PLoS ONE: rolle Rip2 i Udvikling af tumorinfiltrerende MDSCs og blærekræft Metastasis

Abstrakt

Tumor invasion og metastaser repræsenterer en kompleks række molekylære begivenheder, der varsler en dårlig prognose. Bidraget af inflammatoriske pathways medierer denne proces er ikke godt forstået. Nod-lignende receptorer (NLRs) af medfødte immunitet funktion som intracellulære sensorer af patogener motiver og fare molekyler. Vi foreslår en rolle NLRs i tumor overvågning og i programmering tumor-infiltrerende lymfocytter (tils). I denne undersøgelse undersøgte vi nedstrøms serin /threonin og tyrosin kinase Rip2 i en murin model for blærecancer. I Rip2-manglende C57BL6 mus større ortotopisk MB49 tumorer udvikles med flere og højere forekomst af metastaser sammenlignet med kontroller vildtype. Som sådan øget tumor infiltration af CD11b

+ Gr1

hi blev observeret myeloide afledte suppressorceller (MDSCs) med ledsagende fald i T-celler og NK-celler i Rip2-deficient tumorbærende dyr under anvendelse ortotopisk og subkutane tumormodeller. Rip2-mangel tumorer viste forbedret epitel-til-mesenkymal overgang, med forhøjet udtryk for

zeb1

,

zeb2

,

twist

, og

snegl

i tumormikromiljøet. Vi fandt, at der ikke findes Rip2 spiller en iboende rolle i at fremme udviklingen af ​​granulocytiske MDSCs ved en autokrin og parakrin effekt af granulocytisk koloni stimulerende faktor (G-CSF) udtryk. Vores resultater tyder på, at NLR veje kan være en roman modalitet til at programmere TIL’er og påvirke tumor metastaser

Henvisning:. Zhang H, Chin AI (2014) rolle Rip2 i Udvikling af tumorinfiltrerende MDSCs og blærekræft Metastase. PLoS ONE 9 (4): e94793. doi: 10,1371 /journal.pone.0094793

Redaktør: Rajeev Samant, University of Alabama i Birmingham, USA

Modtaget: November 19, 2013; Accepteret: Marts 20, 2014; Udgivet: 14 april, 2014

Copyright: © 2014 Zhang, Chin. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. American Association af Cancer Research Career Development Award 10-20-14, Bred Stem Cell Research center Scholars i Translationel Medicin Program, STOP Cancer Research Career Development Award, Becton Dickinson Biosciences Research Grant (AI Chin) Perkins Foundation. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Baggrunden for immun tumormikromiljøet kan være prædiktiv for tumor stadium, cancer-specifik overlevelse, såvel som reaktion på kemoterapi [1] – [3]. I visse maligniteter, tilstedeværelsen af ​​infiltrerende CD8

+ T-lymfocytter korrelerer med forbedrede resultater, hvorimod infiltrerende B-celler, CD4

+ T-lymfocytter, og negative regulatorer herunder myeloide-afledte suppression celler (MDSCs) og T regulerende celler ( tregs) negativt korrelere med overlevelse [4]. Disse observationer understreger vigtigheden i at definere veje afgørende for programmering af sammensætningen af ​​tumor infiltrerende lymfocytter (tils), som selektiv modulering af immunsystemet tumor mikromiljø repræsenterer en spirende terapeutisk modalitet.

mønstergenkendelse receptorer, såsom det prototypiske Customs lignende receptor (TLR) -familien og intracellulære nukleotid-bindende Oligomeriseringsdomænet (NOD) -lignende receptor (NLR) familie genkender konserverede motiver på patogener samt endogene molekyler frigivet af beskadigede celler [5]. Aktivering af disse signalveje indleder medfødte og adaptive immunrespons, og kan fremme væv reparation og regenerering. Vi har tidligere impliceret TLR3 i en murin model for prostatacancer tumor overvågning kritisk i programmering af infiltrering af T-lymfocytter og NK-celler, mens undertrykke Treg ekspansion [6]. I blærekræft, er effektiviteten af ​​immunmodulering fremhævet ved anvendelse af intravesikal Bacillus Calmette Guerin, som fremmer en tilstrømning af makrofager og neutrofiler i tumormikromiljøet medieret delvist af TLR2 og 4 [7], [8].

Receptor-interagerende protein 2 (Rip2), en serin-threonin og tyrosin kinase nedstrøms og fælles for Nod1 og NOD2, aktiverer transkriptionsfaktorer såsom NF-KB og MAP-kinaser gennem dets kinase-aktivitet samt gennem rekruttering af E3 ubiquitin ligase [9] – [14]. Rip2-afhængige veje er dukket op som kritisk i sensing forskellige patogener, der spænder fra

Listeria monocytogenes

,

Staphylococcus aureus

, og

Legionella pneumophilia

til

Escherichia coli

samt ved mediering af inflammatoriske lidelser, såsom autoimmun encephalomyelitis [15] – [17]. Derudover har polymorfier af NOD2 været forbundet med modtagelighed for Crohns sygdom, mens polymorfismer af Rip2 har været forbundet med systemisk lupus erythematosus [18], [19]. Evne NLRs at mægle tumor overvågning er ikke undersøgt til dato. Her, vi postulerer, at Rip2 kan mediere blærekræft overvågning og udforske sin rolle under anvendelse af en murin orthotopisk og subkutan blærekræft model. Vi viser, at tumorbærende Rip2-manglende mus bias myeloid differentiering mod MDSC afstamning og spiller en iboende rolle i udviklingen af ​​CD11b

+ Ly6G

+ Ly6C

lo granulocytisk MDSC befolkning. Vores resultater er de første til at implicere Rip2 og NLRs i tumor overvågning og deres betydning i programmering af immun tumor mikromiljø. Den NLR vej kan repræsentere en terapeutisk mulighed i modulerende kræft immunitet for at forhindre tumor invasion og metastase.

Materialer og metoder

Etik Statement

Alt dyr arbejde er blevet udført i overensstemmelse med Public Health service Policy på human Care og anvendelse af forsøgsdyr og USDA dyreværnsloven forordninger gennem en godkendt UCLA Institutional Animal Care og brug Udvalg protokol # 2010-023-11C.

Mus

Rip2-defekte mus tilbagekrydses til en C57BL /6 baggrund i 10 generationer blev genotypebestemt som beskrevet tidligere [10]. Aldersmatchede C57BL /6-mus (Jackson Laboratories) blev anvendt som kontroller. Seks- til 8-uger gamle hunmus blev anvendt til forsøgene. Musene blev opstaldet i patogenfrie betingelser ifølge UCLA Animal Research udvalgets protokoller.

Cell kultur

MB49 cellelinjer (gave fra Tim Ratliff) blev afledt fra kræftfremkaldende-induceret urothelial celle karcinomer i C57BL6 mus og holdt ved 37 ° C med 5% CO

2 i DMEM (Cellgro), suppleret med 10% FBS (Omega Scientific) og 1% penicillin og streptomycin [20]. Salg

tumormodeller

intravesikal tumorimplantation blev hunmus bedøvet, kateteriseres med en 24 gauge kateter (BD Biosciences), og indpodet med 10 ug poly-L-lysin (Sigma) i 100 pi i 30 minutter før dræning og inddrypning af 2 × 10

6 MB49 celler i 100 ul i 60 minutter [21], [22]. Mus blev aflivet 12 dage efter inokulation af tumor, og blæren og indre organer blev undersøgt. Blære, lunger og nyrer blev fikseret i formalin eller indlejret i OCT for farvning af H iNOS, 5′-GCTGGAAGCCACTGACACTTCG, 3′-CGAGATGGTCAGGGTCCCCT; IL-4, 5’GTCATCCTGCTCTTCTTTC, 3’ATGGCGTCCCTTCTCCTGT; IL-10, 5′-GCTCTTACTGACTGGCATGAG, 3′-CGCAGCTCTAGGAGCATGTG; IL-12 p40, 5’TGGTTTGCCATCGTTTTGCTG, 3’ACAGGTGAGGTTCACTGTTT; IFNy, 5’GGATGCATTCATGAGTATTGC, 3’CCTTTTCCGCTTCCTGAGG; M-CSF, 5’AGGACCTGTTGGAGTTCCCTC, 3’TTTCGCCCTCACACTTGATGA; G-CSF, 5’CTCAACTTTCTGCCCAGAGG, 3’AGCTGGCTTAGGCACTGTGT; GM-CSF, 5’GCCATCAAAGAAGCCCTGAA, 3’GCGGGTCTGCACACATGTTA; Zeb1, 5′-AACGGAGATTTGTCTCCCAGT, 3′-CTGTCCAGCTTGCATCTTTTC; Zeb2, 5′-TAGCCGGTCCAGAAGAAATG, 3′-GGCCATCTCTTTCCTCCAGT; Snail, 5′-GCGGAAGATCTTCAACTGCAAATATTGTAAC, 3′-GCAGTGGGAGCAGGAGAATGGCTTCTCAC; Twist, 5′-CGGGTCATGGCTAACGTG, 3′-CAGCTTGCCATCTTGGAGTC; og GAPDH, 5′-GACCCCTTCATTGACCTCAAC, 3′-CTTCTCCATGGTGGTGAAGA.

Resultater

For at undersøge den rolle, Rip2 i tumor overvågning, vi udfordrede vildtype og Rip2-mangel mus med syngene MB49 celler i en ortotopisk blærekræft model. Vi observerede en næsten to gange stigning i tumorvægt i fravær af Rip2 (Fig 1A). Tumorer høstet fra mus af begge genotyper påviste en invasion i detrusormusklen af ​​H barer, SEM. Alle

s

værdier blev bestemt ved to-tailed Students

t

test, med statistisk signifikans defineret som p 0,05

Vi har tidligere impliceret Rip2 i udvikling. af Th1 og NK-celler [10], mens andre er rapporteret en rolle i dendritiske celle infiltration [17]. For at undersøge den rolle, Rip2 i forbindelse med tumorigenese blev blære tumor TIL’er undersøgt ved immunofluorescens og immunhistokemi. Dette afslørede faldt infiltration af CD8

+ T-lymfocytter, CD4

+ T-lymfocytter, og NK-celler i fravær af Rip2 som forudsagt. Undersøgelse af Foxp3

+ celler repræsentative for T regulatoriske celler, viste en stigende tendens i Rip2-defekte mus i forhold til vildtype-mus, selv om det ikke nåede statistisk signifikans. Interessant nok viste tumorerne forøget infiltration af CD11b

+ myeloide celler i Rip2-deficiente sammenlignet med vildtypemus, mens yderligere karakterisering af dette myeloid population viste en forventet stigning i makrofag markør F4 /80 og i Gr-1 subtype Ly6G, men ikke undertype Ly6C i tumorer fra Rip2-defekte mus (fig 2).

Infiltration af CD8, CD4, NK, CD11b, F4 /80, Ly6G, og Ly6C udtrykkende celler som indikeret, blev undersøgt ved immunofluorescens, og Foxp3 ved immunohistokemi i blæretumorer fra Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus intravesikalt implanteret med MB49-celler og aflivet efter 12 dage. Venstre paneler viser specifikt antistof farvning, midterste panel viser DAPI farvning, højre panel viser sammenlægning af antistof og DAPI pletter. Repræsentative eksempler fra hver gruppe af fire til seks mus i 4 uafhængige forsøg er vist ved x40 forstørrelse. Søjlediagrammer optælle gennemsnitlige antal celler pr x40 inden for 3 repræsentative snit fra grupper på fire mus; barer, SD. Alle

s

værdier blev bestemt ved to-tailed Students

t

test, med statistisk signifikans defineret som p. 0,05

For yderligere at undersøge funktionen af tumorinfiltrerende populationer, vi subkutant implanteret MB49-celler til at generere større tumorer at lette efterfølgende sortering af celler. I lighed med ortotopisk tumorer, subkutane tumorer udviklet i Rip2-deficiente mus med forøget størrelse i forhold til vildtype-modstykker (Fig 3A). Dissocierede tumorer sorteret for CD45

+ NK1.1

+ NK celler viste nedsat antal i Rip2-deficiente sammenlignet med vildtype-mus som forventet (fig 3B). De infiltrerende antal af CD4 og CD8 celler var for små til kvantificering ved hjælp af flowcytometri (data ikke vist). I overensstemmelse med de tidligere ortotopisk tumorer, dissocierede subkutane tumorer sorteret for overflademarkører CD11b

+ og Gr1

+ viste beriget numre af CD11b

+ GR1

hi celler fra Rip2-mangelfuld i forhold til vildtype-mus (fig 3C). For yderligere at undersøge de funktionelle egenskaber af CD11b

+ Gr1

hi celler undersøgte vi et panel af gener, der repræsenterer en underskrift af MDSCs og myeloide subpopulationer. Arginase-1 og iNOS medierer T undertrykkende virkninger af MDSCs [25]. IFNy støtter differentieringen i retning M1 celler, der adskiller sig efter tur af sekretion af IL-12. IL-4 polariserer myeloide forstadier i retning af en M2 fænotype, som er stærkt forbundet med tumorassocierede MDSCs og hurtig IL-10 til at mediere deres immunsuppressive virkninger [26]. Vi viser, at Rip2-deficiente CD11

+ Gr1

høj celler udtrykte højere niveauer af arginase-1 sammenlignet med celler fra vildtypemus, med en lignende tendens i iNOS-ekspression (fig 3D). Konsekvent, forøget IL-10-ekspression i Rip2-deficient CD11

+ GR1

høj celler sammenlignet med celler fra kontrol vildtype blev observeret, mens ingen signifikante forskelle blev set i ekspression af IFNy og IL-12, der indikerer M2 polarisation (fig 3D). Niveauer af IL-4 var målbart i CD11b

+ Gr1

hi celler (data ikke vist)

Rip2

+ /+ og Rip2

-. /- Mus subkutant implanteret med MB49-celler i 14 dage blev bedømt for (A) tumorvægt, og sorteret ved flowcytometri at undersøge (B) CD45

+ NK1.1

+ -celler og (C) CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi og CD45

+ CD11b

+ Gr1

lo celler. Kolonne, gennemsnit af fire mus; barer SD. Data er repræsentative for to uafhængige forsøg. D, Sorteret CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi og CD45

+ CD11b

+ Gr1

lo celler i Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus blev undersøgt for ekspression af arginase-1 og iNOS af qPCR, mens CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi celler i Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus undersøgt for ekspression af IL10, IL-12, og IFNy ved qPCR. Kolonne, mener to mus; barer SD. Data er repræsentative for tre uafhængige forsøg. Repræsentative eksempler er vist. Alle

s

værdier blev bestemt ved to-tailed Students

t

test, med statistisk signifikans defineret som p. 0,05

For at undersøge Rip-2- afhængige systemiske tidskoder, der kan påvirke udviklingen af ​​tumormikromiljøet blev cytokinniveauer målt ved anvendelse af en inflammatorisk cytokin-array sammenligning serum fra vildtype- og Rip2-deficiente mus implanteret med ortotopisk MB49 blæretumorer. Niveauerne af syv cytokiner fra panelet bestående 40 cytokiner blev fundet forhøjet i fravær af Rip2. Størstedelen var forbundet med myeloid differentiering og kemotaxi, herunder G-CSF, M-CSF, IL-16, MCP-1, TREM-1, TIMP-1 og IL-1α med relative niveauer vist skematisk [27] – [33 ] (fig 4A). Splenocytter fra tumorbærende mus blev analyseret for at vurdere indflydelsen af ​​disse cytokin ændringer, afslører ingen signifikante forskelle i antallet af CD4

+ og CD8

+ -T-lymfocytter, B220

+ B-lymfocytter, og NK1.1

+ -celler, men øget udvikling af CD11b

+ Ly6G

hi celler i Rip2-deficiente sammenlignet med vildtype-mus, der repræsenterer granulocytisk MDSC population (figur 4B). For yderligere at undersøge blæren tumor mikromiljø, vi undersøgte et panel af cytokiner, der påvirker den funktionelle polarisering af makrofager samt differentiering af MDSCs i intravesikale blæretumorer [34]. Forøgede niveauer af IL-4, G-CSF og GM-CSF blev observeret i blæretumorer fra Rip2-deficiente sammenlignet med vildtypemus, mens ingen forskelle blev påvist i IFNy og M-CSF-ekspression i overensstemmelse med en tumor mikromiljø fremme udvikling af de tumorassocierede MDSCs (fig 4C). For at skelne mellem cytokinproduktion fra tumor og omgivende stroma til de myeloide befolkninger, vi undersøgte G-CSF-ekspression i CD45

– befolkning repræsenterer tumor og stromale celler, og CD11b

+ Gr1

hi population repræsenterer myeloide celler , og viste forøget G-CSF i Rip2-mangel i forhold til vildtype CD11b

+ Gr1

hi celler, hvilket tyder på en autokrin og parakrin regulering af MDSCs i fravær af Rip2 (fig 4D).

A, inflammatoriske cytokin-ekspression i serum fra Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus intravesikalt implanteret med MB49-celler i 12 dage blev vurderet ved cytokin array analyse. Cytokiner steg i Rip2

– /- mus er afbildet i skematisk som vist. (+) 2-5x, (++) 5-10x, (+++) 10x baseret på kvantificering af ImageJ. Resultaterne er fra dubletter og repræsentative for to uafhængige forsøg. B, Splenocytter fra Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus blev undersøgt for ekspression af CD4, CD8, B220, NK1.1, mens CD11b

+ -celler blev undersøgt for ekspression af Ly6G og Ly6C ved flowcytometri som angivet. Kolonne, gennemsnit af fire mus; barer SD. Data er repræsentative for to uafhængige forsøg. C, Total tumor fra Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus intravesikalt implanteret med MB49-celler og aflivet efter 12 dage blev undersøgt for ekspression af IL4, IFNy, M-CSF, G-CSF og GM -CSF af qPCR. Kolonne, gennemsnit af tre mus; barer SD. D, Tumorer fra Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus subkutant implanteret med MB49 celler i 14 dage blev fraktioneret til CD45

– og CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi celler og undersøgt for G-CSF-ekspression af qPCR. Kolonne, gennemsnit af tre mus; barer SD. Alle

s

værdier blev bestemt ved to-tailed Students

t

test, med statistisk signifikans defineret som p. 0,05

MDSC befolkning består af umodne myeloide celler og myeloide-stamceller, der kan differentiere til modne makrofager, granulocytter og dendritiske celler. De er karakteriseret ved T-lymfocyt-undertrykkende evne og ekspression af arginase-1 og iNOS [25]. I mus, kan de være yderligere opdeles i granulocytiske MDSCs ved ekspression af overflademarkører CD11b

+ Gr1

hi eller CD11b

+ Ly6G

+ Ly6C

lo og monocytiske MDSCs ved ekspression af markører CD11b

+ Gr1

lo eller CD11b

+ Ly6G

loLy6C

hi [35]. For at teste den iboende rolle Rip2 i myeloid udvikling, naive knoglemarv fra vild-type og Rip2-defekte mus var underlagt

in vitro

differentiering ved hjælp af M-CSF, G-CSF, GM-CSF eller G -CSF og GM-CSF i 4 dage og undersøgt for ekspression af CD11, Ly6G, og Ly6C. I nærværelse af G-CSF, GM-CSF og G-CSF plus GM-CSF, fraværet af Rip2 resulterede i en bias mod CD11b

+ Ly6G

+ Ly6C

lo granulocytisk MDSC population ( fig 5A). I BM-afledte MDSCs differentieret ved anvendelse G-CSF eller G-CSF og GM-CSF, øget arginase-1 og iNOS-ekspression blev ensartet observeret i Rip2-deficiente sammenlignet med vildtypeceller, i overensstemmelse med den øgede udvikling af MDSCs (Fig 5B )

A, knoglemarv fra naive Rip2

+ /+ og Rip2

-. /- mus blev differentieret ved M-CSF, G-CSF, GM-CSF og G-CSF plus GM-CSF som indikeret i fire dage forud for flowcytometri til at undersøge ekspression af Ly6G og Ly6C i CD11b

+ -celler (fra 70-90%, ikke vist). CD11b

+ LYG

+ Ly6C

lo og CD11b

+ LYG

loLy6C

hi befolkninger for hver gruppe vises som totale celletal pr 10

5 startende BM-celler. B, Ekspression af arginase-1 og iNOS ved qPCR i G-CSF og G-CSF plus GM-CSF differentieret knoglemarv fra naive Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus. Kolonne, gennemsnit af tre mus; barer SD. Data er repræsentative for to uafhængige forsøg. Repræsentative eksempler er vist. Alle

s

værdier blev bestemt ved to-tailed Students

t

test, med statistisk signifikans defineret som p. 0,05

MDSCs har været impliceret i at fremme EMT , en proces kritisk lette tumorinvasion og efterfølgende tumormetastaser [36]. Et kendetegn for EMT er en switch i overfladeadhæsionsegenskaber markører med tabet af E-cadherin og ekspression af N-cadherin [37]. For at undersøge indflydelsen af ​​Rip2 i udviklingen af ​​EMT, undersøgte vi ekspressionen af ​​friktion markører i intravesikale tumorer og observeret nedsat E-cadherin ekspression i hele tumoren med samtidig øget N-cadherin ekspression ved den perifere af tumoren i Rip2-deficiente forhold til vildtype -type mus (fig 6a). NF-KB-aktivering er blevet impliceret i at fremme EMT og dermed undersøgte vi dens aktivering i fravær af Rip2 [38]. Overensstemmelse med forudgående litteratur, vi observeret nedsat kanoniske NF-KB-aktivering udviste ved nedsat p-IKB-ekspression i Rip2-deficiente tumorer (Fig 6B), hvilket tyder på NF-KB uafhængige mekanismer til at redegøre for EMT [39]. For at undersøge andre mekanismer fremmer EMT, et panel af transkriptionsfaktorer involveret i EMT herunder

Zeb-1

,

Zeb-2

,

snegl

, og

twist

blev undersøgt i tumor og stromale celler fra dissocierede subkutane tumorer forarmet af CD45, med ekspressionen af ​​

Zeb-1

,

Zeb-2

, og

snegl

fundet steg i Rip2-deficiente sammenlignet med vildtype-tumorbærende mus, og forøget ekspression af

twist

nærmer statistisk signifikans (fig 6C). Vi undersøgte også udtryk for disse EMT fremkaldende gener i lungerne indeholder metastaser fra Rip2 vildtype og deficiente mus, afslører en lignende tendens med statistisk signifikans for øget

twist

udtryk i fravær af Rip2 (Fig 6D).

A, Rip2

+ /+ og Rip2

– /- mus intravesikalt implanteret med MB49 celler i 12 dage blev vurderet for E-cadherin og N-cadherinekspression ved immunfluorescens. Forstørrelse på x40. Data er repræsentative for to uafhængige forsøg. B, Bar grafer nedenfor enumerate betyde antal celler pr x40 inden for 3 repræsentative afsnit fra grupper på fire mus; barer, SD. C, Angivelse af

Zeb-1

,

Zeb-2

,

snegl

, og

twist

blev undersøgt fra CD45

– dissocieret alt tumorvæv ved qPCR. Kolonne, gennemsnit af fire mus; barer SD. Data er repræsentative for to uafhængige forsøg. D, Angivelse af

Zeb-1

,

Zeb-2

,

snegl

, og

twist

blev undersøgt fra dissocierede lunger indeholder metastaser ved qPCR. Kolonne, gennemsnit af fire mus; barer SD. Alle

s

værdier blev bestemt ved to-tailed Students

t

test, med statistisk signifikans defineret som p. 0,05

Diskussion

immun sammensætning tumormikromiljøet kan være prædiktiv for sygdomsfri og samlet overlevelse. Dette er blevet vist i forbindelse med CD4

+ T-lymfocytter og CD1α dendritiske celler i axillære lymfeknuder korrelerer med sygdomsfri overlevelse hos brystkræftpatienter [40], til tumor-infiltrerende CD3

+ -celler og CD8

+ T-lymfocytter i tyktarmen [1] og blærecancer henholdsvis [2]. Resten af ​​TIL’er kan forfine den prædiktive evne til immun mikromiljø, som CD4

l ° CD48

l ° CD8

hi patienter udviste forbedret gentagelse overlevelse, mens forholdet mellem CD8

+ T-celler til CD68

+ tumorassocierede makrofager forudsagde samlet overlevelse og reaktion på neoadjuverende kemoterapi i brystkræftpatienter [3]. Anti-tumor immunitet kan forøges ved at målrette negative regulatorer af T-celle co-stimulation som det fremgår af udviklingen af ​​anti-CTLA4 og anti-PD1 terapi, og kan udvides til at målrette tregs og MDSCs [41]. Dette tyder på, at aktiv programmering af tumoren immun mikromiljø kan være en levedygtig strategi at udnytte og skævhed immunitet mod en anti-tumor respons.

Vi har en hypotese, at evne PRRS at sanse kontekstuelle signaler fra patogener at indlede et immunrespons der parallelt med evne dæmper frigivet af cellulære skader i tumoren miljø at forme tumor immunitet. NLRs herunder Nod1 og NOD2 har været impliceret i sensing forskellige patogener samt cellulære stress [42]. Rolle cytosoliske PRRS, såsom NLR familien i tumor overvågning er uklar. For nylig, tab af Rip2 har været impliceret i udviklingen af ​​større kolorektale cancere i en murin model [43]. I dette manuskript, viser vi, at NLRs gennem Rip2 signalering kan forme tumormikromiljøet retning af tumor-infiltrerende CD8

+ T-lymfocytter, NK-celler og undertrykkelse af MDSCs. Ligeledes i mangel af Rip2, større ortotopisk blæretumorer udviklet samt øgede tumor metastaser i både lunge og nyrer.

Rip2 blev oprindeligt beskrevet baseret på sekvenshomologi til sin C-terminale CARD domæne [44] . Vi udviklede Rip2-deficiente dyr og beskrevet en rolle i medfødte immunitet implicerer Rip2 nedstrøms for Nod1, og adaptiv immunitet mediere IFNy-responser i Th1 og NK udvikling [10]. Siden da er betydningen af ​​Rip2 i NLR signalering og makrofag funktion validerede og bevisligt at spille en afgørende rolle i medfødte immunforsvar signaltransduktion af Nod1 og NOD2 receptorer [45]. I mangel af tumorvækst, vi fandt ingen signifikante forskelle i udviklingen af ​​alle splenocytic afstamninger undersøgte herunder CD11b

+ Gr1

+ celler i Rip2-mangelfuld sammenlignet med vildtype-mus. Men i overværelse af tumorvækst vi observeret øget splenocytic CD11b

+ Ly6G

+ celler repræsenterer granulocytiske MDSCs i fravær af Rip2 [35].

Vi undersøgte den systemiske macroenvironment samt lokale microenvironment niveauer af cytokiner, der blev ændret ved fraværet af Rip2 udtryk. Interessant nok blev forhøjede serumcytokiner vigtige i myeloid differentiering findes i Rip2-deficiente tumorbærende dyr, med forøgede niveauer af G-CSF og M-CSF samt MCP-1 og TREM-1. MCP-1 er blevet impliceret i højere tilbagefald og værre blærekræft prognose ved at mediere tumorinvasion, mens TREM-1 er blevet impliceret i aktivering af Küffner celler i hepatocellulært carcinom [27], [30].