PLoS ONE: Udvikling af en Klinisk-Præcis Mouse Model of Rektal Cancer

Abstrakt

I øjeblikket anvendte gnaver tumormodeller, herunder transgene tumormodeller eller subkutant voksende tumorer i mus, ikke i tilstrækkelig grad repræsenterer klinisk cancer. Vi rapporterer her udvikling af metoder til at opnå en meget klinisk præcise endetarmskræft model. Denne model blev oprettet ved intrarektal transplantation af muse rektale cancerceller, der stabilt udtrykker grønt fluorescerende protein (GFP), efterfulgt af afbrydelse epithelcellelaget af den rektale slimhinde ved inddrypning en eddikesyreopløsning. Tidlige fase tumor blev påvist i den rektale slimhinde ved 6 dage efter transplantation. Tumoren blev så invasiv ind submucosavævet. Tumoren Forekomsten var 100% og betyder volumen (± SD) var 1232.4 ± 994,7 mm

3 ved 4 uger efter transplantation opdaget ved fluorescens billeddannelse. Spontan lymfeknudemetastase og lunge metastase blev også fundet ca. 4 uger efter transplantation i over 90% af musene. Denne rektal tumor model præcist efterligner den naturlige historie af endetarmskræft og kan bruges til at studere tidlig tumor udvikling, metastase, og opdagelse og vurdering af nye lægemidler til denne behandling-resistent sygdom

Henvisning:. Kishimoto H, Momiyama M, Aki R, Kimura H, Suetsugu A, Bouvet M, et al. (2013) Udvikling af en Klinisk-Præcis Mouse Model of Rektal kræft. PLoS ONE 8 (11): e79453. doi: 10,1371 /journal.pone.0079453

Redaktør: Matthew, Stanford University, USA

Modtaget: August 27, 2013; Accepteret: 1 Oktober 2013; Udgivet: November 12, 2013 |

Copyright: © 2013 Kishimoto et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev delvist understøttet af tilskud fra Unge Forskere (B), Undervisningsministeriet, Kultur, Sport, Videnskab og Teknologi, Japan (HK). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har følgende interesser: Hiroyuki Kishimoto, Masashi Momiyama, Ryoichi Aki, Hiroaki Kimura, Atsushi Suetsugu var tidligere afdelinger af AntiCancer Inc. Robert M. Hoffman er en ikke-lønnet datterselskab af AntiCancer Inc. AntiCancer Inc. markedsfører dyremodeller for kræft. Der er ikke andre konkurrerende interesser. Der er ingen patenter, produkter i udvikling eller markedsførte produkter til at erklære. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer, som beskrevet online i vejledningen for forfattere.

Introduktion

Heterotope implantation modeller som subkutane tumor implantater i mus har traditionelt været brugt til at evaluere antitumor behandling på grund af deres reproducerbarhed og overvågning af tumordannelse. Men heterotopiske modeller ikke har tilsvarende tumor mikromiljøer (TME) [1].

Genetisk modificerede musemodeller for kræft kræver normalt lang tid at udvikle tumorer og er uforudsigelige med hensyn til frekvens, tid og placering af primære tumorer og endnu mere uforudsigelig, når og hvor metastase forekommer. Da tumor udvikling i disse dyr er sjældent synkron, skal en stor kohorte af dyrene under henblik på at forberede et tilstrækkeligt antal dyr på passende stadier af kræft. Et stort antal dyr skal undersøges over lange tidsperioder til at evaluere kræftbehandling, og kun overlevelse er ofte brugt som et endepunkt på grund af vanskeligheden med at kontrollere, når tumorer vises i indre organer [2].

Adskillige slags modeller anvender orthotopisk implantation af tumorer er blevet udviklet og anvendt til primært at undersøge antitumorlægemiddel effekt [3]. I disse modeller er enten cancer cellesuspensioner indsprøjtet i ortotopisk organ- eller tumorvævsfragmenter sys i det tilsvarende organ [4], [5] med implantation af vævsfragmenter blevet vist at være mere nøjagtig [5], [6] . Med hensyn til tarmkræft modeller, har tumorer blevet etableret i submukøse væv eller på colon serosa, men ikke på slimhindeoverfladen hvorfra faktisk tumorer opstår hos patienter.

Formålet med denne undersøgelse var at etablere et ” sande “klinisk præcis ortotopisk rektal model, hvor tumorer begynder at danne i slimhindevævet af endetarmen.

Materialer og metoder

Cell kultur

musen kolorektal cancer cellelinje CT26 og den humane kolorektal cancer cellelinie HCT-116 blev dyrket i RPMI 1640 medium suppleret med 10% FBS. CT26 er en N-nitroso-N-methylurethane- (NNMU) -induceret mus udifferentierede koloncarcinomcellelinie [7]. HCT-116 blev afledt fra en primær human coloncancer prøve [8].

GFP og RFP vektor produktion

plein retroviral vektor (Clontech), der udtrykker et forstærket grønt fluorescerende protein (GFP) og neomycinresistensgenet på samme bicistronisk budskab, blev anvendt som en GFP ekspressionsvektor. PT67, en NIH3T3-afledt pakning cellelinje, der udtrykker 10 Al viruskappen, blev købt fra Clontech Laboratories, Inc. PT67-celler blev dyrket i DMEM suppleret med 10% FBS. For GFP-vektoren produktion, PT67-pakkeceller, ved 70% konfluens, blev inkuberet med et udfældet blanding af DOTAP ™ reagens (Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana), og mættende mængder af plein plasmid til 18 timer. Frisk medium blev genopfyldes på dette tidspunkt. Cellerne blev undersøgt ved fluorescensmikroskopi 48 timer efter transduktion. Til selektion, blev cellerne dyrket i nærvær af 500-2000 ug /ml G418 (Life Technologies, Grand Island, New York) i 7 dage. Den isolerede emballage celle-klon blev betegnet PT67-GFP [9] – [12].

For RFP retrovirus produktion,

Hind

III /

Ikke

jeg fragment fra pDsRed2 (Clontech), som indeholder fuldlængde RFP cDNA, blev indsat i

Hind

III /

Ikke

i-stedet i pLNCX2 (Clontech) indeholdende neomycinresistensgen. PT67-celler blev dyrket i DMEM suppleret med 10% FBS. For vektorproduktion, de PT67 pakkeceller, ved 70% konfluens, blev inkuberet med et udfældet blanding af lipofectaminreagens (Life Technologies) og mættende mængder af pLNCX2-DsRed2 plasmid til 18 timer. Frisk medium blev genopfyldes på dette tidspunkt. Cellerne blev undersøgt ved fluorescensmikroskopi 48 timer efter transduktion. Til udvælgelse af en klon producerer store mængder af RFP retroviral vektor (PT67-DsRed2), blev cellerne dyrket i nærvær af 200 til 1.000 ug /ml G418 (Life Technologies) i 7 dage. Den isolerede emballage celleklon blev betegnet PT67-DsRed2 [9] – [12].

GFP og RFP gentransduktion af cancercellelinier

I GFP og RFP gentransduktion, kræftcellerne var inkuberet med en 1: 1 udfældet blanding af retrovirale supernatanter af PT67-GFP eller PT67-DsRed2 celler og RPMI 1640 indeholdende 10% FBS i 72 timer. Frisk medium blev genopfyldes på dette tidspunkt. Cellerne blev høstet ved trypsin /EDTA 72 timer efter transduktion og subdyrket i et forhold på 1:15 i selektivt medium, som indeholdt 200 ug /ml G418. Niveauet af G418 blev forøget op til 800 ug /ml i en trinvis måde. Kloner udtrykker høje niveauer af GFP eller RFP blev isoleret med kloning cylindre (Bel-Art Products) ved hjælp af trypsin /EDTA og forstærkes af konventionelle dyrkningsmetoder i fravær af selektive middel [9] – [12].

Mus

Nude

nu /nu

mus (AntiCancer, Inc., San Diego, CA) blev holdt i en barriere facilitet på AntiCancer, Inc., under HEPA filtrering og fodret med autoklaveret laboratorium gnaver kost (Tecklad LM-485, Western Research Products, Orange, CA). Alle dyr blev udført med et anticancer Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC) -protokol specifikt er godkendt til denne undersøgelse, og i overensstemmelse med de principper og procedurer, der er beskrevet i National Institute of Health Guide for pasning og anvendelse af dyr under Assurance Number A3873-1. Alle dyreforsøg blev udført under bedøvelse under anvendelse af s.c. administration af en ketamin blanding (10 pi ketamin HCL, 7,6 pi xylazin, 2,4 pi acepromazinmaleat, og 10 pi PBS).

Nestin-drevet grønt fluorescerende protein (ND-GFP) nøgne mus Salg

Interaktion af CT26-RFP tumor og vært ND-GFP-udtrykkende celler i den rektale slimhinde blev undersøgt. CT26-RFP-celler blev orthotopisk transplanteret til ND-GFP nøgne mus [13] af de metoder, der er beskrevet nedenfor. Ti dage efter tumortransplantation blev musene aflivet, og anorektum blev dissekeret. Tumor og ND-GFP-celle interaktion blev observeret med OV100 billeddannende system

Forstyrrelse af den rektale slimhinde-barriere

rektal slimhindebarrieren blev kemisk forstyrret af den følgende fremgangsmåde:. Efter mus blev bedøvet, et polyethylenkateter blev indsat i rektale lumen gennem anus. De rektal lumen blev vasket med 6 ml PBS for at rense ud tarm indhold. De rektale lumen blev dilateret ved at indsætte en retraktor i anorektale område og derefter den rektale slimhinde var godt gennemvædet med 4% eddikesyre-opløsning i to minutter, efterfulgt af skylning med 6 ml PBS (fig. 1).

(a) Normalt udseende af muse anus. Scale bar, 1 mm. (B) Retractor fremstillet af et drop infusion rør. (C) De anorektale lumen blev dilateret ved at indsætte retraktoren ind i anorectum og indpodet med en eddikesyreopløsning. (C1) Før eddikesyre forberedelse. (C2) Farven på den rektale slimhinde ændret fra rødlig lyserød til hvidlig efter behandling med eddikesyre-opløsning. m = rektale slimhinde. Scale bar, 1 mm. (D) Histologisk undersøgelse lige efter eddikesyre behandling viste, at epitelcellelaget af den rektale slimhinde blev traumatiseret. (D1) H B = slimhinde; C = muscularis mucosa; D = submucosa; E = muscularis externa. (D2) Efter eddikesyre behandling. Bemærk, at kun den øverste del af slimhinden er forstyrret. Top, × 40 forstørrelse; bund, × 100 forstørrelse.

intrarektal inddrypning af kolorektal cancer celler og undersøgelse for tumordannelse

Umiddelbart efter afbrydelse af rektal slimhinde barriere, CT26-GFP-celler (2,0 x 10

6) i 50 pi Matrigel (BD Biosciences, San Jose, CA), blev indført og dryppet på rektal slimhindeoverfladen med en 28-gage nål indsat 4 mm fra den anale ring. Anus blev forseglet, holde spærhagen i endetarmen, ved plastisk tape umiddelbart efter inddrypning af cancerceller for at forhindre celle lækage. Plastiktapen forsegling og retraktoren i rektum blev fjernet fra musene, efter at de udvundet fra anæstesi. Efter cancer-celle implantation, noninvasive observation med OV100 Small Animal Imaging System [14] eller MVX-10 fluorescensmikroskop [15] (begge fra Olympus, Tokyo, Japan) blev anvendt til at detektere og karakterisere implanterede cancerceller. Så mus blev aflivet til at udforske mulige metastaser og histologiske undersøgelser. Tumorvolumenet blev beregnet ifølge følgende ligning: Tumorvolumen (mm

3) = længde (mm) x bredde (mm) x dybde (mm) × 0,5 [16]

Fluorescens optisk afbildning. og behandling

OV100 Imaging System og MVX-10 fluorescens mikroskop blev anvendt til fluorescens detektion af den voksende tumor. Høj opløsning billeder blev direkte indfanget på en pc og analyseres med CellR software (Olympus-Biosystems, Melville, NY) [14].

histologisk undersøgelse

Efter mus blev aflivet, rektum var åbnet på langs og inspiceret for tilstedeværelsen af ​​tumorer. Det udskårne rektal tumor blev derpå indlejret i frysemedium, frosset og sektioneret ved 7 um med en kryostat. Slides blev observeret for tumor celle fluorescens og efterfølgende undersøgt mikroskopisk ved hæmatoxylin-eosin farvning.

Resultater

Afbrydelse af slimhinden barriere i endetarmen

slimhinden barriere i endetarmen af nøgne mus blev afbrudt ved behandling af slimhinden med 4% eddikesyre-opløsning (fig. 1a-c). Der var ingen dødsfald eller åbenlys toksicitet relateret til denne procedure. Histologisk undersøgelse afslørede, at epitelcelle lag af den rektale slimhinde blev afbrudt og skrællet efter eddikesyre behandling (fig. 1d). Slimhindevævet var nu klar til at acceptere kræftcellerne.

ortotopisk implantation af CT26-GFP-celler

Umiddelbart efter kemisk sprængning af den rektale slimhinde-barriere, CT26-GFP muse colorectal cancer cells, blandet i Matrigel, blev indført i den rektale lumen. Den anus blev forseglet med tape efter påfyldning af de rektale lumen med kræft-celle suspension, der sikrede, at kræftcellerne forblev på rektal slimhinde under anæstesi. Den samlede procedure tid var ca. 15 min per mus, og der var ingen komplikationer eller dødsfald i forbindelse med både eddikesyre behandling og cancer-celle implantation.

Efter cancer-celle implantation, rektale lumen blev invasivt undersøgt med den MVX-10 fluorescens mikroskop eller OV100 Mindre Husdyrs Imaging System (fig. 2a). CT26-GFP-celler på den rektale slimhinde kan let afbildes ved GFP-fluorescens begyndende 6 dage efter implantation senest. Forekomsten af ​​rektale tumorer i den rektale slimhinde var 100%. Hverken instillation af cancerceller alene eller eddikesyre behandling alene resulterede i vækst af en rektal tumor.

(a) rektum blev afbildet ikke-invasivt 10 dage efter implantation. Venstre, lysfeltmikroskopi; midten, CT26-GFP tumorer vokser på rektal slimhinde var klart synlige under fluorescens observation; højre, samtidig observation under lyse lys og fluorescens billeddannelse. Scale bar, 500 pm. (B) Efter laparotomi blev rektum åbnet på langs fra den forreste væg. Venstre, brutto udseende af bughulen. Målestok: 10 mm; midten, detalje af den boxed region; højre, samtidig observation under lyse lys og fluorescens. Placeringen af ​​tumordannelse var begrænset på den bageste væg af terminalen endetarmen. Rød linje, retningen af ​​rektal tværsnit af (c). Hvid linje, retningen af ​​tumor tværsnit af (d). Scale bar, 2 mm. (C) Histologisk analyse bekræftede, at GFP-positive læsioner var medullære-type adenocarcinomer uden kirtelstrukturer. Venstre, fluorescens detektion af tumorer i en frossen sektion; midten, viste GFP-positive tumorer høj cellularitet og blev bekræftet som tumorer vokser i den mucosale lag af rektum; ret, fusioneret billede af H & E histologisk snit og fluorescens detektion. Bemærk, at cancerceller lokalisere kun i den mucosale lag af rektum. (d1-3) CT26 medullær-type adenokarcinomer invaderer submukøse lag ud over grænserne for den muscularis slimhinder (rød pilespidser). T = tumor. Sorte pilespidser, muscularis slimhinder. (E) Histologisk udseende af human medullære-typen adenocarcinom. Grøn pil hoveder angiver tumor kant [23].

Som vist i fig. 2b, blev placeringen af ​​tumordannelse begrænset til den bageste væg af terminalen endetarmen. Denne begrænsning af tumordannelse kan skyldes tillade cancer-cellesuspensionen at kontakte kun det afbrudte dorsale mucosa af endetarmen.

Ved 10 dage efter implantation, fluorescensmikroskopi af frosne sektioner og histologiske analyser afslørede, at tumorer var vokser i det mucosale lag i en lignende måde som human medullære coloncarcinom (fig. 2c-e). Omkring dette tidspunkt, CT26-GFP-celler invaderer det submukøse lag, ud over grænserne for muscularis slimhinder, blev også påvist (fig. 2d).

Alle musene til sidst havde kun en enkelt tumor dannet på den rektale slimhinde , og tumorstørrelsen steg gradvist over tid (fig. 3a). Da de rektale tumorer prolapsed gennem anus, når de nåede ca. 3 mm i størrelse og derefter voksede uden for anus, ingen rektal obstruktion forekom under hele observationsperioden i nogen af ​​musene (Fig. 3b).

(a) Alle musene til sidst kun havde en enkelt tumor dannet på rektal slimhinde. Tumorstørrelse større over tid. (B) Diskusprolaps CT26 rektal tumor vokser uden for anus på 4 uger efter implantation (rød pilespidser). Hvid rør indsat i endetarmen (hvid pil) viser, at anorektal passage er velbevaret, og der er ingen forhindring. Scale bar, 10 mm

På 4 uger efter instillation af kræftceller, det gennemsnitlige tumor volumen (gennemsnitlig volumen ± SD) nåede 1232.4 ± 994,7 mm

3 (fig. 3a), og spontan lymfeknudemetastaser blev påvist med høj forekomst (fig. 4). Den metastatiske sats på caudale mesenteriske lymfeknude (ringere mesenterisk lymfeknude hos mennesker) [17], [18], som er en regional lymfeknude i endetarmskræft, var 90,9%. Metastase til para-aorta lymfeknuder var 54,5% (tabel 1). Spontan lunge metastase blev også påvist i 91,8% af musene (Fig. 5). Men kun 9% af musene (1/11) havde levermetastaser (tabel 2).

(a) Skematisk tegning af anatomien i (b). Den caudale mesenteriske lymfeknude på oprindelsen af ​​det caudale mesenterialarterie. Denne lymfeknude svarer til den nedre mesenteriale lymfekirtel i mennesker. Scale bar, 2 mm. (B1) Caudal mesenterisk lymfeknude under lyse lys observation. (B2) GFP-fluorescens af den kaudale mesenteriale lymfekirtel i (b1), hvilket indikerer, at lymfeknude indeholdt en metastase. Scale bar, 2 mm. (C) To para-aorta lymfeknuder (rød og gule pile) blev identificeret i en anden mus. Hvid pil angiver metastaseret kaudale mesenteriale lymfekirtel. Scale bar, 2 mm. (D) Højere forstørrelse observation af en para-aorta lymfeknude angivet med en rød pil i (c). GFP-fluorescens af en mikro-metastase blev påvist (hvide pile). Scale bar, 1 mm.

(a) Makroskopisk udseende lunge. Lung metastatiske foci blev detekteret med GFP-fluorescens. Scale bar, 2 mm. (B) Makroskopisk udseende af leveren. Fluorescensimagografi detekteret GFP ekspression af CT26-GFP levermetastaser (røde pile). Scale bar, 10 mm. Vejviser

På cirka fire uger, viste mus kakektiske symptomer og måtte ofres på grund af tumorstørrelse.

Angiogenese af mus rektal tumor orthotopisk implanteret i ND-GFP nøgne mus

RFP-udtrykkende CT26-celler blev orthotopisk implanteret ind i endetarmen for nestin-driven GFP (ND-GFP) nøgne mus ved de ovenfor beskrevne metoder. Ti dage efter implantation, blev ND-GFP-udtrykkende vordende blodkar visualiseret vokser ind RFP-udtrykkende CT26 rektal tumor i nøgne mus ND-GFP (fig. 6).

(a) CT26-RFP tumor vokser i rektal slimhinde af ND-GFP nøgne mus (hvide pilespidser). Rød linje, retningen af ​​den rektale tumor tværsnit af (b). Scale bar, 2 mm. (B) Tværsnit af den rektale tumor. Lys- lys observation. Scale bar, 2 mm. (C) Fluorescence observation af (b). Scale bar, 2 mm. (D) Detalje af boxed region i (c). Host-afledte ND-GFP-udtrykkende blodkar blev visualiseret i RFP-udtrykkende CT26 rektal tumor i ND-GFP nøgen mus (hvide pile). Scale bar, 200 um.

Tumor dannelse ved rektal instillation af menneskelig af cancerceller i nøgne mus

Anvendeligheden af ​​denne implantation metode blev evalueret med humane cancerceller. Med den samme teknik, menneskelige tyktarmskræft HCT-116-RFP celler dannet også rektal tumorer i nøgne mus.

Diskussion

Klinisk-nøjagtige dyremodeller, hvor tumorer opstår fra den tidlige fase og senere blive invasive og metastatiske ville være af stor værdi for at forudsige kliniske resultater til kræftbehandling mere præcist. Få transgene modeller af invasiv kolorektal cancer eksisterer [4].

Apc

Min +/- musemodel typisk udvikle adenomer, men ikke invasive adenokarcinomer [19]. Derudover tumor udvikling i genetisk manipuleret mus er sjældent synkrone, hvilket gør det vanskeligt at udarbejde et tilstrækkeligt antal dyr på relevante stadier til evaluering kræftbehandling [2].

Det er blevet påvist, at orthotrop implantation giver vækst og metastatiske potentiale af de transplanterede tumorer, der skal udtrykkes, og afspejler klinisk cancer [5], [20]. Mange kolorektal cancer værdiansættelsesmodeller med orthotrop implantation er også rapporteret. Men i disse modeller, blev enten en cancercelle suspension injiceres i submukøse lag af colorectum [4], [5], [21] eller tumorvævsfragmenter blev simpelthen syet på colon serosa. I disse modeller, tumorer vokser i submukøse væv forlader slimhinden (som er den sande oprindelse af kolorektal cancer) intakt eller fra begyndelsen tumorer vokser kun på serøse overflade, hvilket svarer til fremskredent stadium kolorektal cancer i klinikken.

Formålet med den foreliggende undersøgelse var at etablere et klinisk nøjagtig orthotopisk colorectal model, hvor tumorer begynder at danne i slimhindevævet. Vi antager, at præcis ortotopisk implantation kunne opnås med kemisk forstyrrelse af slimhindeoverfladen barriere af rektum og efterfølgende installation af CT26 cancerceller.

Fluorescerende mærkede cancerceller [22] aktiveret yderst følsomme, real-time, og ikke-invasiv påvisning af meget tidlige fase kræft på rektal slimhinde og mikro-metastatiske foci i lymfeknuder og lunger, hvilket ellers ville være målbart i levende væv eller endog histologisk undersøgelse [20].

placering af primær tumordannelse blev begrænset til den bageste væg af terminalen endetarmen, som er den mest bekvemme observationspunkt i musen colorectum. Reproducerbarheden af ​​tumor placering tilladt lettere og mere fokuseret noninvasive undersøgelse over tid. Den histologiske udseende af tumoren var meget lig human coloncancer klassificeret som udifferentierede eller medullære-typen adenocarcinom [23].

påvistes lymfeknudemetastaser og lunge metastase i musene implanteret med CT26-GFP-celler med høj forekomst, som kan betragtes som “sand” spontan metastase, da der i denne fremgangsmåde er det højst usandsynligt, at cancerceller kan indføres direkte til den venøse eller lymfatiske cirkulation kunstigt på tidspunktet for implantation [4]. Selvom leveren er et mest almindelige metastatisk site af colorektal cancer, blev levermetastaser fundet i kun 9% af musene (1/11) i denne model. Dette kan forklares ved den kendsgerning, at i denne model, tumorer dannes ved den nedre del af rektum, blod, hvoraf dræner ind i det systemiske venøse cirkulation overvejende over portalen venøse cirkulation [24]. Endetarmskræft er mere sandsynligt end tyktarmskræft at resultere i lungemetastaser uden levermetastaser i klinikken [24].

I modsætning til den cecal injektion model, denne model kræver ikke laparotomi, hvorigennem uønsket peritoneal udbredelse skyldes cancerceller dissocieret på tidspunktet for transplantation [4]. Den nuværende metode kan også anvendes hos immunkompetente værter med kræft cellelinier af mus oprindelse og ville være egnet til tumor immunologi studier.

I ND-GFP nøgne mus, GFP udtryk er under kontrol af den nestin promotor [13], [25], hvori værtsafledte ND-GFP-udtrykkende blodkar blev visualiseret i de tidlige stadier rektale tumorer dannet af CT26-RFP celler.

Så vidt vi ved, er dette den første model, der pålideligt kan tilvejebringe virkeligt orthotopisk rektal cancer vokser i slimhindevæv, og senere forårsage spontan lymfeknude og lunge metastase som er let påviselige ved GFP-fluorescens med høj følsomhed. Denne model kan anvendes til at studere tidlige begivenheder i tumorvækst eller vurdering intraluminale faktorer (diætetiske forbindelser, galdesyrebindende, intestinal mikroflora, etc.), der kan virke til at forøge eller inhibere væksten af ​​kolorektal cancer i tidligt stadium kræft.

det kan konkluderes, implantation af cancerceller til slimhindevævet aktiveret ved hjælp af teknikkerne beskrevet i den foreliggende rapport tillod tumorerne at vokse på en måde, som efterligner klinisk sygdom hos mennesker. Denne model ville være nyttigt for evaluering af den terapeutiske effekt af antitumorlægemidler, og kan være i stand til at blive udnyttet til at studere tidlige begivenheder i TME.

Tak

Dette papir er dedikeret til mindet af AR Moossa, M.D.