PLoS ONE: Autophagic Protein Beclin en Fungerer som en uafhængig Positiv Prognostisk Biomarkør for ikke-småcellet Cancer

Abstrakt

Beclin en, en vigtig regulator af autophagy, har vist sig at være afvigende udtrykt i en række af humane maligniteter. Heri anvendte vi immunhistokemi (IHC) for at detektere proteinekspression af Beclin 1 i ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) og parrede normale tilstødende lungevæv, og analyseret sin klinisk-patologisk /prognostisk betydning i NSCLC. Receiver operating characteristic (ROC) kurve analyse blev anvendt til at bestemme en cutoff point ( 2 VS. ≤2) for Beclin 1 ekspression i et træningssæt (n = 105). For validering blev ROC-afledte cutoff værdi underkastet analyse af sammenslutningen af ​​Beclin 1 med patienternes kliniske karakteristika og resultat i en test sæt (n = 111) og den samlede patientpopulation kohorte (n = 216). Vores data viser, at Beclin 1 var signifikant lavere i NSCLC væv sammenlignet med de tilstødende normale væv, negativt associere med tumor recidiv rate (65,8% VS 32,3%;

s

0,001). I sættet test og den samlede patientpopulation kohorte, lav udtryk for Beclin 1 viste signifikant ringere samlet overlevelse (OS) (

s

0,001) og progressionsfri overlevelse (PFS) (

p

0,001) i forhold til høj ekspression af Beclin 1. i den indstillede test og den samlede patientpopulation kohorte, den gennemsnitlige varighed af OS for patienter med høj og lav udtryk for

Beclin 1

var 108 VS. 24,5 måneder (

s

0,001) og 108 VS. 28 måneder (

s

0,001) henholdsvis. Desuden lav udtryk for

Beclin 1

var også en dårlig prognostisk faktor inden for hver fase af NSCLC-patienter. Multivariat analyse identificeret som

Beclin 1

var en uafhængig prognostisk faktor for NSCLC. Vores resultater i denne undersøgelse dokumenteret, at Beclin 1 kan således fremstå som en uafhængig prognostisk biomarkør i denne tumor enhed i fremtiden.

Henvisning: Zhou W, Yue C, Deng J, Hu R, Xu J, Feng L, et al. (2013) Autophagic Protein Beclin en Fungerer som en uafhængig Positiv Prognostisk biomarkør for ikke-småcellet lungekræft. PLoS ONE 8 (11): e80338. doi: 10,1371 /journal.pone.0080338

Redaktør: Andreas-Claudius Hoffmann, vesttyske Cancer Center, Tyskland

Modtaget: Juni 2, 2013; Accepteret: 2 oktober 2013; Udgivet 15. november, 2013 |

Copyright: © 2013 Zhou et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Arbejdet blev støttet af National Nature Science Foundation of China (Grant nr 81.160.305 og Grant nr 81.160.306), en National Science fond for Distinguished Young Scholars (Grant nr 30.888.003), og staten Key Program for National Natural Science Kina (Grant Nej. 81.130.040). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

lungekræft tegner sig for 15% af kræftdiagnoser, viser sig som en af ​​de førende årsager til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan [1]. Ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) repræsenterer 80-85% af lungecancere [2]. Trods betydelige fremskridt i kirurgiske teknikker og medicinsk behandling, den 5-årige overlevelsesrate hos patienter med NSCLC er fortsat kun 15% [2]. Vanskeligheder ved tidlig diagnose, stort potentiale for metastaser og forekomsten af ​​behandlingen modstand for fremskreden sygdom er ansvarlige for den dårlige overlevelse af NSCLC. Selvom meget er kendt om de kausale faktorer, kliniske funktioner og patogenese af NSCLC, den molekylære markør, der har stor klinisk prognostisk prædiktiv værdi forbliver væsentligt begrænset. Mange undersøgelser har vist, at multiple genetiske ændringer og epigenetiske ændringer er ansvarlige for udviklingen og progressionen af ​​NSCLC [3]. Tilstedeværelsen af ​​

KRAS

mutation repræsenterer den mest almindelige molekylære ændring i NSCLC og har vist sig at være forbundet med en dårlig prognose [4]. Aktivering af PI3K /AKT-vejen og tab af PTEN i NSCLC patienter er forbundet med høj kvalitet og mere fremskreden sygdom [5]. Desuden afvigende DNA methylering tjente som en markør for tidlig påvisning af lungekræft [6]. Promotor methylering af p16 er en indikator for dårlig prognose af NSCLC [7]. Således kan identifikation af biologiske markører med til at vurdere prognosen mere præcist eller mere klart at afgøre brugen af ​​adjuverende behandling.

Autophagy refererer til en cellulær kataboliske proces, der leverer cytoplasmatiske komponenter til lysosomer til efterfølgende nedbrydning eller genbruger lang -lived proteiner og organeller for at opretholde intracellulær homeostase i cellen [8]. Der er tre principielle autophagic veje, herunder microautophagy, chaperone-medieret autophagy (CMA), og macroautophagy [9]. Macroautophagy er den vigtigste undertype af autofagi (herefter kaldet autophagy) [9]. Beclin 1, som den første identificeret pattedyr autophagy effektor, er afgørende for indledningen af ​​autophagy ved at danne Beclin 1-interagerende kompleks, som består af BCL-2 familie proteiner, klassen III phosphatidylinositol 3-kinase (VPS34), og ATG14L [10]. Det bliver klart, at Beclin en besidder en ny Bcl-2 homologi region-3 (BH3) domænet [11-13]. Bcl-2-familien proteiner kan binde til BH3-domænet i Beclin 1 og inhiberer Beclin 1-medieret autophagy ved sekvestrering Beclin 1 væk fra hVps34 [11-13]. Modulation af Beclin 1 eller BCL-2 ved phosphorylering eller ubiquitinering kan dissociere BCL-2 familiemedlemmer fra Beclin 1 og aktivere VPS34-aktivitet, hvilket fører til en stigning i autofagi [14]. Følgelig apoptose og autofagi kan co-reguleret i de samme retninger.

For nylig er autophagy defekt rapporteret at spille en kritisk rolle i tumorigenese og tumorprogression [10,15-17]. Faktisk har Beclin 1 blevet rapporteret at være mono-allelically nedsat eller slettet i human ovarie-, bryst- og prostatakræft [10]. Becn1

+/- tumorer viste nedsat autophagy, forhøjet celle stress og genom ustabilitet, der i sidste ende accelererer mamma tumorigenese [18]. Knockdown af

Beclin 1

i mus fører til hæmning af autofagi og efterfølgende en høj forekomst af spontane tumorer, herunder lymfom, lever og lungekræft [19,20]. Endvidere er reduceret ekspression af Beclin 1 fundet at være forbundet med den primære tumorvækst i NSCLC [21]. Disse data tyder på, at

Beclin 1

fungerer som en haploinsufficient tumor-suppressor protein gennem sin regulering af autofagi. Alligevel autofagi forekommer som et cytobeskyttende proces, og det blev foreslået som en alternativ mekanisme af resistens ved at fremme tumorcelleoverlevelse under ugunstige forhold. I lungekræft, viser flere undersøgelser, at autophagy hæmning repræsenterer en lovende tilgang til at forbedre effektiviteten af ​​behandlingen hos patienter med fremskreden ikke-småcellet lungecancer [22,23].

Heri analyserede vi udtryk for autophagic protein

Beclin 1

i 216 NSCLC prøver og analyseret dets overensstemmelse med klinisk-patologiske faktorer af NSCLC patienter. Vores resultater viste, at

Beclin 1

, som påvist ved immunhistokemi, var signifikant lavere i NSCLC væv sammenlignet med de tilstødende normale væv, og negativt forbundet med tumor tilbagefald sats. Lav udtryk for Beclin en forudsagt en ringere OS og PFS i NSCLC. Desuden multivariat analyse viste, at

Beclin 1

var en uafhængig prognostisk faktor for NSCLC.

Materialer og metoder

Patienter og vævsprøver

I alt 244 primære NSCLC prøver fra arkiverne i Patologisk Institut i kræft centrum af Sun Yat-sen Universitet (Guangzhou, Kina) indgik i vores studie. Alle patienter accepterede helbredende operation fra 2001 til 2003. Vi yderligere screenet patienter ved hjælp af en streng støttekriterier protokol som følgende: mikroskopisk bekræftet NSCLC (herunder pladecellekarcinom, adenocarcinom og adenosquamøst karcinom); uden nogen fjerntliggende metastatiske sygdomme; ingen tidligere kemoterapi eller stråleterapi historie; har over 5 års opfølgningsperiode; herunder ikke-rygere (daglig cigaretforbrug × års rygning = 0) og rygere (tidligere rygere og /eller nuværende rygere) [24]. I sidste ende blev 28 patienter med tab af opfølgningen ikke inkluderet i nærværende undersøgelse, der fører til 216 NSCLC patienter omfatte af yderligere kliniske og overlevelse analyse. Blandt de samlede patienter (n = 216), 116 (116/216, 53,7%) blev censureret som døden i løbet af de 5 års follow-up tid (4 tilfælde døde af postoperative komplikationer og 112 tilfælde døde af tumor progression).

af de 216 NSCLC patienter (median alder, 47,0 år range, 22-74 år), der med positive lymfeknude metastaser (n = 100) blev behandlet med fire til seks cyklusser af cisplatin + navelbin adjuverende kemoterapi efter kirurgisk resektion, mens patienter med negativ lymfeknude metastaser (n = 116) modtog ikke adjuverende kemoterapi. Endvidere blev der ikke adjuverende strålebehandling administreret til nogen af ​​de patienter efter operation. Den kohorte af 216 NSCLC-patienter blev derefter tilfældigt opdelt i træningssættet (n = 105) og afprøvning sæt (n = 111) ved computeren (SPSS 17.0 software). Kort fortalt i træningssættet, er der 78 mænd og 27 kvinder, med 38 tilfælde for fase I, 31 tilfælde for fase II og 36 sager for fase III. I mellemtiden er der 81 mænd og 30 kvinder i sættet test, med 41 tilfælde for fase I, 28 sager for fase II og 42 sager for fase III. Den histologiske og scene type blev bestemt i overensstemmelse med klassificeringen af ​​NSCLC af WHO og International Union mod Kræft Tumor-Node-Metastase (TNM) iscenesættelse systemet [25]. Skriftligt informeret samtykke til brug af væv blev opnået fra alle patienter før operation, og undersøgelsen blev godkendt af Institute Research etiske komité af Sun Yat-Sen University.

Tissue microarray konstruktion og immunhistokemi farvning

To repræsentative kerne vævsbiopsier (0,6 mm i diameter) udstanses fra repræsenterede NSCLC væv og en cylinder med samme diameter fra tilstødende normale lungevæv. Flere sektioner (5 um tyk) blev skåret fra TMA blokke og monteret på objektglas. Et afsnit fra TMA blok blev farvet med Hematoxylin og Eosin (H Santa Cruz, SC-11427) i et fugtigt kammer. Derefter Objektglassene blev inkuberet i tilsvarende sekundære antistoffer (HRP-anti-kanin;. Thermo Scientific, kat nr 31460) ved stuetemperatur i 30 min. Reaktionsprodukter blev visualiseret ved farvning med 3, 3-diaminobenzidin (3, 3-diaminobenzidin, Dako, katalog nr K5007.). Efter modfarvet med hæmatoxylin, alle dias var dehydreret og lagres. Negative kontroller blev opnået ved at erstatte

Beclin 1

antistof med tilsvarende ikke-immune serum immunoglobulin. Vores tidligere veldefinerede immunostaining- positive mavekræft slides blev anvendt som positiv kontrol [27].

Farvning evaluering

farvning intensitet og omfanget af

Beclin 1

blev gradueret som tidligere beskrevet [27]. Kort fortalt blev farvningen intensitet inddeles i negativ (score 0), der grænser (score 1), svag (score 2), moderat (score 3) og stærk (score 4). Desuden blev farvningen grad også sorteres i fem niveauer ifølge procentdelen af ​​celler med forhøjet Beclin 1-farvning, herunder negative (score 0), 0-25% (score 1), 26-50% (score 2), 51 -75% (score 3) og 76-100% (score 4).

Beclin 1

farvning blev vurderet ved to patologer, der var uvidende om nogen kliniske detaljer i forbindelse med patienterne. Vurderingen blev kongruent i 85% af tilfældene, hvilket indikerer en meget reproducerbar pointsystem. I afvigende tilfælde blev en fornyet vurdering udført. Værdien blev valgt indtil begge patologer aftalt med resultatet.

Valg af en cutoff point for

Beclin 1

udtryk

Receiver Operating karakteristik (ROC) kurve analyse er normalt bruges i klinisk onkologi at vurdere og sammenligne følsomheden og specificiteten af ​​diagnostiske tests [28,29], eller identificere tærskelværdien, over hvilken et testresultat bør betragtes som positivt for nogle udfald [28]. ROC-kurve analyse har vist sig at være reproducerbar at evaluere IHC proteinekspression og at vælge biologisk eller klinisk relevant cut-off score for tumor positivitet [27,28,30]. Heri, brugte vi ROC kurve analyse for at vælge cutoff punkt

Beclin 1

til OS og PFS i træningssættet (n = 105). Kort sagt, den score lokaliseret nærmest det punkt, både maksimal følsomhed og specificitet (0,0, 1,0) blev valgt som cutoff score på

Beclin 1

, der fører til det største antal tumorer, som korrekt blev klassificeret som havende eller ikke har resultatet. ROC kurve analyse blev lettet ved dichotomizing funktionerne i patienternes resultater til overlevelse (død VS. andre (censureret, levende eller død af andre årsager)) og progression (lokal fejl eller fjernmetastaser).

Opfølgning

Alle patienter havde opfølgende poster for over 5 år. Efter afslutning af terapien blev patienterne observeret efter 3 måneders intervaller i de første 3 år og med 6 måneders intervaller derefter. Den seneste opfølgning blev opdateret i september 2011. OS blev defineret som tiden fra tumor resektion til datoen for død eller når censureret på den seneste dato, hvis patienterne stadig var i live; PFS blev defineret som tiden fra tumor resektion til datoen for sygdommens tilbagefald /progression eller datoen for død eller når censureret på den seneste dato.

Statistisk analyse

ROC analyse blev brugt til at få et optimalt cutoff punkt i

Beclin 1

udtryk for overlevelse analyse i træningssættet (n = 105). For validering, forholdet mellem

Beclin 1

udtryk og OS, PFS blev evalueret i afprøvningen sæt (n = 111) og den samlede patientpopulation kohorte (n = 216). Forholdet mellem

Beclin 1

udtryk og klinisk-patologiske variabler blev analyseret af chi-square test eller Fishers eksakte test. Kaplan-Meier analyse blev anvendt til at vurdere forholdet mellem

Beclin 1

udtryk og OS og PFS. Forskelle i overlevelsessandsynligheder mellem patient delmængder blev vurderet af log-rank test. Den multivariate Cox proportionel risiko model blev anvendt til at estimere hazard ratio og 95% konfidensintervaller for patient resultat. Alle

p

værdier citerede var tosidet og

s

0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Statistisk analyse blev udført ved hjælp af SPSS v. 17,0 (SPSS, Inc, Chicago, IL).

Resultater

Beclin 1

Expression i NSCLC og normale tilstødende væv

Immunhistokemi blev ansat til at undersøge protein udtryk for

Beclin 1

i primære NSCLC prøver og normale tilstødende væv. Immunoreaktiviteten af ​​

Beclin 1

blev observeret primært i cytoplasmaet (figur 1 og figur S1). Baseret på en kombination af intensiteten af ​​farvning og omfanget blev prøverne klassificeret i fire grupper, gruppe 1 med næsten negativ farvning (+), gruppe 2 med svag farvning (++), gruppe 3 med moderat farvning (++ +), gruppe 4 med den stærke farvning (++++; Figur 1A-C). Som vist i figur 1, er høj ekspression af

Beclin 1

hovedsageligt findes i normale lungevæv, manifesterer det store antal prøver med gruppe 3 (74 af 216, 34,3%, figur 1D) og gruppe 4 (93 af 216, 43,1%, figur 1D), mens lunge tumorvæv, uanset tumor undertyper, viste moderat

Beclin 1

farvning (figur 1A, B, D)

(AC), NSCLC tissue arrays indeholder normale lunge- og tumorvæv blev farvet for

Beclin 1

udtryk. Farvede normale og tumorvæv blev klassificeret i fire grupper (+ til ++++) i henhold til farvning intensitet og forlængelse af hvert væv. (D), procentdel af normale eller tumorvæv i hver farvning gruppe. Vævsprøver med forskellig farvning intensitet og udvidelse blev grupperet og tabuleret.

For yderligere overlevelse analyse og undgå problemerne med flere valg beskæringspunkts blev ROC kurve analyse udført for at bestemme en rimelig cutoff punkt i

Beclin 1

i træningssættet (n = 105).

Beclin 1

cutoff point for OS og PFS i træningssættet var 2,7 (

s

0,001, figur 2A) og 2,9 (

s

= 0,001, figur 2B) hhv. En score på 2 ( 2 VS. ≤2) for

Beclin 1

udtryk blev valgt som det ensartede cutoff punkt at skelne NSCLC patienter høj eller lav ekspression af

Beclin 1

.

(A) og (B) viste de

Beclin 1

cutoff point for samlet overlevelse og progressionsfri overlevelse i træningssættet. Ved hver immunhistokemisk score, idet følsomheden og specificiteten for udfaldet undersøgt blev afbildet, hvorved der genereres et ROC-kurve. Det cutoff punkt

Beclin 1

for samlet overlevelse og progressionsfri overlevelse var 2,7 og 2,9 hhv.

Beclin 1

udtryk og kliniske funktioner

De kliniske funktioner i patienter, herunder alder, køn, rygevaner, CEA-niveau, indledende kliniske fase, histologi, differentiering, tumor stadie, lymfeknude metastaser, gentagelse, og

Beclin 1

udtryk, blev opsummeret i tabel 1.

Beclin 1

cutoff score på to stammer fra uddannelsen sæt med held adskilt test indstillet i to undergrupper. Kort fortalt patienter med en cutoff score er 2 betragtes som Beclin en høj ekspression (50/111, 45,0%), og dem med en score ≤2 ses som Beclin en lav ekspression (61/111, 55,0%). Lav udtryk for

Beclin 1

blev hovedsageligt fundet i patienter med positiv recidiv (78/117, 65,8% hos patienter med positiv recidiv VS. 32/99, 32,3% hos patienter med negativ recidiv,

p

0,001). Desuden korrelationsanalyse viste, at

Beclin 1

udtryk var negativt korreleret med tumor tilbagefald sats i begge sæt (

s

0,001 i træningssættet og

s

= 0,001 i sættet afprøvning tabel 1). Desuden

Beclin 1

udtryk også negativt korreleret med den indledende tumor fase (

s

0,001, tabel 1). Lav udtryk for

Beclin 1

var forbundet med metastatisk spredning til lymfeknuderne (

s

= 0,001, tabel 1) i træningssættet, og korreleret med differentiering (

p

= 0,020, tabel 1) og CEA-niveau (

s

= 0,002, tabel 1) i sættet test. Vi kunne ikke vise nogen sammenhæng mellem Beclin 1-ekspression og andre patientkarakteristika herunder alder, køn, rygevaner etc.

Variabel

Alle tilfælde

Training Set (n = 105)

Test Set (n = 111)

høj

Lav

P

høj

Lav

P

Alder (år ) ≥ 60,010526212533 ​​ 60.011130280.71325280.667GenderMale15943353447Female5713140.53116140.285Smoking historyYes12835272739No8821220.44223220.289CEA (ng /ml) 5.09722241536≤ 5.011934250.31835250.002Initial klinisk stagei7927112318II5920110.00012160.169III789271527HistologySquamous celle carcinoma451491012Adenocarcinoma16542400.41238450.839Adenosquamous carcinoma60024DifferentiationWell441271015Moderately7223150.19222120.020Poorly10021271834Tumor stageT

1 + T

216044314243T

3 + T

45612180.0838180.095Lymph node metastasisNegative11640192928Positive10016300.00121330.205RecurrencePositive11717332245Negative9939160.00028160.001Table 1. Sammenslutningen af ​​

Beclin 1

udtryk med patientens clinicopathologic karakteristika i NSCLC

CSV Hent CSV

Beclin 1

udtryk og overlevelse analyse:. Univariat overlevelsesanalyse

som vist i figur 3, viste Kaplan-Meier analyse, lav udtryk for

Beclin en stærkt

forudsagde en ringere OS og PFS i sættet test (

s

0,001 for både OS og PFS, 3A og 3B), og den samlede patientpopulation kohorte (

s

0,001 for både OS og PFS, figur 3C og 3D). I sættet test og den samlede patientpopulation kohorte, den gennemsnitlige varighed af den samlede overlevelse for patienter med høj og lav udtryk for

Beclin 1

var 108 VS. 24,5 måneder (

s

0,001) og 108 VS.28 måneder (

s

0,001) henholdsvis. Yderligere analyse blev udført mellem

Beclin 1

udtryk og undergrupper af NSCLC patienter inden for hver klinisk fase. Lav udtryk for

Beclin 1

også fungeret som en dårlig prognostisk faktor i hvert trin i NSCLC-patienter i sættet test: fase I (

s

= 0,002 til OS og

p

= 0,030 for PFS, figur 4A og 4B), fase II (

s

= 0,018 til OS og

s

= 0,049 for PFS, 4C og 4D), og fase III (

s

0,001 til OS og

s

= 0.003 for PFS, figur 4E og 4F). For den samlede patientpopulation kohorte, resultater svarede til dem, der findes i sættet test (Figur 4G-L).

(A) Lav udtryk for

Beclin 1

var tæt korreleret med dårlig samlet overlevelse og (B) progressionsfri overlevelse i test sæt (n = 111). (C) Patienter med lavere

Beclin 1

udtryk erhvervede også en ringere samlet overlevelse og (D) progressionsfri overlevelse i den samlede patientpopulation kohorte (n = 216). I sættet test og den samlede patientpopulation kohorte, den gennemsnitlige varighed af den samlede overlevelse for patienter med høj og lav udtryk for

Beclin 1

var 108 VS. 24,5 måneder (

s

0,001) og 108 VS.28 måneder (

s

0,001) henholdsvis

(A) Sandsynlighed for overordnede. overlevelse og (B) progressionsfri overlevelse NSCLC-patienter med i stadium i sættet test: lav ekspression, n = 18; høj ekspression, n = 23. (C) Sandsynlighed for samlet overlevelse og (D) progressionsfri overlevelse NSCLC patienter med stadium II i sættet test: lav ekspression, n = 16; høj ekspression, n = 12. (E) Sandsynlighed for samlet overlevelse og (F) progressionsfri overlevelse NSCLC patienter med stadium III i sættet test: lav udtryk, n = 27; høj ekspression, n = 15. (G) Sandsynlighed for samlet overlevelse og (H) progressionsfri overlevelse NSCLC patienter med stadie Ⅰin det den samlede patientpopulation kohorte: lav udtryk, n = 29; høj ekspression, n = 50. (I) Sandsynlighed for samlet overlevelse og (J) progressionsfri overlevelse NSCLC patienter med stadie II i den samlede patientpopulation kohorte: lav udtryk, n = 27; høj ekspression, n = 32. (K) Sandsynlighed for samlet overlevelse og (L) progressionsfri overlevelse NSCLC patienter med stadium III i den samlede patientpopulation kohorte: lav udtryk, n = 54; høj ekspression, n = 24.

multivariat Cox regressionsanalyse

Med henblik på at undgå indflydelse forårsaget af univariat analyse, udtryk for

Beclin 1

som samt andre parametre blev undersøgt i multivariat Cox-analyse i sættet prøvning og den samlede patientpopulation kohorte (tabel 2 og tabel 3). Som vist i tabel 2,

Beclin 1

var en uafhængig biomarkør at forudsige prognosen for OS (hazard ratio, 4,235; 95% CI, 2,382-7,528;

s

0,001, tabel 2) og PFS (hazard ratio, 3,420; 95% CI, 1,936-6,042;

s

0,001, tabel 2) i sættet test. Lignende observation blev også fundet i den samlede patientpopulation kohorte (til OS, hazard ratio, 3,721; 95% CI, 2,453-5,645;

s

0,001, tabel 3, for PFS, hazard ratio, 2,987; 95 % CI, 2,004-4,453;

s

0,001, tabel 3). Endvidere blev CEA-niveau, lymfeknudemetastase, rygevaner, og alder også identificeret som uafhængige prognostiske parametre for OS og /eller PFS i sættet prøvning og /eller den samlede patientpopulation kohorte (tabel 2, tabel 3). Men indledende kliniske fase, som et godt karakteriseret uafhængig prognostisk faktor, blev ikke fundet som selvstændig prognostisk faktor i vores resultater.

Variabel Hus Til døden Hus Til progressionsfri overlevelse

Hazard Ratio

95% konfidensinterval

P

Hazard Ratio

95% konfidensinterval

P

Alder (år) ≥ 60.00 ( VS. 60,0) 1,266 (0,734-2,185) 0.3961.053 (0,613-1,808) 0.852Gender Mand (VS. Female) 3,289 (1,336 to8.096) 0.0103.449 (1,535-7,747) 0.003Smoking historie Ja (VS. ingen) 4,643 (1,958 til 11,009) 0.0002.443 (1,158-5,152) 0.019CEA (ng /ml) 5 (VS. ≤ 5) 2,556 (1,516-4,309) 0.0002.133 (1,271-3,581) 0.004Initial klinisk stageI0.998 (0,277-3,603) 0.9981.063 (0,267-4,231) 0.931II0.785 (0,340-1,813) 0,5710 0,928 (0,387-2,228) 0.868III1111HistologySquamous celle carcinoma1.558 (0,443-5,478) 0.4901.195 (0,405-3,523) 0.747Adenocarcinoma1.474 (0,378-5,742) 0.5760.640 (0,179-2,293) 0.493Adenosquamous carcinoma1111DifferentiationWell0.886 (0,414 til 1,897) 0.7560.538 (0,258-1,121) 0.098Moderately1.159 (0,578-2,324) 0.6770.641 (0,315-1,303) 0.219Poorly1111Tumor fase T

4 + T

3 (VS. T

2 + T

1) 1,091 (0,583-2,042) 0.7851.359 (0,715-2,585) 0.350Lymph node metastase Positiv (VS. Negativ) 2,448 (1,428-4,199) 0.0011.854 (1,098-3,130) 0,021

Beclin 1

lav (VS. høj) 4,235 (2,382-7,528) 0.0003.420 (1,936-6,042) 0.000Table 2. Resultater af multivariat Cox proportional-farer analyse i sættet test (n = 111).

CSV Hent CSV Variabel Hus Til døden Hus Til progressionsfri overlevelse

Hazard Ratio

95% konfidensinterval

P

Hazard Ratio

95 % konfidensinterval

P

Alder (år) ≥ 60.00 (VS. 60,0) 1,375 (0,951-1,988) 0.0911.039 (0,708-1,524) 0.846Gender Mand (VS. Female) 1,422 (0,794-2,546) 0.2361.285 (0,744-2,219) 0.369Smoking historie Ja (VS. Nej) 1,493 (1,021 til 2,184) 0.0391.105 (0,637-1,917) 0.723CEA (ng /ml) 5 (VS. ≤ 5) 2,186 (1,484-3,220) 0.0002.043 (1,395-2,992) 0.000Initial klinisk stageI0.758 (0,286-2,012) 0.5780.969 (0,354-2,652) 0.951II0.853 (0,467-1,558) 0,6050 0,928 (0,494-1,742) 0.816III1111HistologySquamous celle carcinoma1.239 (0,379-4,047) 0.7230.987 (0,354-2,746) 0.979Adenocarcinoma1.070 (0,305-3,763) 0.9160.632 (0,199-1,950) 0.417Adenosquamous carcinoma1111DifferentiationWell0.765 (0,434 til 1,347) 0.3530.640 (0,369-1,110) 0.112Moderately0.959 (0,619-1,485) 0.8500.931 (0,606-1,430) 0.745Poorly1111Tumor fase T

4 + T

3 (VS. T

2 + T

1) 1,122 (0,701-1,794) 0.6311.195 (0,678-1,814) 0.477Lymph node metastase Positiv (VS. Negativ) 2,576 (1,725-3,847) 0.0001.862 (1,262-2,746) 0,002

Beclin 1

lav (VS. høj) 3,721 (2,453-5,645) 0.0002.987 (2,004-4,453) 0.000Table 3. Resultater af multivariat Cox proportional-farer analyse i den samlede patientpopulation kohorte (n = 216).

CSV Hent CSV

diskussion

Autophagy, som er stærkt bevaret fra gær til menneske, er en væsentlig kataboliske vej for nedbrydning af cellulære komponenter i [8] lysosomer. Forskellig fra Ubiquitin-Proteasome System (UPS), der direkte forringer en række regulatoriske proteiner i cytoplasmaet eller cellekernen, autofagi målrettet mod et bredt spektrum af substrater, herunder proteinaggregater, langlivede proteiner eller beskadigede organeller mod lysosomer til efterfølgende nedbrydning. Autophagy involverer i en serie af normale og patologiske processer. For nylig autophagy opstået som en central regulator af flere aspekter af cancer biologi, herunder initiering og progression af cancer, samt indflydelse på effektiviteten af ​​terapeutiske interventioner på denne sygdom [31,32]. Autophagy kan vise et anticarcinogenic funktion i primære celler ved at sikre mod metabolisk stress gennem homeostatiske omsætning mitokondrier og afskaffelse af proteinaggregater.

Beclin 1

, som en central regulator af autophagy, får meget opmærksomhed i de seneste år på grund af sit engagement i carcinogenese og kræft progression. Kliniske undersøgelser har forbundet dårlig prognose og aggressive tumor fænotyper med afvigende ekspression af

Beclin 1

i tumorvæv [27,33-36]. Endvidere Beclin 1-afhængig autophagic funktion er blevet vist, at være undertrykt i human cancer ved aktivering AKT [37].

For nylig nedsat ekspression af

Beclin 1

og

LC3

blev påvist i humane lungecancer væv, hvilket indikerer en mulig rolle i patogenesen for lungekræft. Ingen af ​​de ovennævnte undersøgelser rettet den prognostiske rolle Beclin 1 i lungekræft hidtil [38]. Derudover en anden undersøgelse viste, at

Beclin 1

udtryk blev omvendt forbundet med tumorstørrelse og primær tumor stadie (PT) i lunge planocellulært karcinom og adenokarcinom, men viser ingen forbindelse med den samlede overlevelse [39]. Her, for at undgå problemerne med flere valg beskæringspunkts og få en fordomsfri

Beclin 1

cutoff point for klinisk implikation, brugte vi ROC kurve analyse som en alternativ metode i udvælgelsen og validering af cut-off scores til at bestemme klinisk mest relevante grænse til immunhistokemisk tumor positivitet. Vi analyserede klinisk-patologisk /prognostiske betydning af

Beclin 1

i et samlet antal på 216 NSCLC-patienter, som består af kohorten I (n = 105) til træningssættet og kohorte II (n = 111) til test sæt. ROC-afledte cutoff værdi blev udsat for analyse af sammenslutningen af ​​

Beclin 1

med patienternes kliniske karakteristika og resultat i en test sæt (n = 111) og den samlede patientpopulation kohorte (n = 216).

Derfor

Beclin 1

udtryk, blev hovedsageligt findes at være lav hos patienter med sygdom tilbagefald (tabel 1), hvilket indikerer, at

Beclin 1

kan være involveret i NSCLC progression . Desuden viste Kaplan-Meier overlevelsesanalyse, at lav udtryk for

Beclin 1

forudsagt en betydelig OS og PFS ulempe i høj ekspression af

Beclin 1

undergruppe i sættet test og den samlede patientpopulation kohorte ( figur 3). Derudover lav Beclin 1-ekspression forblev en dårlig prognostisk faktor i hvert trin i NSCLC-patienter (figur 4), fremstår som en selvstændig prognostisk faktor for NSCLC (tabel 2, tabel 3). Imidlertid blev indledende klinisk fase ikke registreret som selvstændig prognostisk faktor i vores resultater. Under alle omstændigheder, er der en tendens til bedre samlet overlevelse i de lavere kliniske faser, som tegner sig for mindre sager og ikke statistisk signifikant.

I betragtning af den prognostiske betydning af

Beclin 1

protein i forskellige menneskelige kræft, har rapporter trukket komplicerede konklusioner. Tidligere har en række undersøgelser dokumenteret, at

Beclin 1

udtryk nedreguleret i brystkræft, leverkræft, livmoderhalskræft og kræft i æggestokkene, associere med en ringere prognose [33,34,36].