PLoS ONE: Serum microRNA biomarkører for Påvisning af ikke-småcellet Cancer

Abstrakt

Ikke-småcellet lungecancer (NSCLC) er den hyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan og de fleste tilfælde diagnosticeres på sene stadier af sygdommen. Der er i øjeblikket ingen omkostningseffektiv screeningstest for NSCLC, og udvikling af en sådan test er en offentlig sundhed nødvendighed. Nylige undersøgelser har antydet, at brystet computertomografi screening af patienter med høj risiko for lungekræft kan øge overlevelsen fra sygdom, men omkostningseffektiviteten af ​​en sådan screening er ikke fastlagt. I denne fase I /II biomarkør studie undersøgte vi muligheden for at anvende serum miRNA som biomarkører for NSCLC hjælp RT-qPCR at undersøge ekspressionen af ​​180 miRNA i sera fra 30 tidligere ubehandlede NSCLC patienter og 20 raske kontroller. Receiver Operating karakteristiske kurver (ROC) og areal under kurven blev brugt til at identificere differentielt udtrykte miRNA par, der kunne skelne NSCLC fra raske kontrolpersoner. Udvalgte miRNA kandidater blev yderligere valideret i sera fra yderligere 55 NSCLC patienter og 75 raske kontrolpersoner. Undersøgelse af miRNA ekspressionsniveauerne i serum fra en multi-institutionel kohorte af 50 forsøgspersoner (30 NSCLC patienter og 20 raske kontroller) identificerede differentielt udtrykte miRNA. En kombination af to differentielt udtrykte miRNA miR-15b og miR-27b, var i stand til at skelne NSCLC fra raske kontrolpersoner med følsomhed, specificitet, positiv prædiktiv værdi (PPV) og negative prædiktive værdi (NPV) på 100% i træningssættet. Efter yderligere test på yderligere 130 forsøgspersoner (55 NSCLC og 75 raske kontrolpersoner), denne miRNA par forudsagt NSCLC med en specificitet på 84% (95% CI 0,73-0,91), følsomhed på 100% (95% CI, 0,93 til 1,0), NPV af 100%, og PPV på 82%. Disse data giver belæg for, at serum miRNA har potentiale til at være følsomme, omkostningseffektive biomarkører for tidlig påvisning af NSCLC. Yderligere testning i et fase III biomarkør studie i er nødvendig for validering af disse resultater

Henvisning:. Hennessey PT, Sanford T, Choudhary A, Mydlarz WW, ​​Brown D, Adai AT, et al. (2012) Serum microRNA biomarkører for Påvisning af ikke-småcellet lungekræft. PLoS ONE 7 (2): e32307. doi: 10,1371 /journal.pone.0032307

Redaktør: Neeraj Vij, Johns Hopkins School of Medicine, USA

Modtaget: September 1, 2011; Accepteret: 26 Jan 2012; Udgivet: 28 februar, 2012 |

Copyright: © 2012 Hennessey et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne forskning blev finansieret delvist af National Institute of Health SBIR tilskud # 1R43CA141786-01 og ved National Institute of Health tilskud # T32DC000027. Disse finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet. Denne forskning blev også finansieret delvist af Asuragen, Inc. Forskerne ved Asuragen, Inc., der deltog i denne undersøgelse ikke var påvirket af ledelsen eller parter uden for deres forskningsgruppe og havde eksklusiv kontrol over undersøgelsesdesign, indsamling og analyse af data, beslutning at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Dr. Elizabeth Mambo, Tiffany Sanford, Ashish Choudhary, og Alex Tamas Adai er ansat i Asuragen, Inc. David Brown var ansat i Asuragen på det tidspunkt Undersøgelsen blev udført. Alle disse forskere gennemførte den forskning, rapporteret i denne publikation som en del af deres ansættelse i Asuragen. Der er ingen direkte økonomisk fordel for forskerne for offentliggørelse af dette manuskript. Asuragen udfører uafhængig intern af manuskripter at opretholde videnskabelig integritet og styre interessekonflikter. David Brown øjeblikket er ansat af miRNA Therapeutics, Inc. Han gennemførte den forskning, der præsenteres i denne artikel, mens han var ansat i Asuragen, Inc. Hans deltagelse i forskning præsenteres i dette manuskript sluttede efter han forlod Asuragen, Inc. ledelse og ejere miRNA Therapeutics havde nogen rolle i forskningen præsenteres i dette manuskript eller nogen indflydelse på udarbejdelsen af ​​manuscript.This ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle de PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Indledning

Lungekræft er den hyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan, og var ansvarlig for 1,38 millioner dødsfald i 2008 [1]. Rygning er den primære risikofaktor for lungekræft, og det anslås, at 20,8% af de amerikanske voksne er aktive rygere [2]. I øjeblikket er der ingen validerede, omkostningseffektiv screening test, der med sikkerhed giver en diagnose af lungekræft. Udviklingen af ​​en sådan test er en offentlig sundhed bydende nødvendigt, da tidlig diagnosticering og behandling af lungekræft er associeret med op til en 92% 5-års overlevelse [3]. Fordi lungekræft normalt ikke bliver klinisk synlige, indtil den når et fremskredent stadium, er større end 75% af lungekræft diagnosticeret efter sygdommen allerede er lokalt avanceret eller metastatisk [4]. På grund af den betydelige overlevelsesfordel til tidlig påvisning, har der været omfattende indsats for at afsløre lungekræft på et tidligt stadium. Den tidlige Lung Cancer Action Project (ELCAP) [5] og National Lung Cancer Screening Trial (NLST) [4] er prospektive undersøgelser, der screenet symptomfrie højrisiko-rygere ved hjælp af lav dosis computertomografi (CT) og foreløbige resultater viser øget evnen til at påvise tidlige stadium, potentielt hærdelige læsioner [3]. Den NLST blev stoppet tidligt i november 2010 efter de foreløbige data viser et fald i lungekræft dødsfald 20,3% i CT-screening arm af forsøget [4], [6]. den høje falsk positiv rate på 96,4% observeret i lav dosis CT-gruppe kan hindre vedtagelsen af ​​CT-scanninger i befolkningen screening Dog [6]. Desuden spørgsmål om omkostningseffektiviteten af ​​CT-baserede screening for lungekræft ubesvarede [7], [8], [9], [10], [11]. Også, der er en vis bekymring for, at gentagen udsættelse for lavdosis CT-scanninger kan udsætte patienterne for potentielt skadelige niveauer af stråling, der kan resultere i flere kræftformer [12]. Selvom CT-scanning kan identificere læsioner mistænkelige for lungekræft, væv diagnose er den eneste måde at afgøre, om en lunge læsion er kræft. En metaanalyse af 7 lunge cancer screening undersøgelser evalueret doser helical CT-scanning lav som en screeningstest for lungekræft og fandt, at 14-55% af højrisikopatienter, med alderen ≥40 og ≥20 pack år rygevaner, som havde en mistænkelig lunge læsion på en screening CT blev i sidste ende viser sig at have godartede lungelæsioner efter undergår en invasiv procedure for væv diagnose [13]. Denne høje invasive procedurer for benign sygdom understreger nødvendigheden af ​​yderligere modaliteter screening, der potentielt kan reducere antallet af patienter, der gennemgår invasive procedurer unødigt.

Ud over de store forsøg, hvor effekten af ​​CT screening for lunge cancer, mange grupper aktivt at undersøge muligheden for blod-baserede biomarkører for ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) [14]. Cirkulerende biomarkører er attraktive for kræftscreening, da de er blod-baserede tests, der er minimalt invasiv, relativt billigt og let gentagelig. Serum microRNA (miRNA) er attraktive kandidater til at blive brugt som kræft biomarkører. Serum miRNA pålideligt kan isoleres fra serum og har vist sig at være meget stabile, selv under barske betingelser, såsom flere fryse-tø-cykler og ændringer i pH [15]. Nylige lovende undersøgelser tyder på, at plasma miRNA kan være et nyttigt skridt i udvælgelsesprocessen for lungekræft, og for at beslutte, hvilke patienter til yderligere skærm ved CT-scanning [16], [17], [18]. I et forsøg på at udvikle ikke-invasive biomarkør assays, der kan anvendes til tidlig påvisning af lungekræft, afprøvede vi ekspressionen af ​​miRNA ekstraheret fra serum opnået fra før behandlingen NSCLC-patienter og cancerpatienter-fri raske personer at identificere miRNA-baserede biomarkører der er i stand til at skelne mellem disse grupper.

Metoder

Prøvetagning

prøver anvendt i denne undersøgelse blev indsamlet på University of Rochester Medical center af Dr. Stephen Ahrendt som del af en lungekræft screening undersøgelse og på The Johns Hopkins Hospital som en del af en hoved- og halscancer screening protokol. Klinisk oplysninger blev også indsamlet for hver patient på tidspunktet for blodprøvetagning. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter før indskrivning i undersøgelserne, og de undersøgelser, blev godkendt af University of Rochester Medical Center Research Emner Review Board og Johns Hopkins Hospital Institutional Review Board, hhv. Blod fra NSCLC-patienter og sunde donorer blev opsamlet i BD Vacutainer® Plus plast serumrør og forarbejdet til serum. Til alle cancerpatienter blev blod opsamlet på tidspunktet for diagnosen, men før tumorresektion eller behandling. Serummet blev straks opbevaret ved -80 ° C indtil anvendelsestidspunktet. Efter indsamlingen blev afsluttet, alle de optegnelser blev de-identificeret til at beskytte patientens fortrolighed. Kohorter blev samlet retrospektivt fra disse store samlinger af serumprøver i et forsøg på at indsamle alder og køn matchede kohorter med lignende rygning historie og med tidlige fase tumorer til kræftpatienter (tabel 1). Patienterne blev defineret som havende en historie af rygning, hvis de havde en historie af konsekvent at ryge i mindst et år. En to tailed Fishers eksakte test blev anvendt til at bestemme foreningerne imellem alle serumprøver opretholdes i vævet bred af Johns Hopkins Hospital Division hoved og hals Cancer Research, ved hjælp af en web-database ansøgning leveres af The Johns Hopkins Hospital Onkologisk Afdeling Research Information Technology Systems (RITS) (https://www.rits.onc.jhmi.edu/). Prøver blev sendt til Asuragen, Inc., Austin TX til RNA isolering og evaluering af miRNA og dataanalyse.

Ekstraktion af Serum RNA

Serum RNA (0,5 ml) blev ekstraheret med den Asuragen Farmakogenomik Services Group hjælp af Mirvana PARIS Kit (Ambion, Austin, TX), ifølge producentens instruktioner. Efter at den organiske ekstraktion blev den vandige fase fyldt på kolonnerne leveret i kittet. RNA blev vasket og ekstraheret i henhold til producentens anvisninger. RNA blev kvantificeret under anvendelse af NanoDrop 1000 (NanoDrop, Wilmington, DE) og opbevaret ved -80 ° C. RNA udbytter opnået var typisk 300-500 ng /ml serum.

miRNA Kvantificering ved RT-qPCR

Vi brugte TaqMan RT-qPCR assays (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) til at undersøge udtryk af 181 miRNA i serum RNA af 50 fag, (30 patienter med NSCLC, og 20 kræft-fri, raske forsøgspersoner). Alle reagenser, primere og probe blev købt fra Applied Biosystems. Revers transkription (RT) blev udført i 10 ul-reaktioner, som hver indeholder 1 × RT puffer (Invitrogen, Carlsbad, CA), 250 uM hver dNTP’er (GE Healthcare, Piscataway, NJ), 2 pi TaqMan RT-primer (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), 4 enheder RNAse-inhibitor (Promega, Madison, WI), 10 enheder MMLV-RT (Invitrogen, Carlsbad, CA), og ~ 1 ng RNA pr reaktion. Reaktionsblandingen blev inkuberet ved 16 ° C i 30 min, 42 ° C i 1 time og 85 ° C i 5 minutter. qPCR reaktioner blev udført under anvendelse af 384-brønds ABI Prism 7900 HT Sequence Detection System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA). For miRNA screening blev en RT og qPCR reaktion per prøve udført, mens der for miRNA verifikation analyser skrive screening, to RT reaktioner fulgte hver af én qPCR blev udført for hver af de 130 prøver, der anvendes til validering. Hver qPCR blev udført i 15 ul reaktioner indeholdende 1 × Platinum Taq buffer (Invitrogen, Carlsbad, CA), 5 mM MgC

2 (Invitrogen), 250 uM dNTP’er, 2 pi TaqMan microRNA assay primer /probe mix (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), 1 × ROX, (0,5 enheder Platinum Taq (Invitrogen, Carlsbad, CA), og 2 pi cDNA fra RT-reaktionen.

Dataanalyse

for at identificere kandidat biomarkører for adskille NSCLC fra raske kontroller, vi først beregnede ACt-værdi matrix for hver prøve ved at subtrahere tærsklen cyklusnummer (Ct) værdi for en miRNA fra Ct værdi for en anden miRNA i den samme prøve. The ACt matrix tilgang overvejer sæt alle differentielt udtrykte miRNA par selvom beregningsmæssigt belastende, men har den fordel, ikke er behov for at påberåbe eksplicitte normalizers. for de 181 miRNA analyserede per prøve, hver prøve vektor gav 16290 elementer (), i det følgende benævnt miRNA “diffpairs”. [19 ], [20] Vi derefter beregnet de ulige varians t-test p-værdier og AUC for ROC-kurven for hver af diffpairs. Cutoff for hver ACt blev valgt til at maksimere summen af ​​følsomhed og specificitet. Kandidat miRNA par for verifikation i en anden prøve sæt blev yderligere udvalgt på grundlag af en følsomhed og specificitet af hver mindst 80%. Disse kriterier er produceret i alt 140 kandidat miRNA diffpairs (Figur S1). Den cutoff point anvendes for hver miRNA diffpair i træningssættet blev anvendt i valideringen datasæt.

Resultater

For at identificere differentielt udtrykte miRNA i NSCLC, vi oprindeligt afskærmet sera fra 16 NSCLC patienter og 20 raske donorer for ekspressionen af ​​328 miRNA ved hjælp af RT-qPCR. For at undgå falske afsløring, vi først fjernet alle miRNA, der blev uopdaget efter 40 cyklusser af qPCR i alle prøver, så kun 181 miRNA. Derfor begrænsede vi yderligere screening af sera fra 30 NSCLC patienter og 20 raske forsøgspersoner til kun de 181 miRNA, der blev udtrykt på eller under 40 cykler. Patienterne blev matchet for alder, køn og rygevaner. En to-tailed Fishers eksakte test, der anvendes til at analysere grupperne. Den eneste statistisk signifikant sammenhæng var mellem kræft og rygning (p = 0,015). Det blev forsøgt at afbalancere repræsentationen af ​​skælcellecarcinomer og adenocarcinomer. Størstedelen af ​​træningssættet prøver (66,7%) var adenocarcinom, mens 33,3% var pladecellecarcinom. De demografiske karakteristika for de 30 NSCLC patienter og 20 raske patienter uden historie af kræft er vist i figur 1 og tabel 1. Selv aldersgruppen var 20-75 år i raske kontrolpersoner, kun én donor var under 35 år.

Brug af differentielt udtrykte miRNA parvise dataanalyse beskrevet ovenfor, træningssættet data på 181 miRNA gav 16290 diff par, hvoraf 140 kandidat miRNA par skelnes NSCLC fra raske kontrolpersoner med en følsomhed og specificitet mindst 80% hver (se figur S1). Adskillige miRNA par involverer miRNA-106a, miR-15b, miR-27b, miR-142-3p, miR-26b, miR-182, 126 #, let7g, lad-7i og miR-30e-5p udstillet en negativ prædiktiv værdi ( NPV) og en positiv prædiktiv værdi (PPV) på 100% (tabel 1), hvilket indikerer disse miRNA som formodede biomarkør kandidater til lungekræft diagnose. De 140 kandidat miRNA par repræsenterede i alt 26 unikke miRNA. Følgelig blev RT-qPCR af de 26 miRNA udført på serum RNA fra yderligere 55 NSCLC-patienter (60% fase I, 24% fase II, 12% trin III og 4% Stage IV), og fra 75 cancer-fri, sund kontroller. De demografiske karakteristika for de 55 NSCLC-patienter og 75 raske patienter uden tidligere kræft er vist i figur 1 og tabel 1. En to-tailed Fishers eksakte test, der anvendes til at analysere grupperne. Den eneste statistisk signifikant sammenhæng var mellem kræft og rygning (p = 0,005). Differentiel udtryk for de kandidat biomarkør miRNA par fra træningssættet (figur S1) blev undersøgt i testen indstillet med samme cut-off punkt som blev anvendt i træningssættet. Resultaterne viste 5 kandidat biomarkører med en følsomhed og specificitet på mindst 75% (tabel 2). Alle 5 kandidat miRNA par vist i tabel 2 var signifikant differentielt udtrykt mellem NSCLC og raske kontroller, som angivet ved p-værdierne 0,001. Differentiel ekspression af miRNA pair MIR-15b /MIR-27b er vist i figur 2 for både oplæringssættet og testsættet. Fordelingen af ​​denne miRNA par blev spredt over et bredere område ( 4 CTS) i raske kontrolpersoner, mens fordelingen i NSCLC prøverne var smallere med en række ~ 2 Cts. Arealet under kurven (AUC) på modtageren opererer karakteristik (ROC) plot (fig. 3) for denne miRNA par var 0,98 for testdata, med en sensitivitet og specificitet på 100% i træningssættet (figur S1) og en følsomhed på 100% (95% CI, 0,93 til 1,0) og specificitet på 84% (95% CI 0,73-0,91) i testen sæt (tabel 2 og figur 2). Den anden ranking miRNA par involveret miR-15a og miR-27b, med en følsomhed på 87% og specificitet på 93% i træningssæt, mens dens følsomhed og specificitet i test sæt var 94% og 75% (Tabel 2). Flere af miRNA par i træningssættet havde suboptimal præstation i testen sæt med enten følsomhed og /eller specificitet mindre end 75%. Den øverste kandidat miRNA par (miR-15b og 27b) skelnes NSCLC fra raske kontrolpersoner med en NPV på 100% og en PPV på 82% i testen sæt (tabel 2). Disse resultater viser potentialet i serum-baserede miRNA som screening biomarkører for lungekræft.

Differential udtryk værdier blev beregnet som en forskel i Ct-værdier for de to miRNA. Tærsklen angivet ved den vandrette linie blev udvalgt til at maksimere summen af ​​følsomhed og specificitet som beskrevet i dataanalysen. Følsomheden, specificitet, positiv prædiktiv værdi (PPV), og negativ prædiktiv værdi (NPV) opnået ved hjælp af den differentielle ekspression af de 2 miRNA vises som tabeller for træningssættet (til højre) og testen sæt (til venstre). Vejviser

diskussion

i denne sonderende fase i /II biomarkør studie (som skitseret af tidlig påvisning Research Network (eDRN) (http: //edrn. nci.nih.gov)) vi screenede serum fra patienter uden tidligere kræft, og patienter med NSCLC i et forsøg på at identificere miRNA, der kan bruges som biomarkører til detektering af tidlig fase lungekræft. Vi identificerede en miRNA par MIR-15b /MIR-27b, der var i stand til at skelne mellem serum fra NSCLC-patienter og cancerpatienter-fri raske kontroller, og med en høj grad af følsomhed. Vores resultater understøtter resultaterne af nylige undersøgelser, der har vist, at cirkulerende miRNA profiler kan være egnede til screening for NSCLC, [16], [17] dog vores undersøgelse omfattede væsentligt flere patienter (180 total) end nogen af ​​disse tidligere undersøgelser. En ulempe ved disse biomarkører er den lave specificitet på 84% i testen sæt. Den relativt høje falsk positiv sats for disse test kunne anses uacceptabel til screening den almindelige befolkning. Men i en population af rygere med høj risiko for lungekræft, unødvendig screening vil blive dæmpet af evne til denne test, med dens negative prædiktiv værdi på 100%, at være i stand til at udelukke et stort antal patienter fra at gå videre til mere dyre screening modaliteter, såsom spiralformet brystet CT. Selv om disse data er overbevisende, er yderligere testning i en stor, prospektiv kohorte som et fase III biomarkør krævede undersøgelse for at vurdere den kliniske anvendelighed af disse miRNA markører som en første screening linje test for NSCLC.

De miRNA markører identificeret i denne undersøgelse er tidligere blevet impliceret i humane maligniteter. MIR-15a og MIR-15b er blevet vist at være de-reguleret i human lungecancer [21]. Både MIR-15a og MIR-15b er blevet vist at have en diagnostisk og prognostisk værdi ved kronisk lymfatisk leukæmi [22], [23]. MIR-27b viste sig at være nedreguleret i lungekræft væv sammenlignet med ikke-kræft lungevæv [24]. Desuden har MIR-27b ekspressionsniveauer blevet korreleret med invasivitet af brystkræft [25] og med regulering af angiogenese [26]. En undersøgelse med i alt 86 NSCLC og 57 kontroller for nylig afsløret en fire miRNA panel i plasma, herunder miR-126, der adskiller NSCLC fra raske kontrolpersoner med en sensitivitet og specificitet på 73% og 96% henholdsvis [27]. Ved hjælp af fuldblod, Keller og kolleger [28] viste, at miR-126 og miR-98 var blandt de øverste miRNA, som kunne adskille NSCLC fra raske kontrolpersoner. MIR-126 er højt udtrykt i lungevæv og er involveret i reguleringen af ​​vaskulær celleadhæsionsmolekyle 1 (VCAM-I) [29]. Afvigende ekspression af MIR-126 er blevet impliceret i patogenesen af ​​NSCLC [30], [31]. I denne undersøgelse, flere par, der involverer miR-126 var blandt de flere kandidater identificeret i træningssættet (figur S1), men efter yderligere test i yderligere 130 prøver, alle miRNA-126 kandidat par udstillet følsomhed over 75% og specificitet var mindre end 75%. Andre nylige undersøgelser af Foss og kolleger [17] viste serum miR-1254 og miR-574-5p blev differentielt udtrykt mellem NSCLC (n = 33) og raske kontroller (n = 42). Det er vigtigt at bemærke, at flere faktorer kan påvirke udfaldet af miRNA studier i kropsvæsker, herunder variationer i prøvetype f.eks fuldblod, plasma eller serum, prøvenumre, studie design, prøvetagning, RNA isolering, patientkarakteristika, antal miRNA undersøgt og teknologier, der anvendes i miRNA profilering f.eks Solexa sekventering, RT-qPCR eller microarray teknologier. Desuden er der behov for standardisering af isolation metoder, normalisering og data analysemetoder for at demonstrere en klar kliniske anvendelighed af disse formodede markører.

Selv om disse data er lovende, testsættet omfattede et relativt lille antal prøver . I sidste ende, disse miRNA-biomarkører kræver yderligere validering på større prospektive kohorter såsom et fase III biomarkør undersøgelse for at validere disse resultater. Omfattende blod-baserede miRNA-markører i spiral CT undersøgelser kan støtte i at udforske anvendeligheden af ​​miRNA i screening for lungekræft. Selv om dette er en sonderende fase I /II studie blev patienterne udvalgt primært fra kirurgiske klinikker, og vægtes mod tidligt stadie sygdom (60% fase I, 24% trin II, 12% Stage III og 4% trin IV). Denne skævhed i retning af tidlig fase sygdom understøtter undersøgelse af disse markører i en fase III eller IV forsøg formål at definere udførelsen af ​​disse markører i et prospektivt måde påvisning tidligt stadium.

Den nylige udbredelse af nytten af ​​screening spiralformet bryst CT-scanninger for reduktion i dødeligheden af ​​lungekræft fra NLST forsøget placerer en præmie på identifikation af højrisiko individer, der kunne drage fordel af screening. Adjuverende serum baseret test kan udføres på en meget omkostningseffektiv måde i forhold til billedbehandling, og kan være en hjælp til at identificere høj-risiko populationer, der kan have gavn af brystet CT, eller der skal anvendes i kombination med billedbehandling at identificere tidlige lungekræft.

Der er stort behov for forbedret screening for lungekræft grund af det store antal berørte personer hvert år, og den høje dødelighed af sygdommen, når diagnosen i sine senere faser. Der er i øjeblikket mange kliniske forsøg, der gennemføres for at teste effektiviteten af ​​nye behandlingsformer for NSCLC, men de fleste af disse er fase II forsøg og for nylig en række fase III studier har undladt at opfylde deres primære slutpunkter [32] Til dato, forbedret screening til at give tidlig påvisning er den mest lovende mulighed for at reducere dødeligheden af ​​NSCLC. Vores undersøgelse styrker yderligere det argument, at serum miRNA har potentiale til at blive brugt som en omkostningseffektiv, ikke-invasiv diagnostisk test for NSCLC, og kan potentielt anvendes som en første linje skærmen for at hjælpe risiko stratificere patienter til videre, dyrere eller invasive screening regimer.

Støtte Information

Figur S1.

Differential miRNA udtryk i sera fra NSCLC patienter (kræft) og raske kontrolpersoner (normale) i træningssæt. Diff, differential udtryk mellem de to miRNA, beregnet som forskellen mellem Ct-værdier for de to angivne miRNA. PPV, positive prædiktive værdi; NPV, negativ prædiktiv værdi; SENS, følsomhed; og SPEC, specificitet. Den cutoff værdi, der bruges til at opnå den angivne specificitet og sensitivitet er angivet for hvert miRNA diff par

doi:. 10,1371 /journal.pone.0032307.s001

(XLS)

Tak

Vi er taknemmelige for Ana Ward og Drs. Gary Latham, Bernard Andrus, og Rolland Carlson for deres kritiske kommentarer og hjælp i udarbejdelsen af ​​dette manuskript.