PLoS ONE: Serum miR-210 Bidrager til Tumor Detection, Stage Forudsigelse og Dynamic Overvågning i patienter med blærekræft

Abstrakt

MIR-210 er master hypoxamir der generelt udviser onkogene egenskaber i de fleste humane solide tumorer, herunder blærekræft (BC). Men det er stadig ukendt om den kliniske betydning af cirkulerende miR-210-niveauer i BC. I denne undersøgelse fandt vi, at serum MIR-210 blev opreguleret hos patienter med BC, og serumniveauer af MIR-210 øgedes med stigende trin og grad. Desuden blev serum miR-210-ekspression sig at være væsentligt reduceret i parrede postoperative prøver og forhøjede i de fleste patienter med recidiverende BC. Tilsammen vore data antyder, at serum MIR-210 kunne være en potentiel noninvasiv biomarkør for screening, forudsigelse og overvågning BC

Henvisning:. Yang Y, Qu A, Liu J, Wang R, Liu Y, Li G et al. (2015) Serum miR-210 Bidrager til Tumor Detection, Stage Forudsigelse og Dynamic Overvågning i patienter med blærekræft. PLoS ONE 10 (8): e0135168. doi: 10,1371 /journal.pone.0135168

Redaktør: Ratna B. Ray, Saint Louis University, UNITED STATES

Modtaget: Juni 2, 2015; Accepteret: 17 Juli 2015; Udgivet: 7 August, 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af National Natural Science Foundation of China (nr 81.271.916); Shandong-provinsen Natural Science Foundation of China (nr ZR2010H004, ZR2013HQ063 og ZR2014HP001.); Grundforskning Fonde af Shandong University (nr 2014QLKY03); Forskningsfonden for ph.d.-programmet for videregående uddannelse i Kina (nr 20120131110055) og National Key Clinical Medical Specialties Foundation. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Blærekræft (BC), den mest almindelige malignitet i urinvejene verdensplan, resulterer i signifikant morbiditet og mortalitet [1]. Ved første diagnosticering, har omkring 70% af BC patienter cancere begrænset til epitelet eller subepiteliale bindevæv (ikke-muskel-invasiv blærekræft, NMIBC, består af faser Ta, Tis og T1). Mere end 50% af disse kræftformer gentage sig, og 15-20% fremskridt til muskel-invasiv formular (MIBC, stages T2, T3 og T4) under opfølgning [2]. Sikkert denne høje sats for tilbagefald kræver livslang overvågning. I øjeblikket er den mest almindeligt anvendte test for ikke-invasiv detektion af BC er urin cytologi. Imidlertid har denne test begrænset følsomhed, især til påvisning af lav kvalitet læsioner [3-6]. Cystoskopi-styrede biopsi til histologisk evaluering kan levere høj diagnostisk nøjagtighed, men det er invasiv og dyrt, og besværligt for generel screening kræft. Derfor er der behov for nye markører, der kan hjælpe i ikke-invasiv påvisning og overvågning af BC.

microRNA (miRNA, Mirs) er en ny klasse af endogen, små, ikke-kodende RNA-oligonukleotider, der kunne negativt regulerer genekspression ved at målrette den 3′-utranslaterede region (3′-UTR) af den tilsvarende mRNA [7]. Kumulativ tyder på, at miRNA ofte dysreguleret i humane kræftformer og udøve betydelig indvirkning på udviklingen af ​​kræft [8, 9]. Cirkulerende microRNA, stammer fra primære tumorvæv, er stabilt påviselige i serum /plasma [10-12]. Flere undersøgelser har vist, at cirkulerende miRNA kan anvendes som nye biomarkører i kræft [13-15]. For nylig har nogle cirkulerende microRNA, såsom MIR-21, MIR-221, MIR-375, etc. blevet foreslået som biomarkører for tilstedeværelse af tumor eller behandling respons på lokale og systemiske behandlinger [9, 16]. Men brugen af ​​cirkulerende miRNA som blodbaserede, minimalt invasive biomarkører for patienter med BC er stadig relativt mindre udforsket.

MIR-210, master hypoxamir, opreguleres i de fleste humane faste tumorer og generelt udviser onkogene egenskaber [17, 18]. Nylige undersøgelser viste, at MIR-210 blev opreguleret i BC væv [19, 20], og overekspression af MIR-210 var forbundet med en ringe overlevelse, fremme cellevækst og migration, inhiberede apoptose af BC-celler [21]. Ekspressionen og kliniske betydning af cirkulerende MIR-210 i BC fortsat uklar på dette tidspunkt. Det er blevet påvist, at høj cirkulerende miR-210 kunne tjene som biomarkør for tumor tilstedeværelse og behandling respons på lægemiddelbehandlinger i patienter med brystkræft [22]. I lyset af disse bemærkninger, vi postulerer miR-210 kunne være en kandidat til udforskning som cirkulerende biomarkører for BC og kan give prædiktiv information til at forbedre kræftbehandlingen.

I denne undersøgelse har vi fokuseret vores analyse på den kliniske effekt af cirkulerende miR-210 på opdagelse og overvågning af BC, med den hypotese, at cirkulerende miR-210 kunne tjene som en minimalt invasiv biomarkør for BC patienter. Vi fandt, at præ-operative miR-210 ekspressionsniveauer i serum er nyttige til at detektere BC, forudsige muskel invasion og histologiske grad, og afspejler tumor dynamik.

Materialer og Metoder

Patienter og prøver

undersøgelsen omfattede 168 patienter med nyligt diagnosticeret BC ved Institut for Urologic Surgery, Qilu Hospital, Shandong University (Jinan, Kina) mellem 2006 og 2010. Histologiske prøver fra alle patienter blev gennemgået for at bekræfte diagnosen af ​​BC, og tumorerne iscenesat og karakter efter TNM klassifikationen 2002 og 1973 WHO klassificeringssystem, hhv. Blod blev opsamlet fra 168 BC patienter før operation. Forbundne postoperative blodprøver blev opsamlet fra 40 patienter en måned efter kirurgi, og uparrede tilbagefald gruppe blodprøver blev opsamlet fra 30 patienter. De klinisk-patologiske data for patienter, herunder køn, alder, histologisk differentiering og tumor fase blev indsamlet retrospektivt. Desuden blev 104 raske kontrolpersoner, der besøgte hospitalet for en lægeundersøgelse indskrevet i denne undersøgelse. Normale kontroller blev udvalgt med lignende alder og køn proportioner til præ-operative kræftpatienter, og de blev screenet for at sikre, at de var inden for normalområdet for alle laboratorieresultater og havde ingen historie af kræft. Indsamling og analyse af alle prøver blev godkendt af Etisk Komité Qilu Hospital, Shandong University, og skriftligt informeret samtykke blev opnået fra hver patient og kontroller.

Hele blodprøver blev indsamlet fra kontroller og patienter ved venepunktur. Serum blev separeret i 1 h indsamling af blod ved centrifugering ved 10.000 rpm i 10 min, til helt at fjerne cellerester. Serumprøverne blev derefter overført til RNase /DNase-fri rør og opbevaret ved -80 ° C indtil yderligere analyse. Formalin-fikseret paraffinindlejrede (FFPE) vævsprøver blev indsamlet fra patienter, der har fået foretaget radikal cystektomi. Alle FFPE prøver blev opbevaret ved stuetemperatur indtil anvendelse.

Cellekultur

BC cellelinjer (5637 og T24) og en human uroepitele cellelinie (SV-HUC-1) blev indkøbt fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). 5637 og T24 blev dyrket i RMPI1640 medium indeholdende 10% føtalt bovint serum (FBS, Gibco, Carlsbad, CA), hvorimod SV-HUC-1 blev dyrket i Dulbeccos modificerede Eagles medium /F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Alle cellelinier blev inkuberet ved 37 ° C i en fugtig atmosfære indeholdende 5% carbondioxid.

Protokol til påvisning af miRNA i serum

cDNA’et af miRNA i serum blev syntetiseret med One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japan). Reaktionsblandingen (20 pi) indeholdt 10 pi af 2 × miRNA Reaction Buffer Mix, 2 pi af miRNA Primescript RT Enzyme Mix, 2 pi 0,1% BSA og 3 pi af serum blandes med 3 pi af serum-puffer (2,5% Tween 20, 50 mmol /L Tris og 1 mmol /L EDTA [23], og blev inkuberet ved 37 ° C i 60 min, ved 85 ° C i 5 sekunder og derefter ved 4 ° C i 60 min. efter centrifugering ved 10 000 rpm i 10 min ved 4 ° C, cDNA blev opbevaret ved -20 ° C indtil anvendelse.

QRT-PCR for miRNA blev udført i de endelige mængder af 25 ul under anvendelse af SYBR PrimeScript miRNA qPCR Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) på ABI PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). reaktionen reagenser indeholdt 12.5μl af SYBR Premix Ex Taq II, 0,5 pi af DyeII, 2 pi 5 uM fremad primer (Ribobio, Guangzhou, Kina), 1 pi 10 pM Uni-miR qPCR primer og 2.0μl af template cDNA. volumenet blev indstillet med RNA-fri H2O. den omvendte-transkriptionsreaktion blev udført tre gange for at fjerne eventuelle outliers. Ifølge vores tidligere forskning, kombinationen af ​​mIR-16-5p og miR- 193a-5p blev brugt som reference gen [24]. Og, miRNA udtryk blev registreret som forholdet mod det geometriske gennemsnit af to referencepunkter gener. Desuden valgte vi den mindste ekspression prøven miR og indstille ekspressionen værdien af ​​denne prøve som 1. Ekspressionsniveauerne for alle de andre prøver blev lig med det relative forhold.

Isolering af RNA, cDNA-syntese og kvantitative realtid polymerasekædereaktion (QRT-PCR)

Total RNA ekstraktion fra celler og dyrkningsmedier prøver blev udført ved anvendelse af TRIzol-reagens (Ambion, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), hvorimod RNA-ekstraktion fra formalinfikserede faste og paraffinindstøbte (FFPE) prøver blev udført ved hjælp af miRNA isolation Kits (Bioteke, Beijing, Kina). Alle manipulationer af RNA blev udført under RNase-fri betingelser. Det isolerede RNA blev opbevaret ved -80 ° C indtil anvendelse.

cDNA blev syntetiseret under anvendelse af genspecifikke primere (Ribobio, Guangzhou, Kina) og M-MLV RT (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) i et 20 pi reaktionsvolumen. RT-reaktionen reagenser indeholdt 1 mg RNA-template, 1 pi 10 mM dNTP-blanding, 2 pi 0,1 M DTT, 4 pi første streng buffer, og 1 pi 40 U /ml RNase-inhibitor. Volumenet blev indstillet med RNA-fri H2O. Revers-transkriptionsreaktion blev udført tre gange for at fjerne eventuelle outliers. Mirna ekspression blev vurderet ved anvendelse QRT-PCR og et ABI PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). De fold ændringer i miRNA udtryk blev bestemt ved anvendelse af 2-ΔΔCT metoden [10] med U6 lille nukleare RNA (U6) som reference gen at normalisere dataene. Derudover satte vi ekspressionen værdien af ​​human uroepitele cellelinie (SV-HUC-1) som 1 og ekspressionsniveauerne for alle de andre prøver var lig med det relative forhold.

Statistisk analyse

SPSS (Statistisk pakke for Social Sciences) softwarepakke, udgave 18.0 (Chicago, IL, USA), og MedCalc 9.3.9.0 (MedCalc, Mariakerke, Belgien) software blev brugt til at analysere alle data. Vi brugte først Kolmogorov-Smirnov test for at afgøre fordelingen af ​​data i hver gruppe. Dataene er præsenteret som middelværdi ± standardafvigelse (SD) eller median (interkvartile område), når værdierne normalt eller unormalt fordelte henholdsvis. Statistiske forskelle mellem grupperne blev testet ved anvendelse af Mann-Whitney U-test, Wilcoxon t-test, t-test, eller en Kruskal-Wallis test, alt efter omstændighederne. Receiver opererer karakteristiske (ROC) kurver blev etableret for at diskriminere de forsøgspersoner med eller uden BC. Forskelle blev betragtet som statistisk signifikant, når P 0,05. Multiple sammenligninger blev betragtet som statistisk signifikant, når p-værdier var mindre end 0,05 /(antal kontraster udført) ifølge Bonferroni multiple sammenligningstest.

Resultater Salg

MIR-210-ekspression i humant BC væv og BC cellelinjer

for at bekræfte tidligere rapporterede høj miR-210 ekspressionsniveauer i BC væv [25], vi undersøgte MIR-210 udtryk i 40 par af menneskelige BC væv og tilsvarende ikke-kræft væv ved hjælp qRT- PCR. Resultaterne viste, at MIR-210-ekspression i BC væv blev signifikant opreguleret i forhold til produktionen i tilgrænsende normale væv (P 0.001, Fig 1A). Også, undersøgte vi MIR-210 ekspression i humane BC cellelinier (T24 og 5637) og en human uroepitele cellelinie (SV-HUC-1). Resultaterne viste, at ekspressionsniveauerne af MIR-210 i BC cellelinjer var signifikant højere end i den humane uroepitele cellelinje (figur 1B).

(A) Sammenligning af MIR-210 niveauer i 40 par af primære BC væv og tilstødende normale væv. Udtrykket niveau af miR-210 var signifikant højere i primære BC væv end i tilstødende normale væv (

P

0,001). (B) Ekspressionsniveauerne for miR-210 i BC-cellelinjer var højere end i en human uroepitele cellelinje.

MIR-210-ekspression i serum af patienter med BC

ekspressionsniveauer af serum mIR-210 i 168 BC patienter og 104 kontrolpersoner blev undersøgt under anvendelse af QRT-PCR. For at validere stabiliteten af ​​reference- gener, vi sammenlignet ekspressionsniveauerne af miR-16-5p, miR-193a-5p og kombination af miR-16-5p og miR-193a-5p (geometrisk middelværdi) i BC patienter og normale kontroller. Der var ingen tegn på differentiel ekspression af miR-16-5p, miR-193a-5p og kombination af miR-16-5p og miR-193a-5p mellem BC patienter og raske kontroller (S1 Fig). Og resultaterne viste, at niveauerne af MIR-210 signifikant opreguleret i BC patienter sammenlignet med raske kontroller (P 0,0001, figur 2A). Repræsentation af data ved hjælp af en ROC plot viste stærk adskillelse mellem begge grupper, med et AUC på 0,898 (95% CI, 0,855-0,931) (fig 2B). Vi brugte ROC kurver med Younden indekset til at opdage cutoff værdier, der kunne diskriminerer blære kræftpatienter fra normale kontroller [26]. Den optimale cutoff værdi blev angivet ved 22,37, med en følsomhed på 97,6% (95% CI, 94,0% -99,3%) og en specificitet på 69,2% (95% CI, 59,4% -77,9%).

(A) serum mIR-210-ekspression i 168 BC patienter og 104 kontroller. De øvre og nedre grænser for kasserne og linierne inde i felter angiver den 75. og 25. percentil og medianen hhv. De øvre og nedre vandrette stænger betegne den 90. og 10. percentiler hhv. (B) Receiver-operating characteristic (ROC) kurve analyse af serummet MIR-210 til påvisning af BC patienter. AUC for 0,898 (95% CI 0,855 til 0,931) indikerer god diskriminerende magt.

De statistiske resultater viste, at serum miR-210-ekspression i BC patienter var signifikant korreleret med T fase (P = 0,000) og M etape (P = 0,040). Der var ingen signifikante sammenhænge mellem serum miR-210 udtryk og patientens køn, alder, N scenen eller Grade (alle P 0,05). (Tabel 1)

rolle serum miR-210 forudsige tumor fase hos patienter med BC

i yderligere analyse, vi delte BC patienter i NMIBC og MIBC, og fandt, at serum miR-210 fra både NMIBC og MIBC betydeligt blev opreguleret i forhold til kontrollerne (

P

0,0001 og

P

0,0001 henholdsvis). Vigtigere, blev der observeret en signifikant forskel i serum udtryk for miR-210 mellem begge grupper af patienter med NMIBC og MIBC (

P

0,0001, figur 3A). AUC miR-210 bruges til at skelne NMIBC (Ta-T1) og MIBC (T2-T4) patienter fra kontrollerne var 0,858 (95% CI, 0,800-0,904) og 0,938 (95% CI, 0,893-0,968), henholdsvis (fig 3B og 3C). Og serum miR-210 kunne pålideligt skelne NMIBC patienter fra MIBC patienter, som det fremgår af en AUC-værdi på 0,736 (95% CI, 0,662-0,800) (fig 3D).

(A) Serum miR-210 ekspression i 84 NMIBC, 84 MIBC og 104 kontroller. Alle

P

0,05 /3. (B) ROC kurver for serum MIR-210 for NMIBC gruppe (n = 84) versus raske individer (n = 104). AUC = 0,858 (95% CI 0,800-0,904). (C) ROC kurver for serum MIR-210 for MIBC (n = 84) versus raske individer (n = 104). AUC = 0,938 (95% CI 0,893-0,968). (D) ROC kurver for serum MIR-210 for NMIBC gruppe (n = 84) vs MIBC (n = 84). AUC = 0,736 (95% CI 0,662-0,800).

Vurdering af, om serum miR-210 kunne overvåge tumor dynamik

Vi valgte 10 BC patienter med den højeste serum miR-210 udtryk (høj gruppe) og yderligere 10 BC patienter med de laveste serum miR-210-ekspression (lav gruppe). De tilsvarende FFPE væv af disse patienter blev opsamlet og derefter MIR-210 udtryk blev evalueret. Som et resultat, i 9 patienter i den høje gruppe, miR-210-ekspression i BC FFPE væv viste højere (90%) end hos patienter i den lave gruppe (S2 Fig). Desuden har vi gennemgået de cirkulerende miR-210 ekspressionsniveauerne i parrede præ- og postoperative serumprøver fra 40 f.Kr. patienter, som gennemgik helbredende cystektomi, og fandt, at niveauerne af serum miR-210 blev væsentligt reduceret i den postoperative gruppe ( P 0,0001) (fig 4A). Vi undersøgte også serumniveauerne af MIR-210 i uparret præ-operative (n = 168), postoperativ (n = 40), og tilbagefald (n = 30) serumprøver, og fandt, at MIR-210 niveau var signifikant reduceret i den postoperative gruppe sammenlignes med den i den præ-operative gruppe (P 0,0001). Niveauet af serum MIR-210 i tilbagefald var væsentligt forøget (P 0,0001) og udviste et niveau svarende til den i præ-operative prøver (Fig 4B). Tilsammen resultaterne viste, at de cirkulerende niveauer af miR-210 kunne afspejle tumor dynamik i BC patienter.

(A) Sammenligning af serum MIR-210 udtryk mellem præ- og postoperative prøver fra BC patienter . De serum miR-210 niveauer blev signifikant reduceret i parrede postoperative prøver sammenlignet med dem i pre-operative prøver (

P

0,0001). (B) Scatter plot af MIR-210 niveauer i den præ-operative (n = 168), postoperativ (n = 40) og tilbagefald (n = 30) serum grupper.

Evaluering af overvågning tumor dynamik ved hjælp mIR-210 ekspression af dyrkede medium i BC cellelinier

det er blevet rapporteret, at primære tumorceller kunne udskille miRNA til omgivende miljøer, herunder tilstødende celler og blodgennemstrømningen [27]. Derfor vi hypotese, at dyrkede kræftceller også kan udskille flere cancer-associerede miRNA i omgivende medium, der simulerer den gensidige påvirkning mellem primære kræftceller og den tilstødende blod. For at bekræfte hypotesen, vi først undersøgte miR-210 udtryk for dyrkede medium i BC cellelinjer (5637 og T24) og fandt miR-210 blev udtrykt i dyrkede medium af både 5637 og T24 celler. Derefter udpladet vi 5637 og T24-celler med forskellige antal og opsamlet mediet på forskellige tidspunkter for detaljeret undersøgelse. Som et resultat blev øget tendenser på MIR-210-ekspression bekræftet i begge celle nummer-og tidsforløb-afhængige måder (Fig 5). Disse resultater indikerer, at MIR-210 eventuelt frigøres fra primære blære tumorceller i det omgivende miljø, hvilket indebærer, at serum MIR-210 kan stamme fra primær BC-celler og dets serum ekspressionsniveauet kunne afspejle tumor dynamik cancerpatienter med BC.

Øget tendenser blev bekræftet i celle medium i både celle nummer-og tid-retters-afhængige manerer.

diskussion

Mange genetiske og epigenetiske ændringer er fundet at være involveret i tumorigenese og progression af forskellige kræftformer. Tidligere rapporter har identificeret tumor specifikke ændringer nukleinsyrer i blodet hos patienter, og har vist den potentielle værdi af plasma /serum nukleinsyrer som nye ikke-invasive biomarkører hos patienter med kræft [28, 29]. Især er microRNA stammer fra cancerceller vist sig at være stabil og let påvises i plasma eller serum hos patienter med flere kræftformer, som kunne spejler ekspressionsmønsteret i de neoplastiske væv [10, 11]. Men i virkeligheden, kun relativt få miRNA, der er rigeligt til udtryk i kræftceller kan påvises i omløb [30], og næsten 30% af de frigivne miRNA ikke afspejler udtrykket mønstre af de specifikke kræftceller [31]. Disse rapporter understreger betydningen af ​​at finde nye cirkulerende microRNA som biomarkører for kræft.

MIR-210 er den mest konsekvent og håndfast induceret microRNA under hypoxi og generelt udviser onkogene egenskaber i forskellige tumorer [32, 33]. Hypoxi er et fælles træk ved mange solide tumorer, herunder BC, og er impliceret i reguleringen af ​​mange gener. Nylige undersøgelser viste MIR-210 blev opreguleret i BC væv [19, 20]. I denne undersøgelse først, bekræftede vi de højere MIR-210 udtryk i BC væv og cellelinier end i det tilstødende normale væv og en human uroepitele cellelinie. Så har vi fokuseret på den kliniske betydning af cirkulerende miR-210 i BC. Vi fandt, at det var væsentligt højere i BC patienter end hos raske frivillige, og AUC til at skelne BC fra raske kontrolpersoner var 0,898, med en følsomhed på 97,6% og en specificitet på 69,2%. Denne undersøgelse er den første til at demonstrere den potentielle rolle af serum miR-210 i detektering af BC. Vi fandt også, at høj MIR-210 ekspression i serum blev forbundet med fremskreden T stadium og tilstedeværelsen af ​​metastaser. Disse resultater var i overensstemmelse med andre rapporter om, at høj miR-210-ekspression i BC væv blev forbundet med muskel-invasiv aggressivitet [19, 20].

Yderligere forskning viste miR-210 niveauer kunne ikke kun skelne NMIBC patienter fra raske kontrollere patienterne, men også MIBC fra NMIBC med AUC værdi på 0,736. Men den relativt lave AUC og betydeligt overlap i fordelingerne af serum MIR-210 i NMIBC og MIBC indikerer, at serum MIR-210 ikke kunne anvendes til nøjagtigt at skelne mellem MIBC og NMIBC. Ikke desto mindre kan serum MIR-210 tjener til at vurdere den relative sandsynlighed for muskel-invasiv BC i fravær af mere pålidelige cirkulerende biomarkører. Således kunne det være nyttigt i præoperativt forudsige tumor scenen med håbet om, at en sådan viden kunne føre terapeutisk valg.

Vi undersøgte også, om serum miR-210 ekspressionsniveauerne kunne afspejle tumor dynamik i BC. Sammenligningen mellem miR-210-ekspression i parret serum og primære tumorer viste, at høje niveauer af miR-210 repræsenterede højere udtryk i de fleste tilfælde af primær BC væv. miR-210 niveauer blev også sammenlignet i parrede serumprøver opnået før og efter kurativ kirurgi, som i væsentlig grad udstillet reduktion postoperativt. Og niveauerne af serum miR-210 fra patienter med recidiverende BC blev opreguleret og nåede niveauet for, at der i præ-operative patienter. Desuden har vi fastslået, om miR-210-niveau i dyrkningsmedium kunne afspejle status BC cellelinjer og kan blive frigivet fra kræftceller. Og vores data viste klart, at de miR-210 niveauer i dyrkede medium af BC cellelinjer steget betydeligt i både celle nummer-og tid-kursus-afhængige manerer, mens miR-210 niveauer i dyrkede medium af den menneskelige uroepitele cellelinie forblev uændret (data ikke vist). Disse resultater viste, at serum ekspressionsniveauet af MIR-210 kunne være reflekterende af tumor dynamik og kan overvåge tumorstatus.

Selvom vores nuværende assay kan være potentielt anvendelige til BC påvisning, var der en begrænsning af anvendelse af miR- 210 som en enkelt biomarkør til diagnosticering af BC. Cirkulerende ekspression af MIR-210 er også blevet beskrevet i andre faste cancere, såsom brystcancer [22], nyrekræft [34], og pancreascancer [35]. Derfor kan det være en udfordring at skelne, om højt cirkulerende miR-210-niveau er specifikt forbundet med BC selv eller, hvis dette er kun et almindeligt fænomen, der manifesterer sig som følge af forstyrrelser i immunresponset vært under progression af enhver kræft [36] . Vi behandlet dette spørgsmål ved at demonstrere, at en positiv signifikant sammenhæng eksisterede mellem primær tumor væv og serumniveauer af miR-210, og at serum miR-210 niveauer faldt postoperativt i en undergruppe af patienter, der fremhæver specificitet miR-210 som en specifik biomarkør for BC.

som konklusion vores resultater tilvejebringer tvingende beviser at serum mIR-210 kan anvendes som en ikke-invasiv biomarkør for screening, trin forudsige og overvågning BC. Dette begreb kan indarbejdes i kliniske beslutninger i en ikke så fjern fremtid afventer validering i store prospektive forsøg.

Støtte Information

S1 Fig. Ct-værdier af miR-16-5p, miR-193a-5p, kombination af miR-16-5p og miR-193a-5p i BC patienter og raske kontroller (alle

P

0,05).

Ingen signifikant forskel blev fundet inden for 3 referencepunkter gener i begge grupper

doi:. 10,1371 /journal.pone.0135168.s001

(TIF)

S2 fig. Sammenligning af MIR-210 niveauer i serum og tilsvarende kræft væv

doi:. 10,1371 /journal.pone.0135168.s002

(TIF)