PLoS ONE: Mas-Related Gene (Mrg) C Aktivering Dæmper Bone Cancer Pain via Modulerende Gi og NR2B

Abstrakt

Målsætning

Denne undersøgelse er at undersøge den rolle, Mas-relateret gen (Mrg) C i patogenesen og behandling af smerte knoglekræft (BCP).

Metoder

BCP musemodel blev etableret af osteosarkom celle podning. Smerter-relaterede adfærd blev vurderet med den spontane løft adfærd test og mekanisk allodyni test. Ekspressionsniveauer af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven blev påvist med Western blot-analyse og immunhistokemi.

Resultater

Pain-relaterede adfærd tests viste signifikant forøgede spontane flinches (NSF) og nedsat potetilbagetrækning mekanisk tærskel (PWMT) i musemodeller af BCP. Western blot analyse viste, at sammenlignet med kontrolgruppen og før modellering, alle ekspressionsniveauerne af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven af ​​BCP-mus blev dramatisk forhøjet, hvilket især blev forøget på dag 7 efter operationen og derefter, i en tidsafhængig måde. Desuden behandling af MrgC agonist BAM8-22 signifikant opreguleret Gi og nedreguleret NR2B ekspressionsniveauer, i rygmarven af ​​BCP-mus, i en tidsafhængig måde. På den anden side, anti-MrgC betydeligt nedreguleret Gi ekspression, mens dramatisk opreguleret NR2B-ekspression, i BCP mus. Tilsvarende resultater blev opnået fra immunohistokemisk påvisning. Vigtigere er det, BAM8-22 betydeligt svækket de nociceptive adfærd i BCP-mus.

Konklusion

Vores resultater angav de MrgC-medierede Gi og NR2B udtryk ændringer i de BCP mus, som kan bidrage til smerte overfølsomhed. Disse resultater kan tilvejebringe en ny strategi til behandling af BCP i klinikken

Henvisning:. Sun Y, Jiang M, Hou B, Lu C, Lei Y, Ma Z, et al. (2016) Mas-Related Gene (Mrg) C Aktivering Dæmper Bone Cancer Pain via Modulerende Gi og NR2B. PLoS ONE 11 (5): e0154851. doi: 10,1371 /journal.pone.0154851

Redaktør: Shao-Jun Tang, University of Texas Medical Branch, UNITED STATES

Modtaget: December 27, 2015; Accepteret: 20. april, 2016 Udgivet: 6. maj 2016

Copyright: © 2016 Sun et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af National Natural Foundation of China (81400914, 81500954, 81371207, 81300950, og 81500955), National Natural Foundation i Jiangsu-provinsen, Kina (RC2011006 og XK201140), og Medical Technology Development Project of Nanjing (YKK13068). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Bone kræft smerter (BCP) er en af ​​de mest genstridige faktorer hos patienter, der lider af primær knogle tumorer eller knoglemetastaser, som i høj grad påvirker patientens livskvalitet [1]. Hidtil mekanismen for BCP er endnu ikke fuldt belyst, og de nuværende behandlinger er altid uundgåeligt ledsaget med betydelige bivirkninger [2, 3]. Derfor er det virkelig vigtigt og presserende at udvikle nye effektive terapeutiske strategier for BCP i klinikken.

Talrige undersøgelser viser, at, i gnavere, mas-relaterede gen (Mrg) C, en sensorisk neuron-specifik GPCR, aktier væsentlig homogenitet med dets menneskelige homolog MrgX1, med ca. 45-65% aminosyresekvensidentitet [4]. MrgC ligger specifikt i lille diameter dorsale ganglion (DRG) neuroner, som er formentlig nociceptive. Det er blevet vist, at intratekal injektion af MrgC agonist, dvs. BAM8-22 og γ2-MSH, kunne frembringe antinociceptive virkninger og dæmpe varme hyperalgesi i akut smerte modeller [5-7]. Desuden har upublicerede data fra vores laboratorium viste også, at, intratekal indgivelse af MrgC agonist BAM8-22 ville dæmpe BCP i en musemodel, på en dosis-afhængig måde.

NR2B er en af ​​underenhederne af NMDA-receptoren , som er blevet vist at være involveret i smerte regulering i forskellige skader [8, 9]. Tyrosinphosphorylering af NR2B i rygmarven er forbundet med central sensibilisering, stigende dorsale horn ophidselse og lette sanseindtryk, der kan være ansvarlig for BCP [10, 11]. Tidligere undersøgelser har vist, at NMDA-receptorantagonister (såsom ketamin) og NR2B-selektive antagonister (såsom ifenprodil og Ro25-6981) kunne udøve potente analgetiske virkninger i dyremodeller af BCP [12, 13]. Disse antagonister har også vist sig, at være forbundet med uacceptable bivirkninger, herunder nedsat hukommelse og psykotomimetiske virkninger. Det er derfor af stor betydning at undersøge nye måder til at modulere NMDA-receptorer, uden at påvirke den basale receptoraktiviteten, for at opnå bedre smertestillende virkning.

I denne undersøgelse musemodellen af ​​BCP blev etableret ved podning af osteosarkomceller, og den rolle, MrgC i patogenesen og behandlingen af ​​BCP blev undersøgt. Smerter-relaterede adfærd blev vurderet i disse musemodeller, og blev også påvist ekspressionsniveauerne af Gi og NR2B i rygmarven, før og efter manipulation af MrgC.

Materialer og metoder

Dyr og cellekultur

voksne mandlige C3H /HeJ mus, 4-6 uger gamle, vejer 18-22 g, blev købt fra den Vital floden Experimental Animal center, Beijing, Kina. Disse dyr blev vænnet individuelt under en 12/12 timers lys /mørke cyklus ved en konstant rumtemperatur på 24 ° C, med fri adgang til foder og vand. Alle dyr eksperimentelle procedurer blev godkendt af Animal Care og brug Udvalg Affiliated Drum-Tower Hospital of Medical College of Nanjing Universitet. Fysiske forhold af musene blev overvåget før hver adfærd test, og ingen af ​​disse mus døde uventet før den eksperimentelle endpoint

Fibrosarcoma NCTC 2472 celler (2087787;. American Type Culture Collection, ATCC, Manassas, VA, USA ) blev dyrket med NCTC 135-medium (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) med 10% hesteserum (Gibco, Grand Island, NY, USA) i en CO 5%

2, 37 ° C inkubator .

Animal gruppering og modellering

BCP-model blev oprettet i henhold til en tidligere procedure fra Schwei

et al

. [14]. Kort beskrevet blev mus bedøvet med intraperitoneal injektion af 50 mg /kg pentobarbital natrium (1% i saltopløsning), og en overfladisk incision blev foretaget i huden overliggende højre Articulatio genu. Gonarthrotomy blev udført for at blotlægge lårbenet kondyler, som derpå blev udsat for lys depression forårsaget af dental bur. Cortex blev perforeret med en 30-gauge nål. For musene i modellen (n = 60), 20 pi α-MEM indeholdende 2 × 10

5 NCTC 2472-celler blev injiceret i det intramedullære rum i højre femur under anvendelse af en 25-pi mikrosprøjte. Mus i sham-gruppen (n = 20) injiceret med α-MEM alene. Injektionen hul blev forseglet med dental amalgam, og rigelig skylning blev gennemført med saltvand før såret blev endeligt lukket. blev gennemført alle nødvendige foranstaltninger for at minimere potentielle smerte og lidelse. For eksempel musene var under fuld narkose, når de procedurer blev udført. Årepresse blev anvendt til at reducere blødning så meget som muligt. Infektion blev forhindret ved at arbejde under sterile forhold og med sterile udstyr.

Pain-relateret adfærd test

Efter modellering, den spontane løft adfærd test og mekanisk allodyni test blev udført for at måle antallet af spontane flinches (NSF) og pote tilbagetrækning mekanisk tærskel (PWMT), hhv. Alle forsøgene blev udført under den lette fase, og musene fik lov til at akklimatisere i mindst 30 minutter før hver test. NSF og PWMT blev undersøgt før dyr modellering (dag 0), på dag 3, 5, 7, 10, og 14 efter modellering, og på dag 1, 3 og 7 efter administration af lægemidlet.

For den spontane løft adfærd test blev en mus holdes i en individuel plexiglas kammer (10 cm x 10 cm x 15 cm) i 30 min, og den højre bagben NSF blev registreret i 2 min. . Løft af højre bagben ikke er relateret til fods eller soignering blev betragtet som en Flinch

På den anden side, blev den mekaniske allodyni test udført med Von Frey filamenter (0,16-2,0 g bøjning kraft Stoelting, Træ Dale, IL, USA), som beskrevet af Chaplan

et al

. [15]. En mus blev anbragt i en individuel gennemsigtig plexiglas kammer (10 cm x 10 cm x 15 cm) på et metalnet gulv med 0,5 cm x 0,5 cm firkanter. Filamenter blev orienteret lodret mod plantar overflade med en tilstrækkelig kraft forårsager svag bøjning mod dyrets pote, som blev afholdt for 6-8 s hver gang, med en 10-min interval. Positiv respons blev defineret som den rask tilbagetrækning eller pote blinke, og PWMT blev bestemt under anvendelse af successivt stigende og faldende stimulusstyrken (dvs. den op-og-ned-metoden). Hver pote blev testet fem gange for pr stimulus styrke, indtil cutoff kraft af 2,0 g. Den laveste filament styrke med mindst tre positive svar blev betragtet som PWMT.

Drug forberedelse og administration

Lægemidler blev forberedt og administreres i henhold til tidligere offentliggjorte protokoller [5]. BAM8-22 (SML0729; Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) og anti-MrgC antistof (orb101320, Biorbyt, San Francisco, CA, USA) blev begge opløst i saltvand. Ved 14 dage efter modellering, blev musemodeller tilfældigt opdelt i følgende tre grupper: (1) BCP model kontrolgruppen (n = 20), hvor de tumorbærende mus blev behandlet med vehikel (saltvand) alene; (2) BAM8-22 (n = 20), hvori BCP mus blev behandlet med BAM8-22; og (3) anti-MrgC gruppe (n = 20), hvori BCP mus blev behandlet med anti-MrgC. For BCP + B og BCP + A-grupper, 5 pi BAM8-22 (8,0 nmol) eller anti-MrgC (1/20 vol /vol) blev administreret intratekalt, en gang om dagen i 7 på hinanden følgende dage [16].

Western blot-analyse

Mus blev aflivet ved halshugning, efter dybt bedøvet med 100 mg /kg pentobarbital natrium. Lumbale rygmarv L

3-L

5 segmenter blev fjernet og opbevaret i flydende nitrogen. Vævsprøver blev homogeniseret med lysepuffer efterfulgt af centrifugering (4 ° C) ved 13.000 rpm i 10 min. Proteinkoncentrationen blev bestemt med BCA kit (Thermo Fisher Scientific Life Science Research, Shanghai, Kina). Proteinprøve blev separeret på SDS-PAGE og derefter overført til en polyvinylidendifluoridmembran (Millipore, Billerica, MA, USA). Efter blokering med 5% fedtfri mælk ved stuetemperatur i 1 time blev membranen inkuberet med kanin-anti-muse-anti-MrgC polyklonalt antistof (1: 500 fortynding; orb101320, Biorbyt), muse-anti-muse-anti-NR2B monoklonalt antistof (1: 1000 fortynding; ab93610; Abcam, Cambridge, MA, USA), og kanin-anti-muse-anti-Gi-polyklonalt antistof (1: 500 fortynding; ab140333; Abcam) hhv. Efter vask blev membranen inkuberet med gede anti-kanin IgG (1: 5000 fortynding; ab6721; Abcam) eller gede-anti-muse-IgG (1: 5000 fortynding; ab6789; Abcam). Proteinbånd visualisering blev opnået med ECL-metoden (Santa Cruz, Santa Cruz, CA, USA), og protein kvantificering blev udført med IPLab software (Scanalytics, Fairfax, VA, USA). β-actin blev anvendt som reference kontrol.

Immunhistokemi

I immunhistokemi, den lumbale rygmarv L

3-L

5 segmenter blev perfunderet med 4% paraformaldehyd i 0,1 M phosphatbuffer (pH 7,4) på ​​dag 3 efter lægemiddelindgivelse. Væv blev skåret i 25 um sektioner på en glidende mikrotom. Efter vask med PBS blev snittene blokeret med 10% (v /v) normal kalvefosterserum ved stuetemperatur i 1 time. Derefter blev snittene inkuberet med kanin-anti-muse-anti-MrgC polyklonalt antistof (1: 250 fortynding orb101320; Biorbyt) eller muse-anti-muse-anti-NR2B monoklonalt antistof (1: 500 fortynding; ab93610; Abcam) ved 4 ° C i 48 timer. Efter vask blev sektionerne inkuberet med Alexa Fluor 594 ged anti-kanin IgG (1: 500 fortynding; ab150084; Abcam) og Alexa Fluor 488 gede-anti-muse-IgG (1: 500 fortynding; ab150117; Abcam) ved 4 ° C natten . Efter forsegling blev snittene afbildet ved 200 × forstørrelse med Leica TCS SP2 multifoton konfokal mikroskop (Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland), og billederne blev analyseret med Image-Pro Plus software (Media Kybernetik, Rockville, MD, USA) .

Statistisk analyse

data blev udtrykt som gennemsnit ± SD. En-vejs ANOVA blev udført for gruppe sammenligning med LSD post hoc test, hvor der blev observeret signifikante forskelle.

P

0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

Pain-relaterede adfærd i BCP mus

For at vurdere smerte-relaterede adfærd i den rigtige bagben af ​​BCP mus, den antal spontane flinches (NSF) og tilbagetrækning af poten mekanisk tærskel (PWMT) blev målt før modellering (dag 0), og på dag 3, 5, 7, 10, og 14 efter model etablering. Vores resultater viste, at der var ingen signifikant forskel i NSF og PWMT mellem falske og model grupper forud for modellering (fig 1). For NSF, i fingeret gruppen, NSF var signifikant forhøjet ved dag 3 efter drift (

P

0,05), som derefter vendte tilbage til det niveau, der kan sammenlignes med før modellering på dag 5 efter operation og derefter (Fig 1A). På den anden side, i modellen gruppen, sammenlignet med før modellering, NSF var også signifikant forhøjet ved dag 3 efter modellering (

P

0,05), og derefter faldet lidt på dag 5 efter modellering. Men NSF i modellen gruppen fortsatte, at stige på dag 7, 10 og 14 efter modellering, hvilket var betydeligt højere end før modellering (alle

P

0,05) (Fig 1A). For PWMT, i fingeret gruppen, PWMT blev faldet markant på dag 3 efter drift (

P

0,05), som derefter returneres til sammenligneligt niveau med før modellering 2 dage senere, og derefter (figur 1B). I modellen gruppen, sammenlignet med før modellering, den PWMT blev faldt betydeligt på dag 3 efter modellering (

P

0,05), og derefter let forhøjet 2 dage senere. Men PWMT i modellen gruppen holdes faldende på dag 7, 10 og 14 efter modellering, hvilket var betydeligt lavere end før modellering (alle

P

0,05) (fig 1B). Tilsammen viser disse resultater den vellykkede etablering af musemodel af BCP, som er egnede til den følgende undersøgelse.

NSF (A) og PWMT (B) blev vurderet i fingeret og BCP model grupper (n = 8) før dyr modellering (dag 0), og på dag 3, 5, 7, 10 og 14 efter model etablering. Sammenlignet med før modellering, *

P

0,05; sammenlignet med den fingeret gruppe på tilsvarende tidspunkt,

#

P

0.05.

opreguleret udtryk for MrgC, Gi, og NR2B i rygmarv fra BCP mus

For at undersøge ekspressionsniveauerne af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven af BCP-mus, blev udført Western blot-analyse. Vores resultater viste, at sammenlignet med sham-gruppen og før modellering, alle ekspressionsniveauerne af MrgC, Gi, og NR2B i BCP mus blev dramatisk forhøjet efter modellering, hvilket især var stigende på dag 7 efter operation og derefter, i en tid -afhængig måde (alle

P

0,05) (figur 2). Disse resultater antyder, at, ekspressionsniveauerne af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven er opreguleret i BCP-mus, som kan bidrage til patogenesen og udviklingen af ​​BCP. Salg

(A) Ekspressionsniveauer af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven af ​​falske mus og BCP-mus blev påvist med Western blot-analyse, før dyret modellering (dag 0, D0), og på dag 3, 5, 7, 10, og 14 (D3- D14) efter model etablering. (B-D) statistiske analyser af MrgC (B), Gi (C), og NR2B (D) i rygmarven af ​​fingeret og BCP mus (n = 6). Sammenlignet med før modellering, *

P

0,05; sammenlignet med den fingeret gruppen,

#

P

0.05.

Effekter af MrgC agonist og anti-MrgC på Gi og NR2B udtryk i rygmarv fra BCP mus

For at vurdere virkningerne af MrgC agonist og anti-MrgC på udtrykket niveauer af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven af ​​BCP-mus, blev disse dyremodeller først administreret med BAM8-22 eller anti-MrgC, og derefter blev påvist ekspressionsniveauerne af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven med Western blot-analyse og immunhistokemi. Vores resultater fra Western blot-analysen viste, at sammenlignet med kontrolgruppen (musemodeller modtog vehikel), den MrgC agonisten BAM8-22 signifikant opreguleret ekspressionsniveauerne af MrgC og Gi, mens signifikant nedreguleret NR2B ekspressionsniveau, i rygmarven af ​​BCP mus, i en tidsafhængig måde (

P

0,05) (fig 3A-3D). På den anden side, sammenlignet med kontrolgruppen (vehikel) gruppe, anti-MrgC betydeligt nedreguleret ekspressionsniveauerne af MrgC og Gi, mens dramatisk opreguleret NR2B ekspressionsniveauet, i rygmarven af ​​BCP-mus, i en tidsafhængig måde (

P

0,05) (fig 3A-3D). Lignende resultater blev opnået for immunhistokemisk detektion af MrgC og NR2B i rygmarven af ​​BCP-mus. Sammenlignet med kontrolgruppen (vehikel) gruppe, blev ekspressionsniveauerne af NR2B i rygmarven signifikant faldt med BAM8-22 og signifikant forhøjet ved anti-MrgC, i BCP-mus (begge

P

0,05) (fig 3E-3G). Tilsammen disse resultater tyder på, at manipulation af MrgC væsentlig grad kan påvirke ekspressionsniveauerne af Gi og NR2B i rygmarven af ​​BCP-mus.

(A) Ekspressionsniveauerne for MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven blev detekteret med Western blot-analyse, i sham mus, model kontrol (Veh) mus og modelmus administreret med BAM8-22 eller anti-MrgC, på dag 1, 3 og 7 efter lægemiddelindgivelse. (B-D) Statistiske analyser af MrgC (B), Gi (C), og NR2B (D) ekspressionsniveauer efter lægemiddelindgivelse som angivet ved Western blot-analyse (n = 6). (E) Ekspression af MrgC (rød) og NR2B (grøn) i rygmarven blev detekteret med immunohistokemi i sham-mus, model kontrol (vehikel) mus, og model mus behandlet med BAM8-22 eller anti-MrgC (× 200) . (F-G) Statistiske analyser af MrgC (F) og NR2B (G) ekspressionsniveauer efter lægemiddelindgivelse som angivet ved immunhistokemi (n = 6). Sammenlignet med køretøjet gruppen,

P

0,05; sammenlignet med den tidligere tidspunkt,

$

P

0.05.

MrgC agonist dæmper nociceptive adfærd i BCP mus

For at vurdere, om MrgC aktivering kan udøve smertestillende effekter i BCP mus, blev disse dyremodeller administreres med BAM8-22 for 7 hinanden følgende dage (fra dag 14 efter operation) og derefter den nociceptive adfærd blev vurderet på dag 1, 3 og 7 efter lægemiddelindgivelse. Anti-MrgC blev anvendt som negativ kontrol. Vores resultater viste, at sammenlignet med kontrolgruppen (musemodeller behandlet med bærer), BAM8-22 signifikant reduceret NSF og øget PWMT i den ipsilaterale bagpote BCP-mus (

P

0,05), i en tidsafhængig måde (figur 4). På den anden side, til behandling af anti-MrgC yderligere drastisk NSF og faldt PWMT i disse BCP-mus (

P

0,05), i en tidsafhængig måde (figur 4). Disse resultater antyder, kunne behandlingen af ​​MrgC agonist betydeligt svække de nociceptive adfærd i disse BCP mus.

BCP-mus blev administreret med BAM8-22 eller anti-MrgC 7 på hinanden følgende dage (fra dag 14 efter operation ), og derefter de nociceptive adfærd blev bedømt på dag 0, 1, 3 og 7 (dag 0-Day 7) efter lægemiddelindgivelse. Statistiske analyser af NSF (A) og PWMT (B) i BCP mus behandlet med BAM8-22 eller anti-MrgC. Sammenlignet med BCP model kontrol ved tilsvarende tidspunkt,

P

0,05.

Discussion

I den foreliggende undersøgelse viste vores resultater, at BCP patogenese var forbundet med opreguleret ekspression af MrgC, Gi, og NR2B i rygmarven. Desuden MrgC agonist BAM8-22, men ikke anti-MrgC, i væsentlig grad kan afhjælpe de unormale smerterelaterede adfærd, gennem regulerer Gi og NR2B ekspressionsniveauer. Disse resultater kan give en potentiel smertestillende strategi for BCP i klinikken.

BCP er klinisk karakteriseret ved betændelse, neuropatiske effekter, og tumorigen potentiale- [17, 18]. Det er blevet godt accepteret, at NMDA-receptoren (især NR2B-underenheden) -afhængig central sensibilisering spiller en vigtig rolle i smerte overfølsomhed [19]. I de postsynaptiske densiteter, er NMDA-receptorer bundet til stilladser og signalproteiner, som regulerer synaptisk transmission [20]. Desuden kunne NMDA receptor binde til Ca

2 + /calmodulin-afhængig proteinkinase II (CaMKII) og medlemmer af Maguk familien (såsom PSD-95). Denne interaktion kobler NMDA-receptormedieret Ca

2+ tilstrømning til at påvirke de intracellulære effektorer og signalering enzymer, som bidrager til NMDA-receptoren-afhængige central sensibilisering [21]. Vores tidligere undersøgelse har vist, at phosphorylering af NR2B i spinal dorsale horn i BCP modeller var signifikant opreguleret efter fibrosarkom celle infusion, som er ledsaget af åbenlyse smerterelaterede adfærd [11]. Endvidere kunne opregulering af NR2B fosforylering reduceres betydeligt ved den intratekal injektion af MrgC agonist BAM8-22. Vores resultater i den foreliggende undersøgelse viste, at BAM8-22 undertrykte BCP-induceret hyperalgesi, opreguleret Gi og nedreguleret NR2B ekspression i rygmarven, hvilket viser, at MrgC kunne kobles med Gi, inducere analgesi.

funktionelle betydning af Gi-aktivering i DRG-neuroner er tidligere blevet beskrevet [22, 23]. Baseret på disse resultater og vores, er der den mulighed, at MrgC kunne regulere smertefølsomhed gennem aktivering af Gi signalvejen. Selvfølgelig er der stadig behov for yderligere undersøgelser for at bekræfte denne hypotese. På den anden side har andre undersøgelser vist, at BAM8-22 kunne hæmme den vedvarende inflammatoriske og kemisk smerte, og nedregulerer ekspressionen niveauet af c-fos i rygmarven [5, 6, 24]. Disse resultater antyder, at MrgC ligander kan fungere som anti-hyperalgesiske midler. Gi-protein er involveret i stress og /eller inflammationsinduceret priming [25], samt opioid-induceret hyperalgesiske priming [26]. Gi aktivering kan bidrage til antinociception af BAM8-22. BAM8-22 kunne dosisafhængigt formindske NMDA-fremkaldte smerter adfærd hos rotter [27], hvilket antyder, at det kan inducere spinal analgesi ved at undertrykke NMDA-receptor-relateret excitation. Det er for nylig blevet rapporteret, at aktiveret MrgC kunne undertrykke opreguleringen af ​​pro-nociceptive mediatorer (f.eks nNOS og CGRP) og inhiberer c-fos-ekspression under inflammatoriske smertetilstande [5, 7].

nærværende undersøgelse, vores resultater viste, at MrgC aktiveringen lettede de BCP-relaterede adfærd, hvilket var i overensstemmelse med tidligere fund [11, 12, 28, 29]. Implantation af tumorceller i den højre femur inducerede progressive ændringer i NSF og PWMT, hvilket indikerer den vellykkede etablering af BCP-model. I mellemtiden blev disse BCP mus ledsaget af bemærkelsesværdige forøgede ekspressionsniveauer af Gi og NR2B i rygmarven, der kan være involveret i udviklingen og vedligeholdelsen af ​​BCP. Desuden vores resultater viste endvidere, at intratekal indgivelse af MrgC agonisten BAM8-22 svækket den taktile hypersensitivitet og smerte-adfærd hos den skadede pote af disse musemodeller, og modulerede ekspressionsniveauerne af Gi og NR2B i rygmarven. Der blev imidlertid modsatte virkninger observeret for anti-MrgC. Disse resultater viser, at MrgC, Gi, og NR2B kunne deltage i reguleringen af ​​smerte-relaterede adfærd i disse BCP mus. Længere dybdegående er stadig behov undersøgelser for at udforske de detaljerede mekanismer.

Vores resultater viste, at NSF blev øget, og PWMT blev nedsat i ipsilaterale bagbenet af disse BCP mus, på dag 7 efter operationen. Imidlertid kan den formindskede PWMT på dag 3 og den genvundne adfærd på dag 5 efter modellering tilskrives de operationelle påvirkninger. På dag 14 efter operationen, de BCP-relaterede adfærd var indlysende og tendens til at være stabil. Derfor blev dag 14 efter drift valgt som tidspunktet for lægemiddel indgriben i disse BCP mus. I betragtning af kompleksiteten og kontinuitet i BCP blev gentagne drug administration anvendt på ca. udøve de terapeutiske virkninger og undersøge den optimale dosering varighed.

Som konklusion viste vores resultater, at ekspressionsniveauerne af MrgC, Gi, og NR2B blev dramatisk forhøjet i rygmarv fra BCP mus. Desuden MrgC agonist BAM8-22 markant opreguleret Gi og ned-reguleret NR2B ekspressionsniveauerne. Vigtigere er det, BAM8-22 kunne dæmpe de nociceptive adfærd i disse BCP mus. Vores resultater viste MrgC-medierede Gi /NR2B udtryk ændringer i BCP mus, som kunne bidrage til modulering af smerte overfølsomhed. Disse resultater kan tilvejebringe en ny strategi til behandling af BCP i klinikken.

Tak

Denne undersøgelse blev støttet af National Natural Foundation of China (81.400.914, 81.500.954, 81.371.207, 81.300.950, og 81.500.955 ), National Natural Foundation i Jiangsu-provinsen, Kina (RC2011006 og XK201140) og Medical Technology Development Project of Nanjing (YKK13068).