PLoS ONE: Novel 3D Co-Culture Model for Epiteliale-stromacellers Interaktion i prostata Cancer

Abstrakt

parakrin funktion er en vigtig mekanisme for celle-celle kommunikation i vævet mikromiljø i normal udvikling og sygdom.

In vitro

cellekultur modeller simulerer væv eller tumor mikromiljø er nødvendige redskaber til at afgrænse epitel-stromale interaktioner herunder parakrin funktion, men en ideel tredimensionel (3D) tumor model specifikt studerer parakrin funktion er i øjeblikket mangler. For at udfylde dette tomrum udviklede vi en hidtil ukendt 3D co-kultur model i tolags alginat hydrogelmikrosfærer, inkorporerer prostatakræft epitel- og stromale celler i adskilte rum i mikrokuglerne. Cellerne forblev begrænset og levedygtig inden for deres respektive i mere end 30 dage. Som bevis på princippet om parakrine funktion af modellen, målte vi Shedded bestanddel af E-cadherin (sE-cad) i de konditionerede medier, en større membranbundet celle klæbemiddel molekyle, der er stærkt dysreguleret i cancere, herunder prostatacancer. Ud over at påvise, at sE-cad pålideligt kan kvantificeres i det konditionerede medier, tidsforløbet eksperimenter viste også, at mængden af ​​sE-cad påvirkes af epitel-stroma interaktion. Konklusionen er, at undersøgelse fastslår en ny 3D

in vitro

co-kultur model, der kan bruges til at studere celle-celle parakrin interaktion

Henvisning:. Fang X, Sittadjody S, Gyabaah K, Opara EF, Balaji KC (2013) Novel 3D Co-Culture Model for Epiteliale-stromacellers Interaktion i prostatakræft. PLoS ONE 8 (9): e75187. doi: 10,1371 /journal.pone.0075187

Redaktør: Elad Katz, AMS Biotechnology, England

Modtaget: Juni 3, 2013; Accepteret: August 11, 2013; Udgivet: 20 September, 2013

Copyright: © 2013 Fang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde understøttes af Wake Forest University institutionelle fonde til KC Balaji og NIH tilskud CA079448 til X. Fang. Funder hjemmeside er https://www.wakehealth.edu/. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet.

Konkurrerende interesser: Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Flere af de

in vitro

celler co-kultur modeller til rådighed til. undersøgelse celle-celle interaktioner bruge todimensionale (2D) petriskåle eller plader [1,2,3]. Men i de fleste levende organismer celler er indlejret i en tredimensional (3D) mikromiljø, omgivet af andre celler og påvirket af opløselige faktorer secerneres i det ekstracellulære miljø. Alternativt sandwich modeller kan anvendes til flerlags vækst af celler, men begrænsninger er indlysende, som celler ville ændre deres morfologiske træk, metabolisme og genekspressionsmønstre i 2D kultur, især når de er fra højere organismer [4,5]. Desuden konventionelle 2D cellekulturer begrænser cellulære kommunikation og transport af opløselige faktorer, ilt og næringsstoffer, fjernelse af affald og cellulære stofskifte som til stede i native biologiske miljøer [6,7]. Derfor er det afgørende at udvikle

in vitro

modelsystemer, der simulerer væv mikromiljøer til at producere pålidelige og biologisk meningsfulde eksperimentelle resultater.

3D modellering systemer simulerer væv mikromiljø blev udviklet til at løse begrænsninger forbundet med 2D modeller [8]. Mens 3D

in vitro

cellekultur modeller overvinde flere begrænsninger af 2D modeller, forbedring i 3D-modellering er nødvendig for at diskriminere bestemte typer celle-celle interaktion såsom celle-celle direkte, autokrine eller parakrine funktioner. Fremskridt i biomaterialer og naturnær teknikker tillader brug af nye materialer såsom kollagen geler, laminin og Matrigel ™ i cellekultur, udvikle syntetisk ekstracellulær matrix og skabe en bred vifte af 3D-modeller [5,9,10,11,12,13,14, 15]. Blandt de biomaterialer tilgængelige, besidder alginat hydrogel foretrukne egenskaber til celletransplantation, drug delivery og vævsmanipulering. Alginat er et polysaccharid og en biokompatibel polymer afledt af brunalger. Ved tilsætning af divalente kationer, såsom calcium eller barium, kan alginat polymerer være ionisk tværbundet til dannelse af en hydrogel. Den hydrofile karakter af alginat stilladser giver høj celle belastning, der forbliver levedygtige og funktionelt i kultur [16,17,18]. Desuden er produktionen af ​​alginat hydrogel er relativt enkel og indkapsling kan opnås under ikke-stringente betingelser. Forskellige celletyper, herunder neuronale celler, osteoblaster, chondrocytter, myoblaster, er blevet indkapslet, kultiveret og udvidet i alginathydrogeler [19,20,21,22,23].

I denne undersøgelse har vi etableret en 3D-prostatakræft epitel-stroma interaktion i alginat hydrogelmikrosfærer ved co-dyrkning prostatacancer c4-2 celler (stabilt transficeret med proteinkinase D1 (pKD1) eller kontrol-vektor) og normale prostata stromale celler (WPMY-1-celler) i den samme mikrokapsel, men i separate underlag. Dette system er ideelt til at studere parakrin indflydelse mellem de to celletyper fordi direkte samspil mellem epitel og stromaceller ikke er tilladt. Som et bevis på princippet at studere parakrin funktion, vi målte udskillelsen af ​​E-cadherin (sE-cad) i opløselige medier. SE-cad er en 80 kDa spaltede fragment af E-cadherin, en transmembrane celle klæbende protein, der er dysreguleret i flere kræftformer, herunder prostata [3,24,25,26]. Forhøjet sE-cad er blevet rapporteret i væsker og serum fra patienter med forskellige cancere og andre sygdomme [25,27,28,29,30] og serumniveauer er blevet vist at korrelere positivt med metastatisk prostatacancer og sygdomstilbagefald. Således er sE-cad foreslået at være en hidtil ukendt biomarkør for cancer prognose. Vi har tidligere beskrevet den nedregulering af pKD1 i fremskreden prostatacancer [31], og at pKD1 fremmer E-cadherin kaste gennem øget matrixmetalloproteinaser (MMP’er) -2 og -9 sekretion [24].

Materialer og Metoder

Cell Culture

c4-2 celler stabilt transficeret med pcDNA3.1 vektor (vektor celler) eller pKD1-GFP (pKD1 celler) blev udviklet i vores laboratorium som beskrevet tidligere [31]. Normal prostata stromale celler (WPMY-1) blev opnået fra ATCC. Celler blev dyrket i DMEM-medium (høj glucose) (HyClone, Cat # SH30243.01) med 10% FBS og 1% Antibioltic-antimykotika (HyClone Cat # SV30079.01) i 15-cm steril dyrkningsplade og inkuberes ved 37 ° C med 5% CO

2. Når cellerne nåede 80% konfluens blev mediet fjernet fra hver plade, og cellerne blev vasket med sterilt PBS tre gange, behandlet med trypsin (HyClone, Cat # SH30236.01) i 20 minutter og overført til sterile centrifugerør. De blev vasket med PBS igen, og derefter resuspenderet i DMEM-medium til indkapsling.

Fremstilling af mikrokapsler

stromale, vektor- og pKD1 celler blev indkapslet i alginat hydrogel under anvendelse af en mikro-fluidindretning med nogle modifikationer af indkapsling som beskrevet af Tendulkar et al. og Khanna et al. [32,33]. Kort fortalt blev første celletype (stromal eller vektor eller pKD1) blandet med 1,5% (vægt /volumen) ultrarent lav viskositet høj mannuronat alginat (LVM) (NovaMatrix, Sandvika Norge) og ekstruderet gennem mikro-strømningstekniske indkapsling enhed. Dråberne frembringes blev opsamlet i 100 mM calciumchloridopløsning. Efter tværbindingen af ​​alginat i fem minutter i CaCl

2, blev mikrokapslerne vasket med 0,9% NaCl indeholdende 20 mM CaCI

2. Mikrokapslerne blev derefter inkuberet med poly-L-ornithin (PLO) (0,1% vægt /volumen) i 20 minutter for at skabe en PLO lag, der tjener som en perm selektiv basalmembran. PLO-overtrukne mikrokapsler blev derefter blandet med den anden celletype (stromal eller vektor eller pKD1) suspenderet i 1,5% (vægt /volumen) LVM og indkapslet igen ved hjælp af mikro-strømningstekniske enhed for at opnå flere lag mikrokapsler. Mikrokapslerne blev vasket med 0,9% NaCl indeholdende 20 mM CaCI

2 og dyrket i DMEM indeholdende føtalt bovint serum (10% v /v) ved 37 ° C med 5% CO

2.

levedygtighed Assay

til vurdering af indkapslede celler levedygtighed, et par kapsler fra hver transficeret gruppe blev taget ud og overført til rene 24-brønds plader, mediet blev aspireret omhyggeligt og celler farves. Enkelt celletype kontrol farvning: CFDA SE (Vybrant® CFDA SE Cell Tracer Kit, Invitrogen) rekonstitueret i serumfrit DMEM (SFM, HyClone) (1: 400) blev tilsat til hver brønd (500 pl /brønd) og inkuberet i 15 minutter ved 37 ° C, 5% CO

2 i inkubatoren. Derefter SFM med CFDA SE blev erstattet af DMEM med 10% FBS og inkuberet igen i yderligere 30 minutter ved 37 ° C, 5% CO

2 i inkubatoren. Den serumholdigt medium blev derefter erstattet med 50 ug /ml propidiumiodid (PI) (Life Technologies /Invitrogen, Grand Island, NY) og inkuberet ved stuetemperatur i 2 minutter og mikrokapslerne blev vasket 3 gange for at fjerne overskydende PI. Mikrokapslerne blev derefter observeret under inverteret fluorescensmikroskop (Zeiss Axiovert 200M) og afbildes. Antallet af levende og døde celler blev bestemt kvalitativt fra det sammensatte billede erhvervede hjælp Image-Pro plus software (version 6.3.1.542). Dobbelt celletype farvning: For at demonstrere forskellen opdelingen i forskellige celletyper i flere lag mikrokapsler, den indre kerne celler blev præ-farvet med Cell Tracker grøn (Invitrogen, kat # C2925) og de ydre lag celler præ- farvet med Cell-tracker Orange (Invitrogen), forud for syntesen af ​​det flerlagede mikrokapsler. Før observation, blev mikrokapslerne farvet med SYTOX Blå Nucleic Acid Stain (Invitrogen, cat # S11348) for døde celler. De flerlagede mikrokapsler blev derefter filmede med den fluorescerende mikroskop (Zeiss Axiovert 200M).

Enzyme Linked immunoabsorbansassay (ELISA)

For at vurdere parakrine funktioner indkapslede celler, niveauerne af sE-cad blev målt i dyrkningsmediet. Hver gruppe af mikrokapsel blev dyrket i firlinger og det brugte medium blev opsamlet hver anden dag. Samtidig med at indsamle de brugte medier, blev medierne i hver brønd blandes grundigt; 1 ml (halvdelen af ​​det totale volumen) blev taget ud fra hver brønd og erstattet med 1 ml frisk komplet DMEM med 10% FBS og 1% antibiotika. Prøven medier blev opbevaret i et rent Eppendorf-rør ved -20 ° C. For celler, der vokser i 2D vævskulturbehandlet petriskåle blev medier opsamlet når cellerne nåede 90-100% sammenløb (tre-dages inkubation). Celletallet blev talt for hver cellelinie til senere normalisering. Niveauerne af sE-cad blev kvantificeret ved hjælp af ELISA-kit fra R 150 kDa [32]. Henviser til, at modellen forhindrede direkte celle-celle interaktion, kunne cellulære sekreter trænge igennem PLO pels giver mulighed for parakrin aktivitet. Som et første skridt i retning af validering af modellen for parakrin funktion, vurderede vi cellernes levedygtighed.

Venstre er en tegneserie model af dobbelt-lags mikrosfære. Indre kerne og det ydre lag blev separeret ved PLO belægning som vist. Celler, der vokser i separate faser blev angivet med røde pile. Right er en faktiske mikrosfære observeret under lysmikroskop. Stromaceller blev dyrket i den indre kerne i 7 dage, og det ydre lag er tomt.

stromale celler (WPMY-1), c4-2 vektor celler (c4-2 celler stabilt transficeret med pcDNA3 .1) og c4-2 pKD1 celler (c4-2 celler stabilt transficeret og udtrykkende pKD1) forblev levedygtige i indre kerne eller det ydre lag i de dobbelt lag mikrokapsler i 4 uger, og forblev begrænset til deres respektive lag uden migrering gennem PLO ( figur 2). Dernæst to forskellige celletyper blev co-dyrket i indre kerne eller det ydre lag af det samme mikrokapsel, og begge celletyper forblev levedygtige i co-kultur i mindst 4 uger, uanset kombinationen lag eller celletype (figur 2). Resultaterne viser, at alginat-mikrosfærer kan anvendes til dyrkning af epitel eller stromaceller opdelte i forskellige lag

in vitro

i mindst en måned.

BS, mikrokapsler med datoer indre kerne og stromale celler ved ydre lag. PS, mikrokapsler med c4-2 pKD1 celler ved indre kerne og stromale celler ved ydre lag. Grøn, levende celler ved indre kerne. Røde, levende celler ved ydre lag. Blå, døde celler. Scale bar, 100 um.

Celler dyrket i mikrosfærer viste sekretoriske funktion

For at bevise, at levedygtige celler i mikrosfærer også fortsat funktionel, vi målte koncentrationen af ​​opløselige E-cadherin fragment (sE-cad eller Shedded E-cadherin) i det konditionerede medium som en markør for sekretorisk funktion. E-cadherin er en vigtig transmembrane celle-celle adhæsion molekyle, der dysreguleret i flere humane cancere [3,34]. Det ekstracellulære domæne af E-cadherin spaltes af flere ekstracellulære proteaser. Spaltningen resulterer i kaste af en ca. 80 kDa fragment, som er blevet vist at være en biomarkør for aggressiv fænotype i adskillige humane cancere herunder prostata [25,27,28,29,30]. Vores tidligere undersøgelser vist, at dysregulering af pKD1 påvirker E-cadherin udgydelse i prostata kræftceller [24]. Derfor brugte vi stabilt transficeret c4-2 pKD1 celler til at kvantificere Shedded E-cadherin niveau. For at inkludere en række positive og negative kontroller, testede vi sE-cad niveau i konditionerede medier af forskellige humane cellelinjer, herunder både normale og neoplastiske celler. Mens nogle celletyper ikke viste mange tegn på E-cad kaste reflekteret af lav /trace niveau af sE-Cad, andre udskilte høje niveauer af sE-cad i de konditionerede medier (figur 3). Resultaterne viste, at metastatiske cellelinjer (MCF-7, PC3 og LNCaP celler) har høj sE-Cad-niveau, og godartede cellelinier (HEK293T celler, 3T3-celler og MS1 celler) viste lav /trace niveau af sE-Cad. Der var signifikante forskelle mellem sE-Cad niveauer af metastatiske celler og godartede celler, som blev bekræftet ved t-test (figur 3). Disse resultater stemmer overens med publiceret litteratur, sE-cad niveau korrelerer med celle invasionsevne [25].

sE-Cad-niveauet blev målt ved ELISA og blev normaliseret for at afspejle udskillelsen af ​​10

7 celler for hver cellelinie. sE-Cad niveau af metastatiske cellelinier (MCF-7, LNCaP og PC3) blev sammenlignet med HEK293T (som repræsentant for normale cellelinier) og P-værdier blev beregnet ved t-test. Hver søjle repræsenterer gennemsnittet af tre parallelle forsøg. Fejl søjle repræsenterer standardafvigelsen.

Co-kultur af epitel og stromaceller indflydelser shedded E-cadherin sekretion som et bevis på parakrin funktion

For at teste parakrin interaktion mellem to forskellige celle linjer, stromaceller, c4-2 vektor celler og c4-2 pKD1 celler blev dyrket i mikrokapsler i forskellige kombinationer og sE-cad i det konditionerede medium blev kvantificeret. Når en enkelt celletype blev dyrket i enten indre kerne eller det ydre lag af mikrokapslerne, havde stromaceller ikke udskiller sE-CAD, hvorimod begge c4-2 vektor celler og c4-2 pKD1 celler gjorde, da indkapslet sammen i separate rum (figur 4A ). Kvantificering af sE-Cad blev udført i celler dyrket i 2D miljø og lignende resultater blev observeret (figur 4B). Resultaterne validere pålideligheden af ​​modellen til at skelne epithelial fra stromale cellers funktioner.

A, celler blev dyrket i 3D-miljø i 6 dage. BS, mikrokapsler med datoer indre kerne og stromale celler i det ydre lag. BV, mikrokapsler med tomme indre kerne og c4-2 vektor celler i det ydre lag. BP, mikrokapsler med tomme indre kerne og c4-2 pKD1 celler i det ydre lag. sE-Cad-niveauet blev målt ved ELISA. B, celler blev dyrket i 2D miljø (petriskål). sE-Cad-niveauet blev målt ved ELISA og normaliseret for at afspejle udskillelsen af ​​10

7 celler for hver cellelinie P-værdier blev beregnet ved t-test. Hver søjle repræsenterer gennemsnittet af tre (2D kultur) eller fire (3D kultur) parallelle forsøg. Fejl søjle repræsenterer standardafvigelsen.

c4-2 pKD1 celler forøget sekretion af sE-cad forhold til c4-2 vektor celler (kontrol) (figur 4), hvilket er i overensstemmelse med vores tidligere publikationer [ ,,,0],24]. Vi har også tidligere vist, at pKD1 opreguleret E-cadherin-ekspression [24]. I den nuværende forsøgsmodel c4-2 pKD1 celler, men ikke c4-2 vektor celler aggregerer til dannelse kompakte kolonier (efter dyrket i tre uger i mikrokapsler) (figur 5), som er en veletableret fænotype af øget E-cadherin ekspression. Når epitel og stromaceller blev co-dyrket i uafhængige lag i samme mikrokapsel, mængden af ​​sE-cad udskilles af c4-2 celler (både vektor- og pKD1 transficerede celler) blev reduceret, hvilket tyder på stromaceller indflydelse på epitel sE-cad-sekretion (figur 6). Fordi det stromale og epiteliale celler er rumopdelt og ude af stand til at interagere direkte, vi postulerer, at stromaceller påvirke epitelcelle sekretorisk funktion via parakrin mekanisme.

Mikrokapsler inkuberet i 23 dage er vist. PB, mikrokapsler med c4-2 pKD1 celler ved indre kerne og blank ydre lag. VB, mikrokapsler med c4-2 vektor celler ved indre kerne og blank ydre lag. Green, CFDA farvning for levende celler. Rød, propidiumiodid (PI) farvning for døde celler. Pile angiver cellekolonier. Scale bar, 100 um.

sE-cad-niveauet blev målt ved ELISA efter co-dyrkning i 30 dage. SB, mikrokapsler med stromale celler ved indre kerne og blank ydre lag. BV, mikrokapsler med tomme indre kerne og c4-2 vektor celler i det ydre lag. BP, mikrokapsler med tomme indre kerne og c4-2 pKD1 celler i det ydre lag. SV, mikrokapsler med stromale celler ved indre kerne og c4-2 vektor celler i det ydre lag. SP, mikrokapsler med stromale celler ved indre kerne og c4-2 pKD1 transficerede celler i det ydre lag. P-værdier blev beregnet ved t-test. Hver søjle repræsenterer gennemsnittet af fire parallelle forsøg. Fejl søjle repræsenterer standardafvigelsen.

Diskussion

Den dobbelte lag mikrosfære model er beskrevet i denne undersøgelse er et 3D-miljø, der simulerer den

in vivo

mikromiljø, medgørlige til nem og skalerbar materielle produktion, oprensning og forarbejdning, uden mærkbar cytotoksicitet, og er kemisk kompatibel med vandige opløsninger og fysiologiske betingelser. I modsætning til andre i øjeblikket tilgængelige 3D

in vitro

model, mikrosfæren model i denne undersøgelse gør det muligt at specifikt analysere parakrin interaktion mellem forskellige typer af celler. Men denne model udviser også visse begrænsninger. Mængden af ​​kvantificerbare sekretion af sE-cad af celler, der vokser i den indre kerne er lavere end den for det samme antal og type af celler dyrket i det ydre lag af mikrokapslen (data ikke vist). Dette nedsat sekretion kan skyldes det faktum, at sE-cad udskilles af celler i den indre kerne er nødt til at diffundere gennem to lag af hydrogel før indtastning konditionerede medier. Det er også muligt at permselektiviteten af ​​PLO coat faldt sekretionen af ​​sE-Cad. For at optimere denne model til påvisning af andre specifikke proteiner, kan de kemiske funktioner i tværbundet PLO coat skal optimeres for bestemte forsøg behov. bør også tages indflydelse af exosom i betragtning med E-cadherin blev identificeret i mikrovesikler oprenset fra normale murine dendritiske celler og humane cancerceller [35,36]. Det er stadig muligt, at sE-Cad kunne blive fanget i exosomer, men alligevel lidt om, hvordan mikrovesikler regulerer celle-celle interaktion i parakrin system.

En anden bekymring er den vedholdende mekanisk egenskab af alginat hydrogel, som ionisk cross-linked alginater viste nedsat gel styrke efter 90 dage

in vitro

[37]. For at løse dette problem kan stabile kovalente tværbindinger indføres i alginathydrogeler under anvendelse bifunktionelle tværbindere. Det er også muligt, at en længere periode

in vitro

inkubationer kan resultere i en ubalance i de fremherskende ion koncentrationer (som er nødvendig for at opretholde mikrokapsel stabilitet), men ikke under

in vivo

betingelser, som ingen nedbrydning af disse alginat mikrokugler blev observeret i mindst tre måneder i vores seneste

in vivo

studier (upublicerede data). På trods af disse begrænsninger, kan modellen som beskrevet bruges effektivt til at studere parakrine epitel-stroma interaktion. Salg

Epithelial-stromale interaktioner spiller en vigtig rolle i normal udvikling og neoplastisk transformation. I normal human prostata stromacellerne hovedsagelig består af glatte muskelceller og fibroblaster, mens resten er lavet af endotelceller, pericytter, lymfocytter og makrofager [38]. Det er blevet rapporteret, at carcinom-associerede stroma (CAS) kunne ændre cellemorfologien /væksthastighed /aggressivitet af neoplastiske humane prostataepitelceller, men ikke normale prostataepitelceller [39]. Lignende effekter blev rapporteret ved brug prostata karcinom celle i co-kultur med pleuripotent knogle stromale celler [40]. Normale fibroblaster viser ikke sådan transformative effekt på epitelceller, hvilket tyder på en karakteristisk epitel-stromale interaktion ved neoplastiske proces celler [39]. I denne undersøgelse viser vi, at en mulig mekanisme af stromal indflydelse på epitelcancerceller er gennem en parakrin mekanisme. Som et bevis på princippet vi vist reduktion i sE-cad sekretion af prostata kræftceller i tilstedeværelse af stromale celler og modellen kunne formentlig bruges til at studere andre cellulære funktioner påvirket af parakrin mekanisme.

Stromal interaktion påvirker spredning, apoptose og metastase af epitelceller. Bugspytkirtelkræft, en antagonist af hedgehog (hh) inhiberede tumorvækst, når cancerassocierede stroma eksisterer, hvilket indikerer signalvejen afhængig af stroma [41]. I prostata, blev det rapporteret, at stromale faktorer, såsom caveolin-1 og thymidinphosphorylase blev relateret til tumor aggressivitet [42]. Andre nye proteiner, der spiller en rolle i epitel-stroma interaktion er blevet identificeret af transkriptionel profilering i prostata [43]. En af dem, decorin, blev nedreguleret i prostatacancer [43]. Nedsat decorin resulterede i en betydelig reduktion af E-Cadherin både

in vivo

in vitro

, og fysisk interaktion mellem decorin og E-Cadherin blev bekræftet ved co-immunoudfældning [34]. Decorin ekspression er strengt begrænset i mesenkymale /stromale celler, men ikke i epitelceller i prostata [43], og dets ekspression er signifikant reduceret i carcinoma-associerede stroma [43]. Hvorvidt decorin spiller også en rolle i at kaste af E-cadherin fortsat ukendt.

En anden vigtig gruppe af ekstracellulære matrix proteiner, MMP, kunne være mulige kandidater af stromale regulatorer, der påvirkede E-cad udgydelse. Vi har tidligere vist, at pKD1-induceret sekretion af MMP-2 og -9 stiger E-cadherin udgydelse og undertrykker celledeling [24].

Sammenfattende undersøgelse viser gennemførligheden og nytten af ​​at bruge 3D-alginat mikrosfære model at studere parakrine cellers funktion. Især vi brugt modellen til at udforske epitel-stroma interaktion og vist, at normale prostata stromaceller påvirke sekretion af sE-Cad ved prostatacancer epitelceller ved parakrin interaktion. Modellen kan anvendes til at validere yderligere cellelinjer og parakrin interaktion af forskellige typer af celler.