PLoS ONE: ENTPD5 fremkalder apoptose i Lung Cancer Cells via Regulering Caspase 3 Expression

Abstrakt

Denne undersøgelse er at undersøge sammenhængen mellem ectonucleoside trifosfat diphosphohydrolase 5 (ENTPD5) udtryk og lungekræft klinisk-patologiske faktorer, og virkningen af ENTPD5 på lunge kræft celle funktioner. Lungekræft prøver og matchede tilstødende normale væv blev opnået fra patienter uden præoperativ strålebehandling eller kemoterapi. Knockdown af ETNPD5 ekspression medførte signifikant nedsat lungecancer cellevæksthastigheden, markant forøget apoptose og evnen til at reparere, og væsentligt reduceret invasion. Gene chip test viste, at knockdown af ENTPD5 udtryk forårsagede mere Caspase udtryk. Kvantitativ real-time polymerasekædereaktion viste, at Caspase 3-ekspression blev signifikant øget efter knockdown af ENTPD5. Desuden immunohistokemi viste, at tumorvækst markering, prolifererende cellekerneantigen, blev signifikant reduceret i knockdown model. Tumorigenicitet assay og terminal deoxynucleotidyltransferase-medieret dUTP nick-endemærkning assay viste, at apoptose af lungecancerceller blev forøget i knockdown model. Vores resultater antyder, at ENTPD5 påvirker lungekræft apoptose via caspase 3 pathway, og kan potentielt anvendes til at overvåge prognosticering eller at vejlede egnede behandlingsregimer

Henvisning:. Xue Y, Wu L, Liu Y, Ma Y, Zhang L, Ma X, et al. (2015) ENTPD5 fremkalder apoptose i Lung Cancer Cells via Regulering Caspase 3 Expression. PLoS ONE 10 (3): e0120046. doi: 10,1371 /journal.pone.0120046

Academic Redaktør: Yi-Hsien Hsieh, Institut for Biokemi og Bioteknologi, TAIWAN

Modtaget: 23. oktober 2014 Accepteret: 3 februar 2015; Udgivet: 20 Marts 2015

Copyright: © 2015 Xue et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af Beijing Science New Star Plan (nr Z11111005450000) og National Natural Science Foundation of China (nr 81.101.598)

Konkurrerende interesser.: forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

Lungekræft, en af ​​de mest almindelige maligne tumorer, er den førende årsag til kræft dødsfald på verdensplan [1]. Ikke-småcellet lungecancer (NSCLC) omtrent udgør 80% af tilfældene lungekræft [2]. Lungekræft betragtes som en slags genetisk sygdom, hvor afvigende endogene patogene genekspression bidrager til genomisk ustabilitet, som øger motilitet og invasionsevne af kræftceller, hvilket fører til de særlige kendetegn ved invasionsevne. Trods vellykket behandling af den primære malignitet, tilbagefald og efterfølgende fjernmetastase stadig forekomme i mere end en fjerdedel af postoperative patienter [3]. Derfor bør udføres postoperative opfølgning rutinemæssigt at søge efter tidlig metastase at reducere dødeligheden. Ifølge nyere forskning har overekspression af specifikke gener under carcinogenese blevet påvist i flere lungecancere, såsom epidermal vækstfaktorreceptor [4-6], human epidermal vækstfaktorreceptor-2 [7], p53 [8] og B-celle lymfom-2 [9]. Inhibering af apoptose af tumorceller sædvanligvis involverer mange vigtige gener, som kan være funktionelt knyttet til ubegrænset kræft cellulære progression såsom proliferation, migration og invasion. Til sidst, kan kræftceller metastaserer til fjerne organer og truer levetid. Gener og proteiner, der regulerer tumor aggressivitet kan tjene som prognostiske markører og /eller terapeutiske mål for lungekræft. Derfor er det nødvendigt at udvikle meget følsomme og specifikke diagnostiske gener /biomarkører at fremme nøjagtighed i tidlig diagnosticering af metastase. Ved nu, er der rapporteret flere gener til at deltage i forskellige patologiske processer og væsentlig indflydelse på aggressivitet af kræftceller, såsom ALK [10], kallikrein-relaterede peptidase 8 gen [11], og RAS [12].

Ectonucleoside triphosphat diphosphohydrolase 5 (ENTPD5) er en slags enzym i det endoplasmatiske reticulum, som hydrolyserer UDP til UMP at fremme protein N-glycosylering og foldning i det endoplasmatiske reticulum. ENTPD5 protein er karakteristisk fra andre NTPDases, da det er det eneste medlem, der er beskrevet som en proto-kræftpsykologisk protein [13]. ENTPD5 er rapporteret at fremme celleproliferation og Warburg virkning [13]. Foreliggende beviser bekræfter, at ENTPD5 deltager i flere cellulære funktionelle processer og fremmer invasion evne prostatacancerceller ved hjælp af proteinkinase Cδ [14]. Desuden er det konstateret, at lægemiddelresistens af prostatacancer under platinbaseret kemoterapi er relateret til protein kinase Cδ-medieret stabil status over B-celle-lymfom-2 [15]. Tidligere undersøgelser fremhæver også betydningen af ​​ENTPD5 der er forbundet med tumordannelse og kræft progression af prostatacancer-cellelinier. Disse resultater viser, at nedregulering af ENTPD5 udtryk negativt påvirker evnen til tumorceller til at overleve under ugunstige forhold.

Der er en masse af rapporter om forholdet mellem ENTPD5 og ondartet tumor vækst, men der er næsten ingen rapportere om sammenhængen mellem ENTPD5 og lungekræft. For nylig, Curry et al. rapporterede, at undertrykkelse af ENTPD5 i PTEN null dyremodel er tilstrækkelig til at mindske insulin-lignende vækstfaktor 1 receptor niveauer, og til at sensibilisere bronchiolær tumorceller til serum sult

in vitro

til kostbegrænsninger

in vivo

[16]. Denne undersøgelse bekræfter, at ENTPD5 kan være relateret til forekomsten af ​​lungekræft i dyreforsøg.

I betragtning af mangel på ENTPD5 forskning i lungekræft og den vigtige rolle, ENTPD 5 i processen med tumorudvikling, vi designet dette undersøgelse for at forstå den detaljerede rolle ENTPD5 i lungekræft cellevækst og invasion proces. Desuden vil vi gerne at afgøre, om ENTPD5 er et lovende mål i terapi for lungekræft.

Materialer og metoder

Cells

Alle lungekræft-cellelinjer, herunder A549, PC9, H1650, H1975, H1299 Skmes-1, og GLC82, blev indkøbt fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) og dyrket i RPMI-1640 suppleret med 10% føtalt bovint serum (Gibco, USA ), 100 U /ml penicillin, og lg /ml streptomycin (Invitrogen, Grand Island, NY, USA) i en fugtig atmosfære af 5% CO

2 og 37 ° C.

sekvenserne af ENTPD5 siRNA og ikke-dæmpende kontrol siRNA var 5’CCUGGGAUUUGGAUUGAAATT -3 ‘og 5’UUUCAAUCCAAAUCCCAGGTT -3 «, henholdsvis. De siRNA’er blev genereret af Genepharma (Shanghai, Kina). De siRNA’er blev transficeret ind A549-celler og PC9 celler under anvendelse af Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ved at følge fabrikantens protokol.

Patienter Salg

LUNGECANCER prøver (n = 131) og matches tilstødende normale væv blev opnået fra patienter uden præoperativ strålebehandling eller kemoterapi på Beijing Cancer Hospital fra 1999 til 2011. Forudgående skriftlig og informeret samtykke blev opnået fra alle patienter og eller deres familier. Undersøgelsen blev godkendt af den etiske komité i Peking University. Klinisk-patologisk karakteristika af tumorer blev defineret i henhold til tumor node metastaser iscenesættelse system i Unionen for International Cancer Control. Klinisk-patologisk faktorer er vist i tabel 1.

Immunhistokemi

primær pulmonal cancer prøver blev fikseret og paraffin-indstøbt. Sektioner (5 um) blev rutinemæssigt behandlet og farvet med et kanin-monoklonalt anti-ENTPD5 antistof (Sigma-Aldrich, Poole, Dorset, UK) ved en koncentration på 2 ug /ml, efterfulgt af inkubering med peberrodsperoxidase-konjugeret kanin anti -rabbit sekundært antistof (Sigma-Aldrich, Poole, Dorset, UK). Positiv farvning områder i hele vævssnit blev gradueret af procentdelen af ​​positivt farvede celler: 0, for 25%; 1, for 25-49%; 2, for 50-74%; og 3 for 75-100%. I denne undersøgelse 0 ansås negativ eller moderat farvning, mens 1, 2 og 3 blev betragtet som positive farvning.

Kvantitativ real-time polymerasekædereaktion (QRT-PCR)

Totalt RNA blev ekstraheret ved anvendelse af TRIzol-reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ved at følge fabrikantens protokol. For moden miRNA kvantificering blev en polyA hale tilsat til totalt RNA (100 ng) af polyA-polymerase (New England Biolabs, Beverly, MA, USA), efterfulgt af revers transkription med oligo-dT adapter primere og Moloney leukæmivirus (Invitrogen, USA). cDNA’er blev syntetiseret ved anvendelse af 2 ug totalt RNA under anvendelse af iScript cDNA syntese kit (Bio-Rad, Hemel Hempstead, UK). Primere til ENTPD5 og GAPDH er anført i tabel 2. GAPDH blev anvendt som indlæsning kontrol. QRT-PCR blev udført ved hjælp af SYBR Green PCR Master Mix (Toyobo, Osaka, Japan) på Light-Cycler 480 Real-Time PCR System (Roche, USA). Den relative mængde af miRNA eller gener blev normaliseret til GAPDH. Data blev beregnet på grundlag af 2

-ΔCt hvor ACt = Ct (Target) -Ct (reference). Fold ændring blev beregnet under anvendelse af 2

-ΔΔCt metode.

Western blotting

Proteiner blev ekstraheret fra celler under anvendelse RIPA-buffer indeholdende komplet proteaseinhibitorcocktail (Roche, Mannheim, Tyskland ). Proteiner blev separeret ved anvendelse af natriumdodecylsulfat polyacrylamidgelelektroforese og overført til polyvinyliden fluorid membraner. Membranerne blev derefter blokeret med 5% fedtfri tørmælk i TBST (15 mM Tris-HCI, pH 7,4, 0,9% NaCl og 0,05% Tween-20, pH 7,4) efterfulgt af blot-analyse under anvendelse af bestemte antistoffer: kanin monoklonalt anti-humant ENTPD5 antistof (Sigma-Aldrich, Poole, Dorset, UK), og kanin-anti-kanin sekundært antistof (1: 1.000). Immunreaktive bånd blev påvist under anvendelse SuperSignal West Femto Chemiluminescent Substrate. Eksperimenter blev udført mindst to gange med ensartede resultater.

Celleproliferationsassay

Celleproliferation blev bestemt under anvendelse celletælling kit-8 assay. Celler (2 x 10

3) blev dyrket i 96-brønds dyrkningsplader. Cellerne blev resuspenderet i RPMI-1640 medium indeholdende 10% FBS, og opdelt i grupper før dyrkning i 0, 24 eller 48 timer. Antallet af levedygtige celler blev bestemt ved måling af absorbans ved 450 nm ved anvendelse Fluostar OPTIMA (BMG LAB-TECH, Offenburg, Tyskland) ifølge producentens instruktioner. Hvert forsøg blev udført tredobbelt

Flowcytometri

Celler blev høstet og analyseret for apoptose ved anvendelse af Annexin V-FITC PI apoptose afsløring kit (IMGENEX, USA) ifølge producentens instruktioner. Celler blev analyseret i FACSCalibur Analyzer (Becton-Dickinson, USA) under anvendelse af CellQuest Pro software.

Transwell invasion assay

Transwell invasion assay blev udført ved at følge producentens retningslinier. Kort fortalt, 5 × 10

4 celler dyrket i RPMI-1640-medium suppleret med 0,1% FBS blev udpladet i plader med 24 brønde indeholdende RPMI-1640-medium suppleret med 10% FBS som kemoattraktant. Efter 24 timer, celler, som vandrede gennem og klæbet til den anden side af insertet blev fikseret og farvet med 0,5% (w /v) krystalviolet. Invaderende celler på bunden af ​​filtrene blev afbildet under anvendelse af fluorescensmikroskopi. Fem high-power felter blev talt pr filter for at score invasion. Antallet af celler blev kvantificeret under anvendelse af ImageJ software.

sårheling assay

Celler blev dyrket til konfluens i 6-brønds skåle før skrabe med en 200 pi pipettespids. Debris blev fjernet ved omfattende vask med phosphatbufret saltvand (PBS), og cellerne blev yderligere inkuberet i yderligere 24 timer eller 48 timer efter skaden.

cDNA microarray analyse

Totalt RNA blev ekstraheret under anvendelse TRIzol fremgangsmåden (Invitrogen, Carlsbad, CA), oprenset med RNeasy mini kit (Qiagen, Valencia, CA, USA), behandlet på en GeneChip Expression 3′-amplifikationsreagenser kit (Affymetrix, USA), og afhørt med en Affymetrix Primeview human Gene Expression Array. RNA blev yderligere oprenset under anvendelse af RNeasy mini kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) ifølge Affymetrix introduktioner. Til ekspression array analyse, blev total RNA (250 ng) anvendes til at generere biotin-mærket cRNA ved anvendelse af GeneChip Expression 3′-amplifikationsreagenser Kit (Affymetrix, USA) ifølge producentens protokol. Den cRNA blev hybridiseret til Affymetrix Primeview Human Gene Expression Array og scannet ved hjælp af en Affymetrix GeneChip vifte Scanner 3000 7G.

Tumorigenicitet assay

Seks uger gamle Balb /c athymiske nøgne mus (Vitalriver laboratoriedyr, Beijing, Kina) blev subkutant injiceret i højre fløj med 2,0 × 10

6 celler i 0,1 ml PBS. Når tumorer blev dannet, blev udført tykkelsesmålinger dagligt og tumorvolumen (V) blev beregnet ved anvendelse af formlen V = (L × B

2) /2, hvor L var længden og W var bredden af ​​tumoren. Når tumorerne nåede et gennemsnit volumen på 30-69 mm

3 blev musene tilfældigt inddelt i tre grupper (n = 6) til daglig intratumoral injektion af ENTPD5-siRNA og negativ kontrol i 16 dage. For hver injektion blev 15 ug miRNA blandet med 15 uL

in vivo

transfektionsreagens (Entranster-in vivo, Engreen, Kina). Vækstkurver blev afbildet under anvendelse af gennemsnitlig tumorvolumen i hver forsøgsgruppe ved flere tidspunkter. Tumorvolumenerne af musene blev registreret i 16 dage, hvorefter musene blev aflivet. De dissekerede tumorer blev opsamlet og forberedt til efterfølgende analyser. Alle eksperimenter dyr blev godkendt af dyret centrum af Beijing Cancer Hospital.

Terminal deoxynucleotidyltransferase-medieret dUTP nick-end mærkning (TUNEL) assay

Terminal deoxynucleotidyltransferase-medieret dUTP nick-end mærkning (TUNEL) assay kit (in situ Celledød Detection kit, Beyotime Institute of Biotechnology, Kina) blev anvendt til vurdering af antallet af apoptotiske celler. Frosne snit blev fikseret i 4% paraformaldehyd i pH 7,4 PBS i 1 time ved stuetemperatur og permeabiliseret i PBS med 1,0% Triton X-100 i 2 minutter. De brudte DNA ender af døde celler blev mærket under anvendelse af TUNEL-kit ifølge producentens protokol.

Statistisk analyse

Statistisk analyse blev udført under anvendelse af SPSS-version 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA ). Mann-Whitney-test blev anvendt til analyse af kontinuerlige variabler. Chi-square test blev Fishers eksakte test eller envejs ANOVA-test til analyse af kategoriske variable. P 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

ENTPD5 scoringer er korreleret til køn, røg historie og tumor etaper, med den negative udtryk for ENTPD5 fører til længere overlevelsestid

Til detektere ENTPD5 ekspression i lungekræft væv blev lungecancerceller farvet for immunohistokemisk analyse. Kræftceller viste stærk og diffus cytoplasmatisk farvning af ENTPD5 (fig. 1A-D). Høj score af ENTPD5 (1-3) i NSCLC blev fundet i 32 tilfælde (24,4%). Blandt alle de tilgængelige parametre, viste sex, røg historie og tumor stadier signifikant sammenhæng til ENTPD5 scores (P 0,05) (tabel 1). Univariate analyse af virkningen af ​​ENTPD5 udtryk status på prognosen viste, at længere overlevelsestid var signifikant korreleret med negativ udtryk for ENTPD5 (gennemsnitlig overlevelsestid, 81 måneder vs 45,6 måneder, P 0,001). Kaplan-Meier overlevelse kurve, baseret på ENTPD5 ekspression score, viste, at den kumulative overlevelsestid for patienter med ENTPD5 negativ ekspression (score = 0, n = 96) var signifikant længere end for patienter med høje niveauer af ENTPD5 (scores = 1- 3, n = 31) (fig. 1E). Disse data antyder, at ENTPD5 score er korreleret til køn, røg historie og tumor stadier, hvor det negative ekspression af ENTPD5 fører til længere overlevelse.

ENTPD5 farvning af lungekræft væv med (A) score 0, (B ) score 1+, (C) score 2+, og (D) score 3+. (E) Kaplan-Meier analyse af sammenhængen mellem den samlede overlevelse af patienter med lungecancer og udtrykket status ENTPD5 protein (P 0,001).

Hæmning af ENTPD5 udtryk reducerer lungekræft cellevækst og øger deres apoptose sats

in vitro

for at teste effekten af ​​ENTPD5 på lungekræft cellevækst og apoptose

in vitro

, vi med succes opbygget de forbigående transfektion celle modeller. Evaluering af ENTPD5 ekspressionsniveauerne i forskellige lungekræft linjer, herunder H1975, H1650, H1299, A549, GLC82, PC9 og SKMES1, viste, at SKMES-1 havde den højeste relative ENTPD5 udtryk (fig. 2A). Desuden knockdown af ENTPD5 inducerede faldt betydeligt ENTPD5 ekspressionsniveauer i PC9 og A549-celler (fig. 2B og C). Desuden cellevækst assay på PC9 og A549 celler med moderat udtryk for ENTPD5 viste, at knockdown af ENTPD5 væsentligt reduceret væksten af ​​lungekræft celler (Fig 2D og E.) (P 0,001). Apoptose analyse på PC9 og A549-celler viste, at knockdown af ENTPD5 øget celle apoptose sats sammenlignet med kontrolgrupper (P 0,05) (fig 2F.). Disse data indikerer, at inhibering af ENTPD5 ekspression reducerer lungekræft cellevækst og øget deres apoptose rate

in vitro

.

(A) Ekspression af ENTPD5 i forskellige lungecancer-cellelinjer. Relativ ENTPD5 ekspression i (B) PC9 og (C) A549-celler bestemt ved QRT-PCR og Western blotting. Vækst evne (D) PC9 og (E) A549-celler efter knockdown af ENTPD5 genet bestemt ved vækst-assay. (F) apoptose af PC9 og A549-celler efter knockdown af ENTPD5 genet bestemt ved flowcytometri. Data er middelværdier ± SD. Dobbelt stjerner angiver værdier, der er væsentligt forskellige fra hinanden.

nedregulering af ENTPD5 udtryk nedsætter invasionen evne og motilitet af lungekræft celler

in vitro

for at undersøge effekten af ​​ENTPD5 på lungekræft celleinvasion og motilitet

in vitro

, transwell invasion assay og sårheling assay blev udført. Transwell invasion assay viste, at nedregulering af ENTPD5 ekspression signifikant hæmmet invasionen evne PC9 og A549-celler (P = 0.000142 og P = 0,00158, henholdsvis) (fig. 3A). Sårheling assay viste, at ned-reguleret ekspression af ENTPD5 faldt dramatisk motilitet PC9 og A549-celler fra 24 timer til slutningen af ​​forsøgene sammenlignet med kontrolceller (fig. 3B og C). Disse data antyder, at nedregulering af ENTPD5 ekspression nedsætter invasion evne og motilitet af lungekræft celler

in vitro

.

ENTPD5-KD eller KD angiver knockdown af lungekræft cellelinier. Data er middelværdier ± SD. Dobbelte stjerner angiver værdier, der er signifikant forskellige fra hinanden (P 0,05). (B) Sårheling af PC9 og A549-celler efter knockdown af ENTPD5 gen sammenlignet med vildtype (WT) og normal kontrol (NC) modeller ved 0, 24 eller 48 timer. Under invasion og sårheling eksperimenter blev caspase 3 tilsat for at inhibere celle apoptose.

Caspase 3 kan spille en vigtig rolle i apoptose af lungecancerceller efter knockdown af ENTPD5

for at forstå de virkningsmekanismer af proteiner relateret til lungekræft celle apoptose efter knockdown af ENTPD5, vi udførte gen chip analyse på PC9 og A549 celler, som hovedsagelig blev fokuseret om testning af celle apoptose pathway. For PC9 celler, knockdown af ENTPD5 øget ekspression af nogle gener med mere end 1,5 gange sammenlignet med kontrol, herunder CASP4, APAF1, BCL2L11, CASP7, og BCL2A1. For A549-celler, knockdown af ENTPD5 øgede ekspression af nogle gener med mindst 2 gange sammenlignet med kontrol, herunder CASP7, MDM2, og BIRC3 (fig. 4A). Af note, Caspase 7 (CASP7), et medlem af caspase 3 undergruppe, udviste signifikant forøget ekspression efter ENTPD5 knockdown i begge PC9 og A549-cellelinier (fig. 4A). Disse data antyder, at caspase 3 kan spille en vigtig rolle i apoptose af lungecancerceller efter knockdown af ENTPD5.

(A), Gene chip test viser pathway analyse, var forbundet med apoptose. Caspase-gen overekspression blev observeret i PC9 og A549-celler efter knockdown af ENTPD5. (B) QRT-PCR-test viser caspase 3-ekspression i PC9 og A549-celler efter knockdown af ENTPD5. Data er middelværdier ± SD. Stjerner angiver værdier, der er signifikant forskellige fra NC-gruppen (P ii) ufølsomhed over for vækst-hæmmende signaler; iii) resistens over for signaler af apoptose; iv) ubegrænset spredning potentiale; v) vedholdende angiogenese; og vi) invasion og metastase [17]. Kræftceller åbenbart komplekse genetiske afvigelser, som opstår under etapevis carcinogenese. Nogle molekylære afvigelser er mere tilbøjelige end andre til at påvirke den kliniske adfærd kræft, herunder risiko for metastaser. Sådanne afvigelser, når identificeret, kan potentielt tjene som prognostiske markører, som er tumor egenskaber, der kan påvirke og forudsige det kliniske resultat af cancerpatienter.

overekspression af visse markører, såsom vaskulær endotelvækstfaktor [18] , epidermal vækstfaktor receptor [4-6], human epidermal vækstfaktorreceptor-2 [7], p53 [8] og B-celle-lymfom-2 [9], har vist korrelation med dårlig prognose. I denne undersøgelse immunhistokemi-analyse bekræftede den specifikke overekspression af ENTPD5 protein i lungekræft væv. Yderligere undersøgelser på samlet overlevelse tyder på, at øget ekspression af ENTPD5 er forbundet med dårligere prognose. Disse observationer afslører potentialet i ENTPD5 som prognostisk indikator.

ENTPD5 er identificeret som et centralt element i Akt /phosphatidylinositol 3-kinase /phosphatase og tensin homolog regulatorisk løkke, i stand til at synergizing aerob glykolyse [19,20 ]. Nogle forskere viser, at overekspression af ENTPD5 påvirker væksten af ​​mange tumorer, såsom gliomablastoma [20], brystkræft [21], livmoderhalskræft [22], testikelkræft kønsceller tumor [23], og larynx neoplasi [24]. Tumorgenese er en multi-trins proces, der involverer cellevækst, invasion, metastase, og angiogenese. Undersøgelse af effekten af ​​ENTPD5 i cellulær progression proces viser, at ned-ekspressionen af ​​ENTPD5 i A549 og PC9 cellelinjer signifikant nedsætter de grader af celleproliferation, apoptose og migration. Tilsammen indikerer disse data, at ENTPD5 kan virke som et onkogen at spille vigtige roller i reguleringen af ​​forskellige cellulære processer, der fremmer neoplastisk progression på flere niveauer. Ikke desto mindre er de mekanismer, hvorved ENTPD5 udøver sin virkning i bestemte signalveje har brug for yderligere undersøgelser.

NSCLC celler er apoptose-resistente. Strategier til at de-undertrykker endogene caspaseinhibitorer i NSCLC tyder lovende aktivitet i modelsystemer og præsentere en rationel og helt ny strategi til forbedring behandling af lungekræft. Apoptose er organiseret af den sekventielle aktivering af caspaser, en familie af cysteinproteaser med specificitet for asparaginsyrerester. To veje kan mediere apoptose: i) dødsreceptorer pathway (tumornekrosefaktor, Fas ligand eller TRAIL-receptorer), der aktiverer caspase 8 og 10, og ii) det mitokondrielle pathway, der aktiverer caspase 9. Begge veje fører til effektor-caspaser 3, 6 og 7 [25]. Vores forskning har bekræftet forholdet mellem ENTPD5 og caspase 3 i celleniveau og dyreforsøg. Forståelse af molekylære grundlag af denne fænotype er kritisk, hvis terapi er at bevæge sig ud over den terapeutiske plateau, der er opnået med konventionel kemoterapi. Caspase 3 ekspression kan være forbundet med følsom proces med kemoterapi eller stråling [26]. MacCarthy et al. rapporterede, at unormal ekspression af ENTPD5 i humane kolorektal carcinom celler kan påvirke ATP-niveauer og modstanden mod oxaliplatin, en kolorektal cancer-relevant kemoterapeutisk middel [27]. Villar et al. også fundet forholdet mellem ENTPD 5 og kemoterapi respons i prostatacancer 15]. Det forekommer, at ENTPD5 ekspression ikke kun kan være en kraftfuld reporter for metabolisk skift i tumorceller, men også en mulig indikator for tumor kemoterapi responser. Denne undersøgelse viste, at ENTPD5 hæmmede apoptose af lungekræft celler gennem caspase 3. Forholdet mellem kemoterapi effekt og ENTPD5 behov for yderligere forskning i fremtiden. Afslutningsvis ENTPD5 genet er afgørende i NSCLC. Det kunne potentielt bruges til at overvåge prognose eller at vejlede egnede behandlingsregimer.

Tak

Dette arbejde blev støttet af Beijing Science New Star Plan (nr Z11111005450000) og National Natural Science Foundation of China (nr 81.101.598).