PLoS ONE: Ekspression af Dicer og dets forbundne miRNA i udviklingen af ​​prostata Cancer

Abstrakt

Dicer er afvigende udtrykt i flere typer af maligne lidelser. Spaltes af Dicer, er de små ikke-kodende microRNA (miRNA) betragtet som potentielle redskaber til diagnose og prognose af kræft. Denne undersøgelse undersøgte udtryk for miRNA menes at målrette Dicer. Angivelse af 1.205 menneskelige miRNA og miRNA * s blev undersøgt i fire patienter med prostatakræft (PCA) af miRNA array i hvor tærsklen blev sat som to gange. Halvfjerds-tre miRNA og miRNA * s var signifikant nedreguleret, mens 10 var opreguleret i PCA væv sammenlignet med matchede histologisk normale kirtler. Af disse miR-29b-1, miR-200a, miR-370, og miR-31, som var den mest ned /opreguleret og tæt potentielt målrette til Dicer 3’UTR blev undersøgt yderligere. Væv af primære tumorer og matchede normale prostata kirtler fra 185 patienter med PCa blev indsamlet til yderligere undersøgelse. Dicer mRNA niveauer var negativt korreleret med miR-29b-1 (ρs = -0,177, p = 0,017), miR-200a (ρs = -0,489, p 0,0001) og miR-31 (ρs = -0,314, p 0,0001) ekspression. Sammenlignet med tilstødende normale kirtler, viste PCA væv signifikant lavere MIR-200a og MIR-31 ekspressionsniveauer. Desuden i metastatisk PCa, ekspressionsniveauerne af miR-200a, miR-370, og miR-31 var dramatisk højere end i lokaliseret PCa. Derudover forhøjede ekspressionsniveauer af MIR-200a og MIR-31 viste sig at være forbundet med kastrationsresistent PCa. Disse resultater tyder på muligheder, miR-200a og miR-31 mål Dicer og er involveret i carcinogenese, migration og adfærd kastrationsresistent PCa, hvilket indikerer, at de kunne være potentielle biomarkører til overvågning PCa progression.

Henvisning : Bian X, Shen Y, Zhang G, Gu C, Cai Y, Wang C, et al. (2015) Ekspression af Dicer og dets forbundne miRNA i udviklingen af ​​prostatakræft. PLoS ONE 10 (3): e0120159. doi: 10,1371 /journal.pone.0120159

Academic Redaktør: Ajay Pratap Singh, University of South Alabama Mitchell Cancer Institute, UNITED STATES

Modtaget: 10. juli 2014 Accepteret: 3 februar 2015; Udgivet: 13 Mar 2015

Copyright: © 2015 Bian et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering: Denne undersøgelse blev støttet delvist af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (nr 81.272.837) og Højteknologifonden i Shanghai (SHDC12013122). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne erklærer, at de ikke har økonomiske eller kommercielle interesser i relation til denne undersøgelse

Introduktion

Prostatakræft (PCA) er i øjeblikket den næststørste årsag til kræft dødsfald på verdensplan, og PCa dødelighed er stigende i mange asiatiske lande [1]. Fremskreden eller metastatisk PCa forbliver uhelbredelig og androgen ablation tilbyder kun ramte patienter en median progressionsfri tid på 2 år [2].

Mange genetiske faktorer såsom polymorfier og epigenetiske ændringer menes at bidrage til carcinogenese og progression af prostata-adenocarcinom. Desuden har flere undersøgelser undersøgt roller microRNA (miRNA) i initiering og progression af humane kræftformer, der fører til udforskning af nye mekanismer til tumor udvikling [3]. I romanen syntese pathway, er lange miRNA forstadier transskriberet af RNA-polymerase II og derefter forarbejdet til modne miRNA ved den sekventielle virkning af Dicer og drosha endonukleaser. Argo2, et medlem af Argonaute familien af ​​proteiner, binder miRNA og danner en RNA-induceret nedregulering kompleks gennem komplementær parring med mål-site på 3′-utranslaterede region (UTR) af mål-mRNA til at udløse enten translationel undertrykkelse eller mRNA nedbrydning [4, 5]. Tab af miRNA biosyntese, som det ses i Dicer knockouts, betragtes som dødelig. For nylig er en Dicer-uafhængig miRNA biogenese pathway blevet afsløret, hvilket viser en hidtil ukendt rolle af Ago protein i gendæmpning [6]. Desuden kan nogle modne miRNA omvendt regulere Dicer udtryk ved at kombinere med Dicer 3’UTR [7].

Flere undersøgelser har vist, de prognostiske værdier udtrykkes afvigende Dicer i æggestokkene, bryst, tyk- og blære kræftformer [ ,,,0],8-11]. Dicer er tidligere blevet vist at være opreguleret i PCa, selv om en lavere ekspression af Dicer bidraget til en kortere tilbagevendende tidspunkt [12]. De øgede Dicer niveauer i PCa korreleret med klinisk fase, lymfeknude status, og Gleason score. Dens opregulering kan også forklare den samlede stigning på miRNA udtryk observeret i PCa [12, 13]. I en

PTEN

null musemodel for PCa, fuldstændig ablation af Dicer aktivitet betydeligt standset tumorvækst og progression, hvilket viser, at miRNA har kritiske roller i at opretholde kræftcelle fitness [14].

Til bedre at forstå forholdet mellem miRNA og Dicer i PCa udvikling og progression, omfattende analyse af ekspressionen af ​​miRNA er nødvendig. Den foreliggende undersøgelse derfor udforsket differentielt udtrykte miRNA, der har potentiale til at målrette Dicer 3’UTR med det formål at undersøge sammenhængen mellem miRNA og Dicer i den fortsatte udvikling af PSA.

Materialer og Metoder

Patient kohorte

Denne undersøgelse blev godkendt af revision bestyrelse Fudan University Shanghai Cancer center og en godkendt og underskrevet review board informeret samtykkeerklæring blev opnået for hver deltager. Væv af primære tumorer og matchede normale prostata kirtler blev indsamlet fra 185 patienter med PCa på Fudan University Shanghai Cancer Center mellem 2007 og 2011. Af disse 144 patienter gennemgik radikal prostatektomi mens 41 blev administreret transuretral resektion af prostata. Kliniske karakteristika, herunder alder, patologisk stadium, Gleason score, androgen-afhængige tilstand, og de første prostata-specifikke antigen (PSA) niveauer er blevet nævnt i vores tidligere arbejde [15].

RNA ekstraktion og miRNA microarray

totalt RNA blev ekstraheret fra frosne væv opbevaret ved -80 ° C ved anvendelse af totalt RNA-ekstraktion kit (Ambion Inc., Austin, TX) i overensstemmelse med producentens instruktioner. RNA koncentration og integritet blev målt under anvendelse af NanoDrop spektrofotometer (ND-1000, NanoDrop Technologies, Wilmington, DE) og elektroforese hhv. Ens mængder (300 ng) af RNA fra hver patient og kontrol blev samlet og præsenteret som to grupper (primær tumor og tilsvarende normale prostata kirtler). Mirna signatur profiler blev genereret fra de to ovennævnte grupper. Agilent microRNA arrays (v16.0, 8 × 60k, Agilent Technologies, Santa Clara, Californien), indeholdende 1.205 bindingsprober, blev anvendt til at kvantificere hele genomet miRNA ekspression i fire par primær tumor og matches normale prostata kirtler. Den microarray arbejde blev udført ved hjælp af en Agilent microRNA array, som blev scannet af en Agilent Scanner G2505B (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) og de erhvervede array-billeder blev analyseret af Agilent Feature Extraction software (version 10.7.3.1, Agilent Technologies, Santa Clara , CA). I stedet for at bruge en global median metode, normalisering og efterfølgende databehandling blev udført ved hjælp af GeneSpring GX v11.5.1 softwarepakke (Agilent Technologies, Santa Clara, CA), hvor tærsklen blev sat som to gange. Computational miRNA target prædiktionsalgoritmen Targetscan (https://www.targetscan.org) og DIANA-microT (https://diana.imis.athena-innovation.gr/) blev anvendt til at undersøge den række af miRNA potentielt målrettet mod Dicer.

revers transkription-PCR og real-time kvantitativ PCR

Totalt RNA (2 ug) blev revers transkriberet under anvendelse af RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo Scientific, Lafayette, CA) i overensstemmelse med producentens anvisninger uden en RNase-inhibitor i et slutvolumen på 20 pi ved 25 ° C i 10 minutter, derefter 37 ° C i 60 minutter, efterfulgt af 70 ° C i 5 minutter. For miRNA analyse blev MicroRNA Reverse Transcription Kit (Haoqinbio Inc., Shanghai, Kina) med specialiserede primere anvendes i overensstemmelse med producentens protokol ved 25 ° C i 5 minutter, derefter 42 ° C i 45 minutter, efterfulgt af 85 ° C i 5 min.

Real-time kvantitativ (q) PCR blev udført under anvendelse af ABI PRISM 7900-system (Applied Biosystems, Foster City, CA). TaqMan prober og primere (Roche, Basel, Schweiz) blev anvendt i overensstemmelse med producentens anvisninger. Totalt RNA (2 ug) blev omdannet til cDNA ifølge fabrikantens protokol, og PCR blev udført i et totalt reaktionsvolumen på 10 pi, herunder 5 pi TaqMan Premix Ex Taq (2 x), 0,5 pi probe og primer forblanding (20 × ), 1 pi cDNA skabelon og 3,5 pi dobbeltdestilleret vand. Reaktionsbetingelser omfattede et indledende denatureringstrin ved 95 ° C i 10 minutter efterfulgt af 40 cykler ved 95 ° C i 10 s og 60 ° C i 60 s. Alle eksperimenter blev udført tredobbelt. For normalisering blev β-actin og U6 bruges til Dicer og miRNA hhv. Middelværdien for hver tredobbelt blev anvendt til at beregne de relative koncentrationer (Dicer ACt = Ct betyde Dicer-Ct betyde β-actin; miRNAsΔCt = Ct betyder miRNA-Ct betyder U6). Ekspressions- fold ændringer blev beregnet ved anvendelse 2

-ΔΔCt metoder.

Statistisk analyse

Statistisk analyse blev udført under anvendelse af IBM SPSS-version 20.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Normaliseret ekspressionsniveauer af Dicer og miRNA gennemgik en normalfordeling test. Forskelle i kontinuerlige variabler blev vurderet ved hjælp af

t-

test. Spearman rang korrelationskoefficient ρ

s blev anvendt til at evaluere associationen mellem normaliserede niveauer af Dicer og miRNA eller Gleason score. Alle tests var to-sidet ved hjælp af et signifikansniveau på 0,05.

Resultater

miRNA array og real-time qPCR validering

Vi identificerede 73 miRNA og miRNA * s, der var signifikant nedreguleres og 10, der blev opreguleret i PCA-patienter, der har potentialet til at blive anvendt til at skelne prostata-adenocarcinom fra matchede normale kirtler. MIR-29b-1, miR-200a, miR-370, og miR-31were udvalgt til yderligere validering af microarray resultater ved hjælp af real-time qPCR, fordi de var ikke kun de mest ned /op-reguleret, men også tæt potentielt målrette til Dicer 3’UTR. Data-analyse viste, at MIR-29b-1, MIR-200a, MIR-370, og MIR-31 blev nedreguleret i prøver prostatakræft sammenlignet med matchede normale væv. De realtid qPCR resultaterne var i overensstemmelse med dem af microarray (fig. 1).

Til sammenligning mellem miRNA array-data og real-time qPCR resultater, miR-29b-1, miR-200a, miR- 370 og miR-31determined skal udtrykkes forskelligt i prostata adenokarcinom i forhold til matchede histologisk normale kirtler i fire patienter ved miRNA vifte valideret ved anvendelse Real-Time qPCR. Længderne af søjlerne i diagrammet repræsenterer log2-transformerede mediane fold ændringer (tumor /normal) i udtryk på tværs af de fire patienter for hver af de fire miRNA validerede.

Dicer mRNA-niveauer i PCa

Dicer mRNA niveauer varierede betydeligt mellem primære PCA væv og matchede normale væv fra 185 PCA patienter (fig. 2A). Desuden sammenlignet med androgen-afhængige PCa, ekspressionen af ​​Dicer var signifikant lavere i kastrationsresistent PCa (fig. 2B), og i metastatisk PCa sammenlignet med den lokaliserede gruppe (fig. 2C). Imidlertid blev ingen signifikante korrelationer observeret mellem Dicer udtryk og den samlede Gleason score (ρ

s = -0,082, p = 0,267) eller vigtigste Gleason score (ρ

s = -0,054, p = 0,468).

A, Ekspression af Dicer i prostata adenokarcinom og dens matchede normale kirtler, efter normalisering til p-actin; B, Ekspression af Dicer i androgen afhængig og androgen uafhængig PCa, fold ændringer i Dicer mRNA-niveauer i prostata adenocarcinom versus matchede normale kirtler blev log2 forvandlet på Y-aksen; C, Ekspression af Dicer i lokaliserede og metastatisk PCa, fold ændringer i Dicer mRNA-niveauer i prostata adenocarcinom versus matchede normale kirtler blev log2 rangeret på Y-aksen.

Differentieret udtryk for miRNA i valideringen kohorten

ekspressionsniveauerne af mIR-200a og mIR-31 var signifikant nedreguleret i PCA væv sammenlignet med matchede normale kirtler (fig. 3B og 3D), mens der ikke var nogen signifikant forskel i ekspressionsniveauerne af mIR-29b -1 eller mIR-370 (fig. 3A og 3C).

Ekspression af mIR-29b-1 (A), mIR-200A (B), mIR-370 (C) og mIR-31 (D ) i prostata adenokarcinom og matchede normale kirtler, efter normalisering til U6.

efter log2-transformation af miRNA fold ændringer i prostata adenocarcinom versus matchede normale kirtler, de relative ekspressionsniveauer af miR-200a, miR -370, og mIR-31 var højere i metastatisk PCa sammenlignet med lokaliserede PCa (fig. 4).

Ekspression af mIR-29b-1 (A), mIR-200A (B), mIR-370 ( C) og miR-31 (D) i lokaliseret og metastatisk PCa, fold ændringer af miRNA niveauer i prostata adenocarcinom versus matchede normale kirtler blev log2 forvandlet på Y-aksen.

Kohorter blev også delt i to undergrupper efter deres androgen-afhængighed med 166 patienter er androgen-afhængige og 19 kastrationsresistent. Efter log2 transformation af fold ændringer i prostataadenocarcinom versus matchede normale kirtler, de relative ekspressionsniveauer af MIR-200a og MIR-31 var signifikant lavere i androgen-afhængige undergruppe forhold til kastrationsresistent on (fig. 5).

Angivelse af miR-29b-1 (A), miR-200a (B), miR-370 (C) og miR-31 (D) i androgen afhængig og kastrationsresistent PCa, fold ændringer af miRNA niveauer i prostata adenocarcinom versus matchede normale kirtler blev log2 forvandlet på Y-aksen.

Dicer mRNA i forhold til miRNA udtryk

korrelationsundersøgelser mellem Dicer og miR-29b-1, miR-200a, miR -370, og mIR-31 ekspression i PSA, viste, at ekspressionen af ​​Dicer mRNA var moderat og negativt korreleret med den af ​​mIR-200a og mIR-31 (ρ

s = -0,489, p 0,0001; ρ

s = -0,314, p 0,0001 henholdsvis). Desuden niveau Dicer mRNA blev fundet mildt og negativt korreleret med miR-29b-1 (ρs = -0,177, p = 0,017) udtryk. Men der var ingen statistisk sammenhæng med udtryk for Dicer til miR-31-ekspressionsniveauer (ρ

s = -0,057, p = 0,458) (Tabel 1).

Diskussion

PCa er en af ​​de førende årsager til kræft-relaterede dødsfald, og diverse mekanismer PCa carcinogenese og progression er blevet undersøgt. Flere undersøgelser har vist, at miRNA spiller vigtige roller i programmet ved at fremme nedbrydning af målgenet. Selv om mange miRNA er kendt for at blive dereguleret i kræft, er det uklart, som har en patogen rolle i dets udvikling. Ændringer i miRNA ekspression i cancercellelinier direkte regulere deres adfærd, såsom proliferation og apoptose [3], samt påvirke tumorsuppression og metastase. I den foreliggende undersøgelse undersøgte vi ekspressionsniveauerne af MIR-29b-1, MIR-200a, MIR-370, og MIR-31 i matchede PCA væv fra 185 patienter.

Tidligere undersøgelser har påvist forhøjede niveauer af Dicer i primær PCa. Vi fandt, at Dicer mRNA-niveauer blev signifikant reduceret i metastatiske og kastrationsresistent PCa, som er forbundet med dårlige prognoser. Silencing Dicer kunne bidrage til aktivering af

s

-Akt og forøget ekspression af cellecyklus-associerede molekyler og proteiner involveret i tumorcelleinvasion. Omvendt blev knock-down af Dicer også vist at inhibere celleproliferation og fremme apoptose i leukæmicellelinjer [16]. Disse uoverensstemmelser kunne forklares ved den observerede heterogenitet og genetiske mangfoldighed i forskellige PCA væv [17].

Vores miRNA korrelation undersøgelse viste, at den relative ekspression af miR-200a og miR-31 var moderat og negativt forbundet med Dicer mRNA-niveauer i PSA. Dette resultat tyder sandsynlighed for en direkte sammenhæng mellem miRNA og Dicer fordi miRNA hæmmer proteinsyntese for at bevare stabiliteten i deres mRNA mål [4]. Sammenligne ekspressionsniveauerne af MIR-200a og MIR-31 mellem primær tumor og tilstødende normale kirtler i den foreliggende undersøgelse, observerede vi en signifikant ekspression fald i primære tumorer, hvilket antyder, at MIR-200a og MIR-31 kan være involveret i prostata carcinogenese. Tidligere undersøgelser viste, at MIR-200 familie er en afgørende modulator af epitelial til mesenkymale overgang, og at det er nedreguleret og udviser tumor undertrykkende egenskaber i nyre-, prostata-, bryst-, blære-, pancreas- og gastriske cancere [3, 18] . Endvidere blev MIR-200 familien vist sig at modulere oxidativt stress respons, således påvirker tumorigenese og kemosensitivitet [19]. Vi fandt, at MIR-31 ekspressionsniveauet blev reduceret i tumorvæv sammenlignet med normale kirtler, hvilket indikerer, at MIR-31 kan fungere som en tumor suppresser gen. Imidlertid forbliver den rolle miR-31 kontroversielle [20-22]. Chan et al. tidligere vist sig, at kun en af ​​tre MIR-31 isoformer, som afveg kun lidt i deres 5′- og /eller 3′-endesekvenser, direkte undertrykt Dicer ekspression både mRNA og translationelle niveauer i MCF-7-brystcancerceller og A549 lunge cancerceller. Dette resulterede i øget cellulær følsomhed over for cisplatin, en kendt egenskab ved Dicer knockdown [23].

Under sygdomsprogression, er miRNA menes at være prognostiske faktorer for metastaser. Vi viste, at MIR-200a, MIR-31, og MIR-370 ekspressionsniveauer blev forøget i metastatisk PCa snarere end i lokaliserede cancere.

In vitro

, forbigående transfektion af MIR-200a blev tidligere vist at reducere PCa cellelinieproliferation men har ingen virkning på invasionsevne [24]. I æggestokkene cancer stamceller, blev tabet af miR-200a udtryk menes at spille en afgørende rolle i E-cadherin undertrykkelse og dermed øge migrationen og invasive evner CD133 /1

+ celler [25]. Desuden MIR-200A nedregulering i meningiomas fremmet tumorvækst ved at reducere E-cadherin ekspression og aktivering af Wnt /β-Catenin signalvejen [26].

Ligeledes en rolle for MIR-370 i proliferationen af humane PSA-celler er tidligere blevet påvist. Den ektopiske udtryk for miR-370 fremmet celledeling og øget forankringsuafhængig vækst og kolonidannelse evne DU145 og LNCaP PCA celler [27]. Højere ekspression af MIR-370 i gastrisk cancer væv var også forbundet med mere avancerede nodal metastase og en højere klinisk fase sammenlignet med kontroller, mens patienter med mere avancerede eller invasive tumorer demonstrerede højere serum MIR-370 ekspressionsniveauer.

In vitro Salg assays indikerede, at exogen MIR-370-ekspression forbedret den onkogene potentiale af gastriske carcinomaceller, målrettet forudsagte steder i den transformerende vækstfaktor-b-receptor II-genet 3’UTR, og øget abdominal dissemineret metastase i nøgne mus [28]. I vores undersøgelse blev miR-31 forhøjet i metastatisk PCa. Hæmning af miR-31 kunne fremme

in vivo

metastase gennem direkte regulering af en kohorte af prometastatic gener i bryst- og ovariecancer [29, 30]. Selvom MIR-31 overekspression i en række æggestokkene cancercellelinier med en dysfunktionel TP53 pathway inhiberede proliferation og apoptose [30], dets overekspression i coloncancercellelinie HT29, bærer en TP53 mutation, resulterede i en stærk anti-apoptotisk virkning . Den anti-apoptotiske virkning af MIR-31 overekspression var lavere eller fraværende i celler med en funktionel TP53 pathway [31]. Tilsammen både udtryk og funktioner miR-31 synes at være kræft-specifikke og muligvis celle kontekstafhængig.

Kastration modstand er en bestemt fase af avancerede PCa forbundet med svigt af hormonbehandling og en dårlig prognose. I vores kohorte, ekspressionsniveauerne af miR-200a og miR-31 var højere i primære tumorer i kastrationsresistent PCa sammenlignet med androgen-afhængige PCa, og højere i primære tumorer sammenlignet med parrede normale kirtler. Dette tyder på en mulighed for, at opreguleret ekspression af MIR-200a og MIR-31 under carcinogenese spiller en vigtig rolle i udviklingen af ​​PCa ved at fremme cellen til kastration fase. Flere undersøgelser har allerede vist, at androgen receptor signalering spiller en kritisk rolle i PCa patogenese. For nylig blev miRNA fundet at være mediatorer af androgen aktivitet i prostata og muskler, hvilket indikerer, at de kan være vigtige i udviklingen af ​​PCa [32]. Lin et al. fandt, at miR-31-ekspression blev reduceret som følge af promotor hypermethylering i primær og metastatisk PCa, og at det omvendt var korreleret med aggressivitet af sygdommen. Det blev vist at direkte målrette androgen receptor ved et sted i den kodende region, der almindeligvis muteret i PCa [33]. Således kan opregulering af MIR-31 være en årsag til svigt af androgen deprivation terapi. Derudover opreguleret miR-31 kunne undertrykke cellecyklus regulatorer og forhindre cytotoksicitet agenter inducere apoptose i PCA celler, hvilket gør kastrationsresistent PCa terapi vanskelig [33, 34].

rolle forhøjede Dicer niveauer i ændring fra primær til metastatiske og kastrationsresistent PCA tumorer, samt i forhold til miRNA, skal undersøges nærmere i en større kohorte af patienter. Vores undersøgelse har ikke løbende overvåge disse ændringer i hver kohorte, og metastatiske og kastrationsresistent prøver var uafhængige af de lokaliserede primære kræft væv, så vores resultater er begrænsede. Alligevel mener vi, at dette pilotundersøgelse var vigtigt at få indblik i, hvordan miRNA kan reguleres i metastatiske og kastrationsresistent PCA patienter. MiRNA dukker op som en roman sæt af molekyler der i sidste ende kan føre til dannelse af kræft, når dereguleret. De er også tilbøjelige til at samarbejde med andre klassiske onkogener og /eller nedregulere tumorsuppressorgener at påvirke tumor adfærd. Disse ikke-kodende klasser af RNA kan tjene som nyttige biomarkører og kan i høj grad forbedre den kliniske behandling ved at give os mulighed for at vælge mere hensigtsmæssige behandlingsmuligheder for patienter [35]. Selv store gennembrud i translationel onkologi er blevet gjort i de seneste år, endnu ikke blevet behandlet i patientbehandlingen mange spørgsmål. Desuden dødeligheden faldet i den “PSA æra ‘er omstridt på grund af PSA-baserede screeningsprogrammer, der også fører til overdiagnostik og overbehandling. Således er et presserende behov for nye og alsidige molekyler i stand til at drive beslutningsprocessen i hele sygdomsforløbet.

Som konklusion viste vores resultater, at Dicer kunne være en mulig mål for miR-200a og miR- 31. Desuden kan disse miRNA inddrage i carcinogenese, migration og adfærd kastrationsresistent PCa, og kunne bruges som potentielle biomarkører i overvågning af sygdommens progression af PSA.