Abstrakt
p21-aktiverede kinaser (Paks) er serin /threonin proteinkinaser involveret i biologiske begivenheder i forbindelse med ondartet tumor progression. I denne undersøgelse, udtryk for Pak1, p-Pak2 Ser
20, PAK4, pPak4 Ser
474 i 21 normal endometrium, blev 16 hyperplastisk endometrium uden atypia, 17 atypisk kompleks hyperplasi og 67 livmoderkræft vurderet af immunhistokemi og korreleret med klinisk-patologiske parametre. Vi tilgås også den proliferative rolle og nedstrøms mål af Pak1 i endometriecancer. Pak1 blev udtrykt i cytoplasmaet henviser PAK4 og p-PAK4 blev udtrykt i både cytoplasmaet og kernen af endometriale væv. I normal endometrium, signifikant højere Pak1 (
P
= 0,028) og cytoplasmatisk p-Pak2 (
P
= 0,048) blev detekteret ekspression i proliferativ endometrium end sekretorisk endometrium. Pak1, cytoplasmatisk og nuklear PAK4 og nuklear p-PAK4 var signifikant overudtrykt i endometriecancer sammenlignet med atrofisk endometrium (alle
P
0,05). Desuden type I endometrioide karcinomer viste signifikant højere Pak1 udtryk end type II ikke-endometrioide karcinomer (
P
0,001). På den anden side, Pak1, PAK4 og p-PAK4 udtryk negativt korreleret med histologisk bedømmelse (alle
P
0,05), mens p-Pak2 og cytoplasmatisk PAK4 udtryk omvendt korreleret med myometrisk invasion (alle
P
0,05). Desuden patienter med livmoderkræft med lavere cytoplasmatisk PAK4 udtryk viste dårligere overlevelse (
P
= 0,026). Multivariat analyse viste cytoplasmatisk PAK4 er en uafhængig prognostisk faktor. Funktionelt, knockdown af Pak1, men ikke PAK4, i endometriecancer cellelinje førte til reduceret celleproliferation sammen med reduceret cyclin D1, østrogen receptor (ERa) og gestagen receptor (PR) udtryk. Signifikant sammenhæng mellem Pak1 og PR-ekspression blev også påvist i kliniske prøver. Vores resultater tyder på, at Pak1 og cytoplasmatisk p-Pak2 kan fremme celle proliferation i normal endometrium under menstral cyklus. Pak1, cytoplasmatisk og nuklear PAK4 og nuklear p-PAK4 er involveret i patogenesen for endometriecancer især hos postmenopausale kvinder. Pak1 fremme endometriecancer celleproliferation, navnlig i type I endometrioide carcinom. Cytoplasmatisk PAK4 kan være potentielt prognostisk markør i endometriecancer
Henvisning:. Siu MKY, Kong DSH, Ngai SYP, Chan HY, Jiang L, Wong ESY, et al. (2015) p21-aktiveret kinaser 1, 2 og 4 i livmoderkræft: Virkninger på kliniske resultater og celleproliferation. PLoS ONE 10 (7): e0133467. doi: 10,1371 /journal.pone.0133467
Redaktør: Steen Henning Hansen, Børns Hospital Boston, UNITED STATES
Modtaget: 3 maj 2014; Accepteret: 27. juni, 2015; Udgivet: 28 Jul 2015
Copyright: © 2015 Siu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres
Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer
Finansiering:.. Denne undersøgelse blev støttet af Hongkong Anti-Cancer Society Grant, University of Hong Kong Lille Projekt Finansiering og konferencen og Forskningsråd Grant
Konkurrerende interesser: Annie NY Cheung er en PLoS ONE Editorial Board medlem. Dette ændrer ikke forfatternes overholdelse PLoS ONE Redaktionelle politikker og kriterier.
Introduktion
Endometriecancer er den mest almindelige gynækologiske malignitet verdensplan [1], og dens forekomst i Asien er stigende. Det kan inddeles i to store klinisk-patologiske typer. Østrogenafhængig type I endometrioide carcinom, omfatter omkring 80% af endometriale cancere, er normalt forbundet med endometrisk hyperplasi [2, 3]. Type II ikke-endometroid carcinom, som er østrogen-uafhængig og omfatter serøs carcinoma og klar celle carcinom, forekommer normalt i atrofisk endometrium [2, 3]. Type I endometrioide karcinom har gunstig prognose, mens type II endometrialcarcinom er mere aggressiv [2, 3].
p21-aktiveret serin /threonin-kinaser (Paks) er effektorer for lille Rho GTPaser Rac1 og Cdc42, der spiller vigtige roller i en række forskellige cellefunktioner, herunder celle morfogenese, motilitet, overlevelse, forankringsuafhængig vækst og angiogenese, som alle er forudsætning trin for tumordannelse og tumorinvasion [4, 5]. Baseret på forskellige domæne strukturer og biokemiske egenskaber, er de seks medlemmer af Pak familien klassificeres i gruppe I (Paks1-3) og gruppe II (Paks 4-6), der har forskellige udtryk mønster, substrat prioritet og funktionel specificitet i forskellige væv [ ,,,0],5-7].
Vi har for nylig identificeret Pak1 og PAK4 som prognostiske markører og potentielle terapeutiske mål for ovariecancer [8, 9]. Øget fosforyleret (p) -Pak2
Ser20 udtryk i kræft i æggestokkene blev også påvist [9]. Pak1 og PAK4 fremme ovariecancer cellemigration og invasion gennem p38 /VEGF-vejen og c-Src /MEK-1 /MMP2 pathway henholdsvis [8, 9]. PAK4 også fremkalde ovariecancer celleproliferation gennem PAK4 /c-Src /EGFR /cyclin D1 /Cdc25A pathway [8]. Vi afslørede også overekspression af Pak1 i choriocarcinoma og hydatidiform modermærker, der skred til aggressiv sygdom [10]. Pak1 regulerer choriocarcinoma celleproliferation, migration og invasion evne i forbindelse med ændret niveau af p16, VEGF og MT1-MMP [10].
Up-regulering af Pak1 og PAK4 er også blevet observeret i andre menneskelige kræftformer [4 , 5, 11], såsom bryst- og tyktarmskræft. En nylig undersøgelse har rapporteret, at Pak1 nedreguleres af progesteron i den sekretoriske fase i normal endometrium [12]. Men forskellen udtryk for Paks i endometrie karcinom er begrænset. Heri udtryk og lokalisering af Pak1, fosforyleret (p) -Pak2
Ser20, PAK4 og p-PAK4
Ser474 (den aktiverede form) i normal, hyperplastiske og kræft endometrium blev vurderet og korreleret med klinisk-patologiske parametre. De proliferative rolle og nedstrøms mål i Pak1 i endometriecancer blev yderligere undersøgt.
Materialer og metoder
Kliniske prøver
Sixty-syv formalinfikserede, paraffinindstøbte indlejrede prøver af livmoderkræft herunder 56 endometrioide carcinomer, 7 serøse carcinomer og 4 klare celle carcinomer blev hentet fra Patologisk Institut, University of Hong Kong, Queen Mary Hospital for immunhistokemi. Kliniske og patologiske parametre, herunder østrogenreceptor alfa (ERa) og progesteronreceptoren (PR) status [13] som bestemt ved immunohistokemi blev hentet. Enogtyve prøver af normal endometrium (herunder 10 atrofisk, 5 sekretoriske og 6 proliferative endometrium), 16 prøver af hyperplastisk endometrium uden atypia (herunder 7 simpel hyperplasi og 9 kompleks hyperplasi) og 17 prøver af atypisk kompleks hyperplasi blev også hentet. Blandt de 17 atypisk kompleks hyperplasi, 8 tilfælde var ren atypisk hyperplasi mens 9 tilfælde udviklede derefter endometriecancere (atypisk hyperplasi med livmoderkræft). Gennemsnitsalderen for disse patienter var 57,2 år (spændvidde 20-82 år). Den gennemsnitlige opfølgningsperiode var 42.75 måneder (interval 1-108 måneder). Skriftligt informeret samtykke blev opnået ved alle patienter. Denne undersøgelse blev godkendt af Institutional Etiske Review Board fra University of Hong Kong /Hospital Myndighed Hongkong West Cluster (HKU /HA HKW IRB). Hæmatoxylin Eosin sektioner blev undersøgt af patologer at gennemgå diagnose og til at sikre, at hver prøve er sammensat af mere end 75% tumorceller.
Cellelinjer
Et humant normalt endometrie cellelinie (NEM) , forlænget fra primær kultur af normale endometriske celler fra en ~ 40-årig præmenopausale kvinder med regelmæssige 28-dages menstruationscyklus, blev venligt givet af professor Doris Benbrook (University of Oklahoma Health Sciences center) [14]. Tre humane endometriske cancercellelinjer, HEC-1B, HEC-1A og RL95-2 var fra ATCC (Manassas, VA). Alle kulturen blev dyrket som tidligere beskrevet [15].
Forbigående knockdown af Pak1 og PAK4 i RL95-2
Celler blev transficeret med 100 nM hver af si
GENOM
Smart -Pool for Pak1, PAK4 og si
Kontrol
nontargeting siRNA pool (Dharmacon, Lafayette, CO), ved hjælp af SilentFect (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) ifølge producentens anvisninger for 48 timer før RNA og protein udvinding, celletælling og celleudpladning [10].
Immunhistokemi
Kort fortalt blev formalin-fikseret paraffinindstøbte snit farvet med antistoffer mod Pak1, p-Pak2
Ser20, PAK4 og p- PAK4 Ser
474 (som anført i S1 tabel) ved hjælp af EnVision + Dual Link System (K4061, Dako, Carpinteria, CA) [8-10]. Microwave antigen recovery blev udført under anvendelse citratbuffer (pH 6,0). Udeladelse eller erstatning af det primære antistof med præimmunt IgG serum blev anvendt som en negativ kontrol. Både intensiteten og procentdelen af farvede epitelceller blev evalueret. Immunreaktivitet blev evalueret semikvantitativt ved intensitet og procentdelen af epitel farves. Farvningsintensitet blev scoret som 0 (negativ), 1 (svag), 2 (mild), 3 (moderat) og 4 (stærk). Procentdelen af positive celler blev bedømt som 0 ( 5%), 1 (5% -25%), 2 (26% -50%), 3 (51% -75%) og 4 ( 75%) . Et sammensat “Histoscore” blev givet ved at gange farvning intensitet (0-4) med den procentdel af farvede celler (0-4) med en maksimal score på 16 [16].
Real-time PCR
Totalt RNA blev ekstraheret fra cancer cellelinjer under anvendelse af Trizol-reagens (Invitrogen). 2,5 pg totalt RNA blev revers transskriberet af SuperScript revers transkriptase (Invitrogen, San Diego, CA). Real-time PCR blev udført med ABI Prism 7700 Detektionssekvensen systemet (Applied Biosystems, Foster City, CA) [17, 18]. Primer sekvenser for Pak1, PAK4, Cdc25A, cyklin D1, ERa, PR (målrette både PRA og PRB isoformer) og GAPDH (som intern kontrol) blev vist i S2 tabel. PCR renhed blev bekræftet ved gelelektroforese.
immunblotting
Celler blev høstet med lysepuffer (0,125 M Tris, pH 6,8 ved 22 oC indeholdende 1% NP-40 (v /v), 2 mM EDTA, 2 mM N-ethylmaleimid, 2 mM PMSF, 1 mM natriumorthovanadat og 0,1 uM natrium okadate], og klaret ved centrifugering ved 4 ° C. Proteinkoncentrationen blev bestemt ved DC (detergent kompatibel) proteinassay (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). 20 ug protein blev løst ved SDS-PAGE, overført til polyvinylidendifluoridmembran, og hybridiseret med tilsvarende antistoffer (som angivet i S1 tabellen) [17, 18].
Celleproliferation var bestemt ved celletælling metode
3 x 10
4-celler blev podet i 6-brønds dyrkningsplader. Cell nummer blev talt under anvendelse af trypan blåt farveeksklusion med hematocytometer på dag 4 [18].
Statistisk analyse
Statistisk analyse blev udført under anvendelse af SPSS 15.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL). Mann-Whitney-test blev anvendt til sammenligning mellem to grupper. Kruskal-Wallis rank test blev anvendt til sammenligning mellem flere grupper. Overlevelse analyse blev udført af Kaplan-Meier-analyse og log-rank test.
P
værdier 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.
Resultat
Udtryk af Pak1 og cytoplasmatisk p-Pak2 Ser
20 var højere i proliferativ endometrium. Pak1, cytoplasmatisk og nuklear PAK4 og nuklear p-PAK4 Ser
474 blev overudtrykt i endometriecancer sammenlignet med atrofisk endometrium
ved immunhistokemi blev Pak1 overvejende udtrykt i cytoplasmaet i endometriske væv med kun fokal kernefarvning påvist (fig 1A). I normale endometriske prøver viste atrofisk og sekretorisk endometrium svag ekspression henviser proliferativ endometrium viste stærk ekspression (Fig 1A i-iii). Hyperplastiske endometrium og livmoderkræft viste moderat til stærkt udtryk (figur 1A iv-ix). Pak1 udtryk i proliferativ endometrium var betydeligt højere end i atrofisk (
P
= 0,001) og sekretorisk (
P
= 0,004) endometrium, atypisk hyperplasi (
P
= 0,042 ) og livmoderkræft (
P
= 0,044) (figur 1B). Markant højere Pak1 udtryk i hyperplastisk endometrium og livmoderkræft end i atrofisk endometrium (begge
P
0,05) blev observeret (Fig 1B). Selvom højere Pak1 udtryk blev fundet i hyperplastisk endometrium og livmoderkræft end sekretorisk endometrium, var signifikant forskel nåede kun mellem simpel /kompleks hyperplasi og sekretorisk endometrium (Fig 1B). Lignende Pak1 udtryk blev påvist i hyperplastiske endometrium og livmoderkræft.
p-Pak2 blev påvist i både cytoplasmaet og kernen af endometrie væv (Fig 2A). Blandt alle kategorier viste proliferative endometrium den stærkeste cytoplasmatiske og nuklear p-Pak2 udtryk (figur 2A). Atrofisk og sekretorisk endometrium samt livmoderkræft viste svag cytoplasmatisk og nuklear p-Pak2 udtryk hvorimod hyperplastisk endometrium viste moderat cytoplasmatisk og nuklear p-Pak2 udtryk (figur 2A). Cytoplasmatisk p-Pak2 udtryk i proliferativ endometrium var signifikant højere end i alle andre kategorier (alle
P
0,05) undtagen kompleks hyperplasi hvorimod nuklear p-Pak2 kun gav signifikant højere udtryk i proliferativ endometrium end atrofisk (
P
= 0,046) og sekretorisk (
P
= 0,028) endometrium og livmoderkræft (
P
= 0,007) (figur 2B). Selvom højere cytoplasmatisk og nuklear p-Pak2 udtryk blev fundet i hyperplastisk endometrium end atrofisk endometrium, kun kompleks hyperplasi (
P
= 0,007) og ren atypisk hyperplasi (
P
= 0,013) viste signifikant højere cytoplasmatisk p-Pak2 ekspression (fig 2B). Desuden var der en betydelig reduceret cytoplasmatisk og nuklear p-Pak2 udtryk i livmoderkræft end i komplekse hyperplasi (
P
= 0,009 og
P
= 0,006, henholdsvis) og ren atypisk hyperplasi (
P
= 0,038 og
P
= 0,042, henholdsvis) (fig 2B).
PAK4 blev udtrykt i både cytoplasmaet og kernen af endometrie væv (fig 3) . Cytoplasmatisk og nuklear PAK4 viste svag udtryk i atrofisk endometrium og moderat til stærkt udtryk i sekretorisk, proliferative, hyperplastisk endometrium og livmoderkræft (Fig 3). Cytoplasmatisk PAK4 udtryk i atrofisk endometrium var signifikant lavere end i andre kategorier (alle
P
0,05) (Fig 3B, øverste panel). Markant højere cytoplasmatisk PAK4 udtryk blev også fundet i sekretorisk endometrium end kompleks hyperplasi (
P
= 0,047) og livmoderkræft (
P
= 0,036) (Fig 3B, øverste panel). Nuklear PAK4 i atrofisk endometrium vises også lavere udtryk end andre kategorier. Men signifikant forskel nuklear PAK4 udtryk kun observeret mellem livmoderkræft og atrofisk endometrium (
P
= 0,026) (Fig 3B, nederste panel). Der er ingen signifikant forskel på cytoplasmatisk og nuklear PAK4 udtryk mellem andre kategorier.
p-PAK4 blev også påvist i både cytoplasmaet og kernen af endometrie væv (Fig 4A). Cytoplasmatisk p-PAK4 udviste svag til moderat udtryk i alle kategorier (Fig 4A) og signifikant forskel blev kun fundet mellem proliferativ endometrium og enkel hyperplasi (
P
= 0,041) (figur 4B, øverste panel). Svag til moderat nukleare p-PAK4 ekspression blev observeret i atrofisk endometrium henviser andre kategorier vises stærk ekspression (Fig 4A). Signifikant forskel blev fundet mellem atrofisk endometrium og andre kategorier (alle
P
0,05) (fig 4B, nederste panel). Da nærværende undersøgelse omfattede 6 proliferative endometrium tilfælde kun, fejlen bar for nukleare pPak2 og PAK4 i proliferativ endometrium er relativt stor.
Up-regulering af Pak1 og PAK4 mRNA og protein-ekspression blev også fundet i cancer cellelinjer (HEC-1B, HEC-1A og RL95-2) sammenlignet med normale endometrie celler ved qPCR (figur 5A) og Western blot analyse (figur 5B), hhv.
Pak1, PAK4 og p-PAK4 ekspression korrelerede med klinisk-patologiske parametre. Pak1 udtryk korreleret med PR
Pak1 udtryk viste sig at korrelere betydeligt med histologisk type, histologisk bedømmelse (klasse 1/2 vs. 3) og patienternes alder ved diagnose (alle
P
0,05), men ikke med andre kliniske parametre (S3 Table). Patienter med type I endometrioide carcinom (Fig 1C), grad 1 og 2 og alder ≤ 57 vises højere Pak1 udtryk end dem med type II serøs og klar celle karcinom, grad 3 og alder 57. Markant højere cytoplasmatisk og nuklear p-Pak2 samt cytoplasmatisk PAK4 udtryk blev observeret i overfladisk myometrisk invasion end dyb myometrisk invasion (alle
P
0,05) (S3 tabel). Der var en signifikant korrelation eksisterede mellem PAK4 og p-PAK4 udtryk (både cytoplasmatisk og nuklear) og histologisk bedømmelse (alle
P
0,05) (S3 tabel). Højere kvalitet af tumorer viste lavere udtryk for PAK4 og p-PAK4. Cytoplasmatisk PAK4 viste signifikant lavere udtryk hos patienter med sent stadium sygdom og kræft involverer livmoderhalsen (alle
P
0,05) (S3 tabel). Ingen signifikant sammenhæng mellem ekspressionen af p-Pak2, PAK4 og p-PAK4 med andre kliniske parametre blev fundet.
Kaplan-Meier-overlevelse analyser afslørede, at lavere udtryk for cytoplasmatisk PAK4 (
P
= 0,026), men ikke Pak1, nukleare og cytoplasmatisk p-Pak2, nuklear PAK4, nukleare og cytoplasmatisk p-PAK4, resulterede i en dårligere overlevelse i livmoderkræft (fig 1D, 2C, 3C og 4C). Multivariat analyse viste, at cytoplasmatisk PAK4 er en uafhængig prognostisk faktor (
P
= 0,037).
Knockdown af Pak1 i endometriecancer celler reduceret celleproliferation og nedreguleret cyclin D1, ERa og PR
for at bestemme den proliferative rolle Pak1 og PAK4 i endometrie kræftceller, blev forbigående knockdown af Pak1 og PAK4 i RL95-2 udført af siRNA tilgang. Efter bekræftelse af specifikke knockdown af Pak1 og PAK4 mRNA (Fig 6A) og protein (figur 6B), blev virkningen på celleproliferation bestemt ved celletælling metode. Pak1 depleteret RL95-2 udviste signifikant reduceret proliferationshastighed sammenlignet med kontrolceller, der var transficeret med kontrol siRNA (Fig 6C). Der blev imidlertid ingen signifikant forskel i proliferationen sats efter knockdown af PAK4 i RL95-2 fundet (Fig 6C). Endvidere knockdown af Pak1 i RL95-2 betydeligt nedreguleret cellecyklus-relateret gen cyclin D1 og steroidreceptorer, ERa og PR, men har ingen virkning på en anden celle cyklus-relateret gen Cdc25A, som evalueret af qPCR (figur 6D). . Cyclin D1 blev også signifikant reduceret i siPak4 RL95-2 (Fig 6D)
Barer, betyder ± SD af tre eksperimenter; **,
P
0,005, Mann-Whitney test
Diskussion
Vores data viste signifikant højere Pak1 og cytoplasmatisk p-Pak2 udtryk i normal proliferativ. endometrium end sekretorisk endometrium, tyder Pak1 og p-Pak2 kan være forbundet med østrogen reguleret proliferative aktivitet af endometrium under menstral cyklus. I brystkræft, er blevet rapporteret regulering af Pak1 af østrogen [19]. Resultaterne også enig med foregående rapport nedregulering af Pak1 ved progesteron i normal sekretorisk endometrium [12].
Den proliferative rolle Pak1 og Pak2 er blevet dokumenteret i normale celler. For eksempel i fibroblaster, Pak1 phosphoryleret af CDC2A har vist sig at ændre post-mitotiske spredning, hvilket er et væsentligt skridt til cellecyklusprogression og proliferation [20]. Vores tidligere undersøgelse viste også at inddrage Pak1 i trofoblast spredning [10]. I normale brystepitelceller, blev hyperaktive Rac3 sig at forøge celleproliferation gennem Pak2 [21]. Phosphorylering af Pak2 ved Ser
20, dens tilsvarende phosphoryleringssted af Pak1 ved Ser
20 har vist sig at modulere Nck binding mellem cytosol og membran, således regulere cellemigrering [22, 23]. I vores tidligere undersøgelse blev cytoplasmatisk p-Pak2 detekteret i cytotrophoblast som kan betragtes som trophoblastiske stamceller ansvarlige for proliferation [10]. Vi har detekteret også nukleare p-Pak2 i endometrie væv, om end de roller p-Pak2 i kernen endnu mangler at blive yderligere undersøgt. Ligesom Pak1 og PAK4 [8, 24], kan p-Pak2 i kernen spille funktionen på gentranskription. Fremover undersøgelse, er det interesse at bestemme, om østrogen kan regulere Pak1 og p-Pak2 udtryk fører til øget proliferativ aktivitet af endometrium under menstral cyklus.
Vi fandt signifikant højere Pak1, cytoplasmatisk og nuklear PAK4 og nuklear p- PAK4 ekspression i endometriecancere end atrofisk endometrium. Forøget ekspression af Pak1 og PAK4 blev også påvist i endometriske cancercellelinier. De fleste funktioner af PAK4 er afhængig af dens kinaseaktivitet [8]. I vores tidligere undersøgelse, foruden cellemigrering udføres i cytoplasmaet, har vi afsløret regulering af gentranskription ved nukleær PAK4 i ovariecancer [8]. De foreliggende resultater antyder, at Pak1 kan cytoplasmatisk og nuklear PAK4 og nuklear p-PAK4 spille vigtige roller i patogenesen for endometriecancer især hos postmenopausale kvinder og kan være nyttige til påvisning af endometrisk carcinoma i små endometriebiopsier fra postmenopausale kvinder.
Vi har også demonstreret nedsat proliferation i endometriecancer celler efter Pak1 knockdown sammen med reduceret cyklin D1 udtryk. Vi og andre har dokumenteret proliferativ rolle Pak1 i andre humane cancere, såsom brystcancer [25], skællede ikke-småcellet lungecarcinom [26] og choriocarcinom [10]. Overekspression af cyclin D1, en D-type cyclin regulerer G1-S-fase cellecyklusprogression, er blevet rapporteret i endometriecancer [27, 28]. Tidligere undersøgelse viste også, at Pak1 regulerer prolactin medieret cyclin D1 promoter aktivitet i brystkræft [29]. De foreliggende resultater tyder på, at Pak1 kan regulere celleproliferation gennem ændring af cellecyklusprogression. Da cyclin D1 kan være et alternativt mål for terapi [30] og små molekyler inhibitorer til Pak familien er under udvikling [7, 31], kombineret målrettet behandling kan opnås til målretning endometriecancer. Selv om vi har afsløret proliferation forstærkende virkning af PAK4 på ovariecancer [8] og detekteret reduceret cyclin D1-ekspression i RL95-2 celler efter PAK4 knockdown i den foreliggende undersøgelse, kunne ingen signifikant effekt af PAK4 på endometriecancer celleproliferation påvises når PAK4 var transient stumme i RL95-2 celler i den foreliggende undersøgelse. Det er muligt, at virkningen på celleproliferation skal bestemmes ved hjælp af stabile Knockdown celler med længere inkubationstid før gør celletal metode. En sådan mulighed bør overvejes i fremtiden undersøgelse. Roller PAK4 i endometriecancer behov for at blive yderligere belyst.
Vi viste signifikant højere Pak1 udtryk i type I endometrioide karcinom end type II ikke-endometrioide carcinom. Type I endometrioide karcinom er en østrogen-afhængig tumor [2, 3]. Selvom tidligere undersøgelse har vist nogen virkning på Pak1 ekspression efter østrogenbehandling i Ishikawa-celler (en veldifferentieret endometrial adenocarcinoma-cellelinie) [12], fandt vi ERa og ER målgenet PR, faldt efter knockdown af Pak1 i RL95-2. Desuden er positiv korrelation mellem Pak1 og PR udtryk i vores endometriecancer kliniske prøver yderligere støtte deres link. Den stærke sammenhæng mellem ERa og PR-udtryk og type I endometrioide karcinom i forhold til type II ikke-endometrioide carcinom [32], forklarer effektiviteten af progestin terapi for type I endometrioide karcinom. I brystkræftceller, Pak1 inhibitor blokeret ER transaktiveringsassays funktioner og nedreguleret ER target produkt PR (både PRA og PRB isoformer) protein udtryk [33]. Desuden har Pak1 medieret phosphorylering af ERa ved Ser305 vist at forøge transaktivering af ERa fører til opregulering af ER-regulerede gener, såsom cyclin D1, som igen fremmer hormon-uafhængig vækst af brystcancerceller [33-35]. Det er muligt, at Pak1 er en af opstrøms mediatorer for ERa og PR udtryk i type I endometrioide karcinom og Pak1 kan øge væksten af endometriecancer celler gennem regulering ERa
Vi fandt lavere udtryk for cytoplasmatisk PAK4 var forbundet med dårligere prognose i livmoderkræft. Tidligere undersøgelser, herunder vores har fundet højere PAK4 ekspression bidrager til dårlig prognose hos patienter med ovariecancer [8] og mundtlige pladecellekræft [36]. Denne relativt overraskende association kan være relateret til den unikke biologiske miljø af endometriet, er en cyklisk proliferativt væv følsomt over for hormon regulering. Årsagen til en sådan observation skal undersøges yderligere i fremtiden.
Sammenfattende Pak1 og cytoplasmatisk p-Pak2 kan spille roller i den proliferative aktivitet af endometrium under menstral cyklus. Pak1, cytoplasmatisk og nuklear PAK4 og nuklear p-PAK4 er involveret i patogenesen for endometriecancer og kan være potentielle terapeutiske mål især hos postmenopausale kvinder. Pak1 forbedre endometriecancer celleproliferation navnlig i type I endometrioide carcinom. Cytoplasmatisk PAK4 kan være potentielt prognostisk markør i endometriecancer.
Støtte Information
S1 Table. Kilder og arbejdsvilkår fortyndinger af antistoffer anvendt i denne undersøgelse
doi:. 10,1371 /journal.pone.0133467.s001
(DOC)
S2 Table. Primere anvendes til real-time PCR
doi:. 10,1371 /journal.pone.0133467.s002
(DOC)
S3 Table. Korrelation af Pak1, nukleare og cytoplasmatisk p-Pak2, PAK4 og p-PAK4 med klinisk-patologiske parametre i endometriecancer
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0133467.s003
(DOC)
Tak
Denne undersøgelse blev støttet af Hongkong Anti-Cancer Society Grant, University of Hong Kong Lille Projekt Finansiering og konferencen og Forskningsråd Grant.
Leave a Reply
Du skal være logget ind for at skrive en kommentar.