PLoS ONE: miR-135a Hæmmer invasion af kræftceller via Undertrykkelse af ERRα

abstrakt

MicroRNA-135a (MIR-135a) ned-modulerer parametre for kræft progression og dets ekspression er reduceret i metastatiske brystcancere (sammenlignet med ikke-metastatiske tumorer) såvel som i prostatatumorer relative til normalt væv. Disse udtryk og aktivitet mønstre er modsat de af Østrogen-relaterede receptor α (ERRα), et forældreløst medlem af den nukleare receptor familien. Faktisk høj ekspression af ERRα korrelerer med dårlig prognose i brystkræft og prostatakræft, og receptoren fremmer forskellige træk af kræft aggressivitet herunder celleinvasion. Her viser vi, at MIR-135a nedregulerer ekspressionen af ​​ERRα gennem specifikke sekvenser af sit 3’UTR. Som en konsekvens MIR-135a reducerer også ekspressionen af ​​nedstrøms mål for ERRα. MIR-135a reducerer også celle invasiv potentiale i en ERRα-afhængig måde. Vores resultater tyder på, at nedsat ekspression af miR-135a i metastatiske tumorer fører til forhøjet ERRα udtryk, hvilket resulterer i øget celle invasion kapacitet

Henvisning:. Tribollet V, Barenton B, Kroiss A, Vincent S, Zhang L, Forcet C, et al. (2016) miR-135a Hæmmer invasion af kræftceller via Undertrykkelse af ERRα. PLoS ONE 11 (5): e0156445. doi: 10,1371 /journal.pone.0156445

Redaktør: Franky L. Chan, Den kinesiske University of Hong Kong, Hongkong

Modtaget: Januar 28, 2016 Accepteret: 13. maj 2016 Udgivet: May 26, 2016

Copyright: © 2016 Tribollet et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information fil

Finansiering:. Dette arbejde blev finansieret af Ligue contre le Cancer (comités Puy-de-Dôme https://www.ligue-cancer.net/cd63/journal og Drôme https://www.ligue-cancer.net/cd26/journal) til JS og JMV. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Jean-Marc Vanacker er en PLoS ONE Editorial bestyrelsesmedlem. Dette ændrer ikke forfatternes overholdelse PLoS ONE Redaktionelle politikker og kriterier.

Introduktion

MikroRNA’er (Mirs) er små ikke-kodende RNA, der gennem en såkaldt “seed box” binder til specifikke komplementære sekvenser i 3’UTR af target mRNA og fremkalde deres nedbrydning eller blokere oversættelse af den kodede protein [1]. I betragtning af den korte størrelse af mRNA’et bindende region i Mirs og eftersom ufuldkommen miR binding er i nogle tilfælde tilstrækkelige til at inducere mRNA regulering, en individuel miR kan handle på flere mRNA’er. Dette rejser muligheden for, at en hel vej /proces kan styres på flere niveauer gennem et enkelt miR. Mirs kan fremme eller undertrykke kræft initiering eller progression, og deregulering af deres udtryk er et fælles træk i disse processer [2-5]. Human MIR-135a er kodet af to gener lokaliseret på forskellige kromosomer (3 og 12 for MIR-135a1 og MIR-135a2, henholdsvis), der producerer en identisk, aktive sekvens. Modstridende resultater er blevet offentliggjort om virkningerne af miR-135a om kræft progression. Rapporter faktisk viser, at denne microRNA kunne fremme eller undertrykke forskellige træk relateret til tumor aggressivitet såsom spredning, celle migration og invasion i colon, melanom, bryst- eller prostatacancer cellelinjer [6-12]. Det blev imidlertid vist, at MIR-135a ekspression kraftigt reduceres i metastatiske brysttumorer (sammenlignet med ikke-metastatiske cancere, [10]) samt i prostata tumorer i forhold til normalt væv [11], hvilket antyder, at i det mindste i disse tumor typer, mIR-135a modvirker cancer progression. I denne henseende, re-ekspression af MIR-135a i ikke-udtrykkende celler reducerer deres invasion potentiale. Mindst tre molekylære mekanismer er blevet foreslået for at tage højde for denne reduktion. Afhængig af undersøgelse og på det cellulære model, har miR-135a faktisk vist sig at formindske ekspressionen af ​​FAK, Runx2 og rock1 /2, alle regler, der fører til en reduktion af cellulær invasion [9-11].

østrogen-relaterede receptor α (

ESRRA

, i det følgende benævnt ERRα) er et medlem af den nukleare receptor superfamilien. Som sådan vises en konserveret centralt beliggende DNA-bindende domæne og et C-terminalt placeret formodede ligandbindende domæne, som kontakter co-aktivatorer og er nødvendig for transkriptionel aktivering [13]. Men ingen naturlige ligand af ERRα er blevet identificeret til dato. ERRα er således omtalt som en “orphan” receptor og aktiverer transkriptionen af ​​sine målgener i en tilsyneladende ligand-uafhængig måde. ERRα regulerer flere fysiopatologiske processer

in vivo

såsom osteoblast differentiering og knogledannelse (revideret i [14]), medfødte immunitet [15-16] og energi metabolisme (revideret i [17-18]). Desuden høj ERRα udtryk i kræft korrelerer med en dårlig prognose i forskellige cancertyper ([19-25], gennemgået i [26-28]). Konsekvent, ERRα har vist sig at fremme flere træk af cancer progression, lige fra proliferation [29-30], epithelio-mesenkymal overgang [31], modstandsdygtighed over for hypoxi [32], angiogenese [33], metabolisk skift til aerob glykolyse [34 -35], celle migration og invasion [36-37]. ERRα øger celleinvasion gennem mindst to molekylære mekanismer. På den ene side receptoren faktisk aktiverer Wnt11-afhængig kaskade, på en anden side, ERRα indirekte fin-tunes RhoA stabilitet til et niveau, der er passende for orienteret celle migration og invasion.

Her viser vi, at re-introduktion af miR-135a i ikke-udtrykkende resultater celler i nedregulering af ERRα udtryk på mRNA og protein niveauer. Dette sker gennem 3’UTR sekvenser, der er komplementære til miR-135a såkassen. Konsekvent, ekspressionen af ​​ERRα målretter gener moduleret af MIR-135a i en ERRα-afhængig måde. Desuden miR-135a overekspression nedsætter invasion kapacitet MDA-MB231 og PC3 celler (humane mammae og prostatacarcinomceller henholdsvis). Disse kapaciteter kan reddes ved at re-udtryk for en ERRα konstruktion, der ikke er målrettet af miR-135a. Alt i alt dette peger på ERRα som alternativ miR-135a mål involveret i reguleringen af ​​celle invasion.

Materialer og metoder

Celler og reagenser

MDA-MB231 (human mammae epitelceller) og PC3 (humane prostata celler) blev dyrket i Dulbeccos modificerede Eagles medium (Invitrogen) suppleret med 10% føtalt kalveserum, 10 U /ml penicillin, 10 ug /ml streptomycin. LNCaP (human prostata celle) blev dyrket i RPMI (Invitrogen) suppleret på samme måde. Celler blev holdt i en befugtet 5% CO2-atmosfære ved 37 ° C. siRNA og miRNA blev indført i celler ved hjælp Interferine (Ozyme) eller lipofectamin 2000 (Thermo Fisher), henholdsvis efter producentens anvisninger. ERRα siRNA’er (sekvenser på S1 Table) var fra Invitrogen (siERRα # 1) og Dharmacon (siERRα # 2). Pre-miRNA (PM11126 for miR-135a, miR negativ kontrol n ° 2) var fra Ambion

Expression Analysis

Totale RNA’er blev udvundet ved guanidiniumthiocyanat /phenol /chloroform og omdannes til først. streng cDNA under anvendelse IScript cDNA syntesekit (Biorad). Real-time PCR blev udført i en 96-brønds plade under anvendelse af IQ SYBR Green Supermix (Biorad). Data blev kvantificeret ved ΔΔ-Ct fremgangsmåde og normaliseret til RPLP0 (36B4) mRNA. Sekvenser af de anvendte primere i denne undersøgelse er vist på S1 tabel.

I western blot-analyse blev celler lyseret i RIPA-buffer. Proteiner (50 ug) blev opløst på 10% SDS-PAGE, blottet på PVDF (Millipore), probet med specifikke antistoffer efter mætning og afslørede anvendelse af et forstærket kemiluminescens påvisningssystem (ECL kit, Amersham Biosciences) med egnede specifikke peroxidasekonjugeret Abs. Antistoffer var fra Gentex (ERRα, GTX108166), Enzo (hsp90, ADI-SPA-830) og Sigma (Flag, F-3165).

plasmider og luciferaseassays

pSG5Flag-Aa /B-ERRα er blevet beskrevet andetsteds [38]. Sekvenser på ESRRA (koder ERRα) 3’UTR, der supplerer miR-135a såkassen blev forudsagt ved hjælp Targetscan (https://www.targetscan.org), PicTar (https://pictar.mdc-berlin.de) og MIRANDA miRBase (https://microrna.sanger.ac.uk) on-line tilgængelige programmer. En 400 bp fragment fra den humane ESRRA 3’UTR omfatter både forudsagte komplementære sekvenser blev klonet ved PCR under anvendelse af MDA-MB231-oprindelse retrotranskriberet mRNA og primere flankeret af Xhol og Sall-restriktionssteder. Komplementære sekvenser blev muteret ved rekombinant PCR. Efter kontrol ved sekventering, blev vildtype og muterede fragmenter klonet i pmiRGLO dual ekspressionsvektor (Promega) som XhoI-Sall indsætter nedstrøms for ildflueluciferase reporter sekvens. Sekvenser af oligonucleotiderne, der anvendes til mutagenese er tilgængelige på S1 tabel.

I transiente transfektioner, 10

5 MDA-MB231-celler blev podet i 24-brønds plader og transficeret ved hjælp af Lipofectamine 2000 50 ng pmiRGLO plasmidet og angivne mængde af præ-miR. Cellerne blev lyseret 48 timer efter transfektion og reporter aktiviteter (renilla og ildflue luciferaser) blev bestemt ved anvendelse af standardmetoder.

Invasion assays Salg

I invasion assays, celler (5. 10

4) blev suspenderet i 200 pi DMEM /2% FCS og podet på toppen af ​​matrigel invasion kamre (Corning). Cellerne fik lov til at migrere mod den nedre kammer indeholdende DMEM /10% FCS i 48 timer. Matrigel blev fjernet under anvendelse vatpinde og celler blev fikseret i 1 time med 4% formaldehyd, farvet med 0,1% krystalviolet og microphotographed. Invaderende celler blev talt på hele godt bruge billede J.

Statistisk Analyse

Statistisk signifikans blev bestemt ved anvendelse af Student t-test mellem grupperne.

Resultater

miR-135a Reducerer ERRα Expression

i løbet af en tidligere undersøgelse blev konsekvenserne af præ-miR-135a overekspression i LNCaP humane prostata kræftceller analyseret i form af cellulær genekspression ved hjælp af en mikro-matrix tilgang [11]. Det blev observeret, at ekspressionen af ​​ERRα sjældne nukleare receptor blev reduceret ved en sådan behandling. For at validere disse resultater, vi transient transficeret pre-MIR-135a i LNCaP-celler og analyseret ekspressionen af ​​ERRα protein (figur 1a). Vi fandt, at niveauet for denne receptor blev reduceret, så snart som 24 timer efter transfektion, en effekt, der varede (om end i mindre grad) i 48 timer. Lignende resultater blev også opnået i MDA-MB231 humane brystcarcinom-celler. Den ERRα-tilsvarende mRNA blev også reduceret 24 og 48 timer efter transfektion i både LNCaP og MDA-MB231-celler, som bedømt af real-time PCR-forsøg (figur 1b), hvilket tyder på en direkte virkning på mRNA.

angivne celler blev transficeret med præ-mIR-135a eller præ-miR kontrol (-) i den angivne tid. en. Ekspression af de angivne proteiner bestemt ved Western blot. Hsp90 blev anvendt som en loading kontrol. Kvantificering af ERRα proteinekspression (vises nedenfor blottene) udtrykkes i forhold den for hsp90, anvendt som en loading kontrol. b. Ekspression af ERRα tilsvarende mRNA analyseret ved real-time PCR. Data er præsenteret i forhold til at pre-mir kontrolprøver og udtrykt i forhold til ekspression af RPLP0. Vist er gennemsnittet af forsøg udført tre gange. Fejl søjler angiver SEM. ***:

s

0,005

Vi analyserede den menneskelige ERRα mRNA for motiver microRNA anerkendelse ved hjælp tre uafhængige forudsigelse programmer (Targetscan, PicTar og Miranda), hvilket gav identiske. resultater. To potentielle komplementære sekvenser for MIR-135a blev identificeret i 3’UTR med den højeste (8-mer) binding sandsynlighed (figur 2a). Bemærkelsesværdige sekvensen samt placering af disse to steder er stærkt konserverede i pattedyr, men ikke hos fugle og padder, hvis en sådan ikke tilsvarende sekvens kunne identificeres. For at bestemme om disse komplementære sekvenser er funktionelle for MIR-135a anerkendelse, blev et 400 bp fragment af 3’UTR (som både omfatter potentielle sekvenser) klonet nedstrøms for luciferasereportergenet i pmiRGLO plasmid. Hver komplementære sekvens blev derefter muteret alene eller i kombination. De resulterende konstruktioner blev transficeret i MDA-MB231-celler sammen med præ-MIR-135a (Fig 2b). Vildtype ERRα-afledte fragment tillagt MIR-135a følsomhed, hvilket resulterer i et fald i reporteraktivitet 50%. Denne effekt blev afskaffet ved mutation af komplementær sekvens 2, men ikke komplementær sekvens 1. Dette tyder stærkt på en direkte virkning af miR-135a på 3’UTR af ERRα, især om komplementær sekvens 2, hvilket resulterer i reducerede niveauer af tilsvarende mRNA og protein.

a. Komplementære sekvenser 1 og 2 (store bogstaver) på ERRα 3’UTR vises for de angivne arter (

Homo sapiens

,

Mus musculus

,

Bos taurus

og

Felis silvestris

) og tilpasset til miR-135a sekvens. Positionen af ​​det første nukleotid i hver komplementær sekvens (cs 1 og 2) er indikeret i forhold den første 3’UTR nukleotid og i forhold til human mRNA start (under parentes). Nukleotider i fed skrift er blevet slettet i de tilsvarende mutanter. b. Ordningen af ​​de genererede mutanter i pmiR-GLO er afbildet på toppen. MDA-MB231-celler blev transient transficeret med de tilsvarende pmiR-GLO derivater sammen med den angivne koncentration af præ-MIR-135a. Luciferaseaktiviteter blev bestemt 48 timer efter transfektion og ildflueluciferaseaktivitet, blev normaliseret til den for Renilla luciferase. Resultater udtrykkes for hver plasmid som procent i forhold til transfektion med præ-miR kontrol og repræsenterer middelværdien af ​​tre uafhængige forsøg. Fejl søjler angivet SEM. **:

s

0,01, ***:.

s

0,005

miR-135a Regulerer ERRα Molekylære og cellulære aktiviteter

for at analysere konsekvenserne af denne forordning, undersøgte vi, om funktionerne i ERRα kan blive påvirket af miR-135a. ERRα fungerer som en transskription faktor og dens mål gener i MDA-MB231 celler er tidligere blevet identificeret gennem en transkriptom RNA-sekventering tilgang [37]. Vi ræsonnerede, at miR-135a overekspression, hvilket fører til nedsat ERRα niveauer, bør også resultere i deregulering af ekspressionen af ​​disse målgener. Denne hypotese blev undersøgt på ni udvalgte gener, som, ifølge vores transkriptomisk tilgang, enten positivt (DHX33, GDAP1, RAB39A, RAPGEF5, TMEM198 og TNFAIP1) eller negativt (PDGFRB, RRAS, CEACAM1) reguleret af ERRα. Vigtigere, blev disse gener valgt, fordi de ikke blev forudsagt som direkte MIR-135a mål, ifølge Targetscan online-program. Brug to forskellige siRNA mod receptoren, vi først kontrolleret, at ekspressionen af ​​disse gener er dereguleret i fravær af ERRα (figur 3a). Vi analyserede derefter mRNA niveauet af disse ERRα mål upon miR-135a overekspression. Som vist på figur 3b, ekspressionen af ​​disse gener var tidsafhængigt reguleret ved transfektion af præ-MIR-135a. Notatet alle miR-135a-inducerede deregulering var i samme retning som dem fremkaldt af direkte rettet mod ERRα. Det styrker yderligere den hypotese, at effekten af ​​miR-135a på disse gener er ERRα-medieret. Vi analyserede også udtryk for fire gener (rock1, ROCK2, pTk2- og SMAD5) rapporteret som miR-135a direkte mål i litteraturen [10-11, 39]. Som forventet ekspressionen af ​​disse gener er tidsafhængigt reduceret på allerede MIR-135a overekspression (figur 3c). Ingen af ​​disse fire gener synes dereguleret i fravær af ERRα, som forventet fra vores RNA-sekventering data (figur 3c og [37]). Vi brugte derefter en redning tilgang at sætte spørgsmålstegn ved muligheden for en ERRα-afhængig effekt af miR-135a. Til dette formål blev celler transficeret af en miR-135a efterligne suppleret eller ikke ved en ERRα konstruktion, der ikke omfatter sin naturlige 3’UTR (

jeg

.

e

. Uden miR-135a komplementære sekvenser). Konsekvent, deregulering af ERRα mål blev reddet ved re-introduktion af receptoren (figur 3d). I modsætning hertil blev ekspressionen af ​​miR-135a direkte mål (rock1, ROCK2, pTk2- og SMAD5), reducerede ved overekspression af den præ-miR, ikke restaureret af ERRα transfektion. Sammen disse data viser, at miR-135a virkninger på genekspression i ERRα-afhængige og-uafhængige manerer.

a. MDA-MB231-celler blev transficeret med det anførte siRNA (c: kontrol siRNA) og RNA blev ekstraheret efter 48 timer. b. Celler blev transficeret med præ-MIR-135a eller kontrol præ-miR (-). RNA’er blev ekstraheret på det angivne tidspunkt efter transfektion. Ekspression af ERRα mål blev undersøgt (a, b). c. Samme eksperiment analysere ekspressionen af ​​direkte MIR-135a målgener. d. Celler blev transficeret ved præ-MIR-135a og pSG5Flag tom vektor (MIR-135a) eller ERRα-kodende plasmid (MIR-135a + ERRα). Som kontroller blev celler transficeret ved præ-miR kontrol suppleret med pSG5Flag vektorplasmid. RNA’er blev ekstraheret efter 48 timer. Ekspression af de angivne gener blev bestemt ved real-time PCR. Data er præsenteret i forhold til kontrol og udtrykt i forhold til ekspression af RPLP0. Vist er gennemsnittet af tre uafhængige eksperimenter i tredobbeltbestemmelse med fejlsøjler angiver SEM. *:

s

0,05, **:

s

0,01, ***:

s

0,005, ns:. Ikke-signifikant

Vi næste spørgsmålstegn ved, om funktionelle effekter af miR-135a kunne stole på ERRα. Denne receptor har vist sig at være nødvendig for adskillige træk relateret til cancer progression herunder cellemigration og invasion [36-37]. På en anden side er blevet vist MIR-135a at reducere celleinvasion [9, 11]. Brug Boyden kammer invasion analyser, vi derfor undersøgt, om en del af disse sidstnævnte aktiviteter kan være medieret af ERRα hæmning. Overudtrykker MIR-135a efterligne i MDA-MB231-celler førte til en reduktion af ERRα ekspression samt til inhibering af celleinvasion, sammenlignet med kontroller (figur 4a). I modsætning hertil re-udtrykkende et ikke-målrettes ERRα konstruere fuldt restaureret celleinvasion potentiale. Identiske eksperimenter udført i PC3 humane prostata-cellelinje gav tilsvarende resultater (figur 4B). Vi konkluderer, at MIR-135a kan inhibere celleinvasion, i det mindste delvist, ved inhibering af ERRα ekspression.

MDA-MB231 (a) eller PC3 (b) celler blev transficeret med kontrol miR (MIR-c ) eller mIR-135a mimic (begge suppleret med tomme pSGFlag plasmid) eller mIR-135a mimic suppleret med pSGFlag-Aa /B-ERRα (udgår fra dens 3’UTR). Ekspression af de angivne proteiner er vist i de øvre paneler. Cellerne fik lov til at invadere Matrigel på Boyden kammer assays. Invaderende celler blev fikseret og farvet. Typiske mikrofotografier vises til venstre. Kvantificering blev udført på hele godt bruge billede J. Resultaterne er udtrykt i forhold til at styre mir betingelser med fejlsøjler angiver sem. **:

p

0,01, *:

p

0,05, NS:. Ikke signifikante

Diskussion

Afvigende resultater er blevet offentliggjort om den rolle, miR-135a i kræft progression. Faktisk har denne microRNA blevet rapporteret at fremme eller hæmme træk af kræft aggressivitet [6-12]. Her viser vi, at MIR-135a reducerer ekspressionen af ​​ERRα på mRNA og protein niveauer, hvilket resulterer i modulering af ekspressionen af ​​receptorens målgener. Interessant ERRα viser et udtryk mønster i kræftsygdomme, der er modsat den af ​​miR-135a. Faktisk receptor niveauer (mRNA og protein) er mere ophøjet i tumorer (i forhold til normalt væv) og dens høj ekspression korrelerer med en dårlig prognose i forskellige typer af cancere såsom dem fra bryst eller prostata (gennemgået i [26-28 ]). Denne høje ekspression kan skyldes flere mekanismer, såsom genomisk amplifikation [40], en transskriptionel autoregulatorisk løkke [41], og nedregulering af microRNA, der er målrettet ERRα [25, 42]. Her foreslår vi, at et fald i MIR-135a ekspression kan derepressere at af receptoren. I overensstemmelse med sin definition som en faktor dårlig prognose, ERRα fremmer flere træk af kræft progression, såsom EMT, angiogenese, skifte til aerob glykolyse (Warburg effekt) og modstandsdygtighed over for hypoxi [31-35]. Det vides ikke, om miR-135a faktisk er involveret i at modvirke fremkomsten af ​​disse processer. Alligevel MIR-135a undertrykker celleinvasion [11], en parameter, der er derimod fremmes af ERRα [36-37]. Vore foreliggende resultater viser, at inaktivering af ERRα af MIR-135a er medvirkende til at forebygge celleinvasion da dette fænomen kan gendannes ved genindførsel af et ikke-målrettes receptor. Mindst to ikke-gensidigt udelukkende mekanismer er blevet fremkaldt til at redegøre for de pro-invasive aktiviteter af receptoren. På den ene side, ERRα inducerer Wnt11 signalering, der direkte regulerer celleinvasion via en autoregulatorisk løkke involverer β-catenin [36]. På den anden side, receptoren positivt regulerer ekspressionen af ​​TNFAIP1, hvilket reducerer RhoA proteinstabilitet samt aktiviteten af ​​sin nedstrømseffektor rock1 [37]. I mangel af ERRα stigningen i rock1 aktivitet fører til en inhibering af celleinvasion. Interessant det blev for nylig vist, at MIR-135a direkte inducerer rock1 mRNA nedbrydning, også resulterer i inhibering af celleinvasion [11]. I denne henseende kan reduktionen af ​​MIR-135a ekspression i cancere resultere i ukontrolleret rock1 udtryk, der kan blive for stor og derved inhibere celleinvasion. Men reduktionen af ​​miR-135a også sandsynlige kundeemner, parallelt, øget ERRα udtryk. Til gengæld receptoren reducerer rock1 aktivitet ned til et niveau, der er passende for celle invasion. Sammenfattende miR-135a og ERRα kan danne en multi-nivelleret regulerende netværk, der fin-tunes rock1 aktivitet.

Perusing litteraturen, synes det muligt, at denne miR-135a- ERRα regulatoriske netværk kan være effektiv i en helt anden sammenhæng. Faktisk er det blevet vist, at MIR-135a direkte nedregulerer ekspressionen af ​​master genet af osteoblast differentiering, Runx2, hvilket forhindrer osteogenese [39].

Per se

, den observerede BMP-2-induceret fald i miR-135a udtryk kan således føre til ukontrolleret Runx2 overekspression og dermed for tidlig osteoblast differentiering. På en anden side har uafhængige data viste, at både Runx2 udtryk og aktivitet er undertrykt af ERRα ([43-45], revideret i [14]). Faldet i MIR-135a ekspression kan således direkte derepressere ekspressionen af ​​både Runx2 og ERRα, sidstnævnte på sin side moderere aktiviteten af ​​førstnævnte. Et sådant netværk vil i sidste ende resultere i finjustering Runx2 aktivitet som beskrevet ovenfor for rock1. Mere arbejde er forpligtet til at godtgøre rigtigheden af ​​denne hypotese.

Støtte Information

S1 Table. Oligonukleotider anvendt i denne undersøgelse

doi:. 10,1371 /journal.pone.0156445.s001

(PDF)