PLoS ONE: humaniseret musemodel for kræft i æggestokkene rekapitulerer Patient Solid Tumor Progression, Ascites Dannelse, og Metastase

Abstrakt

Kræft i æggestokkene er den mest almindelige dødsårsag fra gynækologisk cancer. Forståelse biologi denne sygdom, især hvordan tumorassocierede lymfocytter og fibroblaster bidrager til progression og metastase af tumoren, er blevet hæmmet af manglen på en passende tumor xenograft model. Vi rapporterer en enkel og reproducerbar system, hvor tumoren og tumorstroma held indpodet i NOD-SCID IL2Rγ

null (NSG) mus. Dette opnås ved indblæsning af tumor celleaggregater afledt af friske æggestokkene tumor biopsi væv (herunder tumorceller, og tumorassocierede lymfocytter og fibroblaster) i.p. i NSG mus. Tumor progression i disse mus nøje paralleller mange af de begivenheder, der er observeret i æggestokkene kræftpatienter. Tumorer etablere i omentum, æggestokke, lever, milt, uterus, og bugspytkirtel. Tumorvækst er oprindeligt meget langsom og progressiv inden bughulen med en ultimativ udvikling af tumor ascites, spontan metastase til lungen, øget serum- og ascites niveauer af CA125, og opretholdelse af tumorassocierede humane fibroblaster og lymfocytter, der forbliver funktionelt og responsiv til cytokiner i længere perioder. Med denne model vil man være i stand til at bestemme, hvordan fibroblaster og lymfocytter inden for tumormikromiljøet kan bidrage til tumorvækst og metastase, og vil gøre det muligt at evaluere effekten af ​​behandlinger, der er designet til at målrette disse celler i tumorstroma.

Henvisning: Bankert RB, Balu-Iyer SV, Odunsi K, Shultz LD, Kelleher RJ Jr, Barnas JL, et al. (2011) humaniseret musemodel for kræft i æggestokkene rekapitulerer Patient Solid Tumor Progression, Ascites Dannelse, og metastase. PLoS ONE 6 (9): e24420. doi: 10,1371 /journal.pone.0024420

Redaktør: Sandra Orsulic, Cedars-Sinai Medical Center, USA

Modtaget: Indtil 30. juni, 2011; Accepteret: August 8, 2011; Udgivet: 15 September, 2011

Copyright: © 2011 Bankert et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Undersøgelsen blev delvist understøttet af NIH tilskud CA34196 (LDS) og NIH Grants CA131407, CA108970 og AI079188 (RBB), T32AI1007614 (MSA), Kræft i æggestokkene arbejdsgruppe Udstedelse af Cancer Research Institute (KO) og NIH Grant HL-70.227 (SB -JEG). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Både normale og neoplastiske humane væv med succes er blevet indpodet i T-celle og B-celle-mangel

prkdc

scid (SCID)

mus. Den første vellykket transplantation af humane celler i disse C.B-17

SCID

mus blev rapporteret over 20 år siden [1]. Brugen af ​​humane væv xenografter i disse immunsvækkede mus har siden ført til indsigt i biologi human cancer, autoimmunitet og infektionssygdomme [2]. Potentialet for at bruge flere forskellige menneskelige tumor xenograftmodeller at studere og vurdere anti-cancer behandlinger sammen med modellernes begrænsninger og faldgruber er blevet revideret [3]. En af de største hindringer for de tidligere xenograftmodeller var vært-versus-transplantat (HVG) respons, der blev observeret efter implantationen af ​​humane væv. Mens

SCID

mus manglede funktionel B og T-celler, disse mus havde en intakt medfødt immunrespons, som var ansvarlig for den komplekse cellulære og molekylære HVG respons. Intensiteten af ​​denne HVG respons varierede betydeligt fra mus til mus og med den histologiske tumortype anvendes til indpodning [3]. Forbedrede niveauer af humant væv transplantation har afhang primært på genetiske modifikationer af immundefekte vært mus [2]. Et stort gennembrud var dannelsen af ​​immundefekte mus, som er homozygote for målrettede mutationer i interleukin-2-receptor γ-kæde locus [2]. Disse mus er alvorligt svækket i udvikling og funktion af T-celler, B-celler og NK-celler [2]. Et eksempel på denne nye type immundefekte mus stamme er den NOD.Cg-

Prkdc

scidIL-2RG

tm1Wjl

, forkortet NSG. Immundefekte mus, som mangler IL-2-receptor γ-kæde har vist sig at understøtte den langvarige indpodning af humane hæmatopoietiske celler og mononukleære celler fra perifert blod [2] bedre end tidligere immundefekte musestammer.

A xenograft model, hvor humane tumorer og autologe tumor-associerede T og B-celler kan være co-podet og deres samspil studeret

in vivo

ville give mulighed for at bestemme, hvordan menneskets immunkompetente celler og tumorceller påvirker hinanden. Resultaterne kan potentielt bruges til at evaluere immunterapeutiske tilgange til kræft. Yderligere på grund af den stigende bevidsthed om, at ikke-maligne stromale celler, herunder fibroblaster, epitelceller og andre leukocytter interagerer med og har virkninger tumorvækst og metastaser [4], udvikling og anvendelse af modeller, hvor tumormikromiljøet opretholdes i xenograft er også kritisk for at få indsigt i patogenesen for tumorprogression. Ved at implantere ikke-forstyrret stykker af humane tumorer subkutant i NSG mus blev xenografter etableret ved hvilken vævet arkitektur, herunder tumor-associerede leukocytter, stromale fibroblaster og tumorceller blev bevaret og opretholdes i længere perioder [5]. Denne model vist sig nyttige for at demonstrere evnen af ​​eksogent IL-12 leveret af bionedbrydelige mikrosfærer til at aktivere hvilende hukommelses-T-celler i tumoren mikromiljø [5]. Men fordi disse tumorxenoplantater ikke etableret orthotopisk, og blev kun observeret begrænset dokumentation af tumor spredning modellen ikke præcist afspejler de mønstre af vækst og metastase, der observeres hos kræftpatienter, og var derfor begrænset potentiel værdi i at identificere faktorer at bidrage til tumormetastaser eller til at vurdere effekten af ​​immunterapeutiske protokoller.

En tumor xenograft model er blevet udviklet og er rapporteret her, hvor humane epiteliale æggestokkene tumorxenoplantater etableres orthotopisk, og mønstret af tumorvækst og metastase afspejler, at der er observeret i patienter med ovariecancer. Tumorassocierede T- og B-lymfocytter og fibroblaster co-indpode inden tumorknuder og T-cellerne forbliver funktionelt og reagerer på eksogent indgivet cytokin. CA125 er til stede i sera og ascites af CA125 + tumor-bærende mus og giver mulighed for at overvåge tilstedeværelsen og fremskridt tumorxenoplantater jævne mellemrum. Det forventes, at denne model vil gøre det muligt at studere evnen af ​​human tumor-associeret leukocytter og tumor stroma at modulere

in situ

tumorudvikling. Desuden modellen giver mulighed for at evaluere effekten af ​​en enkelt, samt kombination, terapeutiske tilgange til kræft i æggestokkene.

Resultater

Menneskelige ovarieepitelceller tumorer indpode ortotopisk i æggestokken og andet organ sites efter intraperitoneal (ip) injektion af tumor-afledte celle aggregater i NSG mus

det blev fastslået tidligere, at den subkutane implantation af faste stykker af friske humane tumorvæv i NSG mus resulterede i etableringen af ​​tumor mikromiljøer [ ,,,0],5]. Fordelene ved denne fremgangsmåde i forhold til tidligere metoder var at de resulterende xenotransplantater opretholdt deres oprindelige arkitektur, herunder tumorassocierede leukocytter, stromal fibroblast og tumorceller, og xenotransplantater overlevede i længere perioder uden HVG interferens eller infiltration af værtsceller. En væsentlig begrænsning af denne tidligere xenograftmodel var, at den ikke afspejler de mønstre af tumorvækst og spredning, der observeres hos kræftpatienter, og nogle svulster undlod at indpode eller resulteret i xenotransplantater med store områder af nekrose på grund af en utilstrækkelig vaskularisering af solide stykker af tumorer.

Vi rapporterer her en metode til transplantation, hvor ovarietumorer held kan etableres som xenografter ortotopisk i æggestokken og andre organsystemer steder af modtagende mus. Den tumorvækst afspejler det mønster, og progression observeret hos patienter med ovariecancer. Dette er opnået ved at injicere en suspension af celleaggregater (som er afledt af en mild forstyrrelse af faste ovarietumorer) i.p. i NSG mus (se Metoder afsnit). For at sikre en vellykket tumor transplantation, skal tumor biopsi væv består af områder af levedygtige tumorceller, der omfatter tumorassocierede lymfocytter og fibroblaster som vist i fig. 1. De tumorafledte-cellesuspensioner skyldes driftsforstyrrelser af de friske faste tumorvæv indeholde små (200-300 um diameter) aggregater af celler, der omfatter CD45 + leukocytter, cytokeratin-positive tumorceller, CD3 + T-celler og trichrom positive kollagen, som er produceret af fibroblaster (fig. 2A-E). Celleaggregater afledt fra ovarietumorer opnået fra fem forskellige patienter (Eksperiment 1-5) injiceret i.p. i NSG mus og de modtagende mus aflivet på de angivne tidspunkter i tabel 1. Selv om der blev observeret histologiske tegn på fastgørelsen og væksten af ​​tumor celleaggregater på omentum så tidligt som 8 dage efter i.p. podning (data ikke vist) brutto- og histologiske tegn på tumor og tumor stroma inden for forskellige organer sites (omtalt nedenfor) blev ikke oprettet indtil 80 til 177 dage efter inokulering (tabel 1). Ingen af ​​musene udviste nogen tydelige kliniske tegn på tumorudvikling i løbet af de første 10 ugers observation efter inokulation af tumor. Døden var ofte det første tegn på tumor transplantation. Én mus fra hvert forsøg døde uden evaluering, og blev ikke medtaget i den endelige analyse

Et afsnit af en papillær serøs adenocarcinom i æggestokkene farvet med hemotoxylin og eosin (H E farvning viser tegn på tumor (se pile) i peritoneal knude fra omentum (Aa og Ab), æggestok og periovarian fedt (Ac), bugspytkirtlen (Ad), uterus (Ae), milt (aF), og lever (Ag) . Disse tumorer resulterede fra i.p. injektion af tumorafledte celleaggregater afledt af en papillær serøs carcinom i æggestokken. Mus blev aflivet 140 dage efter inokulering. Lymfocytter (pil) blev observeret i sammenstilling med tumorcelle (pilespids) (Ba). Immunohistokemisk farvning (B) viser tilstedeværelsen af ​​humant CD45 + leukocytter (Bb), CD3 + T-celler (BC), CD20 + B-celler (BD), CD138 + plasmaceller (Be), og HLA + tumor nodule støder op til ovariet (Bf). Proliferation af tumorceller er vist ved positiv pletten med Ki67 (Bg), og bevis for stromale fibroblaster illustreret af trichromfarvning af kollagen se pile (BH). Pilespids viser tumorceller. Alle afsnit i A er på 100 × forstørrelse og i B sektionerne er 400 × forstørrelse.

Hyppigheden af ​​tumorer observeret histologisk i forskellige organer sites varierede fra tumor til tumor og fra mus til mus for hver tumor-afledt celle aggregat implanteret. I et typisk eksempel af organet distribution i 15 mus, 116 dage efter i.p. injektion af celleaggregater afledt fra faste tumorer i æggestokkene (Eksperiment 5A, tabel 1), blev påvist histologiske tegn på tumor i æggestokken af ​​10 mus, milten af ​​10 mus, leveren af ​​8 mus, og livmoderen af ​​2 mus. Det anses for sandsynligt, at dette organ websted engagement er en undervurdering af den faktiske hyppighed af tumorer i forskellige organer, fordi kun et lille område af hvert organ blev undersøgt histologisk.

Menneskelig CD45 +, CD3 +, CD20 +, CD138 + Leukocytter fibroblaster og prolifererende tumorceller er til stede i mikromiljø tumorxenografter

Sektioner af tumorknuder fjernet fra bughulen og farvet med hemotoxylin og eosin afslørede områder, hvor lymfocytter (se pilen) var til stede i sammenstilling med tumor celler (se pilespids) (fig. 3Ba). Immunhistokemisk farvning af dette væv fastslået, at de tumorassocierede lymfocytter blev humane CD45 + og inkluderet CD3 + T-celler, CD20 + B-celler og CD138 + plasmaceller (fig. 3BB-Be). Tumorceller farvedes positivt for HLA klasse I (fig. 3Bf), og omfattede deler sig aktivt Ki67-positive celler (fig. 3BG).

En trichrom plet af tumorknuder viste, at der ud over de inflammatoriske celler, fibroblaster var til stede i mikromiljø af tumorxenotransplantater (se pil) (fig. 3Bh). Fibroblasterne farves positivt for HLA klasse I (data ikke vist).

Vi konkluderer, at den histologiske arkitektur og cellulær sammensætning, herunder tumorceller, inflammatoriske leukocytter og fibroblaster af den oprindelige tumor væv opretholdes i længere perioder (op til 177 dage efter engraftment) i tumoren xenograft, og at tumorceller fortsat proliferere inden tumorknuder til stede i den peritoneale kavitet.

tumor Ascites Udvikling i NSG mus inokuleret med ovarietumor-Derived celleaggregater

Ovariecancerpatienter typisk udvikle en tumor ascites i de senere faser af deres sygdom [6], [7]. For at bestemme om tumor ascites udvikler i tumoren xenograft model blev NSG mus overvåges i længere perioder efter i.p. podning af tumorafledte celleaggregater. Udspilede underliv blev observeret i mus ved 14 uger efter tumorinjektion antyder tilstedeværelsen af ​​ascites. Paracentese bekræftede tilstedeværelsen af ​​ascites væske i bughulen af ​​mus. For at bestemme om levedygtige tumorceller var til stede i ascitesvæsken blev ascitesvæskerne fra tumor-bærende mus (frembragt af i.p. inokulering af æggestokkene tumorafledte celleaggregater fra tre forskellige patienter ovariecancer) injiceret i.p. i naive NSG mus. Syvogfirs til 94 dage efter inokulering mus havde histologiske tegn på tumorudvikling i æggestokken, livmoder, lever, milt og lunge (data ikke vist). De fleste af disse sekundære recipienter havde også udviklet ascites på dette tidspunkt. Disse resultater fastslår både tilstedeværelsen af ​​levedygtige tumorceller i ascitesvæsken af ​​den oprindelige tumorbærende mus, og evnen til at del-passage tumoren og derved udvide antallet af mus med tumorxenotransplantater. Tumorer har nu været succesfuldt sub-passage tre gange. Efter den tredje passage de tumorxenoplantater synes at være stort set blottet for menneskelige tumorassocierede fibroblaster og tumorassocierede lymfocytter.

Tilstedeværelse af CA125 i Sera og Ascites af æggestokkene tumor Bearing NSG Mus

CA125 er et højmolekylært glycoprotein, som er forhøjet i serum fra ca. 90% af patienter med fremskreden epitelial ovariecancer [8], [9], og bruges til at overvåge tumorprogression og respons på kemoterapi i patienter med ovariecancer [8]. Fordi den eneste kliniske tegn på tumor udvikling i mus var tumor ascites, der fandt sted meget sent, var det af interesse at bestemme, om der kunne påvises CA125 niveauer i NSG mus indpodede med æggestokkene tumor-afledt celle aggregater, og at fastslå, om denne markør kunne anvendes til periodisk overvåge tilstedeværelsen og progression af de humane tumorer i mus efter podning med tumoren. De celleaggregater blev afledt fra faste tumorer i tre forskellige ovariecancerpatienter med forhøjede serumniveauer ( 500 U /ml) af CA125. Hver af de tre tumorafledte celleaggregater blev injiceret i.p. i 10 NSG mus og CA125-niveauer i serum og ascites blev analyseret på forskellige tidspunkter efter podning med tumoren. Ved 80 dage post-tumor inokulation, CA125 var til stede i ascites og sera fra alle mus inokuleret med tumorer afledt fra tre forskellige patienter. I en af ​​de tre grupper mus blev dyrene tappet periodisk og serumniveauerne af CA125 bestemt. CA125 i serum steg med tiden og nåede et niveau på mere end 500 enheder /ml 100 dage efter tumor-afledt celle samlet inokulering. Mængden af ​​CA125 i ascites varierede betydeligt fra tumor til tumor nåede niveauer af 400-5800 enheder /ml 85-116 dage efter tumor-afledt celle samlet inokulering. Evnen til at detektere CA125 i serum og ascites tumor xenograft bærende mus er reflekterende af endnu en begivenhed, der er observeret i patienter med ovariecancer, og er betydelig, da den giver en måde at periodisk overvåge tilstedeværelsen og progression af tumoren, og i sidste ende at vurdere den terapeutiske effekt af forskellige behandlingsprotokoller.

metastatisk spredning af æggestokkene tumorxenoplantater fra bughulen i det pleurale rum

intra-abdominal sprede, at vi observerede ved ip inokulering af ovarietumor-afledt celleaggregater i NSG mus, og frembringelsen af ​​tumor ascitesvæske er i overensstemmelse med hvad der ses i Stage IIIc ovariecancer patienter [7]. På dette stadium af sygdommen kan involvere omentum, tarm mesenterium, abdominal peritoneale overflader, serøse overflade af tarmen og membranen. Mus, der havde udviklet tumor ascites ved 16 uger efter i.p. injektion af tumorafledte celleaggregater, havde brutto tegn på tumorer på de serøse overflader af tarmen og omentum og blev omhyggeligt undersøgt for diafragma tumor implantater. blev observeret brutto tegn på mulig vækst tumor på membranen af ​​12 ud af 15 mus inokuleret med tumorafledte celleaggregater. Histologisk analyse bekræftede tilstedeværelsen af ​​tumorvækst på membranen (figur 4A.)

H 100 dage giver mulighed for at undersøge den mulige rolle, som disse lymfocytter (og de biologisk aktive faktorer, de producerer, dvs. cytokiner og antistoffer ) spille i overlevelse og metastase af tumoren, og at afgøre, om det er muligt at manipulere disse lymfocytter, så de montere en effektiv anti-tumor-respons

in situ

.

diskussion

Siden den første rapport om vellykket transplantation af humane celler i CB-17-SCID-mus [1], har flere tusinde papirer offentliggjort på brugen af ​​disse og andre immundefekte mus til indpode menneskelige maligne og ikke-maligne væv i studier af human cancer, hæmatopoiese, adaptive og medfødte immunitet, infektionssygdomme, autoimmunitet og regenerativ medicin [2]. Musemodeller er blevet anvendt til at undersøge cancercellevækst og til præklinisk evaluere den terapeutiske effektivitet af immunbaserede og ikke-immune baseret behandlingsstrategier for kræft. Begrænsninger af disse tidligere modeller omfattede en betydelig medfødte immunrespons af de modtagende mus, der begrænsede varighed transplantatet og gjort det vanskeligt at fortolke resultaterne af terapeutiske undersøgelser af effekten. Disse xenograftmodeller undladt at rekapitulere de steder og mønstre af tumorvækst og i de fleste af de modeller co-transplantation af stromaceller med tumoren ikke blev etableret [3].

Vi rapporterer her et humaniseret model, der i højere grad paralleller mønstrene for tumorudvikling, som observeres i patienter med ovariecancer, end nogen anden tidligere beskrevet model. Vores model indfanger flere vigtige funktioner i menneskets ovariecancer ikke set i tidligere modeller. Det intra-abdominale spredning sammen med udviklingen af ​​ascites er slående lighed med, hvad der er observeret hos patienter. Den co-transplantation af tumor-associerede fibroblaster og T og B-lymfocytter, der forbliver levedygtig og funktionel i længere perioder giver mulighed for at undersøge den mulige bidrag af disse ikke-maligne celler, og de biologisk aktive faktorer, de producerer, til vækst og spredning af tumorcellerne.

ortotopisk engraftment og formidling af tumoren og co-transplantation af tumor-associerede immunkompetente celler med tumor stroma i denne nye humaniseret musemodel gør det muligt at studere

in vivo

interaktionen mellem lymfocytter og tumoren, lymfocytter og tumorassocierede fibroblaster og fibroblaster og tumoren. Det er tidligere blevet fastslået, at tumor stroma er kritisk for forhindre eller tillade immunologiske ødelæggelse af cancerceller [20]. Dette arbejde blev senere bekræftet [21] og udvides derefter viser, at tumorstroma fører til en T-celle medieret udryddelse af etableret tumor [22]. Orimo

et al.

Viste, at fibroblaster fra humane invasive brystcarcinomer signifikant forøget tumorvækst i xenograftmodeller [23]. Tumorassocierede fibroblaster har vist af andre for at forbedre eller undertrykke T-cellefunktion [24] – [26] og undergrupper af tumorassocierede T-celler er kendt for at interagere med tumorceller og gensidigt modulere hinanden [27]. Hvorvidt fibroblast eller leukocytter til stede i humane tumor mikromiljøer forbedre og /eller undertrykke tumorer stadig at blive etableret [28], [29]. Ved at nedbryde, funktionelt inhibering eller aktivering bestemte undergrupper af celler i tumorafledte celleaggregater inden inokulering i NSG mus virkningen på engraftment og efterfølgende intraabdominal spredning og metastase i den ekstra-abdominalt pleurale rum kan bestemmes, hvorved der etableres hvilke celler i tumor mikromiljø bidrager til tumor anholdelse eller forøgelse af tumor progression.

kræft i æggestokkene er oftest asymptomatisk i sin vorden, da de fleste patienter har udbredt sygdom på diagnosetidspunktet [30]. Nye indsigter i patogenesen og oprindelsen af ​​serøs ovariecancer kan i sidste ende føre til en tidligere diagnose af sygdommen. Stigende beviser har vist, at de fleste eller alle high-grade serøse ovariecarcinomer oprindelse i æggelederne [31], [32]. Forhøjede serumniveauer af CA125 (en tumormarkørproteinet) findes i 90% af patienter med fremskreden ovariecancer, men forholdsvis få patienter med stadium I-sygdom er CA125 positive. Tilsvarende mus inokuleret i.p. med tumor-afledt celle aggregater viser ingen kliniske tegn på tumorer i mindst 80 dage, hvor forhøjede CA125 niveauer i sera blev først opdaget. Serum CA125 niveau steg derefter hurtigt nå niveauer, der overstiger 500 enheder /ml ved dag 100 indlæg podning. På dette tidspunkt og uden for musene udviste en patologi i overensstemmelse med Stage IIIc og IV af ovariecancer, dvs. tegn på intra-abdominal spredning i flere orgel sites, diafragma implantater, udvikling af tumor ascites og ekstra-abdominal spredning i det pleurale rum med metastaser til lungen [7].

medens CA125-niveauer er en pålidelig indikator for tilstedeværelsen og udvidelse af ovarietumorer hos patienter og i vores humaniseret musemodel, er det ikke egnet til tidlig tumorpåvisning i enten patienter eller hos mus inokuleret med tumorafledte celleaggregater. Imidlertid er serumniveauer af CA125 øjeblikket anvendes til effektivt at overvåge ovariecancer patienternes respons på kemoterapi og kirurgi [8]. Denne biomarkør er også blevet anvendt som en prognostisk indikator for patienter med ovariecancer. Vi forventer, at serum CA125 niveauer vil også være et meget nyttigt kvantificerbar markør til at overvåge periodisk og sammenligne

in vivo

terapeutiske virkninger i vores humaniseret musemodel.

Den forbedrede evne af små aggregater af tumor og ikke-maligne tumorceller indfører, vokse og spredes i bughulen (sammenlignet med fast ikke-forstyrret stykker af tumorvæv) kan afhænge af evnen hos små celleklynger at overleve i første omgang indtil en tilstrækkelig vaskulær forsyning er etableret for at tillade tumorekspansion . Succesen af ​​indpodning af tumorafledte celleaggregater kan også afhænge delvis af bidraget af biologisk aktive faktorer produceret af de ikke-maligne celler i celleaggregater, der producerer tumor vækstfaktorer og stimulanser til angiogenese. Tumormasser oftest forekommer først i kraniale områder af peritonealhulen nær og inden for omentum. Positionen af ​​tumorknuder samt øget vækst af celleaggregater og langsom progression af tumorerne til andre organer kan stamme fra den første tilkobling af tumoren celleaggregater til stærkt vaskulariserede områder i omentum kaldet matte pletter. Disse adskilte områder blev først anerkendt af Ranvier [33] og er blevet vist at være steder, hvor tumorer vedhæfte fortrinsvis og proliferere efter i.p. injektion af flere forskellige murine tumorcellelinjer og en human ovarie tumorcellelinie i mus [34], [35].