PLoS ONE: Fase I Evaluering af STA-1474, et prodrug af Novel HSP90 Inhibitor Ganetespib, i hunde med spontan Cancer

Abstrakt

Baggrund

Den nye vandopløselige forbindelse STA-1474 metaboliseres til ganetespib (tidligere STA-9090), en potent HSP90 hæmmer tidligere vist at dræbe hunde tumorcellelinjer

in vitro

og hæmme tumorvækst i fastsættelsen af ​​murine xenografter. Formålet med den følgende undersøgelse var at udvide disse observationer og undersøge sikkerhed og effekt af STA-1474 hos hunde med spontane tumorer.

Metoder og Resultater

Det var et fase 1 forsøg, hvor hunde med spontane tumorer modtaget STA-1474 under en af ​​tre forskellige dosering ordninger. Farmakokinetik, toksiciteter, biomarkør ændringer, og tumor respons blev vurderet. Femogtyve hunde med en række forskellige cancere blev inkluderet. Toksiciteter var primært gastrointestinale bestående af diarré, opkastning, appetitløshed og sløvhed. Opregulering af HSP70 proteinekspression blev bemærket i både tumor prøver og PBMC’er indenfor 7 timer efter administration af lægemidlet. Målbare objektive responser blev observeret hos hunde med ondartet mast celle sygdom (n = 3), osteosarkom (n = 1), melanom (n = 1) og skjoldbruskkirtlen carcinom (n = 1), for en svarprocent på 24% (6 /25). Stabil sygdom ( 10 uger) blev set i 3 hunde, en resulterende samlet biologisk aktivitet på 36% (9/25)

Konklusioner

Denne undersøgelse dokumenterer, at STA-1474. udviser biologisk aktivitet i en relevant stor dyremodel af cancer. På grund af lighederne af hunde- og humane cancere med hensyn til tumor biologi og HSP90-aktivering, er det sandsynligt, STA-1474 og ganetespib vil demonstrere sammenlignelig anti-cancer-aktivitet i humane patienter

Henvisning:. London CA, Bjørn MD , McCleese J, Foley KP, Paalangara R, Inoue T, et al. (2011) Fase I Evaluering af STA-1474, et prodrug af Novel HSP90 Inhibitor Ganetespib, i hunde med spontan Cancer. PLoS ONE 6 (11): e27018. doi: 10,1371 /journal.pone.0027018

Redaktør: Mikhail V. Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, USA

Modtaget: Juli 9, 2011; Accepteret: 7 okt 2011; Udgivet: November 3, 2011

Copyright: © 2011 London et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne kliniske forsøg blev støttet af midler fra Synta Pharmaceuticals Corp. de finansieringskilderne bidraget til undersøgelsen design, farmakokinetisk og forberedelse af manuskript, men havde ingen rolle i behandlingen og evalueringen af ​​hunde i denne undersøgelse

Konkurrerende interesser:. det forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

Heat shock protein 90 (HSP90), en molekylær chaperone, der fremmer den konformationelle modning og stabilisering af et bredt udvalg af klient-proteiner, er en lovende mål for terapeutisk indgriben i kræft [1], [2], [3], [4]. Mange HSP90 klienter er kendte oncoproteiner, herunder EGFR familiemedlemmer, Akt, Bcr-Abl, mutant p53, Kit, og Met, blandt andre [1], [3]. Inhibering af HSP90 funktion fremmer nedbrydning af disse klient proteiner oftest gennem ubiquitin proteasomforløb sidste ende resulterer i apoptose [2], [3], [4]. Selektivitet HSP90 inhibitorer for malign versus normale celler menes at være knyttet til den omstændighed, at akkumulering af overudtrykt og muterede klient proteiner fremmer et skift til den aktive, super-chaperone-kompleks form for HSP90 i cancerceller [5], [6 ], [7]. I denne tilstand, en klient protein forbinder med HSP90 ved hjælp af co-chaperoner såsom p23, Hsp40, HOP, og HIP [3], [5], [6]. Denne super-chaperone komplekse udviser forøget ATPase-aktivitet, og følgelig ofte binder små molekyler ATP mimetika med en højere affinitet end den ikke-kompleksdannet form af HSP90, hvilket fører til akkumulering i tumorer i forhold til normale væv. Som sådan er den forbedrede HSP90 aktivitet medfører en større følsomhed af maligne celler til tabet af HSP90 funktion [5]. Målretning HSP90 i kræft er også tiltrækkende som ingen resistente mutationer er blevet identificeret i dette protein i humane kræftformer, hvilket tyder på det repræsenterer en relativt stabilt mål for narkotikabehandling [8]. Fordi HSP90 hæmning kan påvirke flere veje, der ofte bidrager til onkogene proces, HSP90 hæmmere har potentiale til at demonstrere bred aktivitet på tværs af flere tumortyper [1], [3].

Den første klasse af HSP90 hæmmere var baseret på geldanamycin, en benzoquinonansamycin antibiotikum, som binder til den N-terminale ATP-bindende lomme af HSP90 og derved blokere dens ATPase funktionen. Geldanamycin og dens semi-syntetiske derivater 17-AAG og 17-DMAG forhindre stabiliseringen af ​​kundens proteiner, i sidste ende resulterer i deres nedbrydning [9], [10], [11]. Imidlertid geldanamycin og dets derivater har en række begrænsninger, herunder formulering udfordringer og bivirkninger, såsom hepatotoksicitet [12]. STA-1474 (Synta Pharmaceuticals Corp, Lexington, MA, USA) er en højt opløselig prodrug af ganetespib (tidligere STA-9090), en hidtil ukendt resorcinol-holdig forbindelse relateret til geldanamycin, der binder i ATP-afventende domæne ved N-terminus af HSP90 og virker som en potent HSP90-hæmmer. Ganetespib inducerer nedbrydning af multiple HSP90 klient proteiner, dræbe en lang række humane cancercellelinier ved lave koncentrationer nanomolære

in vitro

og udviser kraftig anti-cancer-aktivitet i xenograft tumormodeller i mus ([13], [ ,,,0],14], [15] og ikke-offentliggjorte data, Synta Pharmaceuticals Corp.).

I tidligere undersøgelser, viste vi, at ganetespib og dets vandopløselige prodrug STA-1474 har aktivitet mod hunde tumorcellelinjer [14], [ ,,,0],15]. Behandling af osteosarkom (OSA) og mastcelletumor (MCT) cellelinier med enten ganetespib eller STA-1474 induceret vækstinhibering, apoptose, der var caspase3 /7 afhængige, og inaktivering og /eller nedregulering af pKit /Kit, pMet /Met , Pakt /Akt, og pSTAT3. Både ganetespib og STA-1474 udviste overlegen aktivitet til geldanamycinderivat 17-AAG. Ganetespib inhiberede tumorvækst i en murin MCT xenograft model, mens STA-1474 induceret tumorregression, caspase-3-aktivering og nedregulering af phospho-Met (pMet) /Met og p-Akt /Akt i OSA xenotransplantater [14], [15] . Formålet med følgende kliniske forsøg var at udvide vores

in vitro

og murine undersøgelser og undersøge sikkerhed og effekt af STA-1474 hos hunde med spontane tumorer som optakt til fremtidig klinisk arbejde i mennesker med kræft.

Materialer og metoder

Berettigelse

Denne kliniske forsøg blev godkendt af Ohio State University Veterinary Medical center Hospital forretningsudvalg i juli 2007. skriftlig informeret samtykke fra ejeren af ​​hver hund blev anmodet om i henhold til IACUC og The Ohio State University College of Veterinary Medicine retningslinjer. STA-1474 blev administreret til hunde med spontane tumorer, der havde undladt konventionel behandling, eller for hvilke der ikke var nogen terapeutiske alternativer, eller for hvilke konventionel behandling ikke var ønsket af ejeren. For at være berettiget til undersøgelsen, skal hver hund er blevet diagnosticeret med en af ​​et udvalgt sæt af histologisk bekræftet spontane maligniteter, og har mødt alle inklusionskriterierne og ingen af ​​udelukkelseskriterierne. Støtteberettigede maligniteter omfattede carcinomer, sarkomer, mastcelletumorer, histiocytiske sarkomer eller lymfomer. Yderligere støtteberettigelseskriterier inkluderet: 1 år gammel ved studiets start; tilstrækkelig organfunktion; mindst 2 uger siden kemoterapi eller strålebehandling med fuldstændig helbredelse fra den akutte toksicitet af disse behandlinger (3 uger til en kirurgisk procedure); mindst 1 uge siden tidligere behandling med andre lægemiddelproduktkandidaten; ingen diagnose af leukæmi; og ingen tegn på hjernemetastaser eller enhver alvorlig systemisk lidelse uforenelig med undersøgelsen skøn investigator.

STA-1474 formulering

STA-1474, en opløselig prodrug af ganetespib, blev tilvejebragt ved Synta Pharmaceuticals Corp (figur 1). Lyofiliseret STA-1474 lægemiddelprodukt blev opbevaret ved 4 ° C og beskyttet mod lys, indtil dagen for behandling. Lægemiddel blev opløst i Plasmalyte 148 USP og pH blev justeret til området fra 6,0 til 7,0, ved anvendelse af 0,1 N NaOH standardløsning til en endelig koncentration på 3 mg /ml. Lægemiddelopløsningen blev sterilfiltreret med 0,2 μ nylonfilter og indlæst en ikke-DEHP fluidbane IntraVia

TM 250 ml tom beholder ind. Den fyldte infusionspose blev derefter forbundet til en polyethylenforet udluftet paclitaxel sæt, der indeholder et 0,22 μ filter, til indgivelse. Både infusionspose og linje var dækket for at beskytte mod lys. Drug opløsning blev anvendt inden for 24 timer forberedelse.

Vist er den kemiske struktur af STA-1474, et vandopløseligt fosfat prodrug af ganetespib.

Studie design

Denne undersøgelse var en fase i dosiseskaleringsstudie, open label vurdering af sikkerhed og farmakokinetik af STA-1474 i klient ejede hunde med spontane maligniteter. Hunde blev administreret STA-1474 på en af ​​tre doseringsregimer og blev evalueret ugentligt eller to gange om ugen afhængig af lægemidler, der anvendes. Vurdering af kliniske toksiciteter og tumor respons blev udført ved hvert besøg. Hunde blev evalueret for hæmatologisk og biokemiske toksiciteter hver 7 dage med rutine blodprøven. Den indledende dosis af STA-1474 blev fastsat til 7 mg /kg baseret på tidligere data fra normale laboratorie hunde (data ikke vist) og dosisøgning blev fastsat til trin 2,5 mg /kg i kohorter af 3, indtil toksicitet dosisbegrænsende (DLT) blev identificeret. Den DLT blev anset for at være nogen grad 3 eller 4 hæmatologisk eller ikke-hæmatologisk toksicitet baseret på de etablerede VCOG-CTAE kriterier [16]. Derudover eventuelle kroniske non-grade 3 eller 4 toksiciteter anses for væsentligt forringe livskvaliteten (dvs. sløvhed, appetitløshed) var kvalificeret som DLT. Sygdomsprogression eller tegn og symptomer absolut relateret til sygdom, blev ikke anset bivirkninger (AES).

vurdering

Toksicitet

Hver patient gennemgik en baseline komplet historie, fysisk undersøgelse, og inden dosering laboratorium vurdering, der omfattede en komplet blodtælling (CBC), serum biokemi profil, og urinanalyse. Patienterne blev vurderet for bivirkninger på dag 8, 15, 22, og 29, på hvilket tidspunkt en komplet blodtælling med differentiale og klinisk kemi blev udført. Urinanalyse blev udført ved baseline og gentagen kun hvis indiceret. Bestemmelser vedrørende minimale hæmatologiske krav til fortsat dosering blev inkluderet i protokollen: hæmatokrit 25%, neutrofiler 1500 /L, blodplader 100.000 /L. Desuden blev levertransaminaser skal være . 4X øvre grænse for normal med en normal total bilirubin og serum kreatinin at fortsætte STA-1474 terapi

Anden samtidig medicin

For at forebygge eller behandle narkotika -relaterede gastrointestinale toksicitet, blev understøttende behandling administreres efter behov for hunde indskrevet i den daglige dosering kohorter. Dette bestod typisk af famotidin, metronidazol, loperamid, metoclopramid, ondansetron, og /eller maropitant. Antihistaminer blev administreret til hunde med mastcelletumorer, da disse tumorer er kendt for at frigive histamin. Andre understøttende behandling gives til hunde bestod af prednison og non-steroide anti-inflammatoriske medicin til behandling af tumor-associerede inflammation, appetitløshed, og for smerter kontrol.

vurdering

Tumor respons

Tumor vurderingerne blev afsluttet før studere indrejse, og dage 8, 15, 22, og 29. for hunde, der fortsatte ud over de planlagte 4 doser STA-1474, blev respons vurderinger foretaget hver 3-6 uge derefter, eller på tidspunktet for mistanke tumor progression. Svarene blev vurderet af investigator efter foruddefinerede protokol kriterier. Svaret på hunde med vurderbare sygdom blev udført ved klinisk undersøgelse, røntgen, ultralyd eller CT-scanning. Mange læsioner var ikke modtagelig for kvantitativ radiografisk billeddannelse, men blev enten efterfulgt af seriel klinisk undersøgelse (overfladiske læsioner, håndgribelige lymfeknuder) eller ved ultralydsundersøgelse (abdominale lymfeknuder). Thorax læsioner blev vurderet af thorax røntgen og nasale læsioner ved CT-scanning.

Svaret på hunde med målbar sygdom blev vurderet af investigator på grundlag af RECIST kriterier [17]. En komplet respons (CR) blev defineret som forsvinden af ​​alle sygdomme på to målinger adskilt af en periode på 3 uger minimum. En partielt respons (PR) blev defineret som mere end 30% reduktion i summen af ​​den længste diameter af target-læsioner dokumenteret ved to vurderinger adskilt af mindst 3 uger. En stigning på 20% i størrelsen af ​​alle målbare tumor områder som målt ved summen af ​​længste diametre af target-læsioner taget som reference den mindste sum siden initiering af behandlingen, eller fremkomsten af ​​en ny læsion (r) ville kvalificere som progressiv sygdom (PD). En blandet respons (MR) blev defineret som PR i nogle target læsioner med PD i andre target læsioner. Stabil sygdom (SD) blev defineret ved fravær af kriterier for enten en respons eller progression. Hunde, der havde ingen tegn på tumor progression, og som ikke havde oplevet nogen uacceptabel toksicitet var berettiget til udvidet behandlingsserier. Optrapning af dosis i en individuel hund var tilladt, hvis hunden var tolerere terapi

Ganetespib farmakokinetik

Plasmaprøver blev indsamlet på dag 1 og dag 22 i behandlingen med de angivne intervaller:. Før og efter dosering ved 30, 60, 90, 120, 180, 300 (5 timer), 540 (9 timer), og 1440 (24 timer) minutter i forhold til starten af ​​doseringen. På dag 8 dag 15 og dag 29, blev plasma opsamlet før dosering alene. Ca. 1 ml blod blev udtaget fra et indlagt kateter, som er tilføjet i en natriumheparin vakuum glasrør, og anbringes på is indtil centrifugering. Blodprøver blev centrifugeret ved 3300 rpm i 10 minutter, inden for 30 minutter efter opsamling. Plasma blev overført med pipette i to kryohætteglas og lagret ved -80 ° C indtil analyse.

Plasmakoncentrationer af ganetespib blev bestemt ved anvendelse af en kvalificeret væskekromatografi tandem-massespektrometri (LC-MS /MS) metode. Prøver blev analyseret på et HPLC-system bestående af en Agilent HP1100 adskillelse modul (Santa Clara, CA) koblet til en AB SCIEX API400 MS /MS-detektor (Foster City, CA). Isotopmærkede ganetespib blev anvendt som en intern standard. Prøve ekstraktion blev udført ved en væske-væske-ekstraktion metode med 25 pi plasma prøver og 800 pi methyl-tert-butylether. Den organiske fase af prøver blev inddampet til tørhed under nitrogen og rekonstitueret med vand /acetonitril injektionsvæske. Kromatografisk separation blev opnået på en omvendt-fase-analytisk søjle (4 um partikel, 50 × 2,0 mm i.d.) med gradienteluering med vand /0,1% myresyre og acetonitril /0,1% myresyre ved en strømningshastighed på 500 pl /min. Den totale kørselstid var 4 min. Kvantificering blev opnået ved MS /MS detektion i positiv ion-mode ved at overvåge flere reaktion. Den nedre grænse for kvantificering (LLOQ) var 1,00 ng /mL, med et koncentrationsområde fra 1,00 til 1000 ng /mL.

De farmakokinetiske parametre for ganetespib blev bestemt ud fra plasmakoncentrationsdataene vha Noncompartmental Analysis modul i WinNonlin, udgave 5.2 (Pharsight Corporation, St.Louis, MO). De inden dosering prøver, der er målt under LLOQ (BQL) blev behandlet som nul for beregningerne. Maksimal koncentration (Cmax) og tid for maksimal koncentration (Tmax) var direkte bestemt ud fra de observerede koncentrations-tid-profiler. Arealet under plasmakoncentration-tid-kurven (AUC) blev estimeret ved den lineære trapezoide regel. Den tilsyneladende halveringstid (t

1/2) blev beregnet som t

1/2 = 0,693 /λ, hvor λ var elimineringshastighedskonstanten estimeret ud fra regressionen af ​​terminalen hældning af koncentration mod tid kurven.

Evaluering af HSP70 udtryk

Små biopsier blev indsamlet fra en delmængde af patient tumorer, der var tilgængelige på 0, 7 og 24 timer efter behandlingen. Biopsier blev opnået ved anvendelse af en 3 mm dorn biopsiinstrumentet eller 14 gauge Tru-cut nål. Alle prøver blev anbragt i kryohætteglas, straks lynfrosset i flydende nitrogen og opbevaret ved -80 ° C indtil HSP70 analyse. For at vurdere de relative HSP70 niveauer i de indsamlede tumorprøver, et kommercielt tilgængeligt HSP70-enzymbundet immunsorbentassay (ELISA assay design, Ann Arbor, MI) blev udført. Frosne tumorprøver blev pulveriseret ved anvendelse af en frossen morter og støder. Det resulterende pulver blev resuspenderet i flydende nitrogen, opsamlet, derefter delt mellem to 15 ml conicals; én konisk til ELISA og en for Western-blot (se fremgangsmåde nedenfor). Når den flydende nitrogen inddampet væk, blev prøverne optøs på is. Prøver til ELISA blev resuspenderet i (1X) Udvinding reagens indeholdende 1 ug /ml aprotinin, 1 ug /ml leupeptin, 1 ug /ml pepstatin A, 1 mM PMSF, 1 mM natriumorthovanadat, og 10 mM natriumfluorid, anvendelse af 1 ml for hver 0,5 cm

3 af væv. Prøver blev inkuberet på en rocker i 1 time ved 4 ° C, centrifugeret i 15 minutter ved 4 ° C, og derefter supernatanter blev opsamlet. Bradford protein kvantificering blev udført på ekstrakter ved hjælp BioRad reagens (BioRad, Hercules, CA). Prøver blev udlignet til 250 ug /ml med (1X) Ekstraktionsreagens, alikvoteret og opbevaret ved -80 ° C indtil analyse. På et senere tidspunkt, frosne prøver, hvor lov til at tø på is, og derefter serielt fortyndet med prøvediluent 2 (forudsat i sættet) til 1:04, 1:16, og 1:32. 100 pi af hver fortynding blev tilsat til de passende brønde, i to eksemplarer over 96 brønde præ-coatede ELISA-plade. ELISA blev udført ved at følge producentens instruktioner, og absorbansen blev målt inden for 30 minutter under anvendelse af en Spectramax mikropladelæser (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) med bølgelængden indstillet ved 450 nm og en korrektion bølgelængde ved 540 nm.

Sådan vurdere HSP70 niveauer i perifere mononukleære blodceller blev 8 ml fuldblod opsamlet før dosering og 24 timer efter behandling (i nogle tilfælde også ved 7 timer efter behandlingen) på dag 1 og dag 22 fra halsvenen i to 4 ml BD Vacutainer CPT-rør (BD, Franklin Lakes, NJ). Prøver blev holdt ved stuetemperatur indtil centrifugering i 1 time ved 1600 RCF, inden for 2 timer efter prøvetagning. Efter centrifugering blev det mononukleære cellelag i plasma overføres til et 15 ml konisk. PBMC’er blev vasket ved tilsætning af 15 ml PBS og centrifugering i 15 minutter ved 300 RCF. Efter to vaske blev cellepellets resuspenderet i 1 ml PBS og overført til et 1,5 ml mikrocentrifugerør. Cellerne blev pelleteret igen ved centrifugering ved 13.000 RCF i 1 minut. Supernatanten blev fjernet, og cellepellets hvor lynfryses i flydende nitrogen og opbevaret ved -80 ° C. Umiddelbart før analysen blev PBMC pellets optøs på is, derefter hver prøve blev resuspenderet i 500 pi (1x) Ekstraktion puffer med proteasehæmmere. Ved anvendelse af fremgangsmåden beskrevet ovenfor blev prøverne analyseret for relative koncentrationer af HSP70 hjælp af HSP70-enzymbundet immunsorbentassay (Assay Designs, Ann Arbor, MI).

Evaluering af tumorbiopsier for HSP90-ekspression

Frosne tumorprøver blev behandlet som beskrevet ovenfor, resuspenderes derefter i 100-150 pi lysepuffer bestående af 20 mM Tris-HCI pH 8,0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% IGEPAL CA-630, 10 mM ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA), 1 mg /ml aprotinin, 1 mg /ml leupeptin, 1 mg /ml pepstatin A, 1 mM phenylmethysulphonyl fluorid, 1 mM natriumorthovanadat, 10 mM natriumfluorid (alle fra Sigma, St. Louis, MO). Prøve blev rystet ved 4 ° C i 1 time, og derefter centrifugeret i 15 minutter ved 13.000 RCF. En Bradford protein assay blev udført på lysaterne ved hjælp BioRad reagens (Hercules, CA). 60-100 ug protein blev separeret ved SDS-PAGE og overført til PVDF-membraner. Membranerne blev inkuberet natten over med anti-HSP90-antistoffer (Cell Signaling Technology, Danvers, MA), vasket og derpå inkuberet med peberrodsperoxidase koblet sekundært antistof. Membraner blev igen vasket, derefter udsat for Super Signal West Dura Extended Duration Substrate (Pierce, Rockford, IL) membraner blev strippet, vasket og testet igen for β-Actin (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) under anvendelse af SNAP i.d. apparat (Millipore, Billerica, MA) i henhold til producentens anvisninger.

Resultater

Emner

I alt 25 hunde med en række spontane kræftformer blev indskrevet i undersøgelsen. Patientdemografi og tumortype er anført i tabel 1. De fleste hunde indskrevet i dette studie havde tidligere behandlinger (n = 18, 72%), herunder kirurgi, strålebehandling, kemoterapi eller en kombination af disse behandlinger. I betragtning af de tidligere data, der viser biologisk aktivitet af ganetespib i hunde osteosarkom (OSA) og mast celle tumor (MCT) cellelinjer, samt bevis for tumor regression /stabilisering i murine xenograftmodeller af hunde OSA og MCT, hunde med disse tumortyper var beriget i denne fase i studie. Tumortyper repræsenterede inkluderet OSA (n = 10), MCT (n = 4), thyroid carcinoma (n = 3), lymfom (n = 3), anden carcinom (n = 2), nasal chondrosarcom (n = 1), oral malignt melanom (n = 1), oral fibrosarkom (n = 1).

behandling grupper og farmakokinetisk

Hunde (n = 12) blev oprindeligt indgået et behandlingsregime bestående af STA-1474 indgivet intravenøst ​​over en time en gang om ugen. En anden gruppe af hunde (n = 6) blev administreret STA-1474 over 8 timer en gang om ugen. Dette dosisregime blev valgt på grundlag af en delvis respons på behandlingen observeret i en hund med malignt melanom i første kohorte efter narkotika ekstravasation og langvarig stof udsættelse på grund af langsom subkutan absorption. Den tredje gruppe af hunde (n = 7) modtog STA-1474 administreret over en time to gange om ugen. Hver hund indgik i undersøgelsen var at modtage mindst 4 doser STA-1474 med mulighed for at fortsætte behandlingen i lyset af enten stabil sygdom eller et mål, tumor respons.

Farmakokinetiske data er opsummeret i tabel 2 . Fuld farmakokinetiske prøver blev udført for alle hunde i denne undersøgelse på den første dag af lægemiddeladministration. Middelplasmakoncentrationen – tidsprofiler til hunde i de tre behandlingsgrupper er vist i figur 2a, med repræsentative profiler til 6 hunde (2 i hver behandlingsgruppe) i figur 2b. Til hunde, der modtager nogen af ​​de tre doseringsregimer, AUC var relativt ens på mellem 5013-5701 ng /ml-timers ganetespib. Men de ankomst lægemiddelinfusioner på 9,25 mg /kg eller 5 mg /kg resulterede i en kortere Tmax (0,7 timer og 1,1 timer, henholdsvis) og højere Cmax (3982 ng /ml og 3415 ng /ml) sammenlignet med 8, timers infusion (Tmax 5,7 timer, Cmax 802 ng /ml)

a) Gennemsnitlig ganetespib plasmakoncentration -. tidsprofil for hver doseringsbehandlingsplan b) repræsentant ganetespib plasmakoncentration – tidsprofiler for to patienter i hver dosisregime.

Safety evaluering

Bivirkninger under behandlingen cykler (opsummeret i tabel 3) bestod næsten udelukkende af gastrointestinale gener (anoreksi, kvalme, opkastning, diarré) og sløvhed. Ingen narkotikarelaterede hæmatologiske eller biokemiske toksiciteter blev observeret ved nogen doser. En hund med metastatisk osteosarkom udviklede akut anurisk nyresvigt resulterer i eutanasi. Efterfølgende obduktion afslørede tilstedeværelsen af ​​store tumor emboli i begge renale arterier, uden tegn på lægemiddel induceret ændringer af nyreparenkym, og som sådan progressiv sygdom blev bestemt til at være årsagen til den observerede nyresvigt. En anden hund udviklede akut leverfunktionstest (ALT, ALP) og bilirubin stigninger 24 timer efter administration af lægemidlet. Hunden efterfølgende kastede en stor udenlandsk organ bestående af gaze puder anvendes til bandagering af kateteret stedet og de biokemiske værdier, der returneres til normal inden for 72 timer; en delvis midlertidig obstruktion af den fælles galdegang grundet udenlandsk organ blev bestemt til at være årsagen til de biokemiske forandringer i denne sag.

Optrapning af dosis blev udført og dosisbegrænsende toksiciteter blev identificeret ved hjælp af én gang pr uge time infusion. Mens næsten alle gastrointestinale toksiciteter var primært grad 1 eller 2 i naturen, ved doser over 9,5 mg /kg, blev hundene sig at have apati og anoreksi, at ejere følte væsentligt forringet livskvalitet, hvilket resulterer i afbrydelse af lægemiddeladministration. For eksempel er alle tre hunde der modtog 10,25 mg /kg af lægemiddel oplevede grad 2 diarré, sløvhed, og anoreksi og hver efterfølgende modtog kun en dosis af lægemiddel. Som sådan, 9,5 mg /kg blev anset for at være den maksimalt tolererede ugentlige dosis af lægemiddel, når det indgives ugentlig i 1 eller 8 timer. Ved denne dosis de gastrointestinale toksiciteter var håndterbare med tilføjelse af samtidig medicinering bestående af ondansetron, metoclopramid og /eller maropitant til kvalme /opkastning og metronidazol og /eller loperamid til diarré. Alle hunde, der fortsatte behandlingen med STA-1474 ud over de første 4 cyklusser af behandlingen forblev på samtidig medicinering for varigheden af ​​lægemiddelbehandling.

Reaktion på terapi

Responsrater blev bestemt til hunde indtastet ind i de 3 forskellige doseringsgrupper. Til hunde, som fik en gang om ugen dosisregime (n = 12), blev der ikke objektivt respons noteret med undtagelse af en hund med en omfattende mundtlig malignt melanom, der har oplevet en ekstravasation hændelse under 4

th behandling med STA-1474. Denne hund havde en delvis respons i tumorstørrelse og efter farmakokinetisk analyse (figur 3), blev det bestemt, at den utilsigtet subkutan administration resulterede i en udstrakt Tmax, uden en væsentlig ændring i de faktiske AUC (data ikke vist).

Patient # 5 havde en aggressiv oral malignt melanom, som havde invaderet i næsehulen. Under 4

th behandlingscyklus med STA-1474, indtraf en ekstravasation begivenhed, der resulterer i ændrede farmakokinetik. Et markant fald i den orale masse blev observeret 7 dage senere og en efterfølgende CT-scanning bekræftet en delvis respons på behandlingen. Vist er to repræsentative matchede CT-billeder af tumor før og efter behandling.

Baseret på tegn på biologisk aktivitet forbundet med en længere Tmax, farmakokinetisk modellering blev anvendt til at bestemme en dosering model, der ville opnå en lignende Tmax når lægemidlet blev leveret over en længere tidsperiode på samme dosis. Det blev forudsagt, at 9,5 mg /kg STA-1474 givet over en 8 timers infusion ville resultere i plasmakoncentrationer af ganetespib over 100 ng /ml plasma for 8-10 timer og dermed de næste 6 hunde indgået en kohorte evaluere dette dosering. Derudover to hunde fra den første dosering kohorte (9,5 mg /kg en gang om ugen) blev skiftet til 8 timers infusion protokol efter endt de planlagte 4 doser medicin. Af de 6 hunde oprindeligt behandlet med længere infusion, var der to partielle responser (metastatisk thyroid carcinoma, 36 uger, figur 4a, metastatisk OSA, 20 uger, figur 4b), en blandet reaktion (metastatisk MCT, 16 uger), og to hunde oplevede stabil sygdom (begge med metastatisk OSA, 12 uger). En hund med metastatisk skjoldbruskkirtlen karcinom, der skiftede fra 1 time til 8 timers infusion oplevede stabil sygdom i 40 uger, og hunden med oral malignt melanom og ekstravasation begivenhed oplevet en fortsat partielt respons i 12 uger, mens den 8 timers infusion protokol.

a) Patient # 14 havde en lokalt tilbagevendende thyreoideakarcinom med metastatisk sygdom til lungerne. Denne patient fik STA-1474 på 8 timers infusion protokol og oplevede en delvis respons på behandlingen af ​​både lokalt recidiverende og metastatisk sygdom. Vist er repræsentative røntgenbilleder før og efter 15 behandlinger med STA-1474. De gule pile peger på de metastatiske lungeknuder. b) Patient # 18 havde metastatisk OSA til lungerne efter amputation og kemoterapi for en appendicular OSA. Denne patient fik STA-1474 på 8 timers infusion protokol og oplevede en delvis respons på behandlingen. Vist er repræsentative røntgenbilleder før og efter 4 behandlinger med STA-1474. De gule pile peger på de metastatiske pulmonale knuder.

Siden længere infusion protokol syntes at være forbundet med biologisk aktivitet, vi ønskede at afgøre, om en hyppigere administration af STA-1474 ved hjælp af en time infusion protokol ville være både tolerabel og inducere objektive responser på behandling. En dosis på 5 mg /kg administreret over en time to gange om ugen blev valgt baseret på foreløbige data af tolerabilitet i normale hunde og en farmakokinetisk model (data ikke vist). Som vist i figur 2a og b, sådant behandlingsregime resulterede i et Cmax og AUC smule lavere end den genereret af /kg dosis 9,5 mg. Toksiciteter observerede svarede til dem med én gang ugentligt højere dosis af STA-1474. Af de 7 hunde administreret denne protokol, to oplevede delvise svar på terapi (både MCT, figur 5), og både hunde gik på at få deres resterende sygdom kirurgisk fjernet. En hund (metastatisk OSA) oplevede stabil sygdom i en kort periode, men ejeren valgt ikke at fortsætte behandlingen, og som sådan, dette ikke opfylder RECIST kriterier. De resterende hunde (lymfom, n = 3, metastatisk OSA, n = 1) oplevet progressiv sygdom

a) Patient # 19 havde tilbagevendende klasse 3 kutane MCT.. Denne patient modtog STA-1474 på 1 time infusion protokol to gange om ugen og oplevet en delvis respons på behandling af de kutane læsioner efter 7 behandlinger. b) Patient # 24 havde en stor tidligere ubehandlede kutan MCT. Denne patient fik STA-1474 på 1 times infusion protokol to gange om ugen og oplevet en delvis respons på behandlingen af ​​de kutane læsioner efter 4 behandlinger.

Evaluering af HSP90 og HSP70 udtryk i tumor prøver og PBMC’er

Efter hæmning af HSP90 er hurtig opregulering af HSP70 udtryk ofte bemærket [14], [15], [18]. Som sådan kan HSP70 opregulering potentielt tjene som en biomarkør for tab af HSP90 funktion. For at bestemme om behandling med STA-1474 ændret ekspression af HSP70, og hvis HSP70 kunne tjene som en potentiel følsom surrogat biomarkør for HSP90 inhibering PBMC’er blev opsamlet før og efter behandling og Western blotting for HSP70 udførtes. Som vist i figur 6a, små stigninger i HSP70-ekspression var tydelig i de efter behandling PBMC prøver, selv om disse ændringer var vanskeligt præcist kvantificere. Derfor blev et ELISA-assay anvendes ved efterfølgende prøver til mere endeligt vurdere opregulering af HSP70.