PLoS ONE: Anti-Cancer IgM monoklonalt antistof PAT-SM6 binder sig med høj Aviditet til den udfoldede Protein Svar Regulator GRP78

Abstrakt

Det monoklonale IgM antistof PAT-SM6 afledt af humane tumorer inducerer apoptose i tumorceller og betragtes som en potentiel anti-cancer middel. En primær mål for PAT-SM6 er udfoldet protein responsregulatorprotein GRP78, overudtrykt eksternt på celleoverfladen af ​​tumorceller. Lille vinkel røntgenspredning (SAXS) undersøgelser af human GRP78 viste et to-domæne håndvægt-formet monomer, mens SAXS analyse af PAT-SM6 afslørede en underkop-formet struktur imødekommende femdobbelt symmetri, i overensstemmelse med tidligere undersøgelser af beslægtede proteiner. Sedimentationshastigheden analyse af GRP78 og PAT-SM6 blandinger angivet svag kompleksdannelse kendetegnet ved dissociationskonstanter i høj mikromolære koncentrationsområde. I modsætning hertil enzymbundne immunosorbant assays (ELISA) viste stærke og specifikke interaktioner mellem PAT-SM6 og immobiliseret GRP78. Den tilsyneladende bindingskonstant estimeret ud fra en PAT-SM6 mætningskurve korreleret kraftigt med koncentrationen af ​​GRP78 anvendes til at coate mikrotiter bakken. Forsøg under anvendelse af polyklonale antiGRP78 IgG antistoffer eller et monoklonalt IgG derivat af PAT-SM6 viste ikke en tilsvarende afhængighed. Konkurrence eksperimenter med opløselig GRP78 angivet mere effektiv hæmning af PAT-SM6 binding ved lave koncentrationer GRP78 belægning. Disse observationer tyder på en aviditet-baserede bindende mekanisme, der afhænger af den multi-point fastgørelse af PAT-SM6 til GRP78 grupperet på overfladen af ​​bakken. Analyse af ELISA-data ved høj GRP78 coating koncentrationer gav en tilsyneladende dissociationskonstant på ca. 4 nM. Vi foreslår, at den biologiske virkning af PAT-SM6 i tumorcelle apoptose kan afhænge af den multivalente natur af PAT-SM6 og den høje aviditeten af ​​dens interaktion med flere grp78 molekyler grupperet på tumorcelleoverfladen

Henvisning.: Rosenes Z, Mulhern TD, Hatters DM, Ilag LL, Power BE, Hosking C, et al. (2012) Anti-Cancer IgM monoklonalt antistof PAT-SM6 binder sig med høj Aviditet til den udfoldede Protein Reaktion Regulator GRP78. PLoS ONE 7 (9): e44927. doi: 10,1371 /journal.pone.0044927

Redaktør: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, USA

Modtaget: Juni 21, 2012; Accepteret: August 9, 2012; Udgivet: September 19, 2012