PLoS ONE: Fase I klinisk studie af Fibronectin CH296-stimuleret T-celle terapi hos patienter med fremskreden Cancer

Abstrakt

Baggrund

Tidligere undersøgelser har vist, at mindre-opdelte T-celler er ideelle til adoptiv T-celle transfer terapi (ACT), og at fibronectin CH296 (FN-CH296) sammen med anti-CD3 resulterede i dyrkede celler, der indeholder højere mængder af mindre-opdelte T-celler. I denne fase I klinisk forsøg, vi bygger videre på disse tidligere resultater ved at vurdere sikkerheden og effektiviteten af ​​FN-CH296 stimuleret T-celle hos patienter med fremskreden kræft.

Metoder

Patienter undergik fibronektin CH296 stimuleret T-celle terapi op til seks gange hver anden uge, og sikkerhed og anti-tumor aktivitet af ACT blev vurderet. For at bestemme immunforsvaret, hele blod cytokinniveauer og antallet af perifere regulatoriske T-celler blev analyseret før ACT og under opfølgningen.

Resultater

Overførte celler indeholdt talrige mindre-opdelte T-celler stærkt repræsenteret ved CD27 + CD45RA + eller CD28 + CD45RA + celle, som tegnede sig for ca. 65% og 70% af den samlede, hhv. Ingen ACT relaterede alvorlige eller uventede toksiciteter blev observeret. Svarprocenten blandt patienter var 22,2% og sygdomskontrolrate var 66,7%.

Konklusioner

De opnåede i denne fase I forsøg resultater, viser, at FN-CH296 stimuleret T-celle terapi var meget veltolereret med et niveau af virkningsfuldhed, som er ganske lovende. Vi formoder også, at udvide T-celle ved hjælp CH296 er en metode, der kan anvendes på andre T- cellebaserede behandlingsformer

Prøve registrering

Umin UMIN000001835

Henvisning:. Ishikawa T, Kokura S, Enoki T, Sakamoto N, Okayama T, Ideno M, et al. (2014) fase I klinisk studie af Fibronectin CH296-stimuleret T-celle terapi hos patienter med fremskreden kræft. PLoS ONE 9 (1): e83786. doi: 10,1371 /journal.pone.0083786

Redaktør: William C. S. Cho, Queen Elizabeth Hospital, Hongkong

Modtaget: Juli 14, 2013; Accepteret: 5. november 2013; Udgivet: 31 Jan 2014

Copyright: © 2014 Ishikawa et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev delvist støttet af JSP’er KAKENHI Grant Number 23590891. de finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet. Ingen yderligere eksterne midler modtaget for denne undersøgelse

Konkurrerende interesser:. Takeshi Ishikawa, Satoshi Kokura, Tetsuya Okayama, og Toshikazu Yoshikawa har en tilknytning til en donation finansieret afdeling fra TAKARA BIO Inc. Dette ændrer ikke forfatterne ‘overholdelse af alle de PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Introduktion

adoptiv T-celle transfer (ACT) er i øjeblikket en af ​​de få immunterapier, der kan fremkalde objektive klinisk respons i en betydelig antallet af patienter med metastatiske faste tumorer [1]. De iboende egenskaber ACT befolkning, især dets tilstand af differentiering, siges at være afgørende for succes af ACT-tilgange [2] – [5]. Mindre differentierede T-celler har en højere proliferativt potentiale og er mindre tilbøjelige til apoptose end mere differentierede celler. Mindre differentierede T-celler udtrykker receptorer, såsom IL-7 receptor α-kæde (IL-7Rα), derfor disse celler har potentiale til at proliferere og blive fuldt aktiveret som reaktion på homeostatiske cytokiner, såsom IL-7 [6]. Resultater fra tidligere kliniske undersøgelser viste en signifikant korrelation mellem tumorregression og procentdelen af ​​vedvarende ACT overførte celler i det perifere blod [3], [7]. Disse resultater antyder, at den vedvarende og proliferative potentiale af overførte T-celler spiller en rolle i klinisk respons og at mindre-opdelte T-celler er ideelle til ACT overførsel terapi. Anvendelse af en standard hurtig ekspansion protokol, er T-celler til ACT normalt udvidet med en høj dosis af IL-2 og CD3-specifikt antistof i omkring 2 uger. T-celler ved anvendelse af denne protokol inducerer progressive T-celle differentiering mod en sen effektor tilstand. Men selv om IL-2 er afgørende for persistens og væksten af ​​T-celle, den har, også uønskede egenskaber, såsom dens evne til at fremme den terminale differentiering af T-celler [8]. Som følge heraf er de for tiden anvendte fremgangsmåde resulterer i fænotypiske og funktionelle ændringer i T-celler, der gør dem mindre optimale til mediering antitumor-responser in vivo. I lyset af dette, at udvikle nye metoder til at opnå mindre differentierede T-celler er afgørende for at forbedre de nuværende T-cellebaserede behandlingsformer så patienterne kan udvikle en langvarig positiv immunreaktion.

Det er blevet rapporteret, at fibronektin (FN), et større ekstracellulært matrixprotein, fungerer ikke blot som et adhæsionsmolekyle, men også som et signal inducer via binding til integriner udtrykt på T-celler [9], [10]. FN optræder sammen med anti-CD3 til at inducere T-celleproliferation, som menes at afhænge af integrin meget sent aktivering antigen-4 (VLA-4) /CS1 interaktioner [11], [12]. Rekombinant human fibronectinfragment (FN-CH296, RetroNectin) har været meget anvendt til retroviral genterapi kan forbedre genoverførselseffektivitet. FN-CH296 blev også rapporteret at være i stand til at stimulere perifere blod T-celle-vækst in vitro, når det anvendes sammen med anti-CD3 og IL-2. Anti-CD3 /IL-2 /FN-CH296-stimulerede T-celler indeholdt en større mængde af ugunstigt differentierede T-celler og in vivo persistens af disse celler var signifikant højere end celler stimuleret ved andre metoder [13]. Disse observationer førte os til at anvende FN-CH296-medieret stimulation til mindre differentierede fænotype T-celler til at generere ‘fit T-celler “[2], [14], som er ideelle til ACT. På den måde, vi fortsatte med at evaluere sikkerhed og effekt af FN-CH296-stimuleret T-celle hos patienter med fremskreden kræft.

Metoder

Protokollen for dette forsøg og støtte TREND tjekliste er tilgængelig som underbyggende oplysninger; se Tjekliste S1 og protokol S1.

Study Design

Den kliniske protokol blev godkendt af den etiske komité i Kyoto Prefectural University of Medicine og blev gennemført i overensstemmelse med Helsinki-deklarationen og etiske retningslinjer for Clinical Research (Sundhedsministeriet, Labor og Velfærd, Japan). Det primære formål med denne fase I klinisk forsøg var at vurdere sikkerhed og adverse event profiler af FN-CH296-stimuleret T-celle terapi hos patienter med fremskreden kræft. Vores sekundære mål var at vurdere antitumoraktiviteten af ​​ACT terapi. Denne undersøgelse blev gennemført som en standard 3 + 3 fase I design, der undersøgte den dosisbegrænsende toksiciteter (DLT) forekommer i løbet af en periode på 28 dage efter den anden infusion af dyrkede lymfocytter. DLT blev defineret som grad ≥3 for enhver bivirkning relateret til infusion af dyrkede celler. Vi brugte en accelereret titrering design at vurdere sikkerheden af ​​antallet af adoptiv lymfocytter ved 1 × 10

9 (kohorte 1), 3 × 10

9 (kohorte 2), og 9 × 10

9 ( kohorte 3) per person. Hvis der blev observeret DLT i den første gruppe af patienter blev en anden gruppe på 3 patienter behandlet på det næste højere dosis. Hvis DLT blev observeret i mindst én patient blev kohorten udvidet til 6 patienter. Hvis ≥2 DLT blev noteret i den indledende eller udvidet kohorte, blev ikke yderligere dosis eskalering udføres, og den maksimalt tolererede dosis (MTD) blev anset for at være blevet overskredet. Der var ingen optrapning intrapatientdosisrespons i denne undersøgelse.

skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter. Denne undersøgelse er registreret i Umin Clinical Trials Registry med identifikationen UMIN000001835

Patienter

Patienter indskrevet i dette forsøg opfyldte følgende kriterier:. Histologisk eller cytologisk bekræftet kræft i spiserøret, mavekræft, kolorektal cancer, pancreascancer, galdevejene cancer eller ikke-små lungecancer; residual sygdom efter standardbehandling med ingen andre kurativ behandlingsmuligheder til rådighed; ingen planer om at modtage anden kemoterapi end orale fluorouracil prodrugs, strålebehandling eller biologisk respons modifikatorer; mellem 20 og 80 år; en Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status på 2 eller derunder; en forventet levetid på mindst tre måneder; mindst fire uger siden deres sidste kemoterapi eller strålebehandling; . Og tilstrækkelig hæmatologisk, lever-, nyre- og hjertefunktion

Udelukkelsen kriterier var som følger: tilstedeværelse af ukontrolleret infektion; en historie af autoimmun sygdom eller alvorlig overfølsomhed, tilstedeværelsen af ​​alvorlige komplikationer såsom ustabil angina, eller myokardieinfarkt inden for seks måneder for kræft debut, interstitiel lungebetændelse eller lungefibrose med radiologiske fund, tilstedeværelse af mærket ascites eller pleural effusion, ileus, aktiv anden malignitet , svær mental svækkelse, graviditet og amning, og en sygehistorie med alvorlig overfølsomhed.

Forberedelse af FN-CH296-stimulerede T-celler

Perifert blod (50-70 ml) blev taget fra kræftpatienter. Perifere mononukleære blodceller (PBMC’er) blev separeret ved anvendelse af Ficoll-Paque Premium (GE Healthcare, Tokyo, Japan). Efterfølgende 3-8 × 10

7-celler blev resuspenderet i dyrkningsmedium i en CultiLife215 pose (Takara Bio, Otsu, Japan), der var præ-coatet med både anti-CD3 og FN-CH296 (RetroNectin®, Takara Bio), som er et rekombinant fragment af human fibronectin. Celler blev dyrket i et serum-frit medium, GT-T551 (Takara Bio), som blev suppleret med 0,6-1,2% varmeinaktiveret autologt plasma og 200 U /ml rekombinant IL-2 (Proleukin, NovartisPharma, Nürnberg, Tyskland) . På dag 4 blev cellerne overført til en CultiLife Eva pose (Takara Bio), og GT-T551 medium, som blev suppleret med 0,6-1,2% varmeinaktiveret autologt plasma og 200 U /ml IL-2 blev tilsat. På dag 7 blev GT-T551 medium indeholdende 200 U /ml IL-2 tilsat. På dag 10, blev cellerne høstet og resuspenderet i 50-90 ml kryopræserveret opløsning bestående af CP-1 (Kyokutou Seiyaku, Tokyo, Japan), RPMI1640 (KOHJIN BIO, Sakado, Japan) og humant serumalbumin (Albuminar; CSL Behring, PA, USA) for at skabe det endelige celle produkt. For at opnå det bestemte antal adoptiv lymfocytter, patienterne i kohorter 1 og 2 behov for en engangs-lymfocytkultur, og patienterne i kohorten 3 nødvendige tre lymfocytkulturer. . Dyrkede lymfocytter blev frosset og opbevaret ved -80 ° C indtil tidspunktet for transfusion

Før infusion patienter, celle produkter blev vurderet for $ \\ raster (80%) = “RG1” $ levedygtighed ved trypanblåteksklusion assay $ \\ raster (80%) = “RG2” $ for sterilitet ved BacT /ALERT (bioMérieux, Durham, NC, USA) mikrobiologisk detection system, og $ \\ raster (80%) = “rg3” $ endotoksin ved en kinetisk turbidimetrisk LAL-assay. Både sterilitet og endotoksin tests blev ansat til at FALCO Biosystems (Kyoto, Japan). Desuden blev fænotypiske markører af en lille prøve af slutprodukter undersøges efter frysning-optøning. Således er disse markører betragtes som næsten svarer til dem i de infunderede celler.

Whole Blood cytokinassays

Immunfunktion blev testet under anvendelse venøst ​​blod fra patienter før indgivelse dem med dyrkede celler (baseline) og i opfølgningsperioden som indtraf 4 uger efter 2

nd og 6. dyrket celle infusion (fig. 1). Fremgangsmåder til kvantificering IFN-α-produktion i humant fuldblod har tidligere [15] blevet beskrevet. Kort beskrevet hepariniseret perifert blod blev dyrket med Sendai-virus (500 HA /ml) inden for 8 timer efter blodprøven blev taget. blod-virus-blandingen blev inkuberet ved 37 ° C i 20 timer, og IFN-α-aktivitet i supernatanterne blev kvantificeret ved et bioassay. Andre cytokiner blev kvantificeret ifølge tidligere beskrevne procedurer [16], [17]. Hepariniseret helblod blev fortyndet 4 gange med Eagles minimale essentielle medium (Nissui Pharmaceutical Co. Ltd., Tokyo, Japan) og stimuleret med phytohæmagglutinin-P (PHA-P, 25 ug /ml, Wako Pure Chemical Ind., Osaka, Japan ). Prøver blev inkuberet ved 37 ° C i 48 timer, hvorefter supernatanterne blev høstet ved centrifugering ved 800 x

g

i 10 minutter, og derefter opbevaret ved -80 ° C, indtil de var forpligtet til analyse. Cytokinniveauer i prøverne blev målt med en Bio-Plex multiplex cytokin-array-system (; Bio-Rad Laboratories, CA, USA) ifølge producentens anvisninger. Den Multiplex Th1 /Th2 bead kit (Bio-Rad Laboratories) målt følgende cytokiner: IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, tumornekrosefaktor (TNF ) -α, IFN-γ, og granulocyt-monocyt-kolonistimulerende faktor (GM-CSF). indsamling og analyse af data blev udført med Bio-Plex manager software, version 5.0. Da niveauerne af cytokiner uden PHA-P-stimulering var meget lav (data ikke vist), vi kun vurderet dem med PHA-P-stimulering i denne undersøgelse.

Forsøgspersonerne fik CH296-stimulerede T-celleterapi på dag 1 og 15. Vi har udført sikkerhedsvurderinger for de første 6 ugers behandling. Patienter, der ønskede at fortsætte behandlingen modtaget op til 4 yderligere behandlinger hver 2. uge. For at teste immunforsvaret, blev venøst ​​blod fra fag før behandlingens start (baseline) og under opfølgning en, der fandt sted på 4 uger (2 behandlinger) og efter 6 dyrkede celle forvaltninger.

flowcytometrisk analyse

cellerne blev farvet med FITC-, phycoerythrin (PE) -, phycoerythrin-TexasRed (ECD) – eller phycoerythrin-Cyanin (PC5) mab specifik for CD3, CD4, CD8, CD27 , CD45RA, CD56, HLA-DR (Beckman Coulter, Marseille, Frankrig), CD28, NKG2D (eBioscience, CA, USA) og CCR7 (R 0,05

Sammenligningen blev foretaget i form af celle-overflademarkører (dvs. CD27 + CD45RA +, CD28 + CD45RA +, CCR7 + CD45RA +)

Toksicitet

De rapporterede bivirkninger i denne undersøgelse er vist i tabel 3. En patient, der blev administreret S-1, erfarne grad 3 neutropeni blev dog denne episode anset for at være relateret til S-1 og ikke at handle. Grade to eller lavere niveau hæmatologiske toksiciteter blev observeret hovedsageligt hos patienter administreret med S-1, og disse hæmatologiske toksiciteter var for det meste forbigående. Ikke-hæmatologiske begivenheder, herunder træthed og anoreksi blev observeret, men disse var alle milde. Ingen ACT-relaterede alvorlige eller uventede toksiciteter blev observeret. Således blev der ikke DLT observeret i denne fase I studie.

Klinisk Outcome

En patient (nr.4) opnåede komplet respons (CR). CR Patienten led af lymfeknude tilbagefald efter en endetarmskræft operation, og hun blev behandlet med mFOLFOX6 som første linje kemoterapi. Efterfølgende blev hun behandlet med Capecitabine som anden linje kemoterapi, men intrapelvisk lymfeknudemetastase blev påvist ved FDG-PET. Patienten modtog derefter ACT terapi kombineret med S-1. Tre måneder efter 6 infusioner med dyrkede T-celler, læsionen fuldstændigt forsvundet. Patient no.8 oplevet partielt respons (PR). Han havde refraktær galdegang kræft, og blev behandlet med GEM som første linje kemoterapi efterfulgt af GEM /S-1 som 2

nd linje kemoterapi. Men 17 måneder efter start kemoterapi, størrelsen af ​​den primære tumor steg og metastaser i halshvirvel blev detekteret. Han gennemgik ACT terapi kombineret med S-1. To måneder efter 6 infusioner af ACT, størrelsen af ​​den primære tumor i hans lever faldt med 35% og metastatiske læsioner i halshvirvel helt forsvundet af FDG-PET.

Af de 9 patienter, on (11,1% ) udviste CR, en (11,1%) havde PR, 4 (44,4%) havde stabil sygdom (SD), og 3 (33,3%) havde progressiv sygdom (PD) (tabel 4). Svarprocenten var 22,2% (95% konfidensinterval (CI) 2,8 60,0%?) Og sygdomskontrolrate (DCR, CR + PR + SD) var 66,7% (95% CI 29,9-92,5%)

immun Monitoring

for at bestemme de immunreaktioner i patienter, der fik nye ACT, hele blod cytokin assays og perifere treg analyse, som kunne være nyttige i immun overvågning [18] – [20], blev udført med venøse blod fra patienter. Der var ingen væsentlig ændring i fuldblod cytokinniveauer (figur 4A.) Hos patienter efter at de var infunderet med dyrkede celler; der var imidlertid et fald i IL-4, IL-5 og IL-13 efter behandlingen. Niveauerne af IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-12 og GM-CSF i kohorten 3 steg efter behandling; især niveauerne af IFN-γ, IL-12 og GM-CSF forøgede et multiplum af 10 eller flere gange. Dernæst vi evalueret hele blod cytokinniveauer efter objektive tumorrespons. Niveauerne af IFN-γ, IL-2, IL-12 og GM-CSF i patienter med PR /CR steget mere end dobbelt efter behandlingen, mens disse niveauer hos patienter med SD- eller PD nedsat eller ikke ændre sig væsentligt efter behandling ( fig. 4B).

Mean cytokinniveauer i fag i hver kohorte (A) og niveauer for de forskellige tumor respons (B) er vist.

Som for tregs, både antal og andel af disse celler i det perifere blod viste ingen signifikant ændring efter behandling, når de blev evalueret i henhold til kohorte eller tumorrespons (fig. 4A, B).

Discussion Salg

resultaterne præsenteret i denne undersøgelse indikerer, at FN-CH296-stimuleret T-celleterapi var meget veltolereret i vores patientprøve. Ingen signifikant ACT-relaterede grad 3 eller 4 bivirkninger forekom hos enhver patient og ACT producerede tumor regression i 2 patienter: CR i en patient med endetarmskræft og PR i en anden med galdegang kræft. Svarprocenten var 22,2% og DCR var 66,7%. Trods størrelsen af ​​prøven, disse resultater er lovende.

Resultaterne af tidligere mus studier og kliniske forsøg vist, at mindre-opdelte T-celler kan være den optimale population for ACT-baserede immunterapier grund af deres in vivo vedholdenhed , høj proliferativ potentiale, modtagelighed for homeostatiske og costimulerende signaler, deres homing til sekundære lymfevæv og deres evne til at udskille IL-2 [2] – [5]. Hertil kommer, Yu et al. har rapporteret, at FN-CH296 handler med anti-CD3 inducere T-celleproliferation. Disse tyder thats FN-CH296 /anti-CD3 stimulation kan være en effektiv måde at generere et stort antal mindre-opdelte T-celler er egnede til ACT resulterer i højere og længere vedholdenhed in vivo [13].

CD45RA- , CD27, CD28, og CCR7 vides at være højt udtrykt i ugunstigt differentierede T-celler. Baseret på humane virale infektion studier, har en lineær model af T-celle differentiering blevet foreslået, hvor CD27 + CD28 + CD45RA + naive celler fremskridt gennem en CD27 + CD28 + CD45RA- tidligt antigen-erfarne fænotype og fortsætter derefter til en CD27 + CD28-CD45RA- /+ mellemliggende fænotype og endelig til CD27-CD28-CD45RA +/- sent antigen-erfaren fænotype. Denne lineære bevægelse fører til en stigning i cytotoksisk potentiale og en reduktion i celleproliferation [21]. CD27 og CD28 er costimulerende molekyler, som virker i forening med T-celle receptor (TCR) for at støtte T-celle-ekspansion [22]. Det er blevet foreslået, at CD28-udtrykkende T-celler secernerer IL-2 og inducerer antiapoptotiske molekyler [23]. I den seneste tid, har rollen som CD28-ekspression i ACT-baserede kliniske forsøg været at få større opmærksomhed og mere detaljerede undersøgelser er ved at blive gjort. Analyse af vedvarende og ikke-vedvarende TIL kloner indikerer fortrinsret overlevelse clonotypes udtrykker høje niveauer af CD28, implicerer en overlevelse fordel for overførte T-celler med CD28 + mindre-opdelte fænotype [4], [5]. CD27 kan også forøge TCR-induceret T-celleproliferation og er nødvendig til produktion og opretholdelse af hukommelses-T-celler in vivo [24]. Der er beviser for, at hyppigheden af ​​T-celler, der udtrykker CD27 øges gradvist efter ACT og kan være forbundet med den langsigtede opretholdelse af et stabilt antal tumor-specifikke T-celler i responderende patienter [25]. I denne fase I kliniske forsøg, frekvenserne af både CD27 + CD45RA + og CD28 + CD45RA + celler steg markant efter kultur og deres befolkning overførte celler var omkring 60%. På den anden side, har hyppigheden af ​​CCR7 + CD45RA + -celler, som også blev udtrykt i mindre differentierede T-celler, ikke ændre sig efter dyrkning af ukendte årsager. Forholdene mellem de mindre differentierede fænotype T-celler (dvs. CD27 + CD45 +, CD28 + CD45RA +, og CCR7 + CD45RA + celler) i overførte celler afveg meget for hver patient. En stærk positiv korrelation blev fundet mellem forholdene mellem CD27 + CD45RA + (ρ = 0,717, p = 0,037), CD28 + CD45RA + (ρ = 0,717, p = 0,037), CCR7 + CD45RA + (p = 0,733, p = 0,031) celler i overførte celler og dem i PBMC’er (før kultur). Det er nødvendigt at forbedre eller finde nye metoder, der effektivt kan generere et stort antal mindre differentierede T-celler selv i tilfælde, hvor der er få mindre-opdelte T-celler. Overensstemmelse med tidligere rapporter [13], fandt vi, at stimulering med FN-CH296 /anti-CD3 fortrinsvis ekspanderet CD8 + -celler i denne undersøgelse. Det er den generelle opfattelse, at den fremherskende tumordræbende effektor mekanisme er den cytotoksiske dræbende effekt af CD8

+ T-celler, men på trods af den forskning udført til dato, virkningen af ​​den præferentielle proliferation af CD8 T-celler på kræft immunterapi stadig behov meget længere undersøgelse.

Tidligere undersøgelser har vist, at IFN-γ spiller en vigtig rolle i cancerimmunterapi og IFN-γ-ekspression af T-celler anses for at være stærkt korreleret med terapeutisk succes. Vi har også påvist, at assayet af fuldblod IFN-y-niveauet var en effektiv metode til evaluering klinisk respons på cancer immunoterapi [19] [20]. I denne undersøgelse fuldblod IFN-y niveauer i kohorte 3 øges op til 10 eller flere gange efter 6 infusioner med dyrkede celler. Hele blod IFN-y niveauer i PR eller CR sager steget mere end dobbelt, mens de i PD eller SD sager oplevede ingen signifikant stigning efter behandlingen. Konstateringen i vores forudgående undersøgelse [20], at stigningen i fuldblod IFN-γ niveauer efter ACT blev selvstændigt relateret til den samlede overlevelse hos kræftpatienter understreger relevansen af ​​resultaterne opnået i denne undersøgelse.

Mens ingen signifikant korrelation mellem antallet af infused mindre differentierede T-celler og fuldblod IFN-γ niveauer blev ikke bekræftet sandsynligvis på grund af små prøver, vi formode, at ugunstigt differentierede T-celler kan bidrage til forøgelse af IFN-y-niveauet. Fremtidige studier er nødvendige for at undersøge virkningen af ​​antallet af CD27 + CD45RA + CD28 + CD45 + og CCR7 + CD45RA + -celler på de fuldblod IFN-γ niveauer.

Ud over IFN-γ andre Th1 cytokinniveauer sådanne som IL-2, IL-12 og TNF-α også forøget hos patienter i kohorte 3, og hos patienter med PR /CR, hvorimod Th2 cytokinniveauer, såsom IL-4, IL-5 og IL-13 faldt efter behandlingen. Desuden helblod GM-CSF-niveau øges hos patienter i kohorte 3 og hos patienter, der oplevede PR /CR. Det blev tidligere rapporteret, at cellemedieret immunitet fortrinsvis aktiveres af Th1 cytokiner, hvorimod Th2-cytokiner undertrykker cellemedieret immunitet [26]. GM-CSF er et pleiotropisk cytokin, som stimulerer dendritiske celler (DC’er) og fremmer optagelse af tumorantigener ved DC’er fører til T-celle krydspriming og aktivering af immunsystemet mod specifikke antigener [27], [28]. Følgelig baseret på resultaterne fra immun-overvågning udføres på dette foreliggende undersøgelse, er vi tilbøjelig til at tro, at fibronectin CH296-stimuleret T-celleterapi kan udøve antitumorvirkninger ved at aktivere cellemedieret immunitet. Selvom vi for nylig vist, at ACT har potentialet til at reducere antallet af tregs [29], i analysen gjort i denne undersøgelse, var antallet af perifere tregs ikke ændre sig væsentligt efter behandling.

Lydhørhed til immun-baserede behandlingsformer varierer blandt tumortyper. Mens melanom og renal-celle kræft er klassisk for at være immunogent, fleste epitelmalignanser er ikke immunogene og respondere dårligt til immunterapi. I vores prøve, alle ni patienter havde epiteliale maligniteter såsom gastrointestinale cancere og lungekræft, der traditionelt betragtes som refraktære over for immunterapi. Det skal bemærkes, at objektivt respons blev observeret hos patienter med rektal cancer og galdegang kræft. Det er stadig uklart, om denne roman ACT har terapeutisk potentiale for flere tumortyper.