte miRNA og Taqman-baserede kvantitative RT-PCR analyser blev anvendt til at analysere niveauer af miR-29c, MIR-93, og miR-429 udtryk i NSCLC vævsprøver, tilsvarende normale vævsprøver, og serumprøver fra 70 NSCLC patienter samt i serumprøver fra 48 raske kontrolpersoner.

Resultater

niveauer af miR-29c og miR-93-ekspression blev opreguleret i NSCLC væv, mens serumniveauer af miR-29c også blev opreguleret, men niveauer af serum mIR-429 blev reduceret i NSCLC. Desuden blev niveauerne af miR-429-ekspression i NSCLC væv forbundet med dem i serumprøver. Modtager opererer karakteristik (ROC) kurve analyse viste, at der på den optimale cut-off punkt, områderne under ROC-kurven for serumniveauer af miR-29c og miR-429 var 0,723 og 0,727 henholdsvis niveauer, som er højere end for carcinom embryonale antigen (0,534) i diagnosen af ​​fase i NSCLC. Desuden blev serumniveauer af MIR-429 forbundet med dårlig overordnet overlevelse på NSCLC-patienter. Både univariate og multivariate analyser viste, at serum miR-429-niveau var en uafhængig prognostisk prædiktor for NSCLC.

Konklusioner

Resultatet af den aktuelle undersøgelse tyder på, at påvisning af serum miR-29c og miR- 429 udtryk bør yderligere evalueres som en roman, non-invasiv biomarkør for tidligt NSCLC

Henvisning:. Zhu W, han J, Chen D, Zhang B, Xu L, Ma H, et al. (2014) Ekspression af miR-29c, miR-93, og miR-429 som potentielle biomarkører til detektering af Early Stage Non-Small Lung Cancer. PLoS ONE 9 (2): e87780. doi: 10,1371 /journal.pone.0087780

Redaktør: Song Guo Zheng, Penn State University, USA

Modtaget: November 12, 2013; Accepteret: 1. januar 2014 Publiceret: 11 feb 2014

Copyright: © 2014 Zhu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev delvist understøttet af tilskud fra Natural Science Foundation i Zhejiang-provinsen (Y2110960), Videnskab og Teknologi Bureau of Zhoushan (10137 og 2011C12039), og fra Medical Bureau of Zhejiang-provinsen (2011KYB165). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

MikroRNA’er (miRNA) er en klasse af små ikke-kodende RNA’er, der kan fungere som endogen RNA-interferens til at regulere ekspressionen af ​​de målrettede gener [1] – [3]. Til dato har i alt 1048 menneskelige miRNA blevet identificeret og rapporteret i RNA-databasen, og dette tal fortsætter med at stige. Nogle af disse miRNA er blevet rapporteret at være anvendelige som potentielle biomarkører for diagnose, prognose, og personlig terapi af humane cancere [1] – [6], fordi ændret ekspression af disse miRNA bidrager til human carcinogenese. For eksempel har afvigende miRNA ekspression blevet rapporteret i lungekræft. En række forskere, herunder os, har rapporteret den potentielle kliniske anvendelse af cirkulerende miRNA (såsom miR-1254, miR-142-3p, miR-24, miR-183, miR-21, miR-221, miR-29c, mIR-486, mIR-30d, mIR-1, mIR-499, og mIR-210) [7], [8]. Således kunne yderligere undersøgelser af afvigende miRNA udtryk føre til opdagelsen af ​​nye miRNA-biomarkører for lungekræft.

Lungekræft er den hyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan [9]. Trods fremskridt i tidlig opsporing og forbedringer i behandlingsmuligheder, patienter med fremskreden sygdom stadig ofte udvikle tilbagevendende sygdom efter længere radikale resektioner, og 5-års samlede overlevelse er stadig kun 5%. Således nyskabende fremgangsmåder til effektivt at administrere denne sygdom på molekylært niveau kunne identificere patienter, som har en højere eller lavere risiko for tilbagefald efter operation og give biomarkører til forudsigelse af patientens overlevelse. I denne henseende er blevet rapporteret anvendelse af serum miRNA som potentielle biomarkører til diagnosticering og forudsigelse prognose af lungekræft [7], [10]. Faktisk har flere undersøgelser identificeret miRNA signaturer, der adskiller sig mellem normale og ondartede væv til klassificering af cancertyper og for tumor diagnose og prognose. Det kan også være muligt at anvende miRNA ekspression som en biomarkør til at overvåge behandlingen effektivitet eller forudsige udviklingen af ​​kræft [11] – [12]. Men til dato har de fleste undersøgelser fokuseret på tumorvæv, og ændringer i cirkulerende serum miRNA niveauer og forholdet mellem disse ændringer og vævet ved sygdomsdebut forbliver kontroversiel [7]. Desuden har nytten af ​​mange cirkulerende miRNA blevet påvist i diagnosen af ​​NSCLC, men få cirkulerende miRNA viste diagnostisk værdi for tidligt NSCLC [13], [14]. Men der er behov for yderligere kontrol i forskellige populationer. Således i denne undersøgelse, analyserede vi niveauer af tre miRNA (MIR-29c, MIR-93, og MIR-429) i ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) væv og sammenlignede dem med dem i serumprøver fra NSCLC-patienter og sunde kontroller, især, deres ekspressionsniveauer i tidlige stadie NSCLC patienter. I mellemtiden analyseret vi dataene i forhold til carcinoma embryonal antigen (CEA), som er et meget anvendt markør ved diagnosticering af NSCLC [15]. Vi derefter undersøgt sammenhænge mellem deres udtryk og klinisk-patologiske og overlevelsesdata fra NSCLC patienter.

Materialer og metoder

Etik Statement

Denne undersøgelse blev godkendt af Etisk Review Committee of Zhoushan kommunale regering Kina, og alle biologiske prøver blev opnået med patienternes skriftligt informeret samtykke.

Patientprøver

i denne undersøgelse har vi rekrutteret 70 patienter med kirurgisk resektion NSCLC og matchede fjernt noncancerous væv fra Zhoushan Hospital, Zhejiang, Kina mellem januar 2008 og maj 2009. Der var 56 mandlige og 14 kvindelige patienter med NSCLC, herunder 34 patienter yngre end 60 år, og 36 ældre end 60 år. I mellemtiden, sera fra alle NSCLC patienter og 48 raske frivillige matchede efter køn og alder blev også indsamlet. Ingen af ​​de deltagende patienter i dette studie havde modtaget nogen kemoterapi eller strålebehandling før operationen. For vævsprøve samling, efter fjernelse af de kirurgiske prøver, vævene blev straks transporteret til patologilaboratoriet, og prøverne blev anbragt i et kryohætteglas, snap-frosset i flydende nitrogen i 30 minutter og opbevaret ved -80 ° C indtil anvendelse . Alle vævsprøver blev gennemgået af to patologer, og diagnosen blev foretaget i henhold til de nationale Comprehensive Cancer Network (NCCN) kriterier. Der var 34 lunge adenokarcinomer og 36 lunge planocellulært karcinom, og 46 tumorer blev moderat til højt differentierede, mens 24 var dårligt differentieret. Desuden 18 NSCLC-patienter havde en tumor mindre end 3 cm i størrelse, mens 52 patienter med en tumor større end 3 cm. Lymfeknudemetastase blev fundet i 32 patienter, og 36 patienter havde stadium I NSCLC og 34 patienter havde stadium II, III eller IV NSCLC (tabel 1). Desuden blev serumniveauer af CEA måles ved anvendelse af kemiluminescens som en del af rutinemæssige kliniske forsøg, og reference værdi blev erhvervet fra den kliniske database på Zhoushan Hospital.

RNA isolering og kvantitativ RT-PCR

Totalt cellulært RNA blev isoleret fra 100 mg lungevæv eller 600 pi serumprøver ved anvendelse af en miRNA isolation kit eller Mirvana PARIS RNA-isolering kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ifølge producentens protokol. RNA-koncentrationen blev bestemt ved anvendelse af et NanoDrop ND-1000 spektrofotometer (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA), og RNA kvalitet blev målt under anvendelse af et denaturerende 15% polyacrylamidgel. Revers transkription reaktion blev udført under anvendelse af TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems) ifølge producentens instruktioner i et totalt reaktionsvolumen på 7,5 pi. qPCR blev udført tredobbelt under anvendelse af TaqMan 2 × Universal PCR Master Mix uden AmpErase UNG (Applied Biosystems) i et ABI 7500 Real-Time PCR-system (Applied Biosystems) med følgende betingelser: 95 ° C i 10 minutter, efterfulgt af 40 cykler af 95 ° C i 15 s og 60 ° C i 1 min. Tærsklen cyklus (Ct) værdier blev beregnet ved hjælp af SDS 2.0.1 software (Applied Biosystems). Skabelon-fri kontroller for både RT og PCR blev inkluderet i hvert forsøg på at sikre målspecifik forstærkning.

De gennemsnitlige niveauer af miRNA udtryk i væv og sera blev normaliseret i forhold til de gennemsnitlige mængder af U6 snRNA og U48 snRNA under anvendelse af 2

-ΔΔCt metode [16] – [17]. De gennemsnitlige Ct-værdier for disse fem miRNA blev beregnes eksklusive outliers (dvs. replikerer med Ct-værdier afviger mere end en cyklus fra medianen). Hertil kommer, at hvis CtU6, ave og CtU48, ave hver ikke forekomme inden for 32 cyklusser, blev analysen gentaget. Prøver med lav U6 eller U48 snRNA niveauer blev ikke udelukket fra dataanalyser.

Statistisk analyse

Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af GraphPad Prism 5.0 software (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Dataene blev analyseret ved anvendelse varianshomogenitet. Envejs ANOVA eller Wilcoxon to stikprøver tests blev anvendt til at teste for associationer mellem miRNA ekspressionsniveauer og klinisk-patologiske træk ved patienterne. En parret prøve t-test blev anvendt til at sammenligne forskelle i miRNA ekspression mellem lungevæv og serumprøver. Receiver Operating karakteristik (ROC) kurver blev genereret for at vurdere den diagnostiske nøjagtighed hver parameter. Patientoverlevelse blev estimeret ved Kaplan-Meier-metoden, og log-rank testen blev anvendt til at sammenligne overlevelsen mellem grupper. Cox hazard regressionsmodel blev anvendt til at analysere de risikofaktorer for NSCLC. Alle statistiske tests var to-sidet og en

P

værdi på 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

Differentiel udtryk for tre miRNA i NSCLC væv og patient sera

Baseret på vores miRNA array (Agilent) og validering af data, valgte vi tre miRNA (mIR-29c, miR-93, og miR-429) til yderligere undersøgelse i NSCLC prøver. Vi udførte QRT-PCR-analyse for disse tre miRNA i 70 par af NSCLC og tilsvarende noncancerous lungevæv. Vores data viser, at niveauet af miR-29c og miR-93-ekspression blev opreguleret i NSCLC væv sammenlignet med de tilsvarende noncancerous lungevæv (

P

= 0,0408 og

P

= 0,0444, henholdsvis), hvorimod miR-429 niveauer var ikke signifikant forskellig mellem NSCLC og noncancerous lungevæv (

P

= 0,3903, figur 1A).

A, QRT-PCR påvisning af tre miRNA i 70 NSCLC tumorer og de tilsvarende normale lungevæv.

P

-værdier for miR-29c, miR-93, og miR-429 var 0,0408, 0,0444, og 0,3903, henholdsvis ved hjælp af en parret prøve

t

-test. B, QRT-PCR-analyse af serum miRNA niveauer i serumprøver fra 70 NSCLC patienter vs. 48 raske kontroller.

P Salg -værdier af serum MIR-29c, MIR-93, og MIR-429 var 0,0012, 0,9291 og 0,0001, henholdsvis ved hjælp af en uparret prøve t-test. C, D, E, Foreningen af ​​disse miRNA niveauer mellem NSCLC væv og serumprøver. Pearson korrelation test viste, at MIR-429 ekspression i serum var signifikant associeret med det i NSCLC væv (r = 0,3578,

P

= 0,0024), hvorimod serumniveauer af MIR-29c og MIR-93 var ikke associeret med dem i NSCLC væv (r = -,07877,

P

= 0.5169 og r = 0.1515,

P

= 0.2105, henholdsvis). *

P

0,05 mellem grupperne

Vi undersøgte derefter, om disse forskelle i miRNA-ekspression var til stede i serumprøver fra disse patienter.. Vi fandt, at serum miR-93-ekspression var ikke forskellig mellem NSCLC patienter og raske kontroller (

P

= 0.3530). Imidlertid blev miR-29c udtryk væsentligt forøget serum fra NSCLC patienter (

P

= 0,0012), og miR-429-ekspression signifikant nedsat (

P

= 0,0001, Figur 1B). Serum niveau af miR-429-ekspression var signifikant korreleret med det i NSCLC væv (r = 0,3578,

P

= 0,0024, Figur 1E), hvorimod serumniveauer af miR-29c og miR-93-ekspression var ikke forbundet med dem i NSCLC væv (r = -,07877,

P

= 0,5169 og r = 0,1515,

P

= 0,2105, henholdsvis figur 1C og D).

Foreninger mellem ændret miRNA-ekspression og kliniske karakteristika for NSCLC

Vi næste undersøgte associationer mellem de ændrede miRNA ekspressionsniveauerne (mIR-29c og miR-93 i NSCLC og miR-29c og miR-429 i serum) med de klinisk-patologiske karakteristika de NSCLC-patienter. Vi fandt, at øget miR-93-ekspression var stærkt forbundet med NSCLC histologi (

P

= 0,031, tabel 2), mens serum miR-29c udtryk var forbundet med abnorme CEA niveauer (

P

= 0.030, tabel 2). I modsætning hertil blev der ikke andre sammenslutninger påvist mellem ekspressionsniveauerne af disse miRNA. Endvidere afbildet vi udtryk data for MIR-29c og MIR-429 under anvendelse af ROC kurver for at identificere en afskæringsværdi, der kunne skelne lungekræftpatienter fra raske kontroller. ROC-kurve analyse viste, at ved den optimale afskæringsværdi, serumniveauer af MIR-29c havde en følsomhed på 65,7% og en specificitet på 74,1% for at skelne NSCLC patienter fra raske kontroller med et areal under kurven (AUC) af 0,676 (

P

= 0,0004, 95% konfidensinterval [CI]: 0,584 til 0,759, figur 2A). Desuden serumniveauer af miR-429 havde en følsomhed på 54,3% og en specificitet på 81,2% for at skelne NSCLC patienter fra raske kontrolpersoner med et AUC på 0,713 (

P

0,0001, 95% CI: 0,623 -0,793, figur 2B). Fordi blodet CEA test er en meget anvendt markør for NSCLC, vi sammenlignet CEA resultater med miRNA ekspressionsniveauerne og fandt, at CEA havde en AUC på 0,576 (

P

= 0,1493, 95% CI: 0,482 til 0,666, Figur 2C). Men for kombinationen af ​​miR-29c udtryk og CEA, viste data, en AUC på 0,712 (

P

0,0001, 95% CI: 0,622-0,792); for kombinationen af ​​miR-429 udtryk og CEA, AUC var 0,707 (

P

= 0,0007, 95% CI: 0,616-0,787); og for kombinationen af ​​miR-29c udtryk og miR-429 med CEA, AUC var 0,797 (

P

0,0001, 95% CI: 0,713-0,865).

A, miR -29c; B, MIR-429; C, viste CEA ROC kurver og en AUC med diagnostisk magt til at skelne NSCLC patienter fra raske kontroller. D, miR-29c; E, miR-429; F, viste CEA ROC kurver og en AUC med diagnostisk magt til at skelne fase I NSCLC patienter fra raske kontroller.

Desuden har vi også fundet, at serumniveauer af miR-29c havde en følsomhed på 50,0% og en specificitet på 95,8% for karakteristiske fase i NSCLC fra raske kontrolpersoner med et AUC på 0,727 (

P

= 0,0001, 95% CI 0,619-0,818, figur 2D). miR-429 havde en følsomhed på 94,4% og en specificitet på 41,7% for karakteristiske fase I NSCLC patienter fra raske kontrolpersoner med et AUC på 0,723 (

P

= 0.0001,95% CI 0,615-0,815, figur 2E) . CEA havde en følsomhed på 66,7% og en specificitet på 52,1% for at skelne fase I NSCLC patienter fra raske kontrolpersoner med et AUC på 0,534 (

P

= 0,6040, 95% CI 0,422-0,644, figur 2F). Desuden er kombinationen af ​​MIR-29c ekspression og CEA havde en AUC på 0,757 (

P

0,0001, 95% CI: 0,651-0,844), kombinationen af ​​MIR-429-ekspression og CEA havde en AUC af 0,659 (

P

= 0,0128, 95% CI: 0,547 til 0,759), og kombinationen af ​​miR-29c udtryk, miR-429 udtryk, og CEA havde en AUC på 0,833 (

P

0,0001, 95% CI: 0,736-0,906)

associering mellem serum miR-429 niveauet og overlevelse af NSCLC patienter

Fordi udtryk for de tre testede miRNA blev ændret i NSCLC væv og serumprøver, vi yderligere vurderet, om påvisning af deres niveauer kunne forudsige prognosen i NSCLC patienter. Vi fandt, at serum niveau af miR-429-ekspression var forbundet med den overordnede overlevelse NSCLC patienter (

P

= 0,0030 ved hjælp af en Log-rank test, figur 3). Men udtryk for miR-29c, miR-93, og miR-429 i NSCLC væv og serumniveauer af miR-29c og miR-93 var ikke forbundet med den overordnede overlevelse NSCLC patienter. Den univariate Cox hazard regressionsanalyse viste, at serumniveauer af miR-429 var en betydelig prognostisk indikator for NSCLC (justeret hazard ratio = 6,458, 95% CI: 1,409 til 29,593,

P

= 0,016). Den multivariate Cox proportional hazard regressionsanalyse viste, at serumniveauer af miR-429 var en uafhængig prognostisk prædiktor for NSCLC patienter (hazard ratio = 12,875, 95% CI: 2,295 til 72,230,

P

= 0,004, tabel 3) .

P

-værdi for overlevelse af patienter med høje og lave niveauer af miRNA-ekspression blev beregnet ved hjælp af log-rank test. *

P

. 0,05 mellem grupperne

Diskussion

I denne undersøgelse analyserede vi udtryk for tre miRNA, udvalgt på baggrund af vores tidligere miRNA-array og validering af data, i NSCLC væv og serumprøver for association med klinisk-patologiske og overlevelsesdata fra patienter. Vi fandt, at MIR-29c og MIR-93 ekspression blev opreguleret i NSCLC væv sammenlignet med de tilsvarende noncancerous lungevæv. Desuden blev serumniveauer af MIR-29c signifikant øget og serumniveauer af MIR-429 blev signifikant reduceret i trin I NSCLC sammenlignet med niveauer i 48 raske kontroller. Desuden fandt vi, at lavere serum miR-429 niveauer blev forbundet med dårlig samlet overlevelse af NSCLC patienter. De univariate og multivariate analyser viste, at serum niveau af miR-429 var en uafhængig prædiktor for den samlede overlevelse NSCLC patienter. Vores nuværende data indikerer, at detektion af serum miR-29c og miR-429-ekspression bør yderligere evalueres som et nyt ikke-invasiv biomarkør for tidligt i NSCLC.

Faktisk til dato, en lang række undersøgelser har viste, at ændret ekspression af specifikke miRNA spiller en vigtig rolle i human tumorgenese grund af de funktioner af disse miRNA som gen-undertrykkere eller onkogener [17] – [19]. Således kunne detektion af afvigende miRNA ekspressionsniveauer anvendes til tidlig diagnose af humane cancere eller forudsigelse af prognose fordi miRNA er mere stabile og modstandsdygtige over for RNase A-fordøjelse og andre barske forhold end er traditionelle proteinmarkører [7], [10], [ ,,,0],17], [20]. For eksempel Chen

et al

[10] viste, at miRNA er stabile i cirkulerende serum og kan tjene som potentielle diagnostiske markører for lungekræft. Hu

et al

[7] rapporterede, at fire miRNA er selvstændige prædiktorer for samlet overlevelse hos patienter med lungecancer. Le og kolleger [20] viste, at serumniveauer af miRNA er forskellige i præ- og postoperative lungekræft prøver, og at disse miRNA kan potentielt anvendes som biomarkører for tilbagefald efter operationen. Imidlertid har kun få studier fokuseret på den diagnostiske rolle miRNA i tidligt stadium NSCLC [13], [14]. I den aktuelle undersøgelse, analyserede vi ekspressionen af ​​tre miRNA i NSCLC væv og serumprøver for deres potentielle værdi i tidlig diagnose og prognose af NSCLC-patienter. Vores data viser, at niveauer af MIR-29c og MIR-93 ekspression blev opreguleret i NSCLC væv sammenlignet med de tilsvarende noncancerous lungevæv. Desuden viste ROC data, som AUC for MIR-29c og MIR-429 var 0,723 og 0,727 henholdsvis og disse værdier var signifikant højere end for CEA (0,534), i trin I NSCLC patienter, hvilket tyder disse miRNA kunne anvendes til tidlig diagnosticering af NSCLC. CEA er et meget anvendt biomarkør til diagnosticering NSCLC og blev valgt som positiv kontrol [15]. Faktisk Heegaard

et al

[8] viste, at ekspressionen af ​​miR-29c blev øget betydeligt i 220 stage NSCLC patienter tidligt i forhold til 220 matchede kontroller. I andre undersøgelser blev MIR-93-ekspression sig at fremme tumorangiogenese og metastase ved at undertrykke stor tumor suppressor homologi 2-ekspression [21] – [22]. Men MIR-429 er et medlem af MIR-200 familie, der tidligere var vist at hæmme epitel-til-mesenkymale overgang ved at regulere E-cadherin, ZEB1, og SIP1 ekspression [23] – [25]. Ingen undersøgelse har endnu afsløret sin rolle ved diagnose og prognose af NSCLC. I den foreliggende undersøgelse, vi for første gang viste, at ekspressionen af ​​MIR-429 i serum blev nedreguleret i NSCLC-patienter sammenlignet med raske kontroller, og at lavere MIR-429-ekspression blev forbundet med dårlig overordnet overlevelse på NSCLC-patienter, hvilket tyder MIR-429 udtryk er en uafhængig prognostisk indikator for NSCLC. Desuden fandt vi, at serumniveauer af MIR-429 var signifikant associeret med MIR-429-ekspression i NSCLC væv, som førte til den hypotese, at tumorceller kan anvende miRNA at transportere genetisk information til de omgivende eller fjerne celler og derved fremme tumorvækst og progression [26]. I vores tidligere undersøgelse har vi beskrevet, at serum og tumor niveauer af MIR-96 blev associeret [18], støtter opfattelsen af, at nogle miRNA kunne secerneres fra tumorvæv og fremme udviklingen af ​​kræft, hvilket også er i overensstemmelse med rapporter fra Mitchell

et al

[17] og Hu

et al

[7].

Flere undersøgelser har vist, at påvisning af serum miRNA kan være særligt nyttige til tidligere diagnosticering af klinisk asymptomatiske cancere [ ,,,0],27] – [29]. For eksempel i tidligere undersøgelser lungekræft, niveauer af miR-1254, miR-574-5p, miR-486, miR-30d, miR-1, og miR-499 udtryk signifikant dysreguleret i den tidlige fase lungekræft [7] , [30]. Chen

et al

[31] viste, gennem profilering at 10 serum miRNA kan tjene som nye invasive biomarkører for lungekræft diagnose. Keller

et al

[32] også foreslået, at udvikle lungekræft kan være påviselige år før diagnosen gennem en særlig miRNA signatur, og at denne signatur ændringer under tumor udvikling. Delvis i overensstemmelse med resultaterne af disse undersøgelser, resultaterne af vores aktuelle undersøgelse demonstrerer anvendeligheden af ​​de tre testede miRNA, som var mere følsomme end CEA til påvisning fase I NSCLC. Men vores nuværende data er, proof-of-principle, og yderligere prospektivt studie ved hjælp af en større stikprøve vil kontrollere, om påvisning af disse miRNA er nyttig til tidlig diagnose af fase I NSCLC og overlevelse forudsigelse i NSCLC patienter.

Vi fandt forskelle i ekspression af tre miRNA mellem NSCLC væv og tilsvarende noncancerous lungevæv. Vigtigt er det, vi identificeret MIR-29c og MIR-429 som dysreguleret i cirkulerende serumprøver fra patienter med tidligt stadium NSCLC, og ekspressionen af ​​disse miRNA var mere følsom end serum CEA niveauer i adskille NSCLC-patienter fra raske kontroller. Desuden har vi også identificeret nedsat serum miR-429 udtryk som en selvstændig prognostisk biomarkør for NSCLC. Den kliniske værdi af de tre testede miRNA i diagnose og prognose af NSCLC garanterer yderligere undersøgelse i større kohorter.